格尔德霉素对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响

目的探讨格尔德霉素(geldanamycin, GA)对人胃癌细胞株MGC-803增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测GA对MGC-803细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化及细胞凋亡率;姬姆萨染色法观察细胞形态学改变;免疫细胞化学染色法及流式细胞术分析EphA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果GA可显著抑制MGC-803细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖关系;各浓度GA可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;姬姆萨染色可见用药组细胞出现凋亡形态学改变;各浓度GA可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论GA可抑制MGC-803细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调EphA2、survivin的表达,进而促进Caspase-3的表达有关。     

蟾蜍灵对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的蟾蜍灵是从中药蟾酥中提取出来的有效成分,其抗肿瘤作用已经在许多体外肿瘤细胞中得到证实,本研究旨在探讨蟾蜍灵对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法采用MTT法测定细胞活力,绘制细胞增殖抑制曲线;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞仪通过PI染色进行细胞周期分析及凋亡判定;Western blot法检测Livin及Caspase-3蛋白的表达.结果蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,48 h、72 h及96 h抑制细胞增殖50%的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L及(7.39±4.16)nmol/L;蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪榆测到的亚二倍体凋亡峰,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Livin蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3蛋白.结论蟾蜍灵能够抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡;抑制凋亡抑制蛋白Livin的活性及活化Caspase-3可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

GSK1838705A对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究胰岛素样生长因子1受体抑制剂GSK1838705A对人胰腺癌细胞的抗肿瘤作用.方法:Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法检测不同浓度GSK1838705A对胰腺癌CAPAN-2细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测GSK1838705A对CAPAN-2细胞凋亡的影响;Western blot方法检测GSK1838705A作用于胰腺癌CAPAN-2细胞后Bax和Cytochrome C蛋白表达水平的变化;划痕试验观察GSK1838705A处理CAPAN-2细胞后对细胞生长及迁移的影响.结果:CCK-8检测结果表明不同浓度GSK1838705A能够不同程度抑制胰腺癌CAPAN-2细胞的增殖,当药物浓度达10 μmol/L时,其抑制率可达98.29％;流式结果显示,GSK1838705A可诱导CAPAN-2细胞发生凋亡,随着GSK1838705A浓度的增加,诱导凋亡作用增强;Western blot结果显示,Bax和Cytochrome C蛋白表达水平升高;划痕试验结果表明,不同浓度GSK1838705A能够不同程度抑制CAPAN-2细胞的增殖和迁移.结论:胰岛素样生长因子1受体抑制剂GSK1838705A在体外可显著抑制胰腺癌CAPAN-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡并抑制细胞迁移,在胰腺癌细胞中发挥着显著的抗肿瘤作用.     

腺苷抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的机制

目的:检测腺苷对乳腺肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响,并探究其潜在的分子机制。方法:以MCF-7细胞为模型,采用梯度浓度的腺苷处理细胞,MTT及细胞计数法检测腺苷对细胞增殖的影响,流式细胞术检测腺苷对细胞凋亡及周期的影响,划痕修复实验检测腺苷对细胞迁移能力的影响。结果:腺苷可显著抑制MCF-7细胞增殖,且抑制效果与腺苷浓度及作用时间呈相关性。流式细胞术检测结果表明腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,并引起细胞的 G2/M期阻滞。划痕实验结果表明腺苷抑制MCF-7细胞的迁移能力。实时定量PCR检测结果发现,促细胞凋亡分子Bax及Bak表达量显著升高,而凋亡抑制分子Bcl-2表达量显著下降,同时Caspase-3的表达量也显著升高。结论:腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,抑制细胞的增殖,同时腺苷可以抑制MCF-7细胞的迁移能力。腺苷诱导MCF-7细胞凋亡与其激活线粒体凋亡通路密切相关。     

