海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2+]i的影响

目的：揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果：海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时,Ca^2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论：海嘧啶通过升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,从而启动肿瘤细胞凋亡机制,诱导肿瘤细胞凋亡;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道,引起肿瘤细胞内钙库释放,降低肿瘤细胞钙泵活性3条途径达到的。     

海嘧啶对H22小鼠完整细胞膜脂流动性及人胃腺癌细胞内DNA含量影响的研究

目的 研究海嘧啶对H22荷瘤小鼠红细胞膜的影响以及对人胃腺癌细胞DNA合成的影响。方法 采用荧光分光光度法及激光扫描共聚焦显微镜进行研究。结果 海嘧啶可使荷瘤小鼠红细胞微粘度下降,膜脂流动性升高,体外实验对胃腺癌细胞内DNA荧光强度降低,DNA合成减少。结论 海嘧啶可改善荷瘤机体的血液循环,提高红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力,同时通过影响肿瘤细胞内DNA的合成发挥抗肿瘤作用。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNF_α、IL-1、IL-6及细胞[Ca~(2 )]_i的影响

目的　研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i 的影响。方法　利用脂多糖 (lipopolysacchride,L PS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型 ,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i。结果　大黄素对 TNFα 的分泌和[Ca2 ]i 有双向调节作用。结论　大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca~(2 )]i的影响

目的:观察脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响,初步探讨脑心通胶囊治疗血管性痴呆的机制。方法:采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作血管性痴呆动物模型;使用胰蛋白酶消化法制备海马组织单细胞悬液,Fura-2/AM负载分离的神经细胞,双波长荧光法测定海马神经细胞内静息态[Ca2 ]i。结果:模型组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i为437.42±32.14nmol/L,显著高于假手术组189.83±18.57 nmol/L(P<0.05);脑心通组和喜德镇组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i为252.61±20.15 nmol/L、237.34±19.83 nmol/L,较模型组显著降低(P<0.05)。结论:脑心通胶囊可降低血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2 ]i,这可能是脑心通胶囊治疗血管性痴呆的作用机制之一。     

海嘧啶对细胞膜功能及细胞凋亡影响的研究

[目的]研究海嘧啶对细胞膜功能以及肿瘤细胞凋亡的影响,阐明海嘧啶抗肿瘤作用机制。[方法]海嘧啶给予S180、H22荷瘤小鼠,观察其红细胞及肿瘤细胞膜功能变化及肿瘤细胞凋亡的情况。细胞膜功能实验测定红细胞膜免疫黏附肿瘤细胞能力、红细胞膜和肿瘤细胞膜上唾液酸含量、红细胞膜和肿瘤细胞膜的封闭度。细胞凋亡实验用流式细胞仪检测细胞分期和凋亡细胞的比例。[结果]海嘧啶对肿瘤细胞和红细胞膜功能均有影响,主要表现在:使荷瘤小鼠红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力有明显提高;可提高红细胞膜唾液酸含量而降低肿瘤细胞膜唾液酸含量;可提高红细胞膜封闭度的同时降低肿瘤细胞膜的封闭度。海嘧啶具有一定程度上的诱发细胞凋亡的作用,不同剂量海嘧啶对细胞周期有不同的影响,小剂量海嘧啶使肿瘤细胞主要集中在G0-G1期,随着剂量的加大,停滞于G2-M期的肿瘤细胞增多。[结论]海嘧啶抗肿瘤作用机制存在多种途径,体现在提高红细胞免疫功能、降低肿瘤细胞膜功能和具有一定程度的诱发肿瘤细胞凋亡的作用。     

海嘧啶对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

络合Ca~(2+)对山羊膀胱经经穴氧分压的影响

目的:探讨Ca2+和组织氧分压与经络现象之间的联系。方法:波尔杂交母山羊10只,用盐酸氯丙嗪(0.85 mg/kg)镇静后,采用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2200μL,0.05 kg/mol)络合穴区局部组织Ca2+,用新型组织氧分压传感针检测山羊膀胱经经穴"肝俞"大肠俞"关元俞"及旁开非经穴处氧分压的变化趋势。结果:1)膀胱经经穴的Ca2+电位明显高于旁开对照点(P<0.05,0.01);2)膀胱经经穴的组织氧分压高于旁开对照点(P<0.01);3)注射EDTA-Na2后,经穴的氧分压较注射前及注射生理盐水均明显升高(P<0.01),且经穴的氧分压高于旁开对照点(P<0.01)。结论:膀胱经穴Ca2+电位明显高于各自旁开对照点;注射EDTA-Na2络合Ca2+后氧分压明显升高。     

