骨关节炎Ⅰ号方对抗过氧化氢致软骨细胞DNA的损伤作用

目的：选用过氧化氢作为实验软骨细胞DNA的损伤因子，探讨骨关节炎Ⅰ号方预防过氧化氢对软骨细胞DNA的损伤作用。方法：实验于2004—01／12在福建省中医学院动物中心完成。骨关节炎Ⅰ号方由仙灵脾、巴戟天、川芎、三七、祖师麻组成。取三四周龄兔关节软骨，经胶原酶Ⅱ消化，建立软骨细胞体外培养体系。随机分成4组，①骨关节炎Ⅰ号方组加入100g／L骨关节炎Ⅰ号方药液，②中药加过氧化氢组加入100g／L骨关节炎I号方与lmmol／L过氧化氢组混合液，③过氧化氢对照组加入1mmol／L过氧化氢液，④正常对照组加入磷酸盐缓冲液。均加入软骨细胞培养体系中培养2h，用单细胞凝胶电泳法检测培养体系中软骨细胞的DNA损伤的程度以彗星细胞出现率和慧星尾长的变化做评估指标。结果：①彗尾样细胞出现率：过氧化氢组彗尾样细胞出现率显著高于中药加过氧化氢组(41％，24％，P&;lt;0．05)、显著高于中药组(41％，8％．P&;lt;0．01）、显著高于正常对照组(41％，9％，P&;lt;0．01)；中药组与正常对照组彗尾样细胞出现率相似(8％，9％)。②彗星尾长：正常对照组、中药组DNA荧光图像呈圆形；过氧化氢对照组软骨细胞出现慧星状DNA荧光图像；中药加过氧化氢组软骨细胞也出现“拖尾”现象，但较过氧化氢对照组短(20．2950&;#177;12．8414，39．3983&;#177;12．5368．P&;lt;0．05)。结论：过氧化氢组彗星样细胞出现率，彗星尾长都显著高于正常对照组，说明过氧化氢对软骨细胞DNA具有损伤作用。加入骨关节炎Ⅰ号方进行干预后，彗星样软骨细胞百分率、彗星尾长都明显下降，说明骨关节炎Ⅰ号方具有预防过氧化氢对软骨细胞DNA的损伤作用。     

脑血栓前期血管内皮细胞损伤研究

目的观察脑栓塞前期血液血管性血友病因子(v WF)、脱氢血栓烷(DH-TXB2)、P-选择素(P-selectin)含量和白细胞DNA的损伤情况,探讨脑血栓前期血管内皮细胞损伤的原因,为预防脑栓塞寻找理论依据。方法采用ELISA法测定血浆v WF、P-选择素及DH-TXB2的含量;碱性单细胞凝胶电泳法检测白细胞DNA损伤,用彗星图像分析系统分析白细胞的彗星率和彗尾DNA百分(%)含量。结果(1)v WF、DH-TXB2和P-选择素在血栓前期显著高于对照组(P<0.001),与血栓形成后的水平相近(P<0.05);(2)未发生脑栓塞、脑栓塞前后患者血液中单个核细胞的彗星率、彗尾DNA%含量均显著高于对照组(P<0.01),脑栓塞组患者血液中单个核细胞的彗星率、彗尾DNA%含量与未发生脑栓塞组有显著差异(P<0.01),脑栓塞前后患者血液中单个核细胞的彗星率、彗尾DNA%含量无显著差异(P>0.01)。结论脑栓塞前期血液中白细胞DNA明显损伤,表明微环境存在严重缺氧。由此推测,脑血栓前期血管内皮细胞严重损伤,导致血小板聚集活化释放,缺氧可能是其主要原因之一。     