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达

背景与目的：组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors,HDACi）是-类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi（MS-275）对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系。方法：将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响：通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Westernblot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP—ribose）polymerase,PARP]的裂解情况。结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0／G1期。MS-275作用U266细胞48h时的Ic50为1．39μmol／L：2μmol／L的MS-275作用U266细胞24h后,G／G,期细胞占66．39％．36h后G0／G1期细胞占89．80％。瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化。Western blot检测结果显示。MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切。结论：MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关。     

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

n-3多不饱和脂肪酸在食管癌细胞增殖和凋亡中的作用机制探讨

目的:探讨n-3多不饱和脂肪酸的两个活性成分二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)在食管癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法:采用 CCK-8法测定不同浓度、不同时间点（培养后 24 h、48 h、72 h）的DHA、EPA对食管癌细胞增殖的影响,用Western-blot法检测DHA、EPA对凋亡相关蛋白表达的影响,并用荧光染色和流式细胞仪检测DHA、EPA对食管癌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,DHA和EPA均能够抑制食管癌细胞的增殖并具浓度依赖性,但无时间依赖性。Western-blot 显示DHA、EPA能激活Caspase-3和Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达。DHA和EPA作用24 h后,荧光染色可见部分食管癌细胞呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,DHA和EPA能够诱导食管癌细胞凋亡,且与浓度呈正比。结论:n-3多不饱和脂肪酸能够抑制食管癌细胞的增殖和诱导食管癌细胞的凋亡,调控Caspase-3活性以及 Bcl-2 家族促凋亡蛋白/抗凋亡蛋白之间的平衡来发挥其抑制食管癌细胞增殖和诱导食管癌细胞凋亡的作用。     

抑制细胞外信号调节激酶对As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶在三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径中的作用.方法采用MTT法检测As2O3对胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用,采用瑞氏-姬姆萨染色和流式细胞仪检测As2O3诱导MGC-803凋亡以及加入选择性ERK抑制剂PD98059后细胞凋亡率的变化.结果5 μmol/L与10 μmol/L的As2O3作用24 h后凋亡率分别为(4.74±0.03)%和(11.93±0.06)%,而与PD98059联合作用24 h后凋亡率分别增加至(11.65±0.09)%和(18.15±0.10)%,P＜0.05.As2O3抑制MGC-803细胞的增殖,并诱导凋亡.结论预先抑制ERK途径增加了As2O3诱导MGC-803细胞的凋亡效应.ERK途径可能参与了As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径.     

芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G2/M期阻滞

  目的  探讨芹菜素（apigenin）对乳腺癌T47D细胞系凋亡及细胞周期的影响。  方法  常规培养T47D细胞, 用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测芹菜素对乳腺癌T47D细胞系细胞增殖的影响。荧光染色法观察凋亡细胞的形态变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布。Western blot检测不同浓度（0、10、20、40、80 μM）芹菜素对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。  结果  随着芹菜素浓度的增加, 芹菜素对T47D细胞的增殖抑制作用明显增强（P < 0.05）; 凋亡荧光染色及流式细胞仪显示, 芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞凋亡, 随着其浓度的增高, 各组凋亡率分别为（2.41±0.072）%、（10.87±0.028）%、（18.02±0.056）%、（37.05± 0.092）%和（78.38±0.082）%, 与对照组相比, 差异有统计学意义（P < 0.05）; 流式周期分析显示, 芹菜素能够使T47D细胞系G₂/M期阻滞, 随着芹菜素浓度的增高, 不同浓度组细胞G₂/M期所占的比例逐渐增加, 差异有统计学意义（P < 0.05）; Western blot显示p53、p21、Bax和p-Cdc2的含量及Caspase-3, PARP剪切明显增加, 而Bcl-2、CyclinB1及Cdc2的含量却显著减少。  结论  芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G₂/M期阻滞, 从而明显抑制其增殖。      

