结直肠癌与其淋巴结转移癌及结直肠癌细胞上皮-间质转化的对比研究

背景与目的:对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的研究虽有大量文献报道,但研究数据仍有争议.本研究旨在探讨淋巴结转移的结直肠癌与结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异.方法:Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系SW480和SW620 E-cadherin和vimentin的mRNA表达:免疫组织化学法检测30例配对结直肠癌及其转移淋巴结的石蜡组织标本中E-cadherin和vimentin的表达,HE染色观察30例配对结直肠癌及其淋巴结转移癌组织形态以及SW480和SW620的细胞形态.结果:SW480与SW620中E-cadherin和vimentin的mRNA表达差异有统计学意义(P=0.037),均以后者为高;E-cadherin和vimentin在结直肠癌与其淋巴结转移癌组织中的表达差异无统计学意义(P=0.108;P=0.660).部分淋巴结转移癌中E-cadherin的表达高于结直肠癌(4/30),且vimentin表达比结直肠癌弱,甚至表达缺失(6/30);结直肠癌与其淋巴结转移癌组织具有相似的形态学特征;SW480和SW620两者形态类似.结论:结直肠癌对比其淋巴结转移癌、SW480对比SW620发现EMT特征无显著差异,推测是由于淋巴结转移癌和SW620发生TEMT.     

miR-489抑制结直肠癌细胞的侵袭转移

目的:探究miR-489在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达情况及其临床意义,并进一步探究miR-489对CRC细胞的侵袭迁移的作用.方法:应用Real-time PCR检测miR-489在CRC组织和细胞系中的表达情况;分析miR-489与CRC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-489对CRC细胞的侵袭与迁移能力的影响;Western blot探究miR-489对CRC细胞上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用.结果:Real-time PCR结果显示miR-489在CRC组织和细胞系中均为显著性低表达(P＜0.05);统计学分析显示miR-489的表达量与CRC的静脉浸润、浸润深度以及淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的侵袭与迁移;Western blot结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的EMT.结论:miR-489在CRC中为低表达,其能够通过抑制CRC细胞的侵袭、迁移与EMT发挥其抗CRC作用.     

结直肠癌微转移检测方法的研究现状

微转移是结直肠癌预后不良的重要原因之一,在临床上尚未受到普遍重视。近年来研究人员用许多手段对结直肠癌的微转移进行检测,起到了准确分期、评估预后和指导治疗等作用。目前较常用的结直肠癌微转移检测手段,主要包括连续切片法、免疫组化法、组织细胞培养技术和放射免疫导向技术、酶联免疫法、免疫荧光技术、流式细胞术、多聚酶链反应（PCR）技术、免疫-磁分离技术和放射示踪技术等。     

结直肠癌细胞外基质与癌细胞上皮-间质转化和分期的相关性

目的：细胞外基质（extracellular matrix,ECM）作为肿瘤微环境的重要组成部分,参与肿瘤的发生发展。而上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是肿瘤细胞获得运动和侵袭能力的重要方式。本研究通过研究不同分期结直肠癌 ECM 的变化,探讨其对结肠癌细胞系 HT29 EMT 的影响及作用机制。方法收集2011-01-01－2012-05-31北京朝阳医院普外科手术切除的80例结直肠癌组织和20例正常的结肠组织。应用胰酶脱细胞法制备不同分期结直肠癌 ECM,并与结肠癌细胞系 HT29复合培养,免疫组化和蛋白质印迹法检测不同分期结直肠癌 ECM 组中E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）和整合素αvβ6的表达情况。结果 E-cad 主要表达于细胞膜与细胞质中,在正常结肠ECM 组中强阳性表达,在结直肠癌 ECM 组中表达强度降低。Ⅰ期结直肠癌 ECM 组 E-cad 灰度值为1．01±0．11,Ⅱ期为1．08±0．07,Ⅲ期为1．31±0．32,Ⅳ期为1．45±0．57,均与正常结肠 ECM 组相比差异有统计学意义,P Ⅰ期＝0．049, P Ⅱ期＝0．028,P Ⅲ期＝0．003,P Ⅳ期＝0．001。整合素αvβ6主要表达于细胞膜,在正常结肠 ECM 组中低表达,在结直肠癌ECM 组中表达强度增高。Ⅰ期结直肠癌 ECM 组整合素αvβ6表达灰度值为3．75±0．57,Ⅱ期为3．67±0．61,Ⅲ期为3．45±0．69,Ⅳ期为2．95±0．96,均与正常结肠 ECM 组相比差异有统计学意义,P Ⅰ期＝0．048,P Ⅱ期＝0．034,P Ⅲ期＝0．014,P Ⅳ期＝0．002。结论重构后的结直肠癌 ECM 具有促癌细胞发生 EMT 的能力;并且结直肠癌分期越高,其 ECM促癌细胞发生 EMT 的能力越强。     