骨关节炎Ⅰ号方预防氢化可的松对兔软骨细胞的损伤作用

背景骨关节炎Ⅰ号方中的补肾活血祛风湿中药具有治疗骨关节炎、预防糖皮质激素副作用的作用.目的建立体外兔关节软骨细胞培养体系,观察骨关节炎Ⅰ号方预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用.设计完全随机设计,对照实验.单位福建省第二人民医院风湿免疫科.材料实验于2003-11/2004-03在福建中医学院骨伤系分子实验室完成.关节炎Ⅰ号方由仙灵脾、巴戟天、川芎、三七、祖师麻组成.用胶原酶Ⅱ消化兔关节软骨,建立软骨细胞体外培养体系,在软骨细胞培养体系中分别加入不同浓度的骨关节炎Ⅰ号方与氢化可的松的混合液,根据加入的药物浓度不同随机分成2组,一组加入1.25g/L氢化可的松和/或150g/L骨关节炎Ⅰ号方,另一组加入2.50 g/L氢化可的松和/或300 g/L骨关节炎Ⅰ号方.每组再分为4个亚组,各组再分别分为对照组、氢化可的松组、氢化可的松+关节炎Ⅰ号方组、关节炎Ⅰ号方组,每组5孔.方法①1.25g/L氢化可的松+150g/L关节炎J号方组每孔分别加入1.25 g/L氢化可的松和150g/L骨关节炎Ⅰ号方混合液0.1 mL.②1.25g/L氢化可的松组每孔分别加入磷酸盐缓冲液和1.25 g/L氢化可的松的混合液0.1 mL.③150g/L骨关节炎Ⅰ号方组每孔分别加入150g/L骨关节炎Ⅰ号方药液0.1 mL.④对照组1每孔分别加入磷酸盐缓冲液0.1 mL.⑤2.50g/L氢化可的松+300g/L骨关节炎Ⅰ号方组每孔分别加入2.50g/L氢化可的松和300 g/L骨关节炎Ⅰ号方的混合液0.1 mL.⑥2.50g/L氢化可的松组每孔分别加入磷酸盐缓冲液和2.50g/L氢化可的松的混合液0.1 mL.⑦300 g/L骨关节炎Ⅰ号方组每孔分别加入300g/L骨关节炎Ⅰ号方药液0.1 mL.⑧对照组2每孔分别加入磷酸盐缓冲液0.1 mL.⑨上述各组加药培养24h后,用倒置显微镜观察各组软骨细胞形态变化.④采用四氮唑蓝比色法检测各孔软骨细胞的A值,以反映软骨细胞增殖情况.主要观察指标骨关节炎Ⅰ号方与氢化可的松联合用药对兔软骨细胞增殖的影响.结果①软骨细胞形态倒置显微镜观察见对照组软骨细胞呈多角形或梭形贴壁生长,1.25和2.50 g/L氢化可的松浓度培养24 h的软骨细胞呈固缩或漂浮状态,各浓度氢化可的松+骨关节炎Ⅰ号方组、骨关节炎Ⅰ号方组的软骨细胞呈多角形或梭形贴壁生长与对照组无差异.②软骨细胞A值1.25 g/L氢化可的松组明显低于对照组1(0.007 6±0.001 8,0.015 2±0.002 6,t=5.374 0,P＜0.01);1.25 g/L氢化可的松+150 g/L关节炎Ⅰ号方组和150g/L关节炎Ⅰ号方组明显高于1.25g/L氢化可的松组(0.065 6±0.016 9,0.086 6±0.019 0,t=7.630 9,9.255 9,P＜0.01);2.50 g/L氢化可的松组明显低于对照组2(0.0053±0.0014,0.0153±0.0023,t=8.304 5,P＜0.01);2.50 g/L氢化可的松+300 g/L关节炎Ⅰ号方组和300 g/L关节炎Ⅰ号方组明显高于2.50 g/L氢化可的松组(0.0858±0.015 0,0.092 6±0.016 8,t=11.948 3,11.579 4,＜0.01).结论高浓度氢化可的松可导致软骨细胞已严重损伤或死亡,而氢化可的松加中药培养的软骨细胞生长良好,骨关节炎Ⅰ号方有预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用.     