丹酚酸B对缺氧再复氧心肌细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

目的　探讨中药丹参水溶性单体成分丹酚酸B(SalB)对体外培养心肌细胞模拟心肌缺血再灌注损伤 (MIRI)钙超载的干预作用。方法　建立大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型。缺氧 4h ,复氧 2 0h ,应用荧光染料Fura - 2 /AM定量测定细胞内游离Ca2 +浓度。结果　SalB可以减少细胞内Ca2 +的浓度。结论　SalB可以抑制心肌细胞缺氧复氧过程中的Ca2 +超载 ,是其发挥心肌缺血再灌注损伤心肌保护作用的机制之一。     

海嘧啶对FC,H22荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响

 目的研究海嘧啶对荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响。方法采用DPH荧光探针标记的方法测定红细胞膜的流动性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定红细胞膜蛋白的含量,用比色法测定红细胞膜表面唾液酸含量和膜封闭度。结果海嘧啶能够降低荷瘤小鼠红细胞膜的流动性,降低荷瘤小鼠膜蛋白的含量,升高荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量,提高红细胞膜重新封闭的能力。结论海嘧啶通过改善和恢复荷瘤小鼠红细胞膜功能,改善机体的免疫功能而达到抗肿瘤的作用。     

大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2 )]_i的抑制作用特征

目的:研究大黄影响正常的及内毒素细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的特征及其与细胞[Ca~(2 )]_i 的变化关系。方法:利用 TNF-α敏感细胞系 L929,用 MTT法检测 PMφ分泌的 TNF-α量;用荧光探针和荧光光谱法分别测定多细胞和单细胞的[Ca~(2 )]_i。结果:适宜浓度的大黄可轻度活化正常的 PMφ分泌 TNF-α和升高[Ca~(2 )]_i,大黄对 LPS 刺激的 PMφ分泌 TNF-α和升高[Ca~(2 )]_i 有剂量依赖性的抑制效应,1.0%大黄分别抑制了 LPS 刺激的 PMφTNF-α分泌量的92.5%和[Ca~(2 )]_i升高的90.5%。其抑制作用主要表现在给药的早期阶段。结论:大黄对 PMφ分泌 TNF-α有双向调节作用,降低细胞[Ca~(2 )]_i 是其抑制 LPS 刺激作用的细胞内信号传导的关键环节。     

N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对青霉素诱发惊厥大鼠神经细胞内钙离子含量的影响

目的:检测黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺(N-methyl-N-cis-styryl-cinnamamide,s-MSC)对皮层定位注射青霉素(Penicillin,PNC)诱发惊厥大鼠脑神经细胞内钙离子含量的影响,初步探讨其抗惊机理。方法:20只大鼠分为5组:正常对照组(20 ml/L吐温80+生理盐水)、模型对照组(20 ml/L吐温80+PNC)、丙戊酸钠120 mg/kg+PNC7、5 mg/kg s-MSC组(s-MSC 75 mg/kg+PNC)、150 mg/kg s-MSC组(s-MSC 150 mg/kg+PNC)。建立皮层定位注射PNC诱发大鼠癫痫模型,流式细胞术检测各组大鼠左侧大脑初级、次级躯体运动皮层及左侧海马神经细胞内钙离子含量。结果:皮层定位注射PNC后大鼠脑神经元内钙离子含量增加(P<0.01),丙戊酸钠及150 mg/kg的s-MSC均可使致癫大鼠脑神经元内钙离子含量降低(P<0.01)7,5 mg/kg s-MSC对于细胞内钙离子的降低无统计学意义。结论:黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对抗大鼠皮层定位注射PNC诱发的惊厥可能与其降低神经元内钙离子含量有关。     

益心康胶囊和复方丹参片含药血清对Fe2+/抗坏血酸致大鼠心肌线粒体游离钙及摄钙能力改变的影响

目的 :研究益心康胶囊 (H30 3)和复方丹参片 (FD)对大鼠心肌线粒体损伤的保护作用。方法 :利用体外自由基产生体系造成线粒体氧应激损伤 ,观察两药含药血清对线粒体游离钙及摄钙能力的影响。结果 :2 5 2 .5mMFe2 抗坏血酸损伤心肌线粒体 30min后 ,可使线粒体游离钙及其摄钙能力发生不同的变化。线粒体摄钙能力明显降低 ,由正常血清对照组的 73 1%降至 30 8%。H30 3及FD( 50～ 80 0mg kg)含药血清组可使钙摄取能力有不同程度的增加。结论 :自由基损伤可引起大鼠心肌线粒体游离钙及摄钙能力改变 ,H30 3和FD含药血清对此具有保护作用     