人结直肠肿瘤干细胞的分离培养与生物学特性

目的 从人结直肠肿瘤细胞中分离培养结直肠肿瘤干细胞(Colon cancer stem cells)并研究其生物学特性。方法 采用有限稀释法筛选分离具有连续克隆能力的单细胞,通过MTT比色法对其体外增殖能力进行鉴定,流式细胞仪分析细胞表面标记CD133、CD166、CD24、CD47、CD200、CD90、CD44、EPCAM的表达情况;PCR检测Oct4、Sox2、Nanog、C-myc等相关基因的表达,实时荧光定量PCR检测其表达量。结果 三例能够形成肿瘤球的原代培养细胞CD166阳性细胞所占比例分别为61.9%、52.4%、47.8%,CD47阳性细胞所占比例分别为99.8%、97.2%、99.9%;不能形成肿瘤球的原代培养细胞中CD166阳性细胞为10.8%,CD47阳性细胞为0.1%;CD133、EPCAM、CD24、CD200四个表面标记在两种细胞中的表达均低于0.5%,CD44、CD90在两种细胞中的表达均高于95%;与原代细胞相比,克隆细胞具有较强的体外增殖能力并且高表达Oct4(P<0.05)、C-myc (P<0.01)及Sox2基因,不表达Nanog基因。结论 人结直肠肿瘤中存在具有自我更新和增殖潜能的结直肠肿瘤干细胞,在体外可将其分离、培养和纯化。     

结直肠癌转移的防治进展

结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）是全球发病率第3位、死亡率第4位的恶性肿瘤,每年新发病例数100~200万并导致60万人死亡[1]。在一些低危险性国家,比如西班牙、部分东欧及东亚国家,结直肠癌的发病率在快速的增高,这种情况被归因于膳食模式的改变以及逐渐西方化的生活方式。在美国以及其他一些高收入国家,由于乙状结肠镜和全结肠镜息肉切除术的应用增加,     

结直肠癌组织中CD133和Bmi-1的表达及临床意义

目的:探讨肿瘤干细胞标志物CD133和Bmi-1在结直肠癌组织中的表达,及其与临床病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测60例手术切除的结直肠癌、癌旁和正常组织中CD133、Bmi-1的表达,对各指标之间的相关关系及其与性别、年龄、肿瘤的部位和大小、病理分级、侵袭深度、淋巴结转移、pTNM分期之间的关系进行分析。结果:结直肠癌组织中CD133、Bmi-1阳性表达率分别为50％（30/60）和73.33％（44/60）,显著高于癌旁及正常组织（P<0.01）;CD133的表达与淋巴结转移、pTNM分期和病理分级相关（P<0.05）,与其他临床病理参数均无关;Bmi-1的表达与淋巴结转移、pTNM分期相关（P<0.01）,与其他临床病理参数均无关;CD133和Bmi-1的表达呈正相关（P<0.05）。结论:结直肠癌组织中存在CD133+肿瘤细胞,即肿瘤干细胞;CD133+肿瘤细胞和Bmi-1表达在结直肠癌的发生、发展中起重要作用。肿瘤干细胞标志物CD133和Bmi-1表达可能成为判断肿瘤的恶性程度和预后的重要指标。     