牛磺酸对经单细胞凝胶电泳技术检测人视网膜色素上皮氧化损伤的保护特征

目的:观察过氧化氢对人视网膜色素上皮细胞的氧化作用,以及牛磺酸对人视网膜色素上皮细胞的抗氧化作用。方法:实验于2005-01/09在哈尔滨医科大学公共卫生学院中心实验室完成。①人眼视网膜色素上皮细胞来源:实验眼来自20～35岁男性意外死亡后12h内捐给黑龙江省眼库作为角膜移植的供体眼5眼,家属签署知情同意书。取8～10代人眼视网膜色素上皮细胞用于实验。②过氧化氢损伤实验:将培养的细胞按随机数字表法分为5组:过氧化氢各浓度组分别加入终浓度为10,25,50,100μmol/L的过氧化氢,阴性对照组只加入等量的磷酸盐缓冲液。③牛磺酸实验:将培养的细胞按随机数字表法分为5组:阴性对照组用不含血清的DMEM-F12培养液培养,牛磺酸各浓度组分别用含有终浓度为300和600μmol/L的牛磺酸培养液进行培养。将上述每个浓度组的细胞悬液分成2份,向其中1份加入终浓度为25μmol/L的过氧化氢,另一份加入等量的磷酸盐缓冲液。④指标检测:15min后,用单细胞凝胶电泳法检测人视网膜色素上皮细胞的DNA损伤的程度,以拖尾率(彗星细胞数/总细胞数)和拖尾细胞DNA迁移距离[400倍显微镜下测量25个拖尾细胞的DNA迁移长度,整个核DNA直径和迁移DNA(即彗星尾)长度,其差值为DNA迁移距离]的变化表示。⑤统计学分析:用四格表χ2检验(确切概论法)比较组间彗星细胞拖尾率;用t检验进行组间DNA迁移距离比较。结果:①过氧化氢损伤实验结果:阴性对照组DNA荧光图像为红色圆球形,过氧化氢各组出现彗星样,随着过氧化氢浓度(10,25,50,100μmol/L)的增加,人视网膜色素上皮细胞拖尾率和DNA迁移距离均明显高于或长于阴性对照组[拖尾率:4.6%,26.0%,43.3%,86.6%,96.0%;DNA迁移距离:(4.13±0.52),(10.54±2.03),(20.59±4.42),(39.56±10.28),(51.54±15.93)μm,P<0.01]。②牛磺酸实验结果:300和600μmol/L牛磺酸组视网膜色素上皮细胞拖尾率和拖尾细胞DNA迁移距离与阴性对照组相近(P>0.05)。300和600μmol/L牛磺酸 25μmol/L的过氧化氢组均明显低于或短于25μmol/L过氧化氢组[拖尾率:22.6%,20.0%,43.3%;DNA迁移距离:(17.46±7.13),(13.56±2.52),(20.59±4.42)μm,P<0.05],且牛磺酸浓度越高,差异越大。结论:10μmol/L过氧化氢就能对人视网膜色素上皮细胞直接造成DNA断裂损伤,该作用呈剂量依赖性。适量的牛磺酸(300和600μmol/L)对人视网膜色素上皮细胞DNA的氧化断裂损伤起保护作用,该作用也呈剂量依赖性     

缺氧对心肌细胞DNA链损伤的体外实验研究

目的 :研究缺氧条件下对体外培养的心肌细胞DNA链的损伤及其探讨损伤机制。方法 :利用单细胞电泳技术结合激光扫描共聚焦显微镜来观察乳鼠心肌细胞的DNA损伤 ,以慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距 (尾部DNA占总DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价心肌细胞DNA的损伤程度。结果 :缺氧 12h后 ,心肌细胞DNA发生了损伤 ,慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距均增加 ,与对照组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;并随缺氧时间的延长 ,DNA的损伤程度和慧星样细胞的出现率均随之增加 ,呈现明显的时间———效应趋势。结论 :单细胞电泳可快速、灵敏地检测缺氧引起的心肌细胞DNA损伤。缺氧导致细胞的DNA损伤可能是诱导心肌细胞凋亡发生的重要机制之一。     