诱导HEK293细胞增殖中钙离子及TRPC6的变化及意义

目的建立AngⅡ诱导人胚肾细胞增殖模型,探讨增殖效果与Ca2+变化及TRPC6表达的关系。方法用不同浓度AngⅡ诱导细胞,在不同时间(0,6,12,24,48 h),予LOS干预24 h后用激光扫描共聚焦显微镜测Ca2+变化,RT-PCR、Western Blot检测TRPC6表达情况。采用MTT法及台盼蓝法检测细胞增殖及活性,确定最适浓度及时间构建增殖模型。结果 AngⅡ10-6mol/L诱导HEK293 24 h后细胞增殖及Ca2+升高明显,LOS干预后细胞增殖及Ca2+明显下降。TRPC6表达(+/-),胞膜、胞质定位不清。结论 HEK293细胞自身无明显表达TRPC6,可利用此表达系统进一步研究外源性TRPC6与Ca2+变化的关系。AngⅡ诱导HEK293细胞增殖与Ca2+升高有关,具有一定的时间和剂量依赖性。     

清热中药对大鼠体温调节中枢Na^＋／Ca^2＋的影响

用黄芩、银花、连翘组成清热方，从体温调节中枢神经介质方面探讨了清热方的解热作用机制。实验结果表明降低体温调节中枢Ｎａ＋／Ｃａ２＋，从而抑制体温调定点上移是清热方的解热作用机理之一。     

柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca~(2+)及SERCA2a mRNA表达的影响

目的:研究柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠的防治作用,通过检查指标探讨其可能的作用机制。方法:以结扎大鼠冠状动脉前降支为模型,将60只大鼠分为模型组、假手术组、柴胡三参胶囊小、中、大剂量组和普罗帕酮组,观察大鼠结扎后心电图、心肌细胞Ca2+浓度及SERCA2amRNA表达。结果:柴胡三参胶囊可减少大鼠心肌缺血心律失常的发生,减少心肌细胞内Ca2+超载,增强SERCA2amRNA的表达。结论:柴胡三参胶囊对大鼠心肌缺血心律失常具有明显的保护作用,可能是通过增加SERCA2amRNA活性,从而减少心肌细胞内Ca2+超载。     

远近部位穴位对脑缺血大鼠脑组织Ca~(2 )、Na~ 、K~ 含量影响的比较

目的　比较不同部位穴位对实验性脑缺血疗效的影响。方法　采用大鼠大脑中动脉暂时性缺血模型 ,以脑组织 Ca2 、Na 、K 含量为指标 ,比较电针近脑部的百会、人中穴和远脑部的环跳、昆仑穴对脑缺血的影响。结果　两组穴位对脑组织中异常升高的 Ca2 、Na 含量均有不同程度的降低 ,但两组之间无差别。结论　头部穴位组和肢体部穴位组均对脑缺血 /再灌注损伤具有一定的保护作用 ,两组之间比较未见显著差别     

脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响

目的观察脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态游离Ca2+浓度 ([Ca2+]i) 的影响,初步探讨脑心通胶囊治疗血管性痴呆的机制.方法采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作血管性痴呆动物模型;使用胰蛋白酶消化法制备海马组织单细胞悬液,Fura-2/AM负载分离的神经细胞,双波长荧光法测定海马神经细胞内静息态[Ca2+]i.结果模型组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为437.42±32.14nmol/L,显著高于假手术组189.83±18.57 nmol/L(P<0.05);脑心通组和喜德镇组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为252.61±20.15 nmol/L、237.34±19.83 nmol/L,较模型组显著降低(P<0.05).结论 脑心通胶囊可降低血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i,这可能是脑心通胶囊治疗血管性痴呆的作用机制之一.     

野西瓜总生物碱诱导HepG2细胞凋亡与[Ca2+]i变化的相关性

目的 探讨野西瓜总生物碱(Capparis spinosa alkaloid,CSA)对人肝癌HepG2细胞的杀伤和诱导凋亡的作用机制.方法 MTT法研究CSA对人肝癌HepG2的杀伤作用;荧光显微镜观察HepG2细胞形态;流式细胞仪研究CSA对HepG2细胞的凋亡诱导作用;激光共聚焦显微镜检测CSA对HepG2细胞内[Ca~(2+)]i的影响.结果 CSA对人肝癌HepG2有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性,IC_(50)为142.82 μg/mL;HepG2细胞在CSA作用后出现特征性凋亡形态特征,凋亡细胞比率明显高于自然凋亡率;且阻断细胞由S期向G_2期的移行,CSA明显升高HepG2细胞[Ca~(2+)]i,并与药物质量浓度呈量效正相关.结论 CSA对人肝癌HepG2有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能与CSA造成肿瘤细胞内钙离子超载有关.