重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗烧伤及皮肤损伤的临床研究

目的探讨烧伤及皮肤损伤患者采用重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗的临床效果。方法将我院60例烧伤及皮肤损伤患者随机分为观察组与对照组各30例,给予对照组常规治疗,观察组施加重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗,对比两组的临床效果。结果对照组浅Ⅱ度、深Ⅱ度、供皮区、肉芽、外伤与慢性创面的愈合时间均明显高于观察组;观察组不良反应发生率以6.7%明显低于对照组的33.3%(P0.05)。结论烧伤及皮肤损伤患者采用重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗后的效果显著,值得推广。     

聚乳酸对皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

目的：观察种植在聚乳酸材料上的皮肤成细胞的生物学特性，为其在人工真皮中的应用打好基础。方法：将体外培养的人皮肤成纤维细胞接种到聚乳酸膜上，观察细胞在膜上的粘附、增殖，形态结构。结果：接种后的皮肤成纤维细胞在聚乳酸膜上有较高的粘附率，并且增殖良好。HE染色明显可见细胞在膜上所形成的复层化结构。结论：聚乳酸可以支持皮肤成纤维细胞的正常生长，在皮肤组织工程中有一定的应用价值。     

二羧酸转运蛋白对人成纤维细胞周期和周期蛋白的影响

背景:钠依赖二羧酸转运蛋白参与能量代谢,对细胞衰老可能有影响,但其促进细胞衰老的机制不清.目的:通过细胞周期和周期蛋白的测定探讨二羧酸转运蛋白(hNaDC3)促进细胞衰老的可能机制.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-12/2008-05在南京市鼓楼医院完成.材料:WI-38细胞为ATCC公司产品;pLNCX2反转录病毒载体、正义载体PLNCX2-hNaDC3和反义载体PLNCX2-AshNaDC3为Clontech公司产品.方法:在已构建的反转录病毒载体基础上,使用含有hNaDC3基因的反转录病毒液将hNaDC3基因导入人胚肺二倍体成纤维细胞(WI-38)中,并获得表达,通过细胞周期、P16的检测以观察其对细胞衰老的影响.主要观察指标:①WI-38细胞hNaDC3整合和表达.②hNaDC3转导致WI-38细胞形态和传代数的改变.③细胞周期变化.④细胞周期蛋白P16的表达.结果:Northern blot及Western blot结果显示WI-38/hNaDC3细胞在基因和蛋白水平均有hNaDC3的表达,WI-38/As hNaDC3细胞有hNaDC3 mRNA整合而无蛋白表达.与对照细胞相比,hNaDC3基因导入后,人二倍体成纤维细胞形态呈衰老细胞样变化,细胞传代数减少8～12代,生长速率降低,细胞周期阻滞于G1期,细胞周期蛋白P16的表达增高.结论:hNaDC3可能通过增高P16表达促进人二倍体成纤维细胞的衰老.     

长波紫外线照射皮肤成纤维细胞表皮生长因子受体的表达

背景:长波紫外线与人体皮肤老化关系密切,主要作用于表皮和真皮全层。目的:观察长波紫外线照射对体外培养的皮肤成纤维细胞的表皮生长因子受体表达的影响。方法:体外培养人成纤维细胞,将细胞分为对照组、长波紫外线照射5,10,20J/cm2组。照射24h后,分别用实时PCR和Western blot检测表皮生长因子受体mRNA和蛋白的表达情况。结果与结论:体外培养的皮肤成纤维细胞随着长波紫外线照射剂量的增加,表皮生长因子受体的mRNA与蛋白水平均显著增加,提示长波紫外线可以诱导成纤维细胞里的表皮生长因子的表达。     

人皮肤成纤维细胞的培养和鉴定

目的探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法通过酶消化法分离人皮肤外分泌汗腺，在外分泌汗腺生长的同时，成纤维细胞也在生长；用质量分数为0．25％的胰酶和0．02％的乙二胺四乙酸(EDTA)消化分离汗腺细胞和成纤维细胞；以Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)为基础培养基，添加胎牛血清(体积分数10％)、青霉素(100kU／L)和链霉素(100mg／L)，置37℃、体积分数为5％CO2、95％空气、饱和湿度条件下培养。倒置相差显微镜和苏木素-伊红染色，观察成纤维细胞形态，并对培养细胞行波形蛋白免疫组化及染色体鉴定。结果分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖，波形蛋白免疫组化染色为阳性，染色体分析为46条。结论该方法所获得的皮肤成纤维细胞可在体外稳定培养，为在细胞水平上研究伤口愈合的机制提供了充足、可靠的靶细胞。     