牛磺酸对经单细胞凝胶电泳技术检测人视网膜色素上皮氧化损伤的保护特征

目的：观察过氧化氢对人视网膜色素上皮细胞的氧化作用，以及牛磺酸对人视网膜色素上皮细胞的抗氧化作用。 方法：实验于2005—01／09在哈尔滨医科大学公共卫生学院中心实验室完成。①人眼视网膜色素上皮细胞来源：实验眼来自20—35岁男性意外死亡后12h内捐给黑龙江省眼库作为角膜移植的供体眼5眼，家属签署知情同意书。取8-10代人眼视网膜色素上皮细胞用于实验. ②过氧化氢损伤实验：将培养的细胞按随机数字表法分为5组：过氧化氢各浓度组分别加入终浓度为10，25，50，100μmol／L的过氧化氢，阴性对照组只加入等量的磷酸盐缓冲液。③牛磺酸实验：将培养的细胞按随机数字表法分为5组：阴性对照组用不含血清的DMEM-F12培养液培养，牛磺酸各浓度组分别用含有终浓度为300和600μmol／L的牛磺酸培养液进行培养。将上述每个浓度组的细胞悬液分成2份，向其中1份加入终浓度为25μmol几的过氧化氢，另一份加入等量的磷酸盐缓冲液。④指标检测：15min后，用单细胞凝胶电泳法检测人视网膜色素上皮细胞的DNA损伤的程度，以拖尾率（彗星细胞数／总细胞数）和拖尾细胞DNA迁移距离[400倍显微镜下测量25个拖尾细胞的DNA迁移长度，整个核DNA直径和迁移DNA（即彗星尾）长度，其差值为DNA迁移距离]的变化表示。⑤统计学分析：用四格表x^2检验（确切概论法）比较组间彗星细胞拖尾率；用t检验进行组间DNA迁移距离比较。 结果：①过氧化氢损伤实验结果：阴性对照组DNA荧光图像为红色圆球形，过氧化氢各组出现彗星样，随着过氧化氢浓度（10，25，50，100μmol／L）的增加，人视网膜色素上皮细胞拖尾率和DNA迁移距离均明显高于或长于阴性对照组[拖尾率：4．6％，26．0％，43．3％，86．6％，96．0％；DNA迁移距离：（4．13&;#177;0．52），（10．54&;#177;2．03），（20．59&;#177;4．42），（39．56&;#177;10．28），（51．54&;#177;15．93）μm，P〈0．01]。②牛磺酸实验结果：300和600μmol／L牛磺酸组视网膜色素上皮细胞拖尾率和拖尾细胞DNA迁移距离与阴性对照组相近（P〉0．05）。300和600μmol／L牛磺酸＋25μmol／L的过氧化氢组均明显低于或短于25μmol／L过氧化氢组[拖尾率：22．6％，20．0％，43．3％；DNA迁移距离：（17．46&;#177;7．13），（13．56&;#177;2．52），（20．59&;#177;4．42）μm，P〈0．05]，且牛磺酸浓度越高，差异越大。 结论：10μmol／L过氧化氢就能对人视网膜色素上皮细胞直接造成DNA断裂损伤，该作用呈剂量依赖性。适量的牛磺酸（300和600μmol／L）对人视网膜色素上皮细胞DNA的氧化断裂损伤起保护作用，该作用也呈剂量依赖性     

核酸对铅染毒大鼠DNA损伤的干预效应

目的:探讨抗氧化物质核酸对铅染毒大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的干预效应。方法:实验于2003-03/05在哈尔滨医科大学公共卫生学院完成。选用32只纯种雄性健康3月龄Wistar大鼠,清洁级,32只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、低剂量和高剂量核酸组各8只。空白组正常饮水,其余3组饮醋酸铅水溶液8g/L。空白组、模型组灌胃蒸馏水,低剂量和高剂量核酸组分别灌胃核酸200,700mg/kg,末次灌胃后24h,尾部取抗凝血,分离淋巴细胞,制成细胞悬液,24h内待测。5周后断头处死各组动物,取出肝脏,制成肝细胞悬液,24h内待测。采用单细胞凝胶电泳技术(彗星细胞实验)对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤进行观察,细胞中DNA损伤单链断裂时会出现拖尾的彗星细胞。每片随机观察30个细胞,计数彗星细胞百分率,用目镜测微尺测量彗星细胞尾长。结果:32只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长比较:模型组与核酸低、高剂量组大鼠淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长均显著高于空白组[(50.25±6.21)%,(41.25±6.96)%,(35.38±5.93)%,(6.88±1.13)%;(23.25±4.23)μm,(16.50±4.24)μm,(13.63±2.62)μm,(6.75±1.17)μm,(q=11.28～42.94,P<0.01)]。核酸低、高剂量组彗星细胞百分率及彗星细胞尾长均明显低于模型组(q=8.91～15.77,P<0.01)。②肝细胞中彗星细胞百分率和尾长比较:模型组与核酸低、高剂量组大鼠肝细胞彗星细胞百分率和尾长均明显高于空白组(56.25±6.71)%,(42.25±6.09)%,(39.25±7.17)%,(8.25±1.28)%;(27.63±4.98)μm,(19.25±3.54)μm,(18.50±5.48)μm,(7.88±0.99)μm,(q=14.07～45.24,P<0.01)。核酸低、高剂量组彗星细胞百分率和尾长也显著低于模型组(q=11.10～16.02,P<0.01)。结论:慢性铅染毒可导致大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤,饮食核酸能显著提高对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的修复作用。     