MINDY2过表达慢病毒质粒的构建及其对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:构建能表达MINDY2的慢病毒质粒,并获取稳定过表达MINDY2的A549细胞株,探讨过表达MINDY2对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用同源重组法构建pLVX-Flag-MINDY2过表达质粒,并通过菌落PCR和测序对重组质粒进行鉴定;在HEK293T细胞中瞬时转染pLVX-Flag-MINDY2质粒,通过Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;重组慢病毒载体包装HEK293T细胞,获取病毒上清液感染A549细胞,嘌呤霉素筛选后利用Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;CCK8实验、Transwell和划痕实验检测过表达MINDY2对A549细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化。结果:测序结果证明成功构建了MINDY2过表达慢病毒载体;在HEK293T细胞中瞬时转染MINDY2重组质粒,能检测到Flag-MINDY2融合蛋白的表达;Western blot结果显示MINDY2在A549细胞中稳定过表达;CCK8实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的增殖;流式细胞术表明...     

PIG11基因沉默与HepG2细胞凋亡关系的研究

目的:构建人PIG11的miRNA表达载体pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR,建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株,联合PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的影响.方法:构建miRNA干扰载体,通过脂质体转染HepG2细胞,建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞,与前期已建立的PIG11蛋白稳定高表达的HepG2细胞模型作对比,利用PI染色流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白的表达情况.结果:成功构建人PIG11的miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR,转染后获得PIG11基因沉默的HepG2细胞株.PI染色流式细胞仪检测结果显示,HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞和pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为(5.72±0.81)%、(1.34士0.71)%、(5.10±0.40)%、(34.83±2.29)%和(5.34±0.60)%.PIG11高表达的pLXSN-PIG-11-HepG2细胞组凋亡率比其他组增高(P＜0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P＜0.01).蛋白质印迹法检测结果显示,PIG11高表达的HepG2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均上调(P＜0.01),PIG11低表达的HepG2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白的表达下调(P＜0.01).结论:构建人PIG11的干扰载体成功获得PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株,PI染色流式细胞仪检测及Caspase-3的检测证实PIG11对HepG2细胞凋亡起负调控作用,Caspase-9检测显示PIG11诱导HepG2细胞凋亡可能通过线粒体途径.     

Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:利用本实验室已建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株和PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的机制。方法:细胞培养,分组:HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2(pLXSN-PIG11转染建立PIG11蛋白高表达HepG2细胞)、pLXSN-HepG2(pLXSN空载体转染HepG2细胞)、miR-PIG11-HepG2(miRNA干扰PIG11蛋白低表达HepG2细胞)、miR-HepG2(干扰空载体HepG2细胞)。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:Hoechst 33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示:HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P<0.01)。Western blot检测结果显示PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P<0.01)。结论:PIG11蛋白高表达能诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与Caspase-8蛋白及Bcl-2蛋白表达相关。     

辣椒素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的研究

目的研究辣椒素对人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察辣椒素对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,通过DNA凝胶电泳进行DNA片段化分析,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法分析DNA酶抑制剂（ICAD）蛋白的表达。结果辣椒素可诱导A375-S2细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性。250μmol／L辣椒素处理24h,A375-S2细胞出现明娩的亚二倍体峰;处理36h,Hoechst 33258荧光染色有明显的凋亡小体出现,DNA电泳出现阶梯状图谱。在辣椒素作用下,caspase激活的ICAD蛋白表达量随时间延长而减少。结论辣椒素对A375-S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,降低ICAD蛋白的表达为其诱发A375-S2细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究

背景与目的： 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide, As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NF-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响。 材料与方法： 将As2O3和Caspase-3 抑制剂Ac-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot 法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测C-IAP2 mRNA表达。 结果： 5.0 μmol/L As2O3单独处理A375细胞12 h和24 h以及As2O3联合Ac-devd-cho处理24 h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp 65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着As2O3作用时间的延长而增高,但能被Ac-devd-cho阻断。 结论： As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断; As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ac-devd-cho阻断。推测NF-κB-C-IAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人骨髓瘤U266细胞生长的影响及其可能机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素(survivin)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测survivin、p21、细胞周期依赖激酶4(CDK4)和NF-κB的抑制蛋白(IKB-α)等的表达,以及凋亡信号通路中caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.结果 MS-275抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,呈时间-剂量依赖性.MS-275作用U266细胞48 h的IC50为1.39μmol/L.2 μmol/L MS-275作用U266细胞24 h后,G0/G1期细胞所占比例为(64.57±4.09)%;作用36 h后,G0/G1期细胞所占比例为(87.20±2.83)%;瑞氏-姬姆萨染色显示,U266细胞形态发生明显变化.Western blot检测表明,MS-275作用U266细胞后,survivin和CDK4表达下降,p21表达增加,IκB-α磷酸化水平受到明显抑制,caspase-3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切,细胞发生凋亡.结论 MS-275可诱导人骨髓瘤细胞系U266凋亡,NF-κB信号通路阻断是凋亡发生的机制之一.     

