叶绿酸铜钠的抗诱变作用及其机理

本研究运用小鼠骨髓细胞微核试验评价叶绿素的衍生物－叶绿酸铜钠（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ－Ｃｏｐｐｅｒ Ｓａｌｔ，ＣＨＬ）抑制间接诱变剂环磷酰胺（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｐ）的诱变作用。实验根据小鼠给予ＣＨＬ和ＣＰ的时间，设计４种不同程序，以此探索ＣＨＬ抗诱变作用的机理。实验结果表明，ＣＨＬ本身无诱变作用，但对ＣＰ诱导微核作用有明显的抑制。同时也提示ＣＨＬ对ＣＰ的抗诱变作     

叶绿酸铜钠对SMMC7721肝癌细胞抑制作用的体外实验研究

[目的]研究叶绿酸铜钠（CHL）体外抑制SMMC7721肝癌细胞的作用及机制。[方法]（1）MTT法测半数抑制浓度（IC50）并绘制生长曲线;（2）流式细胞仪观察CHL对SMMC7721细胞凋亡的诱导作用;（3）免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、环氧化酶-2（COX-2）的表达。[结果]（1）CHL对SMMC7721细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度和时间依赖效应;（2）CHL能诱导SMMC7721细胞G1期阻滞,通过抑制细胞生长周期、降低细胞增生速率抑制肿瘤细胞增殖;（3）CHL对SMMC7721细胞凋亡无明显诱导作用;（4）CHL能下调SMMC7721细胞PCNA和COX-2蛋白表达,并呈一定的浓度依赖性。对Cyclin D1的表达无明显影响。[结论]CHL能抑制SMMC7721细胞的生长,这种抑制作用同PCNA、COX-2表达下调及细胞G1期阻滞有关,但与细胞凋亡和Cyclin D1的表达无关。     

叶绿酸铜钠对二甲肼诱导小鼠大肠肿瘤的预防作用

目的研究叶绿酸铜钠（CHL）对二甲肼（DMH）诱导的小鼠大肠肿瘤的预防作用及机制。方法以DMH诱导小鼠大肠肿瘤，诱癌各阶段予以不同浓度CHL，观察其对大肠肿瘤的化学预防作用。采用免疫组化方法检测CHL及其对COX-2与NF-κB蛋白表达的影响。结果（1）CHL组大肠癌发生率低于阳性对照组（P〈0．05），平均肿瘤数及腺癌百分率均低于阳性对照组（P〈0．05）；（2）CHL能够抑制小鼠肿瘤组织中COX-2蛋白的表达；（3）CHL能够抑制NF-κB蛋白的表达。结论CHL能够抑制DMH诱导的小鼠大肠肿瘤的发生，其预防作用同CHL对COX-2的抑制作用有关，而CHL对COX-2的抑制作用可能是通过对NF-κB的抑制来实现的。     

叶绿酸铁钠的中国仓鼠肺细胞体外染色体畸变试验

本文报道运用体外培养的中国仓鼠肺细胞(CEL)作染色体畸变试验研究叶绿酸铁钠诱变性的结果:叶绿酸铁钠浓度达160μg/ml时无论加与不加S_9代谢活化系统,对CHL细胞均无致染色体畸变作用。     

叶绿酸联合赛特铂对人SMMC-7721肝癌细胞株影响的初步研究

目的:探讨叶绿酸(CHL)联合赛特铂(JM216)对人SMMC-7721肝癌细胞凋亡及增殖的作用。方法:选用CHL(1×10-5 mol/L)及不同浓度JM216(10、20和40mg/L),1×10-5 mol/L的CHL分别联合不同浓度JM216作用于SMMC-7721肝癌细胞24、48和72h后,用MTT比色法观察其对肝癌细胞的生长抑制作用,并观察细胞形态变化;用流式细胞术分析药物作用48h时肝癌细胞的周期分布和凋亡情况。结果:CHL组、不同浓度JM216组和联合组细胞生长抑制率均高于对照组,联合组1和联合组2以及联合组3的细胞生长抑制率均高于相应浓度的JM216组。CHL组SMMC-7721细胞周期中G0/G1期比例为(55.94±3.49)%,高于对照组的(50.52±2.56)%,差异有统计学意义,P<0.05;而JM216组SMMC-7721细胞周期中S期比例为(45.12±1.42)%,高于对照组的(27.60±1.27)%,差异有统计学意义,P<0.05。CHL组和JM216组细胞凋亡率分别为(13.48±1.63)%和(15.51±2.09)%,均高于对照组的(1.61±0.47)%,差异有统计学意义,P<0.05;联合组细胞凋亡率为(30.22±3.20)%,高于JM216组和对照组,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:CHL和JM216均可抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长并诱导其凋亡,且联用后作用增强。     

叶绿酸对肿瘤化学预防研究进展

叶绿酸(CHL)是天然叶绿素的衍生物.最近的实验研究表明CHL对肝肿瘤、肠肿瘤、皮肤肿瘤、乳腺肿瘤等多种肿瘤具有潜在预防作用,并且基本无毒副作用,其效果与致癌物种类、CHL用药方案和靶器官等有关,其作用机制被认为是影响致癌物引起的DNA加成物形成和与致癌物形成复合物影响其吸收,值得进一步深入研究.     