10—羧基喜树碱对人膀胱癌细胞染色质DNA的断裂作用的研究

目：探讨10－羟基喜树碱（10－Hydroxyl camptothecine,10-HCPT)对T24人膀胱癌细胞染色质DNA的断裂作用。方法：采用快速，灵敏的检测细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳（Singe cell gel electrophoresis,SCGE)技术，观察不同浓度10－HCPT（0.01-0.1mg/ml)分别作用于T24人膀胱癌细胞不同时间（24h和48h)后细胞DNA的损伤情况，以“彗星样”淋巴细胞出现率（计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例），总彗星长度（“彗星”电泳方向上的最大长度，即尾长）和尾距（尾部DNA占总DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积）来评价淋巴细胞DNA的损伤程度。结果：10－HCPT能剂量依赖性地导致T24人膀胱癌细胞DNA的明显断裂损伤，能使“彗星样”膀胱癌细胞出现率，总彗星长度和尾距显著增加（P＜0．05，P＜0．01），并随着时间的延长损伤加重。结论：HCPT对膀胱癌细胞具有很强的细胞毒作用，10－HCPT作用下T24人膀胱癌细胞DNA断裂损伤的增加，可能就是10－HCPT抗肿瘤效应的重要作用机理之一。     

新生儿缺氧缺血性脑病血谷胱甘肽过氧化物酶水平与DNA损伤的关系探讨

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)水平与外周血单个核细胞DNA损伤程度的关系。方法HIE患儿20例,分别在急性期、恢复期采血,用动力学检测全血中GSHPx水平,用碱性单细胞凝胶电泳(SCGE)检测外周血中单个核细胞的彗星率及尾矩。12例新生儿作为正常对照组。结果急性期HIE患儿血中,GSHPx水平明显减低,与对照组比较有统计学意义(P<0.01),恢复期GSHPx水平上升,与对照组比较无统计学意义(P>0.05);急性期HIE患儿外周血单个核细胞彗星率及尾矩显著增高,与对照组比较有统计学意义(P<0.01),恢复期两者水平下降,但与对照组比较仍有统计学意义(P<0.01)。结论自由基及DNA损伤参与了新生儿HIE的病理发展过程,GSHPx可作为HIE患儿体内自由基水平检测指标之一。     

黄芪总黄酮对尿毒症患者血清诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪总黄酮(TFA)对尿毒症患者血清诱导的内皮细胞凋亡的影响。方法收集22例健康志愿者和25例规律血液透析的尿毒症患者血清。以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为研究对象,设立对照组(细胞同步化后加入健康志愿者血清)和尿毒症组(细胞同步化后加入尿毒症患者血清)。细胞同步化前6h,在尿毒症组的一部分细胞中加入0.5、1.0、2.0mg/mL TFA预先进行干预,分别得到低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞。细胞培养24h后,于显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖活力;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;硝酸还原酶比色法测定一氧化氮(NO)水平;彗星实验法检测细胞DNA损伤;TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组比较,尿毒症组细胞增殖活力、SOD活性、NO水平均降低(P<0.01),DNA拖尾率、细胞凋亡指数(AI)均升高(P<0.01);与尿毒症组细胞比较,不同剂量干预的各组细胞增殖活力均增加(P<0.05),NO水平均升高(P<0.01);与尿毒症组比较,中剂量、高剂量组SOD活性增加(P<0.05),DNA损伤拖尾率降低(P<0.05)。结论 TFA可减少尿毒症患者血清诱导的内皮细胞凋亡,其可能机制与抗氧化应激有关。     

骨关节炎中软骨细胞CD80/CD86的表达

目的骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的一种慢性退行性骨关节疾病。近年的研究显示骨关节炎不但是一种退行性疾病,而且是一种关节内的炎症反应。通过检测OA软骨细胞CD80/CD86的表达情况,探讨软骨细胞在OA发病中的作用。方法收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组。进行软骨细胞培养和流式细胞技术,检测软骨细胞CD80/CD86的表达情况。进行统计学分析。结果病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P<0.01)。病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P<0.01)。结论CD80/CD86在骨关节炎患者软骨细胞中表达增加,做为抗原提呈细胞的标志分子,提示软骨细胞在骨关节炎中发挥抗原提呈作用。     

