长春瑞滨联合西妥昔单抗抑制血管生成作用的实验研究

目的 探讨长春瑞滨联合西妥昔单抗对体内外血管生成的抑制作用.方法 以人肺腺癌细胞株A549为对照,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,观察长春瑞滨联合西妥昔单抗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力的影响;应用Transwell小室模型、体外小管形成实验及流式细胞术,分别观察长春瑞滨联合西妥昔单抗对HUVEC迁移、小管形成及细胞凋亡的影响;应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察药物对体内CAM血管生成的抑制作用.结果 0.1、0.4和0.8 ng/ml长春瑞滨对HUVEC增殖的抑制率分别为25.8%、39.2%和54.0%,0.25 μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖的抑制率为19.7%.0.1 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗和0.4 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖的抑制率分别为29.5%和46.4%,联合用药有次加作用;0.8 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖的抑制率为64.6%,联合用药有协同作用.0.1、0.4和0.8 ng/ml长春瑞滨分别联合0.25 μg/ml西妥昔单抗具有抑制HUVEC迁移的作用,抗HUVEC迁移率分别为51.9%、68.2%和95.0%,联合应用有协同作用.0.1 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗或0.4 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗对抑制HUVEC小管形成有次加或协同作用,抗HUVEC小管形成率分别为38.8%和57.7%;0.8 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗对抑制HUVEC小管形成有协同作用,抗HUVEC小管形成率为78.9%.0.8 ng/ml长春瑞滨+0.25 μg/ml西妥昔单抗诱导HUVEC的凋亡率为59.9%,有协同作用.长春瑞滨联合西妥昔单抗具有协同抑制CAM血管生成的作用.结论 小剂量长春瑞滨和西妥昔单抗在体内外具有抗血管生成作用,联合用药具有次加或协同作用.     

奥沙利铂联合热疗对血管生成的抑制作用

目的探讨奥沙利铂(L-OHP)联合热疗在体内外对血管生成的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTY)法观察L-OHP联合热疗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人结肠癌LOVO细胞增殖的影响;采用transwell实验观察L-OHP联合热疗对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察L-OHP对CAM新生血管的抑制作用。结果0.5～16μs/ml L-OHP均具有抑制HUVEC增殖的作用,细胞存活率为80.1%～42.5%,其增殖速度与L-OHP浓度呈负相关(r=-0.943, P=0.005);在此浓度范围内,L-OHP对LOVO细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制。0.5、1和16μg/ml L-OHP与热疗对HUVEC增殖的抑制具有协同作用,2、4和8μg/ml L-OHP与热疗具有相加作用。0.25～2μg/ml L-OHP具有抑制HUVEC迁移的作用,细胞迁移抑制率为18.7%～53.0%。1、4μg/ml L-OHP对CAM新生血管具有明显的抑制作用,抑制率分别为70.0%和100.0%。结论小剂量L-OHP在体内外具有抑制血管生成的作用,联合热疗对抑制HUVEC增殖具有协同或相加效应。     

白头翁联合恩度体外抗血管生成作用

目的：探讨白头翁醇提物联合恩度体外对血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成的作用。方法：以人结肠癌Lovo细胞为对照,采用MTT法观察中药白头翁联合恩度对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）体外增殖的影响;利用transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察中药白头翁联合恩度对HUVEC体外迁移、成血管能力的影响。结果：白头翁醇提物2-8μg/ml在体外具有抑制HUVEC增殖的作用,联合恩度10μg/ml时具有协同作用（细胞存活率在37.6%-22.5%）,与浓度呈负相关（r=-0.850,P=0.032）,此浓度范围内对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显差异细胞毒作用（P=0.000）。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用12h后具有抑制HUVEC迁移的作用,与浓度呈负相关（r=-0.919,P=0.000）。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用24h后内皮细胞小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,与浓度呈负相关（r=-0.908,P=0.000）。结论：小剂量白头翁在体外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。     

白头翁联合恩度体外抗血管生成作用

目的:探讨白头翁醇提物联合恩度体外对血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成的作用。方法:以人结肠癌Lovo细胞为对照,采用MTT法观察中药白头翁联合恩度对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响;利用transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察中药白头翁联合恩度对HUVEC体外迁移、成血管能力的影响。结果:白头翁醇提物2-8μg/ml在体外具有抑制HUVEC增殖的作用,联合恩度10μg/ml时具有协同作用(细胞存活率在37.6%-22.5%),与浓度呈负相关(r=-0.850,P=0.032),此浓度范围内对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显差异细胞毒作用(P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用12h后具有抑制HUVEC迁移的作用,与浓度呈负相关(r=-0.919,P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用24h后内皮细胞小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,与浓度呈负相关(r=-0.908,P=0.000)。结论:小剂量白头翁在体外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。     