一氧化氮对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的通过研究一氧化氮(nitricoxide，NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对胃癌细胞系BGC823的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖过程的影响.方法应用光学显微镜和透射电子显微镜进行形态观察,四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium     

CHL对小鼠结肠肿瘤的预防作用及对COX-2的选择性抑制作用

背景与目的:研究表明叶绿酸铜钠(chlorophyllin,CHL)对多种诱变剂和致癌物都有较强的抗诱变作用,但有关CHL预防肿瘤的确切效果有待进一步研究.本研究探讨CHL对二甲肼(dimethylhydrazine,DMH)诱导的小鼠结肠肿瘤的预防作用及对环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX-2)的选择性抑制作用.方法:(1)以DMH诱导小鼠结肠肿瘤,诱癌不同阶段予以不同浓度CHL,观察CHL对结肠肿瘤的化学预防作用;(2)MTT法测CHL对HT29肠癌细胞的半数抑制浓度(IC50)及生长曲线;(3)RT-PCR法检测CHL对HT29细胞COX-2和COX-1的影响;(4)Western blot和免疫组化法检测CHL对COX-2蛋白表达的影响;(5)免疫组化法检测CHL对NF-κB蛋白的表达影响.结果:(1)CHL组结肠癌发生率少于阳性对照组(P＜0.05),平均肿瘤数及腺癌百分率均低于阳性对照组(P＜0.05);(2)CHL能抑制HT29细胞生长且呈剂量依赖关系;(3)CHL能够选择性抑制HT29细胞COX-2 mRNA的表达;(4)CHL能够抑制肿瘤组织和HT29细胞COX-2蛋白的表达;(5)CHL能够抑制NF-κB蛋白的表达.结论:CHL能够抑制DMH诱导的小鼠结肠肿瘤的发生,这种预防作用与CHL对COX-2的选择性抑制作用有关,而CHL对COX-2的抑制作用可能通过对NF-κB的抑制来实现.     

克霉唑对结肠癌细胞系CCL229生物学行为的影响

目的 研究克霉唑对结肠癌细胞生长,粘附和侵袭转移中的作用,并初步探讨其机制。方法用不同浓度的克霉唑加入培养中的结肠癌细胞株ＣＣＬ２２９中,观察加药前后细胞生长速度的变化,检测细胞与基质的粘附能力,用细胞分离试验测定细胞的同质粘附性。Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测细胞的侵袭能力;流式细胞光度术检测细胞尿激酶型纤溶原激活剂（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ－ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ＵＰＡ）表达。结     

TRAIL基因修饰联合阿霉素对大肠癌细胞株RKO作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子(tumor necrsis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因联合阿霉索后,应用于人大肠癌细胞株RKO基因治疗的实验研究.方法:将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于大肠癌细胞株RKO,并联合低剂量的阿霉素协同作用.通过MTF比色法与流式细胞仪研究分析其对RKO细胞的作用效果,并以RT-PCR检测联合应用阿霉素前后TRAIL基因的表达水平.结果:病毒载体对RKO细胞的生长有轻微的抑制作用,作用4 d抑制率为11.9%,但不增加RKO细胞的凋亡率.TRAIL对RKO细胞的生长抑制率及凋亡诱导率分别为50.1%和19.8%.联合阿霉素后,TRAIL对RKO细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达60.3%及49.0%.RT-PCR结果提示联合应用阿霉素后,TRAIL基因的表达并未增强.结论:TRAIL能有效抑制RKO的生长,联合阿霉素后,其对RKO的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强.阿霉素不是通过增加TRAIL基因的表达来实现上述作用的.     

ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响

[目的]探讨ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响。[方法]构建携带空载体、人ZNF488基因的逆转录病毒质粒pMSCV和pMSCV—ZNF488．以磷酸钙法转染293FT细胞并收集病毒液,感染鼻咽癌细胞株HONE1,经嘌呤霉素筛选及WesternB1ot鉴定,建立稳定表达ZNF488的HONE1-pMSCV-ZNF488和空载体HONE1-pMSCV的细胞株。应用噻唑盐（MTr）法、平板克隆形成实验检测ZNF488过表达对HONE1细胞生长增殖的影响,同时应用流式细胞术检测ZNF488对细胞周期增殖指数的影响。划痕实验及Transwell体外侵袭实验观察zNF488对HONE1迁移侵袭能力的影响。WesternB1ot检测上皮-间质转化（EMT）相关蛋白及抑癌基因门EⅣ的表达情况。[结果]成功建立稳定表达ZNF488的HONE1-pMSCV-ZNF488细胞株,MTT法及平板克隆形成实验结果显示,与空载体组HONE1-pMSCV细胞相比,HONE1-pMSCV—ZNF488细胞增殖及克隆形成能力均增强。流式细胞术显示过表达ZNF488细胞S期百分比较空载体组高,增殖指数增加。划痕实验、Transwe11体外侵袭实验示ZNF488能够显著增加细胞的迁移、侵袭能力。WesternB1ot检测发现上皮标志E-Cadherin、α-Catenin表达降低,间质性标志Fibronectin、Vimentin表达升高,同时抑癌因子PTEN表达下降。[结论]过表达ZNF488可通过诱导鼻咽癌细胞HONE1发生上皮间质转变及下调抑癌基因PTEN,促进细胞的增殖及迁移侵袭能力。     

RNA干扰技术沉默Stat3基因对胃癌细胞SGC7901生物学行为影响的实验研究

目的：构建Stat3-siRNA表达载体，探讨转染Slat3-siRNA表达载体阻断人胃癌细胞系SGC7901的Stat3信号传导通路对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用RNAi技术，构建Star3－siRNA表达载体，稳定转染胃癌细胞系SGC7901，利用Real—time PCR、Western Blot、MTT、流式细胞技术等方法分别检测Stat3基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖和凋亡的变化情况，结果：成功构建Stag—siRNA表达载体，经测序验证无误。Weslern Blot及Real—time PCR结果显示：Stat3基因的表达水平均下降，其中以SGC7901-siRNA3干扰效果最明显，差异具有显著性（P〈0．05）。MTT法结果显示：稳定转染SGC7901细胞后，细胞的增殖能力明显下降，与对照组相比差别显著（P〈0．05）。流式细胞技术显示：Stat3-siRNA3实验组较对照组出现了明显的细胞凋亡，在G1期前出现的亚二倍峰即为凋亡峰。结论：Star3基因的RNAi重组体可以有效的抑制Star3基因的表达，RNA干扰技术沉默Stat3基因能够抑制胃癌细胞的生长，促进其凋亡。     

GINS2基因对鼻咽癌细胞5-8F生物学行为的影响

摘 要：［目的］探讨GINS2基因对鼻咽癌5-8F细胞生物学行为的影响。［方法］将靶向GINS2基因的shRNA慢病毒载体感染5-8F细胞,利用荧光显微镜观察感染效率。实时荧光定量PCR检测GINS2 mRNA表达的改变;Western blot检测GINS2蛋白表达的改变;Celigo细胞成像分析、噻唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验检测细胞的生长增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡率。［结果］ GINS2-shRNA慢病毒载体成功感染5-8F细胞,shGINS2组细胞中GINS2 mRNA和蛋白表达水平明显降低;Celigo细胞计数结果显示,shGINS2组细胞生长受抑制;MTT结果显示,shGINS2组细胞增殖受抑制;平板克隆形成实验显示,shGINS2组细胞克隆形成数减少;流式细胞术结果显示,shGINS2组细胞凋亡率增高。［结论］ 下调5-8F细胞GINS2的水平可抑制细胞生长增殖,诱导细胞凋亡。     

Induction of Apoptosis in RKO Colon Cancer Cell Line by an Aqueous Extract of Millingtonia hortensis

Millingtonia hortensis is an important medicinal plant in Southeast Asia, used for the treatment of asthma, sinusitisand as a cholagogue and tonic. The aim of this study was to compare the effects of aqueous and ethanol extracts ofMillingtonia hortensis on the induction of apoptosis in an RKO human colon cancer cell line. Viability of RKO cellswas assessed by MTT reduction assay. The aqueous extract, but not the ethanol extract of M. hortensis inhibited cellgrowth and proliferation in a dose- and time-dependent manner. Apoptotic cells were determined by flow cytometryand DNA fragmentation assay. Apoptotic cell numbers increased in a dose-dependent manner after treatment withaqueous extract. DNA ladders were clearly observed in RKO cells treated with 200, 300 and 400 μg/ml of the aqueousextract of M. hortensis for 48 h. These results indicate that the aqueous extract of M. hortensis inhibited cellproliferation in an RKO colon cancer cell line via the apoptosis pathway.     