双尾彗星实验检测精子DNA完整性的方法学建立

目的建立双尾彗星实验检测精子DNA完整性的方法学,并分析精子DNA损伤的类型。方法利用中性和碱性双相单细胞凝胶电泳技术检测精子DNA损伤的情况。结果双尾彗星实验共得到9种彗星形态,分别代表9种精子DNA损伤类型。利用H2O2和限制性内切酶AluI分别诱导单链DNA和双链DNA的产生。随着H2O2浓度逐渐增加,单链DNA的断裂逐渐增多,显微镜下可见含Y轴彗星尾的精子数逐渐增多,差异有统计学意义(P<0.05)。同样,随着AluI消化时间的延长,双链DNA的断裂增多,显微镜下可见含X轴彗星尾的精子数增多,差异有统计学意义(P<0.05)。另外,我们还发现男性不育组和有正常生育能力组的DNA单链损伤碎片指数(SSB-DFI)差异无统计学意义,而男性不育组的DNA双链损伤碎片指数(DSB-DFI)却显著高于正常生育能力组(P<0.05)。结论双尾彗星实验能够区分精子DNA损伤是单链损伤还是双链损伤,为评估男性的生育能力提供更加深入、有力的实验室依据。     

马钱子碱对一氧化氮诱导软骨细胞凋亡的影响

目的:观察中药马钱子碱对一氧化氮(nitricoxide,NO)在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的影响。方法:取体外培养的新西兰兔软骨细胞,分别加入硝普钠(SNP)培养12,24,48h,用透射电镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡的变化,并以不同剂量马钱子碱加入NO诱导的软骨细胞凋亡体系培养24h,采用annexinV/PI方法检测凋亡情况。结果:在体外培养兔软骨细胞加入硝普钠24h,流式细胞仪检测早期凋亡率为(38.7±6.5)%。空白对照组为(2.4±1.4)%(t=10.90,P<0.01),透射电镜可见典型软骨细胞早期凋亡形态改变,并有一定时间依赖性,加入不同剂量马钱子碱,其凋亡率明显下降,并以高剂量最为显著为(2.9±1.1)%。马钱子碱高剂量组加入硝普钠后与正常软骨细胞组比较,二者凋亡率无显著差异性(t=0.51,P>0.05)。结论:硝普钠在体外能诱导软骨细胞凋亡,马钱子碱能明显降低NO诱导的软骨细胞早期凋亡,提示马钱子碱能有效治疗骨关节炎,可能与抑制软骨细胞早期凋亡有关。     

脐血造血细胞体外扩增过程中DNA损伤的研究

本研究检测脐血(CB)单个核细胞(MNC)体外培养DNA损伤情况,以探讨体外培养的最佳收获时机。脐血MNC分别接种于含细胞因子无血清培养体系并进行集落接种,分别在0、7、14及21天收集细胞,用流式细胞仪检测CD34+及CD133+细胞数,采用单细胞凝胶电泳试验检测培养后不同时间点脐血造血细胞及集落细胞的DNA链断裂损伤情况。结果表明,体外短期培养(14天内)时,脐血CD34+及CD133+细胞数最多,脐血细胞DNA损伤率均低于5.0%,21天时CD34+及CD133+细胞数降到低于0天的比例,细胞DNA损伤率为28.2%,DNA损伤率比0天时高(p=0.000),损伤细胞彗星尾长度明显大于0天(p=0.000);而其余各培养时间点(7天和14天)损伤细胞彗星尾长度与培养0天组损伤细胞的彗星尾长度比较,差异无统计学意义(p=0.863及p=0.253);集落培养细胞DNA损伤率均低于5.0%。结论:利用本方法进行脐血造血细胞短期(14天)培养DNA损伤率均低于5.0%,但超过14天时DNA损伤明显增加,体外培养的最佳收获时机应在14天内。     

骨关节炎中软骨细胞的CD80/CD86的表达及白细胞介素18对其影响

目的探讨软骨细胞及γ-干扰素(γ-IFN)在骨关节炎发病中的作用。方法收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组。经过软骨细胞培养及γ-IFN的刺激,采用流式细胞技术检测CD80/CD86的表达情况。结果病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P<0.01)。病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P<0.01)。正常对照组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80阳性百分率(7.39%±3.18%)比刺激前明显增高(P<0.01),CD86阳性百分率刺激后(4.96%±3.11%)明显升高(P<0.01)。OA组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86阳性百分率(7.54%±4.47%、6.52%±4.24%)比刺激前明显增高(P<0.01)。两组软骨细胞在γ-IFN刺激后CD80和CD86的表达差异均没有显著性。结论正常软骨细胞有抗原提呈的潜能,γ-IFN可以诱导正常软骨细胞表达CD80/CD86增加,γ-IFN在骨关节炎发病中可能发挥致炎因子的作用。     

