SLC22A18基因对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响

目的:探讨印记基因SLC22A18 (solute carrier family 22,member 18)对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响及耐药机制的研究.方法:采用脂质体转染法将携带有SLC22A 18基因的重组质粒pIRES2-EGFP-SLC22A18转入U251细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测SLC22A18 mRNA及蛋白在转染后U251细胞中的表达情况;CCK-8法检测细胞对化疗药物敏感性的变化;FCM法检测SLC22A18表达对细胞凋亡以及对多柔比星在细胞内蓄积浓度的影响.结果:转染SLC22A18基因的U251细胞中有SLC22A18 mRNA及其蛋白的表达;SLC22A18基因转染组U251细胞与对照组细胞比较,U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值上升(t=3.23,P＜0.05),对替莫唑胺的敏感性上升,IC50值下降(t=4.28,P＜0.05).SLC22A18基因转染组和空质粒转染组细胞凋亡率分别为(41.35±4.98)％和(6.25±0.82)％,差异有统计学意义(t=12.05,P＜ 0.01).SLC22A18表达使细胞内多柔比星蓄积浓度明显下降(t=4.25,P＜0.05).结论:SLC22A18表达使人胶质瘤U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,对替莫唑胺的敏感性提高,并可能通过降低细胞内化疗药物蓄积产生耐药性.     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。     

长链非编码RNA MEG3靶向miR-21对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探究长链非编码RNA人母系表达基因3 (maternally expressed gene 3,MEG3)对人胶质瘤细胞U251增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。［方法］ RT-PCR检测MEG3和miR-21在胶质瘤组织、癌旁组织中、正常星形胶质细胞NHAs和胶质瘤细胞U251中的表达;用pcDNA-MEG3 (pc-MEG3)转染U251细胞,RT-PCR检测MEG3和miR-21的表达;生物信息及荧光素酶报告实验预测并验证MEG3和miR-21的关系;MTT检测细胞增殖能力,Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;免疫印迹检测增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2) 和MMP-9的表达。［结果］ 与癌旁组织比较,MEG3在胶质瘤组织中表达水平明显降低(t=23.169,P<0.001),miR-21水平明显升高(t=14.965,P=0.002);与NHAs组比较,U251组细胞MEG3表达水平明显降低(t=13.145,P<0.001),miR-21表达水平显著升高（t=12.483,P<0.001);pcMEG3 能显著上调MEG3的表达水平并抑制miR-21表达(t=8.129,P<0.001;t=11.705,P<0.001);miR-21 mimic能显著促进miR-21表达并能降低MEG3 野生质粒 (MEG3 wt) 的活性(t=6.460,P<0.001;t=7.742,P=0.004);pc-MEG3能显著降低U251细胞增殖倍数和PCNA的表达水平(F=96.45,P<0.001;t=5.337,P<0.001),miR-21 mimic能显著减弱pc-MEG3对细胞增殖及PCNA表达的抑制作用(t=7.073,P<0.001;t=4.609,P<0.001);同时,pc-MEG3还能显著降低U251细胞的划痕闭合率和侵袭细胞数(t=5.014,P<0.001;t=10.664,P<0.001),并抑制MMP-2和MMP-9的表达(t=3.360,P=0.007;t=3.453,P=0.006）;miR-21 mimic能明显减弱pc-MEG3对细胞侵袭、迁移及MMP-2和MMP-9表达的抑制作用(t=2.498,P=0.032;t=4.298,P=0.002;t=4.612,P<0.001;t=5.137,P<0.001)。［结论］ MEG能通过靶向miR-21减弱胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞凋亡的影响

目的:研究FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法:Real-time PCR检测35例脑胶质瘤及相应癌旁组织中FUBP1 mRNA的表达。设计并合成FUBP1基因特异性的siRNA,转染U251细胞。转染后,western blot检测转染后FUBP1蛋白的表达,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果:与癌旁组织相比,FUBP1 mRNA在脑胶质瘤组织中表达明显上调。转染后,U251细胞中的FUBP1蛋白表达明显降低,同时,凋亡率明显增加。结论:FUBP1基因在脑胶质瘤中存在表达异常,其表达降低能够促进细胞凋亡。     

FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞凋亡的影响

目的：研究FUBP1基因在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法：Real-time PCR检测35例脑胶质瘤及相应癌旁组织中FUBP1 mRNA的表达。设计并合成FUBP1基因特异性的siRNA,转染U251细胞。转染后,western blot检测转染后FUBP1蛋白的表达,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果：与癌旁组织相比,FUBP1 mRNA在脑胶质瘤组织中表达明显上调。转染后,U251细胞中的FUBP1蛋白表达明显降低,同时,凋亡率明显增加。结论：FUBP1基因在脑胶质瘤中存在表达异常,其表达降低能够促进细胞凋亡。     

EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

背景与目的:使用小分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251的抑制作用。方法:用不同浓度gefitinib作用于U251细胞72h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度gefitinib作用后细胞的生存率;流式细胞术分析不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后细胞周期的变化;Western blotting法检测不同浓度gefitinib作用后,U251细胞周期相关蛋白表达量的变化。结果:MTT结果显示与对照相比,不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后,细胞增殖抑制率均具有显著性差异(P<0.05),并呈浓度依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01μmol/L。细胞周期检测结果显示,随着gefitinib浓度的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,而S+G2/M期细胞的比例明显降低,说明gefitinib阻滞U251细胞于G0/G1期。Western blotting分析结果显示gefitinib对U251细胞的G0/G1期阻滞主要通过下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4与细胞周期素cyclin E的表达,同时上调p21的表达,介导周期阻滞来实现。结论:gefitinib可能通过细胞周期的G0/G1期阻滞,体外抑制人胶质瘤细胞的生长,这为gefitinib治疗恶性脑胶质瘤提供了一定的理论基础。但对于gefitinib的研究还需进一步深入,以明确其治疗机制及疗效。     

lacZ报告基因重组腺病毒载体对脑胶质瘤细胞U251的转染

目的观察lacZ报告基因重组腺病毒对人脑胶质瘤细胞U251的转染能力及其细胞毒性.方法将lacZ报告基因重组腺病毒转染人脑胶质瘤细胞U251,TCID50法测定病毒滴度,MTT法测定细胞毒性影响.结果腺病毒滴度在2.0×106时可使U251细胞100%感染;MTT法显示腺病毒转染与未转染的U251细胞间OD570差异无显著性.结论针对U251细胞而言,腺病毒具有很高的转染效率,其本身对细胞无毒性,可作为胶质瘤基因治疗的有效载体.     

过表达 CD133 对脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响

目的： 构建稳定表达人 CD133 基因的脑胶质瘤U251细胞株,并探讨 CD133 对U251细胞生物学行为的影响。 方法： 将人 CD133 全长cDNA构建入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term ,包装成逆转录病毒pEGZ-Term-CD133,进而感染脑胶质瘤U251细胞株。流式细胞术及Real-time PCR检测感染后U251细胞CD133分子的表达。细胞计数法、神经球形成实验观察CD133过表达对U251细胞体外的增殖和神经球形成的影响。裸鼠皮下成瘤法检测感染后U251细胞的体内致瘤性。 结果： 成功构建pEGZ-Term-CD133逆转录病毒表达载体,并获得稳定表达 CD133 的U251细胞。相比U251-mock、U251细胞,U251-CD133细胞高表达 CD133 mRNA \[（7 400.2±5 003.4) vs (2.0±1.1)、(1.0±2.2),均P=0.0007）和蛋白。感染pEGZ-Term-CD133对U251细胞的体外增殖并无影响（P＞0.05）;但在无血清神经干细胞培养条件下,U251-CD133细胞所形成的神经球数量显著高于U251-mock和U251细胞\[（34.0±7.5） vs（14.6±2.3）、（11.5±1.3）个,均P<0.01\]。接种量为1×105 个细胞时,U251-CD133细胞在裸鼠体内的成瘤时间（32 d）少于U251-mock细胞（38 d）、成瘤率更高（100% vs 30%）,在第41天时,肿瘤体积显著增大\[（180.3±146.8） vs （4.0±0.0）mm3,P=0.003\]。 结论： CD133分子不影响脑胶质瘤U251细胞的体外增殖,但可促进U251细胞神经球的形成和致瘤性。     

藤黄酸通过抑制GLUT-3/AKT信号通路增强神经胶质瘤U251细胞对替 莫唑胺的敏感性

目的：探索藤黄酸是否能够增强神经胶质瘤U251细胞对替莫唑胺的敏感性,并进一步探索其增敏机制。方法： 体 外培养U251细胞,并分成空白对照组、藤黄酸单独处理组、替莫唑胺单独处理组和联合处理组;利用CCK-8实验检测各组细胞存 活率,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况和 ROS 水平变化情况,利用Western blotting 实验检测相关蛋白表达量变化情况。 结果: CCK-8法实验中,四组细胞处理24 h后存活率依次为（98.65±3.68） %、（93.58±2.47） %、（66.81±2.39） %和（38.65±4.13） %, 可 以看出联合处理组能够大幅提高对替莫唑胺对U251细胞增殖的抑制作用（P<0.01）;联合处理组U251细胞凋亡比例为（61.43± 2.58） %,与替莫唑胺单独处理组的（26.68±1.82） %相比明显增加（P<0.01）;藤黄酸和替莫唑胺共同处理后能够上调U251细胞 ROS水平和降低GLUT-3和p-AKT的表达,抑制GLUT-3/AKT信号通路（P<0.05或P<0.01）。结论: 藤黄酸与替莫唑胺联用能够 通过上调U251细胞中的ROS水平、抑制GLUT-3和AKT信号通路而增强U251细胞对替莫唑胺的敏感性。     