MDR 逆转因子筛选技术P-gp 细胞系的建立及其生物学特性评价

 目的 通过基因转导和药物诱导，建立稳定表达P—gp的细胞系，用于筛选特异性逆转P-gp的药物。方法 经RT-PCR反应得到小鼠肿瘤细胞P-gp DNA，转化大肠杆茵，构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中，进而感染B-MD-C1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞P-gp mRNA和P-gp分子的表达；以MTT法分析细胞的增殖活性；应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性。结果 成功构建了稳定表达特异性P-gp基因和P-gP分子的B-MD-C1(ADR+／+)细胞系。经阿霉素诱导，B-MD-C1(ADR+／+)细胞P-gp的表达明显增高，在阿霉素增加至12000ng／mL时，仍有80％的细胞保持良好增殖状态，而B-MD-C1(wt)细胞在1000ng／mL时100％细胞死亡。B-MD-C1(ADR+／+)较(wt)细胞对MI>123有较低的聚集量和较高的排放量，加入P—gP逆转剂Verapamil后，B-MD-C1(ADR+／+)细胞MD-123聚集量增加，药物外排作用消失。结论 B-MD-C1(ADR+／+)细胞系具有较强的药物耐受性，可用于筛选特异性逆转P-gp的药物，Verapamil可逆转P—gP耐药性，具有Verapamil特性者可视为具有逆转P—gp耐药性。     

启动子区5''CpG岛去甲基化对人肠癌RKO细胞生物学表型的影响

目的:探讨DNA启动子区5'CpG岛甲基化状态与人肠癌RKO细胞生物学特征的关系.方法:应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂-5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72小时,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2抑癌基因5'CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后对细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响.结果:肠癌RKO细胞p16/CDKN2基因5'CpG岛呈高甲基化状态;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P＜0.01),诱导肠癌细胞凋亡,并呈良好的量效依赖关系.结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点.     

转染wt—p53对小鼠移行细胞癌生物学行为影响的研究

为进一步探讨膀胱瘤的治疗途径,方法利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将外源性野生型ｐ５３基因导入小鼠膀胱移行细胞癌ＢＳＴ７３９细胞中,并行到表达。结果细胞在体外标准条件下,生长增殖率降低。流式细胞计检测：细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比例明显增高,凋亡指数升高,细胞生长速度减低,细胞增殖能力下降,体内接种致瘤性下降。结论增加野生型Ｐ５３基因表达能抑制恶性肿瘤的生长。     

Impact of HER2 and PTEN Simultaneous Deregulation in Non-small Cell Lung Carcinoma: Correlation with Biological Behavior

Background: HER2/neu overexpression due to gene amplification is an important factor in breast cancer,modifying the sensitivity to anti-HER2 monoclonal antibody therapy. The clinical significance of HER2 expressionin non small cell lung carcinoma (NSCLC) is currently under evaluation. The tumor suppressor gene PTENnegatively regulates the HER2/PI3K/Akt signalling pathway. The purpose of this study was to evaluate therole of simultaneous alteration in HER2 and PTEN protein expression in relation to biological behaviour ofNSCLCs. Materials and Methods: Protein expression was determined by immunohistochemistry in sixty-one(n=61) NSCLC cases along with CISH for HER2 gene analysis and detection of chromosome 17 aneuploidy.Patients were followed-up for a period of 34 to 41 months after surgery. Results: HER2 overexpression (2+/3+score) was detected in 17 (27.9%) patients while loss of PTEN expression was observed in 24 (39.3%) cases,low expression in 29 (47.6%) and overexpression in 8 (13.1%). Simultaneous HER2 overexpression and PTENlow/loss of expression were correlated with metastasis (71.4% vs 36.2% p=0.03). Analysis in the subgroup of22 patients of pTNM stage III with lymph node status N1 or N2 revealed that there was a relationship betweenthe number of positive regional lymph node groups and simultaneous deregulation of the two genes (p=0.04).Multivariate analysis determined that HER2 overexpression was associated with an increasing risk of developingmetastases (OR: 4.3; 95%CI: 1.2-15.9; p: 0.03) while PTEN overexpression was associated with lower risk (OR:0.1; 95%CI: 0.1, 1.0; p: 0.05). Conclusions: Simultaneous HER2/PTEN deregulation is a significant genetic eventthat leads to a more aggressive phenotype of NSCLC.     

HER2基因转染MCF-7细胞及生物学特性观察

目的:建立共表达HER2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)基因和ER(Estrogen Receptor)基因的细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-HER2,利用脂质体介导将其转染ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选阳性克隆.用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学等方法检测HER2基因在MCF-7细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法和肿瘤细胞侵袭实验,观察转染细胞的生物学活性.结果:在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有HER2基因的高表达,转染后细胞的增殖能力和侵袭能力明显增强.结论:构建含HER2基因的重组载体,导入乳腺癌MCF-7细胞后,获得生物学活性稳定的HER2基因和ER基因高表达的细胞模型,为进一步研究奠定了基础.