单细胞电泳法检测肿瘤患者化疗后淋巴细胞DNA损伤

应用单细胞电泳 (SCGE)检测肿瘤患者环磷酰胺化疗后外周血T淋巴细胞DNA损伤。在标准SCGE条件下应用彗星图象分析系统定量分析人T淋巴细胞DNA的损伤程度。彗星图象分析研究结果显示 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞DNA损伤明显强于正常对照组 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞拖尾动量为 10 42± 1 98,正常人群为 1 2 6± 0 77;两者差异极显著 (P <0 .0 1)。肿瘤患者化疗后T淋巴细胞的拖尾长度为 3 3 69± 7 56μm ,DNA损伤的百分比为 3 1 5± 5 46% ;正常人群T淋巴细胞的拖尾长度和DNA损伤的百分比分别为 16 2± 1 5μm和7 46± 1 15% ;两组数据相比差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :单细胞电泳可快速灵敏地检测细胞DNA损伤 ,能用于肿瘤化疗患者的流行病学观察。对于指导临床用药和预后也有指导意义     

超声增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应

目的探讨超声能否增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应。方法人卵巢癌顺铂耐药细胞COC1/DDP以顺铂处理,同时在给予药物后加以超声辐照。以单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测DNA损伤。结果对照组、DDP组、US组及DDP＋US组的慧星长度（像素）分别为26.9&#177;2.86、48.4&#177;14.29、31.3&#177;3.42、71.7&#177;8.90。DDP组、DDP＋US组对细胞DNA的损伤均较对照组高（P〈0.05、P〈0.05）。结论增强顺铂对DNA的损伤是超声逆转卵巢癌细胞顺铂耐药性的机制     

微量全血单细胞凝胶电泳评定过度训练大鼠淋巴细胞DNA损伤

背景：微量全血单细胞凝胶电泳技术是检测有核细胞DNA损伤与修复的一种方法，具有敏感性高、取材方便、细胞制备简单、不需体外活化、费用低、实验周期短等优点。目的：采用微量令血单细胞凝胶电泳技术评定过度训练对大鼠血液淋巴细胞DNA损伤的情况。设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照实验，于2004-08／09在沈阳体育学院研究生实验室完成。材料：雄性Wistar大鼠29只，按随机数字表法分为2组，正常对照组12只、运动组17只。方法：正常对照组大鼠不参加运动。运动组大鼠在玻璃池中进行游泳训练。采用6周递增负荷游泳训练建立过度训练动物模型，训练结束后24h，避光眼眶取血。主要观察指标：采用微量全血单细胞凝胶电泳法柃测单个血液淋巴细胞的DNA尾长、尾矩、椭圆矩，以反映DNA的损伤情况。结果：荧光显微镜下运动组大鼠淋巴细胞的DNA断裂比正常对照组明显，断片离开头部向阳极方向迁移，形成一个像彗星样的拖尾。运动组反映大鼠血液淋巴细胞DNA损伤的指标尾长、尾矩和椭圆矩显著高于正常对照组，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：6周递增负荷过度训练后大鼠血液淋巴细胞存在DNA损伤。     

透骨消痛胶囊对早期骨关节炎软骨细胞超微结构与软骨基质的影响

目的:观察透骨消痛胶囊对大鼠早期骨关节炎模型软骨细胞超微结构及软骨基质的影响。方法:24只雄性大鼠按照体质量随机分成正常组、模型组、中药组,每组8只。采用膝关节腔注射木瓜蛋白酶建立骨关节炎大鼠模型,给予透骨消痛胶囊水溶液干预4周后处死大鼠,取股骨髁关节软骨进行电镜和光镜制样,观察软骨细胞显微、超微结构;组织化学法定量软骨基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原含量。结果:软骨细胞超微结构观察,与正常组比较,模型组软骨细胞增生、簇聚,细胞器大量减少或肿胀;与模型组比较,中药组软骨细胞聚集减少,粗面内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器数量增多。软骨基质含量检测发现,与正常组比较,模型组蛋白多糖和Ⅱ型胶原含量均显著降低(P0.01);与模型组比较,中药组蛋白多糖和Ⅱ型胶原含量均显著升高(P0.01)。结论:透骨消痛胶囊可减轻早期骨关节炎软骨细胞变性、内质网和线粒体等损伤,增加软骨基质合成,从而延缓骨关节炎软骨退变。     

