凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的：探讨凋亡：抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用，探讨其在抗癌方面的作用。方法：①实验于2002-08／2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI—H446细胞分为6组：空白对照组，脂质体10mg／L组（仅加空脂质体），NSODN 500nmol／L组（该3组均为对照组），survivin反义寡核苷酸500nmol／L组，bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组（分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸，48h后收取细胞进行以下检测）。②在脂质体介导下，以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC—A1，于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数：（静止期／DNA合成前期）占整个细胞周期的百分比；增殖指数=（DNA复制期＋合成后期／有丝分裂期）占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI—H446后，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数，锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。（3）计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果：①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后，出现生长抑制和细胞凋亡，细胞survivin mRNA明显下调，反义寡核苷酸500nmol／L作用72h后NCI—H446和SPC—A1细胞survivin mRNA抑制率分别达62．72％和67．43％。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI—H446细胞均有生长抑制作用；联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64．9％，优于单独应用（单用bcl-2反义寡核苷酸为34．2％）（P〈0．01），两药相互作用指数为0．708。锥虫蓝拒染实验显示，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组细胞死亡率为62．1％，高于两药单用时的31．4％和41．4％。流式细胞仪检测凋亡显示，与各对照组相比，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡，凋亡率分别为43．6％和30．7％，两者联用凋亡率提高到58．6％（p〈0．01）。结论：①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达，并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。     

MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用

目的:探讨MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法:用脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入肝癌细胞株SMMC-7721中,通过细胞活力、蛋白质含量、集落形成和DNA合成的变化检测MAPK反义寡核苷酸对肝癌恶性表型的逆转作用。结果:MAPK反义寡核苷酸可明显抑制细胞活力、蛋白质含量、集落形成和DNA合成,其抑制率分别为52.6%、50.5%、54.9%和47.5%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:MAPK反义寡核苷酸可逆转SMMC-7721细胞恶性表型,也为肝癌治疗指出了新方向。     

Id反义寡核苷酸对A549肺癌细胞的抑制及意义

【目的】观察Id反义寡核苷酸（IdASOD）对A549细胞中Id蛋白、mRNA表达及细胞的影响。【方法】体外培养A549细胞,并转染Id反义寡核苷酸;运用RT-PCR与Western-blot检测反义寡核苷酸对A549细胞中Id基因的抑制及蛋白表达的变化;用MTT法与细胞贴壁率检测转染反义寡核苷酸后A549细胞生物学特征的变化。【结果】转染反义寡核苷酸后A549中IdmRNA与蛋白表达水平明显低于未转染组（P〈0．05）,细胞存活率与活性明显下降（P〈0．05）。【结论】IdASOD对A549细胞及Id基因与蛋白表达有明显的抑制作用。     

核因子-кB反义核酸对TNF-α表达的实验研究

目的:研究核因子-кB(N F-кB)反义寡核苷酸(A O D N)对TN F-α表达的影响,探讨N F-кB与TN F-α的关系及反义核酸技术作用的特点。方法:将不同浓度经硫代磷酸化修饰的反义寡核苷酸(PS-A O D N)导入培养的R A W264.7细胞中与脂多糖预孵育,设立空白对照组和错义寡核苷酸M O D N()()组。分别采用免疫细胞化学和酶联免疫吸附法检测细胞中N F-κB和TN F-α表达。结果:A O D N组的N F-кB、TN F-α表达较空白对照组及M O D N组明显降低(P<0.05)。结论:反义寡核苷酸在一定时间内能有效地阻抑N F-кB在脂多糖刺激下的表达,从而抑制TN F-α的表达。     

凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的探讨凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用,探讨其在抗癌方面的作用。方法①实验于2002-08/2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI-H446细胞分为6组空白对照组,脂质体10m g/L组(仅加空脂质体),NSODN500nm ol/L组(该3组均为对照组),survivin反义寡核苷酸500nm ol/L组,bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组(分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸,48h后收取细胞进行以下检测)。②在脂质体介导下,以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC-A1,于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数=(静止期/DNA合成前期)占整个细胞周期的百分比;增殖指数=(DNA复制期+合成后期/有丝分裂期)占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI-H446后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数,锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。③计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后,出现生长抑制和细胞凋亡,细胞survivin m RNA明显下调,反义寡核苷酸500nm ol/L作用72h后NCI-H446和SPC-A1细胞survivin m RNA抑制率分别达62.72%和67.43%。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI-H446细胞均有生长抑制作用;联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64.9%,优于单独应用(单用bcl-2反义寡核苷酸为34.2%)(P<0.01),两药相互作用指数为0.708。锥虫蓝拒染实验显示,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组细胞死亡率为62.1%,高于两药单用时的31.4%和41.4%。流式细胞仪检测凋亡显示,与各对照组相比,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为43.6%和30.7%,两者联用凋亡率提高到58.6%(P<0.01)。结论①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达,并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。     