长波紫外线照射皮肤成纤维细胞表皮生长因子受体的表达术

背景：长波紫外线与人体皮肤老化关系密切,主要作用于表皮和真皮全层。目的：观察长波紫外线照射对体外培养的皮肤成纤维细胞的表皮生长因子受体表达的影响。方法：体外培养人成纤维细胞。将细胞分为对照组、长波紫外线照射5,10,20J／cm^2。组。照射24h后,分别用实时PCR和Westernblot检测表皮生长因子受体mRNA和蛋白的表达情况。结果与结论：体外培养的皮肤成纤维细胞随着长波紫外线照射剂量的增加,表皮生长因子受体的mRNA与蛋白水平均显著增加,提示长波紫外线可以诱导成纤维细胞星的表皮生长因子的表达。     

聚乳酸对皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

目的观察种植在聚乳酸材料上的皮肤成纤维细胞的生物学特性,为其在人工真皮中的应用打好基础。方法将体外培养的人皮肤成纤维细胞接种到聚乳酸膜上,观察细胞在膜上的粘附、增殖,形态结构。结果接种后的皮肤成纤维细胞在聚乳酸膜上有较高的粘附率,并且增殖良好。HE染色明显可见细胞在膜上所形成的复层化结构。结论聚乳酸可以支持皮肤成纤维细胞的正常生长,在皮肤组织工程中有一定的应用价值。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用，为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法：实验皮肤标本来源于2002—07／2003—07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者，取冗余全层皮肤组织，患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞，实验分为异搏定组：包括1&;#215;10^-3, 1&;#215;10^-4, 1&;#215;10^-5, 1&;#215;10^-6, 1&;#215;10^-7, 1&;#215;10^-8,1&;#215;10^-9,1&;#215;10^-10mol／L组，分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液；氢化可的松组：在细胞培养孔中加入2mL浓度为1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松的培养液；对照组：在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0．005的新生牛血清的Dulbecco＇s改良的Eade＇s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色；细胞增殖状况测定应用^3氚标记的胸腺嘧啶掺入法；观察细胞增殖抑制率[抑制率（1％）=（阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值）／阴性对照每分钟脉冲数值]，取各例样本的平均值。结果：①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果：对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖，24h达到高峰，48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应：各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用，其中1&;#215;10^-6mol／L异搏定与1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异（t=0．135,P=0．896〉0．05）。③浓度为1&;#215;10^-6mol/异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应：氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12,48h时[（60．67&;#177;18．94）％比（-19．69&;#177;21．26）％，（10．89&;#177;11．61）％，（37．03&;#177;12．17）％，q=10．867．6．732，3．197；P〈0．051；异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12，48h时[（51．42&;#177;15．30）％比（-16．83&;#177;16．90）％．（1．09&;#177;11．62）％，（17．41&;#177;13．41）％，q=10．566，7．791，5．265，〈0．051；在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松（t=2．423,P=0．042〈0．05）。结论：不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用，异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