流式细胞术检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞和循环肿瘤干细胞及其临床预测价值

目的:探讨流式细胞仪检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)和循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cell,CTSC)作为患者临床预测指标的可行性和临床价值.方法:人组首诊初治50例结直肠癌患者,手术前后各抽取15 ml外周血.分离单个核细胞后分成两份,一份标记CTC标志物(CD45、EpCAM和CK),另一份标记CTSC标志物(CD45、EpCAM、CD44和CD133),Moflo XDP流式细胞仪对其进行检测,CD45-EpCAM+ CK+细胞确定为CTC;CTSC确定为3群:CD44+CTSC、CD133+ CTSC和CD44+ CD133+ CTSC.结果:结直肠癌根治术前患者CTC和CD44+ CTSC阳性率分别为34％和44％,CD133+ CTSC和CD44+CD133+ CTSC是24％和0;术后患者CTC和CD44+ CTSC阳性率分别为38％和54％,CD133+ CTSC和CD44+ CD133+ CTSC分别为26％和0.根治术前后CTC阳性率都与肿瘤T分期有关联(P＜0.05);术后CTC与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关联(P＜0.05);术前CD44+ CTSC与肿瘤的浸润深度有关联.结论:根治术前后CTC及术前CD44+ CTSC阳性率都具有临床预测指标的可行性和价值,术后CTC阳性率可能是更好的预测指标.     

结直肠癌病人Vimentin表达的临床意义

目的 探讨波形蛋白(Vimentin)表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。方法 采用免疫组化方法 对189例经病理组织学证实的结直肠癌组织进行Vimentin表达情况检测,分析其与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果 Vimentin阳性表达与淋巴结转移(pN分期,P=0.038)、TNM分期(P=0.024)显著相关。生存分析表明,Vimentin阳性表达与结直肠癌不良预后显著相关(P=0.016)。多因素分析发现,Vimentin表达是结直肠癌患者预后的一个独立因素(P=0.026)。结论 Vimentin阳性表达与淋巴结转移和TNM分期显著相关,是影响其预后的独立因素。     

结直肠癌肿瘤干细胞标志物的研究进展

近年来,肿瘤干细胞（CSC）学说得到越来越多的支持,识别CSC的关键就是寻找干细胞的表面特异性标志物.结直肠癌CSC的相关研究不断取得进展,文章综述了近几年发现的比较公认的干细胞标志物CD44、SOX9、ALDH1和OCT-4等的研究进展及其与结直肠癌的关系.     

Establishment and phenotypic characterization of the first human pulmonary blastoma cell line

Background

Sarcomatoid carcinomas are a group of poorly differentiated carcinomas containing a sarcomatoid component with the presence of epithelial-mesenchymal transition.

Materials and methods

To obtain a stabilized cell line, three mediums were used: IMDM, BEBM and IMDM/BEBM. CD44, CD29, CD90, CD133, CD326 antigens, cytokeratins and vimentin were tested by flow cytometry and immunofluorescence assay. Side population, spheres formation, tumorigenicity in vitro and in vivo and cell cycle analysis were analyzed.

Results

At day of surgery, cytometric analysis revealed that CD133, CD90 and CD326 levels were very low, CD29 and CD44 were about 80%. After 30 days of culture, CD133 levels increased up to 30%, all cells expressed CD90 and vimentin markers and CD326 was lost. The cells grew only in IMDM/BEBM medium. The cell population was heterogeneous with epithelial and mesenchymal cells. After about 15-30 days, only fibroblast-like cells were observed. LC114 cells were not able to grow as spheres and they did not show a side-population phenotype. The cell cycle analysis confirmed an aneuploid population in the tissue and normal diploid population in cell line.

Conclusions

We selected, characterized and stabilized a primary cell line of human pulmonary blastoma by the expression both of stemness and differentiation markers and confirmed the presence of the marker CD133.     