羟基脲对人脑胶质瘤U251细胞放化疗增敏作用的研究

目的:探讨羟基脲(HU)联合替莫唑胺(TMZ)加放疗(RT)对人脑胶质瘤U251细胞放化疗(CRT)敏感性的影响。方法:体外培养U251细胞,采用CCK8实验检测不同浓度HU、TMZ及不同条件处理后细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况;Transwell小室、划痕实验评估细胞侵袭、迁移能力变化;We...     

碱性成纤维细胞生长因子小分子干扰RNA对胶质瘤细胞株U251增殖与凋亡的影响

背景与目的:碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的重要一员,bFGF是多功能细胞因子,参与创伤愈合、组织修复、未成熟神经细胞的增殖和分化过程.本课题组前期对bFGF在胶质瘤中的表达做过研究,证实bFGF在胶质瘤细胞中过表达,并刺激胶质瘤细胞的增殖和新生血管生成.本研究检测bFGF小分子干扰RNA对胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响.方法:用化学法合成四条针对bFGF的siRNA和一条阴性对照siRNA,并用脂质体法转染胶质瘤细胞系U251;以Opti-MEM I无血清培养基培养的U251细胞作为正常对照.通过RT-PCR和免疫组化的方法检测bFGF的表达,并用流式细胞术、MTT法检测转染后U251细胞的凋亡和增殖活性的变化.结果:转染48 h后,正常对照、阴性对照、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4组U251细胞中的bFGF mRNA水平分别为0.95 0.02、0.95±0.02、0.85 0.02、0.76±0.04、0.65±0.04和0.56±0.03;转染72 h后,分别为0.95±0.04、0.89±0.05、0.81±0.05、0.80±0.05、0.77±0.04和0.53±0.05.四条bFGF siRNA中,siRNA-4作用最显著.转染48 h后,siRNA-4和阴性对照组细胞增殖抑制率分别为(66.4±1.2)%和(56.3±1.4)%;转染72 h后,分别为(40.0±2.6)%和(14.7±0.6)%,siRNA-4与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:理想的bFGF小分子干扰RNA 能够抑制该基因的表达并抑制胶质瘤细胞的增殖活性.     

白藜芦醇抑制胶质瘤细胞增殖的体内外实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将不同浓度Res作用于C6大鼠胶质瘤细胞系,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白印迹(Western blot)检测Res处理前后C6细胞表皮生长因子受体(EGFR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;免疫组化分析基质金属蛋白酶(MMP)-9、转录核因子-κB(NF-κB)的表达。应用立体定向术建立大鼠动物模型,将20只大鼠分为对照组和治疗组,治疗组8只以8 mg·kg-1·d-1的剂量饲喂,2只以16 mg·kg-1·d-1的剂量饲喂,观察动物一般表现及生存期。MRI动态监测肿瘤大小,脑标本进行病理组织学及相关指标检测。结果在体外Res可明显抑制C6胶质瘤细胞生长,细胞周期被阻滞在S期,诱导肿瘤细胞凋亡,Res可延长荷瘤SD大鼠生存期,免疫组化检测EGFR、MMP-9、NF-κB表达降低,而GFAP表达升高。结论Res可抑制胶质瘤细胞增殖,延长荷瘤动物生存期,具有潜在临床应用价值。     

长链非编码RNA PSMA3-AS1在人胶质瘤细胞中的表达及作用研究

目的探究胶质瘤组织中lncRNA PSMA3-AS1的表达情况,以及其对胶质瘤细胞(U251、LN229、T98G和A172)增殖和侵袭能力的影响。方法使用qRT-PCR实验检测35对胶质母细胞瘤组织和癌旁组织中PSMA3-AS1表达;结合TCGA数据库分析PSMA3-AS1表达与胶质瘤恶性程度及患者预后的关系;采用U251和T98G胶质瘤细胞系进行细胞增殖能力和侵袭能力检测;使用Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-2/9表达水平。结果 TCGA数据库分析提示PSMA3-AS1在胶质瘤组织中呈高表达状态,结合35对胶质瘤组织和细胞系中PSMA3-AS1的表达,提示PSMA3-AS1在胶质瘤中表达明显上调(P<0.05)。同时发现PSMA3-AS1表达与肿瘤直径有关(P=0.007),而PSMA3-AS1高表达的胶质瘤患者生存期较短(P=0.042)。敲低PSMA3-AS1表达后,胶质瘤细胞内PSMA3-AS1的表达水平及细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制,侵袭相关蛋白(MMP-2/9)表达水平明显降低(P<0.05)。结论 PSMA3-AS1在胶质瘤中呈高表达状...     