立体培养条件下人皮肤成纤维细胞的生物学特性

目的 观察人皮肤成纤维细胞在立体培养条件下的生长、增殖及代谢情况。方法 以人纤维蛋白凝胶为载体，将人皮肤细胞中的成纤维细胞接种于其中，以单层培养为对照，观察细胞对纤维蛋白胶的作用及其在生长增殖、DNA合成及胶原合成等方面的生物学变化。结果 成纤维细胞在纤维蛋白胶中具有良好的细胞形态、正常的生长增殖、DNA合成及胶原合成等生物学功能并能引起纤维蛋白凝胶的明显收缩。结论 该培养系统可用于成纤维细胞的体外培养且能较好地模拟其在创面愈合中的生物学行为。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用,为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法:实验皮肤标本来源于2002-07/2003-07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者,取冗余全层皮肤组织,患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞,实验分为异搏定组:包括1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9,1×10-10mol/L组,分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液;氢化可的松组:在细胞培养孔中加入2mL浓度为1×10-7mol/L氢化可的松的培养液;对照组:在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0.005的新生牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色;细胞增殖状况测定应用3氚标记的胸腺嘧啶掺入法;观察细胞增殖抑制率[抑制率(I%)=(阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值)/阴性对照每分钟脉冲数值],取各例样本的平均值。结果:①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果:对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖,24h达到高峰,48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应:各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用,其中1×10-6mol/L异搏定与1×10-7mol/L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异(t=0.135,P=0.896>0.05)。③浓度为1×10-6mol/L异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应:氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(60.67±18.94)%比(-19.69±21.26)%,(10.89±11.61)%,(37.03±12.17)%,q=10.867,6.732,3.197;P<0.05];异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(51.42±15.30)%比(-16.83±16.90)%,(1.09±11.62)%,(17.41±13.41)%,q=10.566,7.791,5.265;P<0.05];在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松(t=2.423,P=0.042<0.05)。结论:不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠皮肤生长促进作用的比较

目的　比较改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)促进大鼠皮肤生长的作用。方法　将 2 mm× 2 mm的新生大鼠皮肤分别接种在含有 1、10和 10 0 μg/ L 3种不同浓度的改构型 a FGF和野生型 a FGF与体积分数为 10 %小牛血清的 Dulbecco改良 Eagle培养基中培养 4 d,然后测定生长后皮肤的面积。结果　空白对照组的皮肤面积为 ( 2 .96± 1.12 ) mm2 ,浓度为 1、10和 10 0 μg/ L 改构型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.4、1.5和 1.3倍 ,而 3种不同浓度的野生型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.5、3.2和 1.6倍。与其他组相比 ,只有浓度为 10μg/ L野生型 a FGF组的皮肤面积显著升高 ( P<0 .0 5 )。结论　改构型 a FGF对皮肤生长无显著刺激 ,其作用效果明显低于野生型 a FGF。     

RT-PCR检测人皮肤组织中趋化因子受体基因

目的　建立检测人体皮肤组织中趋化因子受体基因的RT PCR方法。方法　取 2 0例银屑病患者皮损及皮损边缘未受累部位皮肤 ,并收集 1 0例健康人皮肤 ,用 2 5g/L分散酶 (dispase)消化分离真皮、表皮 ,TRIzol提取RNA ,逆转录合成cDNA ,PCR扩增CXC型趋化因子受体CXCR2片段。结果　银屑病患者皮损部位表皮及真皮中的CXCR2表达水平 (为靶序列与 β 肌动蛋白序列吸光度之比 ,下同 )分别为 1 .2 9± 1 .1 3和 2 .4 2± 1 .2 6 ,明显高于皮损边缘部位及健康对照皮肤 (分别为 0 .5 2± 0 .4 6、0 .92± 0 .6 0和 0 .0 2± 0 .0 2、0 .0 5± 0 .0 4 ) (均P <0 .0 1 ) ,CXCR2基因表达在真皮高于表皮。结论　CXCR2可能参与银屑病的发病机制 ,建立的检测人体皮肤组织中趋化因子受体基因的RT PCR基本可靠     

rhEGF凝胶预防宫颈癌放疗所致会阴皮肤损伤的效果观察及护理

目的 观察rhEGF凝胶用于预防宫颈癌放疗所致会阴皮肤损伤的临床效果.方法 将112例接受放射治疗的宫颈癌患者随机分为观察组和对照组各56例,观察组会阴部皮肤采用常规护理加rhEGF凝胶预防,对照组会阴部皮肤只采用常规护理,比较两组会阴部皮肤发生放射反应的程度.结果 对照组发生放射性皮炎49例,发生率为87.5%,观察...     

依济复用于放射性皮肤损伤的疗效研究

目的:研究依济复治疗放射性皮肤损伤的疗效。方法:将39例接受放疗后出现皮肤损伤的患者随机分为实验组和对照组,对照组按照常规的皮肤护理,实验组在常规护理的基础上采用依济复进行喷涂治疗,观察两组的疼痛程度与创面愈合时间。结果:实验组患者的疼痛减轻程度明显优于对照组,实验组平均愈合时间较对照组短。结论:依济复对创面刺激较小,并能显著减轻创面疼痛,加速创面愈合,对放射性皮肤损伤具有较好的临床疗效。     