肿瘤干细胞标志物在结直肠癌中的研究进展

肿瘤干细胞(CSC)标志物是用来标记并鉴定CSC的一类分子.目前研究发现与结直肠癌有关的CSC标志物主要有CD133、CD29、CD166、CD44、Nanog等.这些干细胞标志物通过多种分子机制参与肿瘤的发生发展,可作为潜在的治疗靶点,还可被用作评估患者预后的有效指标.     

大肠癌细胞HCT-15肿瘤干细胞样细胞分离及成瘤性比较

目的:依据人大肠癌细胞HCT-15的表面标志物,分离其中的干细胞亚群。建立裸鼠体内原代大肠癌荷瘤模型,比较各亚群肿瘤体积和质量。方法:利用免疫磁珠分选技术,分离其中CD133/CD44干细胞亚群。分选得到CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群分别接种于裸鼠体内,并观察肿瘤大小和质量。结果:CD133+CD44+和CD133+CD44-细胞亚群成功的从HCT-15细胞中分离出来。接种CD133+CD44+细胞的裸鼠形成的肿瘤体积［（2.76±0.22）cm3］和质量［（5.2±0.21）g］明显高于接种CD133+CD44-细胞裸鼠的肿瘤体积与质量［（1.56±0.34）cm3,（3.4±0.18）g］（P＜0.05）。结论:CD44阳性的大肠癌肿瘤干细胞成瘤能力明显高于CD44阴性的大肠癌肿瘤干细胞。     

咖啡酸苯乙酯诱导人大肠癌细胞凋亡的研究

目的 :探讨咖啡酸苯乙酯 (caffeicacid phenethylester ,CAPE )诱导大肠癌HCT116细胞发生凋亡的作用 ,为CAPE用于大肠癌的临床治疗提供依据。方法 :采用MTT法、HE染色、AnnexinV FITC/PI双染色流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记法(TUNEL) ,检测不同浓度CAPE作用后HCT116细胞增殖活性和细胞凋亡的变化。结果 :2 5、5 0、10 0mg/L的CAPE处理HCT116细胞 2 4h后 ,抑制率分别为12 2 0 %、2 2 44 %、3 7 86% ,细胞增殖明显受到抑制 ,呈量效依赖性 ;凋亡率分别为( 10 2 0± 0 66) %、 ( 16 60± 0 61) %、( 2 5 5 3± 3 2 7) % ,均显著高于对照组 ( 5 47± 0 93 ) % ,P <0 0 1。HE染色呈现典型的凋亡细胞形态特征。TUNEL法标记见明显的凋亡阳性细胞。结论 :CAPE可诱导体外培养的大肠癌细胞发生凋亡     

人小细胞肺癌细胞株H446侧群细胞的生物学特征

背景与目的:肿瘤干细胞学说的提出为肿瘤治疗提供了新的靶点和方向,但肿瘤干细胞的分离纯化一直是个难题。本研究拟从人小细胞肺癌细胞株H446中分离并鉴定出具有干细胞特性的侧群(SP)细胞,研究其生物学特征,为肿瘤干细胞的分离纯化奠定基础。方法:采用荧光激活细胞分选(FACS)技术分选得到H446细胞中SP细胞和非侧群(NSP)细胞,并检测纯度。观察形成悬浮肿瘤细胞球的能力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测这两种细胞亚群中CD133、ABCG2、NucleosteminmRNA水平。MTT法比较SP细胞、NSP细胞及未分选细胞体外增殖能力及耐药性差异,流式细胞仪检测体外分化能力,裸鼠成瘤实验检测体内成瘤能力。结果:荧光显微镜下H446细胞中Hoechst33342阴性细胞约为(5.1±0.2)%。流式细胞分选结果显示,H446中SP细胞比例为(6.3±0.1)%。SP细胞在无血清培养基中形成悬浮肿瘤细胞球的能力强于NSP细胞。CD133、ABCG2在SP细胞中的表达是NSP细胞的(21.60±0.26)倍、(7.10±0.14)倍,差异有统计学意义(P<0.01);Nucleostemi...     