STAT1基因对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响及其机制

 目的 探讨信号转导与转录激活因子1（STAT1）对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响及其机制。方法 利用LipofectamineTM2000转染试剂体外瞬时将pcDNA3.1-STAT1转染入胶质瘤细胞系U251，将细胞分为Mock组（无转染）、空载组（转染pcDNA3.1）和STAT1组（转染pcDNA3.1-STAT1），采用Western blot法检测胶质瘤U251细胞中STAT1表达水平，MTT法检测转染STAT1的U251细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期指标，划痕实验检测细胞迁移指标，通过Western blot法检测转染细胞中P53、P21、bcl-2、Caspase-8的表达水平及变化趋势。结果 与Mock和空载组相比，STAT1组中STAT1蛋白表达量明显增高（P<0.05），细胞增殖明显减慢（P<0.05），G₀/G₁期细胞比例明显升高，细胞的迁移能力明显下降； P53、P21、Caspase-8表达明显增强（P<0.05），bcl-2表达明显减弱（P<0.05）。结论 高表达的STAT1对人脑胶质瘤U251细胞具有抑制增殖或促进凋亡的作用，并且STAT1可调控多分子信号转导通路，对脑胶质瘤的发生和发展起到了关键的作用。     

纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对胶质瘤U251细胞放疗增敏作用的实验研究

目的 探讨纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤U251细胞的放射增敏作用。方法 细胞免疫组化法检测脑胶质瘤U251细胞CD133的表达情况;流式细胞分选获得U251-CD133+细胞;MTT法观察纳米Fe3O4／CD133Ab复合物和CD133Ab分别对脑胶质瘤细胞U251及U251-CD133+的细胞毒作用;克隆形成抑制实验检测纳米Fe3O4／CD133Ab复合物和CD133Ab对脑胶质瘤U251细胞放射增敏的影响。结果 脑胶质瘤U251细胞中有CD133分子阳性表达并可以分选出CD133阳性表达细胞;在0.0488～25μg／ml范围内,纳米Fe3O4／CD133Ab复合物作用于脑胶质瘤U251及U251-CD133+细胞24h的细胞毒性呈明显剂量依赖性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＞0.05）。纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤U251和U251-CD133+细胞的增殖抑制率最高值分别为59.46％和56.66％,IC50分别为11.84μg／ml和12.06μg／ml。纳米Fe3O4／CD133Ab复合物+照射组与CD133Ab+照射组比较,细胞存活分数差异有统计学意义（P＜0.05）,在照射4Gy以上时,随X射线剂量增加而放射敏感性增强。结论 纳米Fe3O4／CD133Ab复合物对脑胶质瘤细胞U251和U251-CD133+有细胞毒作用,并且对U251细胞有放射增敏作用。     

隔蛋白7逆转裸鼠移植胶质瘤的恶性表型

目的探讨隔蛋白（SEPT）7对胶质瘤恶性表型的影响。方法建立SEPT7表达缺失的人胶质瘤TJ905细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，将荷瘤鼠分为治疗组（SEVIT／pcDNA3）、空载体组（pcDNA3）和对照组（PBS），观察各组肿瘤的大小及生长速度；采用免疫组化法检测各组肿瘤组织标本中SEPT7、增殖细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、侵袭相关因子[基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9]、细胞周期因子（CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE、p21、p16）以及凋亡相关因子（bcl-2、caspase-3）的表达；原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡。结果治疗组肿瘤的生长速度明显减慢，6d后肿瘤体积明显小于对照组和空载体组（P〈0．05）；治疗组肿瘤标本中SEV17、p21、p16和caspase-3的表达上调，PCNA、MMP-2、MMP-9、CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE和bcl-2的表达下降，且GFAP呈阳性表达；TUNEL法检测治疗组肿瘤细胞凋亡增加。结论SEPT7可抑制肿瘤生长、增殖和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，对胶质瘤的恶性表型具有逆转作用。     

TRPM7通过PI3K/AKT/ERK信号途径影响脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化

目的 探讨沉默M型顺时受体电位通道7(melastatin transient receptor potential channel 7,TRPM7)对脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7在人正常星形胶质HA1800细胞株以及脑胶质瘤细胞株...