Survivin联用bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨survivin、bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)联用对白血病细胞凋亡的诱导作用。方法:设计并合成靶向survivin ASODN和bcl-2的ASODN,应用脂质体Lipofectamine TM2000作为载体,转染寡核苷酸入白血病K562细胞。实验分为空白对照组、脂质体空转染组、无关序列寡核苷酸组、survivin ASODN组、bcl-2ASODN组和survivin、bcl-2ASODN半量联用组。转染48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测K562细胞survivin mRNA表达。结果:survivin ASODN和bcl-2ASODN对K562细胞均有一定的增殖抑制作用,抑制率分别为48.78%、40.24%。而survivin、bcl-2ASODN半量联用组的细胞增殖抑制率为60.98%,明显高于单用组(P<0.01)。与非ASODN组相比,survivin ASODN和bcl-2ASODN均可诱导K562细胞凋亡,凋亡率分别为(13.36±4.03)%、(10.40±1.71)%,两者联用凋亡率提高到(26.14±4.39)%(P<0.01)。Survivin、bcl-2ASODN半量联用组survivin mRNA水平明显低于survivin ASODN组和bcl-2ASODN组。结论:survivin、bcl-2ASODN联用可协同抑制K562细胞的增殖,增强凋亡诱导作用,可为白血病基因治疗提供一项新策略。     

β1整合素反义寡核苷酸对人结肠癌细胞黏附和侵袭抑制作用

目的研究β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）对人结肠癌HT-29细胞侵袭的抑制作用。方法以脂质体为载体将硫代磷酸修饰的β1整合素ASODN及无义寡核苷酸（NSODN）转染人结肠癌HT-29细胞,通过RT-PCR及Western-Blot试验,分别测定ASODN组、NSODN组和空白对照组β1整合素mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell小室法分别测定其黏附力和侵袭力。结果与NSODN组和空白对照组相比较,ASODN组中β1整合素mRNA和蛋白表达强度明显降低;ASODN组和NSODN组转染的人结肠癌HT-29细胞侵袭力均下降,但前者下降较为明显。结论β1整合素ASODN转染HT-29细胞后,通过降低其β1整合素mRNA和蛋白表达水平,从而抑制其对细胞外基质的侵袭。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的：探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法：于2001-05／2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL／6小鼠皮下肺癌模型30只，分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内，用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗，对照组只注射生理盐水，观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达，强阳性为卅，弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达，计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果：30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量：对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7．83&;#177;0．78)，(4．49&;#177;0．43)和(7．73&;#177;0．69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内，在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性，而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120／β-actin：血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0．1594&;#177;0．025)低于对照组[(0．4020&;#177;0．032)，P&;lt;0．01]，低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组【(0．3805&;#177;0．030)，P&;lt;．01】。④血管内皮生长因子164／β-actin：血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0．3073&;#177;0．021)低于对照组[(0．878O&;#177;0．029)，P&;lt;0．01]，低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0．8481&;#177;0．020)，P&;lt;0．01]。结论：血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。     

STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌放射治疗的增效作用

目的：评价STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用及辐射增敏作用，探讨新的肺癌分子靶向治疗药物。方法：2003-10／2004-11于解放军第二军医大学放射医学教研室，应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549细胞，westem blot检测STAT3总蛋白和p—STAT3蛋白的表达；MTT法检测细胞增殖状态；流式细胞术检测细胞周期；用克隆形成分析和SF2研究人肺腺癌细胞A549辐射敏感性的变化。结果：STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549后STAT3蛋白的表达和磷酸化水平下降，细胞增殖受抑制，出现Gl阻滞；照射后12d．反义寡核苷酸组测定SF2值是(46．78％&;#177;3．25％)．较对照组(61．52％&;#177;2．74％)明显降低(P&;lt;0．01)。结论：STAT3反义寡核苷酸可以抑制STAT3蛋白表达和细胞增殖，对人肺腺癌细胞A549有辐射增敏作用。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法:于2001-05/2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达,强阳性为,弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达,计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果:30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量:对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7.83±0.78),(4.49±0.43)和(7.73±0.69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内,在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性,而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.1594±0.025)低于对照组[(0.4020±0.032),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.3805±0.030),P<0.01]。④血管内皮生长因子164/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.3073±0.021)低于对照组[(0.8780±0.029),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.8481±0.020),P<0.01]。结论:血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。     