汉防己甲素对前列腺癌PC3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 研究汉防己甲素(Tetrandrine,TET)对人前列腺癌细胞PC3增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法 用不同浓度TET（0、1、2、4、6、8、10 μg/ml）处理PC3细胞,锥虫蓝拒染法和MTT法检测TET对PC3细胞生长的影响,流式细胞仪检测TET对PC3细胞凋亡的诱导作用,Western blot法检测TET对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP表达的影响。结果 2 μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率为（20.96±1.72）%,随着药物浓度的增加,抑制作用加强,10 μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率达（89.23±4.12）%。TET能诱导PC3细胞凋亡,并能明显诱导凋亡相关基因Caspase-3的剪切活化及其底物PARP的剪切失活。结论 TET能明显抑制PC3细胞生长,诱导细胞凋亡,该作用与TET诱导细胞Caspase-3剪切激活及PARP剪切失活有关。     

真菌Polyporus sp.MO5多糖诱导白血病细胞株HL-60凋亡作用机制的实验研究

目的:研究真菌Polyporus sp.M05多糖对白血病细胞株HL-60增殖抑制及诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法:活细胞计数法检测多糖的增殖抑制作用;倒置显微镜下直接观察细胞形态;PI染色流式细胞术检测多糖诱导周期阻滞及凋亡作用;RT-PCR检测凋亡相关基因。结果:多糖对HL-60细胞有增殖抑制作用,并随着浓度增大,作用增强;显微镜下观察细胞有明显的凋亡小体。流式细胞术检测细胞有明显G0/G1期阻滞及凋亡峰的出现,并随着时间越长和浓度的增大凋亡阳性率比例越高,与阴性对照相比差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR检测到Bcl-2基因下调,Bax、Fas及Caspase-9基因上调。结论:Polyporus sp.M05中提取的多糖对白血病细胞株HL-60有增殖抑制和诱导凋亡作用,分子机制与Bcl-2基因下调,Bax、Fas及Caspase-9基因上调有关,线粒体途径及死亡受体途径均参与了此凋亡过程。     

TRIM59通过结合BCLAF1调控人皮肤黑色素瘤SK-MEL-2细胞的恶性生物学行为

目的：探究三结构域蛋白59(TRIM59)调控人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-2增殖、细胞周期、凋亡及迁移侵袭的作用机制,及其与Bcl2相关转录因子1(BCLAF1)之间的关系。方法：qPCR和WB法检测人表皮黑色素细胞HEMn-LP、人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-2、UACC903、A375及36例邢台市人民医院2019年2月至2021年7月收集的皮肤黑色素瘤组织中TRIM59的mRNA和蛋白表达,使用脂质体将si-con、si-TRIM59转染至SK-MEL-2细胞中,WB法检测干扰TRIM59表达对细胞中周期蛋白D1(CCND1)、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)、肿瘤抑制蛋白基因(TP53)和BCLAF1蛋白表达的影响,CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验检测对细胞的活性、凋亡、迁移和侵袭的影响,免疫共沉淀(Co-IP)实验检测对细胞中TRIM59蛋白与BCLAF1结合能力的影响。结果：与HEMn-LP细胞相比,SK-MEL-2、UACC903、A375细胞中TRIM59 mRNA和TRIM59、BCLAF1蛋白均呈高表达(均P<0.05),...