结肠癌 COLO 耐药株的构建及其与肿瘤干细胞的关系

目的：构建结肠癌 COLO 耐药株,探索其功能特性及其与肿瘤干细胞的关系。方法通过逐渐递增化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）浓度的方法,构建了耐0．10μmol／ml 和0．20μmol／ml 5-FU 的结肠癌 COLO 耐药株各1株,分别命名为 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2。从增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力、微球体形成能力、干性基因的表达、交叉耐药等方面与亲本结肠癌细胞株 COLO 进行对比。结果在存活检测中,常规培养后第4天,结肠癌耐药株 COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的 A 值分别为0．61±0．13、0．54±0．07、0．41±0．09,差异有统计学意义（F ＝63．43,P ＝0．033）。随着耐5-FU 药物浓度的增加,COLO 耐药株的克隆形成率逐渐增强,COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO的克隆形成率依次为（87．6±12．7）％、（65．3±9．7）％、（38．5±7．6）％,差异有统计学意义（F ＝33．64, P ＝0．017）。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 每高倍视野中迁移穿过基底膜的细胞数分别为（482±39）个、（434±45）个、（373±38）个,侵袭穿过基底膜的细胞数分别为（174±42）个、（112±31）个、（87±29）个,差异均有统计学意义（F ＝109．61,P ＝0．009;F ＝67．31,P ＝0．032）。与亲本结肠癌细胞株COLO 比较,耐药株表达更高的干性基因,差异有统计学意义（F ＝47．31,P ＝0．042）;且耐药株对其他化疗药如米托蒽醌存在交叉耐药[如给药96 h,米拖蒽醌对亲本 COLO 的抑制率高于 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2（0．749±0．042、0．423±0．024、0．342±0．018）,差异有统计学意义（F ＝12．61,P ＝0．028）]。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的微球体形成率依次为（8．90±0．97）％、（6．20±0．75）％、（3．90±0．32）％,差异有统计学意义（F ＝164．32,P ＝0．006）。结论结肠癌 COLO耐药株有肿瘤干细胞样细胞的特点,是富集了的肿瘤干细胞。     

Tbx3基因在肿瘤进展中的机制

Tbx3(T-box3)基因作为T-box家族的成员之一,广泛存在于人体的多种组织和器官中,参与了胚胎时期乳腺、四肢、心脏、眼、肺、胰腺的发育调控,并且在维持胚胎干细胞的发育中发挥了重要作用.最新研究表明,Tbx3可以作为转录因子通过上皮间质转化、肿瘤干细胞和甲基化等多种途径参与肿瘤的发生和发展.更好地了解Tbx3将为肿瘤的基因诊断和靶向治疗提供新的思路.     

Tbx3基因在肿瘤进展中的机制研究

 Tbx3(T-box3)基因作为T-box家族的成员之一,广泛存在于人体的多种组织和器官中,参与了胚胎时期乳腺、四肢、心脏、眼、肺、胰腺的发育调控,并且在维持胚胎干细胞的发育中发挥了重要作用。最新研究表明,Tbx3可以作为转录因子通过上皮间质转化、肿瘤干细胞和甲基化等多种途径参与肿瘤的发生和发展。更好地了解Tbx3将为肿瘤的基因诊断和靶向治疗提供新的思路。     

长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性

目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性.方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力.FCM法检测CD44~+/CD24~(-/low)细胞的含量.结果: 接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞.随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化.CD44~+/CD24~(-/low)细胞仅存在于基底样乳腺癌标本.来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异.结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变.     

肝癌干细胞表面标志物研究进展

近年来研究发现,表达CD133、CD90、上皮细胞黏附分子、CD13、趋化因子受体4、CD44及ATP结合盒蛋白转运体的肝癌细胞在肝癌的生长、复发和转移中发挥重要作用.肝癌干细胞由众多不同表型的细胞构成,上述细胞均可能是肝癌干细胞的重要组成部分,这为肝癌干细胞理论的进一步发展及实际应用带来了困难.