洁悠神用于放射性皮肤损伤的疗效观察

目的观察洁悠神对放射性皮肤损伤的预防和控制效果。方法将86例接受放疗过程出现急性放射性皮肤损伤的鼻咽癌患者随机分成2组。观察组40例使用洁悠神治疗,对照组46例只作常规的宣教以及皮肤护理。结果观察组2级以上皮肤反应发生率及程度明显低于对照组,两组差别有统计学意义。结论洁悠神能降低放射性皮肤损伤的发病率,促进放射性皮肤损伤的愈合,保证放射治疗的顺利进行。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对缺血心肌的保护作用

目的：探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）在急性心肌缺血中对缺血心肌细胞的保护作用。方法：无菌条件下开胸结扎兔冠状动脉左前降支（LAD），建立急性心肌梗死动物模型；制备rhbFGF蛋白，将其直接四点注入兔缺血心肌内，通过心肌酶学及电镜病理观察rhbFGF对缺血心肌的保护作用。结果：①血清心肌酶学观察：结扎LAD后24h及48h心肌酶AST、LDH、LDH-1、CK、CK-MB、HBDH与术前比较显著升高，术后48h rhbFGF组心肌酶CK-MB较生理盐水对照组明显降低；术后48h与24h相比较，LDH-1在生理盐水对照组升高而在rhbFGF组降低；②电镜观察：与生理盐水对照组相比rhbFGF组心肌细胞间可见大量毛细血管生长，新生血管周围可见趋于正常的心肌细胞。结论：rhbFGF可缩小心肌梗死面积，对缺血心肌细胞可能有直接的保护作用。     

PDCA循环在预防动脉压迫止血器致皮肤损害中的应用效果

目的通过采用PDCA持续改进肝癌介入术后动脉压迫止血器使用方法,以期减少因动脉压迫止血器致皮肤损害的发生率,减轻患者痛苦。方法选取肝癌介入术后使用动脉压迫止血器患者305例,应用PDCA循环缩短压迫时间、建立皮肤损害高危评估机制,评估患者局部皮肤损害情况。结果通过PDCA持续改进,动脉压迫器所致患者皮肤损害的发生率降低(P0.01)。结论缩短动脉压迫止血器压迫时间、实施皮肤破损高危评估基本解决了介入术后动脉压迫止血器致皮肤损害的问题,在发现、解决护理问题中起到推动作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠真皮下血管网皮片愈合的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞因子(bFGF)对大鼠真皮下血管网皮片愈合的影响。方法:Wistar大白鼠30只,每只背部切取2个真皮下血管网皮片并原位移植缝合,上部皮片下注入bFGF为实验组。下部皮片为对照组,术后大体肉眼观察皮片成后情况,并于2,4,6,8d取材镜下组织学观察CD34阳性细胞数、血管内皮细胞生长情况,微血管密度及肉芽组织生长情况。结果:实验组与对照组皮片成活率分别为93%及64%,经配对t检验差异显著(t=3.701,P<0.01)。其镜下观察CD34阳性细胞数、微血管数及肉芽组织厚度两组均有明显差异(P<0.01)。结论:bFGF具有广泛的细胞增殖效应,可通过多个环节促进小血管形成及肉芽组织增长,加速移植皮片与周围皮肤的愈合过程。     

Engineering a human skin equivalent to study dermis remodelling and epidermis senescence in vitro after UVA exposure

Utra Violet type A (UVA) exposure strongly affects the ageing of human skin by modifying both epidermis and dermis and their cross talk as well. The possibility to get a deep understanding in vitro of such crucial mechanism would have a huge impact in the development of antiageing compounds. Here, we present a full thickness model of human skin equivalent formed by a millimeter‐sized dermis completely composed of fibroblasts embedded in their own extracellular matrix. We show that such endogenous nature of the dermis compartment allows the replication of the complexity of the mutual interactions occurring between cellular and extracellular components of the skin under UVA exposure: (a) oxidative stress formation in the whole tissue (dermis and epidermis); (b) senescence of germinative layer of epidermal tissue in terms of p63, ki67, and activated caspase‐3 regulation; (c) modification of the collagenous network architecture in the dermis compartment. By using this human skin model, it is possible to study a widely shared assumptions not yet proved in vitro such the effect of UVA on the self‐renewal capability of skin stem cells.