参芪脑保含药血清在体外培养PC12细胞抗凋亡作用中的量效分析

目的:观察在经典药方补阳还五汤基础上加减而成的参芪脑保对体外培养的正常PC12细胞增殖和对抗活性氧(100μmol/L过氧化氢)引起的细胞凋亡作用,分析该作用的量效关系。方法:实验于2002-09/2003-04在解放军总医院老年医学研究所老年医学实验室完成。①含药血清制备:选用3月龄SD大鼠,随机分为4组:对照组,参芪脑保6.4,3.2,1.6g/kg组,每组12只。参芪脑保6.4,3.2,1.6g/kg组:将参芪脑保颗粒剂(成分:黄芪、丹参、当归尾、桃仁、红花、川芎、赤芍、地龙,10g/包,由解放军总医院制剂室提供,批号000831)按6.4,3.2,1.6g/kg剂量溶于2mL蒸馏水中灌胃;对照组:给予等量蒸馏水。各组连续灌胃7d后腹主动脉取血分离含药血清。②参芪脑宝对正常细胞增殖的影响:采用大鼠PC12细胞作为体外神经细胞模型。将对数生长期细胞接种于96孔培养板,将细胞随机分为4组:对照组和参芪脑保6.4,3.2,1.6g/kg组,分别加入含体积分数0.1各组相应含药血清的DMEM培养液,分别于培养24,60和86h进行细胞计数。③参芪脑保抗活性氧引起的细胞凋亡作用:将对数生长期细胞培养24h。将细胞随机分为5组:对照组、过氧化氢损伤组和过氧化氢 参芪脑保6.4,3.2,1.6g/kg组,除对照组外,其余各组均用含过氧化氢(终浓度100μmol/L)和20g/LB27的无血清DMEM培养基处理30min,过氧化氢损伤组和氧化损伤组改用含体积分数0.1的对照组血清培养基,参芪脑保各剂量组改用相应的含药血清培养基继续培养48h。④采用四氮唑蓝比色法测定正常细胞增殖和活性氧损伤后细胞存活数;采用流式细胞仪和DNAladder法观察细胞凋亡及参芪脑保抗凋亡作用及其剂量效应关系。⑤多组间差异采用方差分析,根据方差齐性结果,采用非配对t检验作两组间比较。结果:①参芪脑保对正常细胞增殖的影响:与对照组相比,参芪脑保6.4,3.2,1.6g/kg组在培养24,48和86h时均能明显提高正常PC12细胞的存活数(P<0.01),但无明显剂量效应关系。②参芪脑保对活性氧损伤后细胞存活数的影响:过氧化氢损伤组的细胞存活数明显低于对照组(P<0.01),除了过氧化氢 参芪脑保1.6g/kg组外,过氧化氢 参芪脑保6.4,3.2g/kg组细胞存活数明显高于过氧化氢损伤组(P<0.01)。③参芪脑保对活性氧损伤后细胞凋亡率影响:过氧化氢损伤组的细胞凋亡率明显高于对照组,除过氧化氢 参芪脑保1.6g/kg组外,过氧化氢 参芪脑保6.4,3.2g/kg组细胞凋亡率均明显低于过氧化氢损伤组(P<0.01)。④参芪脑保对活性氧损伤后细胞DNA片断化的影响:过氧化氢损伤组细胞的DNA片断化明显增强,过氧化氢 参芪脑保3.2g/kg组也可见轻度DNAladder现象,但过氧化氢 参芪脑保3.2g/kg和6.4g/kg组的DNAladder则明显减弱甚至消失,说明有明显的剂量效应关系。结论:参芪脑保对正常培养PC12细胞具有明显促进增殖作用,并在较高剂量下能显著对抗过氧化氢引起的细胞存活率降低、细胞凋亡率增高和DNA片断化,表明参芪脑保具有明显的神经保护作用,其机制可能与抗氧化反应有关。