核仁素反义寡核苷酸对RAW264.7细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨核仁素反义寡核苷酸对RAW264．7细胞增殖与凋亡的影响。【方法】采用反义寡核苷酸技术以抑制RAW264．7细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。【结果】免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达被显著抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机寡核苷酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。【结论】核仁素表达下调能抑制RAW264．7细胞增殖并能触发RAW264．7细胞凋亡。     

STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌放射治疗的增效作用

目的:评价STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用及辐射增敏作用,探讨新的肺癌分子靶向治疗药物。方法:2003-10/2004-11于解放军第二军医大学放射医学教研室,应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549细胞,westernblot检测STAT3总蛋白和p-STAT3蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期;用克隆形成分析和SF2研究人肺腺癌细胞A549辐射敏感性的变化。结果:STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549后STAT3蛋白的表达和磷酸化水平下降,细胞增殖受抑制,出现G1阻滞;照射后12d,反义寡核苷酸组测定SF2值是(46.78%±3.25%),较对照组(61.52%±2.74%)明显降低(P<0.01)。结论:STAT3反义寡核苷酸可以抑制STAT3蛋白表达和细胞增殖,对人肺腺癌细胞A549有辐射增敏作用。     

圆盘状受体反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达和胶原合成的抑制作用

目的:观察硫代修饰和脂质体包埋的反义寡核苷酸(ASODN)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞圆盘状受体基因表达及其对瘢痕疙瘩胶原抑制的影响。方法:实验于2005-03/2006-01进行。收集解放军第二军医大学长海医院整形外科手术切除的4例瘢痕疙瘩(供体知情同意),采用组织块培养法进行细胞培养。并将经脂质体包埋并全硫代修饰后的圆盘状受体ASODN加入培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中,实验分6组,ASODN 5,10,20 μmol/L组、无寡核苷酸组、单纯脂质体及空白对照组。采用反转录-聚合酶链反应技术及[3H]-脯氨酸掺入法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体1 mRNA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达相对量及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成分泌的影响。结果:①圆盘状受体1 mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.19,1.19±0.37,0.49±0.14,2.61±0.47,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10 μmol/L组(P<0.01)。②Ⅰ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.59,1.46±0.17,0.19±0.27,3.31±0.53,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。③Ⅲ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(0.73±0.36,0.61±0.23,1.16±0.43,P<0.01)。④Ⅰ型胶原mRNA/Ⅲ型胶原mRNA:空白对照组为4.50±0.12,ASODN 5,10,20 μmol/L组均低于空白对照组(2.40±0.11,2.00±0.06,1.50±0.07,P<0.05,0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。⑤胶原合成分泌量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(P<0.01)。ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5 μmol/L组(P<0.01)。结论:圆盘状受体-ASODN能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达,显著抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达,调整Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原比例,并抑制胶原合成和分泌。     

Bcl-2反义寡核苷酸增强K562细胞对依托泊苷化疗敏感性的研究

目的探讨Bcl-2反义寡核苷酸能否增强K562细胞对依托泊苷的化疗敏感性。方法采用人工方法合成Bcl-2寡核苷酸,通过脂质体将Bcl-2不同寡核苷酸导入K562细胞中(正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组、反义寡核苷酸组),另设未经转染空白对照组,检测Bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡率。采用不同浓度的依托泊苷作用于4组细胞,用MTT法测定细胞存活分数。结果空白对照组和正义、无义寡核苷酸组的K562细胞Bcl-2蛋白与Bcl-2蛋白条带相符,反义寡核苷酸组在相应位置未见蛋白条带,且凋亡率显著高于其他3组(P<0.01)。细胞与依托泊苷作用后,反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于其他3组(P<0.05)。结论 Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因表达,增加K562细胞的凋亡,增强依托泊苷的敏感性。     

bcl-2基因反义寡核苷酸的设计与白血病细胞对Ara-C敏感性研究

寻找在bcl-2mRNA上除了起始区以外的反义寡核苷酸作用的敏感位点和观察这些核苷酸对白血病细胞的阿糖胞苷敏感性的影响。用RNAstructure软件模拟bcl-2mRNA的二级结构设计合成两端硫代修饰反义寡核苷酸，用MTT法测定抑制HL-60和K562细胞的阿糖胞苷半数抑制浓度（IC50）值；用流式细胞术检测HL-60和K562细胞凋亡率和bcl-2蛋白表达水平。结果发现，10μmol/Lbcl-2基因的反义寡核苷酸同Ara-C结合使用，能明显地抑制HL-60和K562细胞bcl-2基因蛋白的表达，促进细胞凋亡，减低Ara-C的IC50值；同时发现针对蛋白编码区的反义寡核苷酸有更强的作用。结论：除了bcl-2mRNA的起始区外，在bcl-2mRNA的其他部位存在有设计反义寡核苷酸更有效的位点，该项研究将为反义药物的设计提供新的有用途径。     

肿瘤基因治疗学研究：血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长的抑制

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASPODN)治疗肺癌的可能性。方法：实验于2002—12／2004—05在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。制备C57BL／6小鼠皮下肺癌模型30只，随机分为3组(每组10只)：VEGF—ASPODN治疗组，VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内，分别皮下注射AS—PODN及SPODN进行治疗，对照组只注射生理盐水，2次／周，连续4周；观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠，光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化。结果：与对照组瘤质量[(7．83&;#177;0．78)g]比较，VEGF—ASPODN组[(4．49&;#177;0．43)g]能明显抑制小鼠肿瘤生长(P&;lt;0．01)，VEGF—SPODN组[(7．73&;#177;0．69)g]则无明显作用(P&;gt;0．05)。VEGF-ASPODN组和VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42．7％和5．9％。组织形态学及超微结构观察，VEGF-ASPODN能明显抑制肿瘤细胞生长，降低增殖活性。结论：肿瘤原位注射VEGF—ASPODN能抑制小鼠肺癌生长。     

转染bcl-2反义寡核苷酸诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的体外实验研究

目的 :体外研究bcl- 2反义寡核苷酸对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 ,旨在寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法 :(1)免疫组化、半定量RT -PCR法鉴定ASODN的有效性。 (2 )Giemsa染色、流式细胞术凋亡指数 (AI)、DNALadder检测细胞凋亡。结果 :(1)转染后 ,免疫组化结果示Bcl- 2蛋白表达降低 ;半定量RT -PCR结果显示bcl- 2mRNA表达较对照组明显减弱 (P <0 0 5 )。 (2 )转染后 ,Giemsa染色可见凋亡小体 ;流式细胞术结果显示转染后AI为 :6 6 0± 0 70 % ,明显高于对照组 1 79± 0 19% (P <0 0 5 ) ;DNALadder呈现具有凋亡特征的梯带。结论 :(1)本实验所设计的ASODN能有效地抑制bcl- 2基因的表达。 (2 )转染ASODN (bcl-2 )能够显著增加Hela细胞凋亡。进而有望通过转染ASODN提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸对Raji细胞增殖和凋亡的影响

研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对淋巴系统恶性肿瘤的作用及机制。将bcl-2 ASODN与Raji细胞共孵育，应用MTT检测，电镜超微结构，流式细胞仪（FCM）分析和RT-PCR方法，观察bcl-2 ASODN对Raji细胞增殖及凋亡的影响，以及bcl-2蛋白及mRNA水平的变化。MTT检测显示bcl-2 ASODN可以部分抑制Raji细胞增殖；经ASODN作用48h，电镜超微细胞观察细胞呈现典型凋亡特征，包括胞膜出芽，异染色质核膜下浓聚形成凋亡小体及胞核破裂；FCM检测Annexin V^ /PI^-的凋亡细胞比例升高，20μmol/L bcl-2 ASODN处理Raji细胞72h，细胞凋亡率达43.86%，比对照组（10.05%）明显增高。bcl-2阳性细胞率逐渐下降，于72h达低谷为0.88%，明显低于对照组（79.54%）。bcl-2 mRNA水平亦显下降。结论 bcl-2 ASODN通过下调bcl-2蛋白表达水平，诱导Raji细胞凋亡。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人肝癌细胞株乙酰肝素酶表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)反义寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞株Hpa mRNA和蛋白表达的影响。方法:设计合成互补于Hpa mRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体Oligofectamine~(TM) Reagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞,以RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞Hpa mRNA以及蛋白表达的变化。结果:与正常对照组和NS-ODN相应浓度组相比,转染AS-ODN组肝癌细胞Hp amRNA和蛋白的表达均下降。结论:Hpa反义寡脱氧核苷酸下调Hpa mRNA和蛋白的表达,可能抑制肝癌的侵袭转移。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用

为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。