地塞米松联合硫酸镁预防长春瑞滨所致静脉炎

目的　长春瑞滨是目前最常用的化疗药物之一,它是缓和的发疱剂,能引起静脉炎。本研究旨在探讨地塞米松联合硫酸镁预防长春瑞滨所致静脉炎的效果。方法　前瞻性观察我科３００例初治晚期非小细胞肺癌患者,化疗方案包含长春瑞滨,每周期评估静脉炎的程度。全组分为试验组和对照组各１５０例,试验组使用长春瑞滨前后用地塞米松２.５ｍｇ静脉注射,５０％硫酸镁湿敷静脉穿刺点以上皮肤,从静脉用药前１０ｍｉｎ至结束后４～６ｈ;对照组仅用药前后给予地塞米松２.５ｍｇ静脉注射,未用硫酸镁湿敷。结果　试验组静脉注射长春瑞滨７９１次,其中３９次（４.９３％）发生静脉炎;对照组予８０７次静脉注射长春瑞滨,９８次（１２.１４％）发生静脉炎,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。试验组有８例发生静脉炎（５.３３％）,对照组１９例发生静脉炎（１２.６７％）,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。结论　地塞米松联合硫酸镁能预防长春瑞滨治疗非小细胞肺癌患者所致静脉炎的发生,增加患者对化疗的依从性。     

长春瑞滨联合依维莫司对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨长春瑞滨联合依维莫司对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,采用长春瑞滨、依维莫司干预细胞,检测长春瑞滨、依维莫司作用细胞48 h的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设置长春瑞滨组、依维莫司组及联合组的用药浓度,以不加药物处理的细胞为对照组.MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、磷酸化AKT1(p-AKT1)蛋白的表达情况.建立乳腺癌裸鼠转移瘤模型,腹腔注射长春瑞滨(2 mg/kg,qd)或依维莫司(2 mg/kg,q3d),联合组注射长春瑞滨(2 mg/kg,qd)+依维莫司(2 mg/kg,q3d),计算肿瘤体积和重量.结果 随着长春瑞滨或依维莫司药物作用浓度的增加,细胞的存活率逐渐下降,且呈一定的浓度依赖性.联合组的细胞存活率低于长春瑞滨组和依维莫司组(P﹤0.05).长春瑞滨组、依维莫司组的细胞凋亡率均高于对照组,联合组的细胞凋亡率高于长春瑞滨组和依维莫司组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).长春瑞滨组、依维莫司组、联合组的肿瘤体积和重量均低于对照组,联合组的肿瘤体积和重量均低于长春瑞滨组和依维莫司组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).长春瑞滨组和联合组细胞的p-PI3K、p-AKT1蛋白表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);长春瑞滨组细胞的p-PI3K、p-AKT1蛋白表达水平均低于依维莫司组,高于联合组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 长春瑞滨和依维莫司在抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制肿瘤生长时具有协同作用,主要是通过抑制PI3K/AKT1信号通路的激活发挥作用.     

微管促解聚与促聚合药物序贯使用对肿瘤细胞的抑制作用

目的：探讨细胞微管促解聚与促聚合药物序贯使用对肿瘤细胞的抑制作用。方法：采用四唑盐（MTr）比色法，检测化疗药物紫杉醇和长春瑞滨对肿瘤细胞株MCF-7、SK-OV3、A549的抑瘤效应。设定紫杉醇组、长春瑞滨组、紫杉醇加长春瑞滨组、先紫杉醇4小时后加长春瑞滨组和先长春瑞滨4小时后加紫杉醇组，药物浓度为100％血浆峰值浓度（PPC），50％PPC，25％PPC，12．5％PPC，6．25％PPC，培养72小时测定。结果：对三种肿瘤细胞株MCF-7，SK-OV3，A549，先加长春瑞滨4小时后加紫杉醇组抑瘤效应均明显优于其他各组（P〈0．01），先紫杉醇4小时后加长春瑞滨组抑瘤率并不优于其他组（P〉0．1）。结论：在联合使用微管解聚或聚合的化疗药物时，先使用促解聚药物，再使用促聚合药物，对肿瘤细胞的抑制有增效作用。     

羟喜树碱联合热疗对体内外血管生成的抑制作用

目的:探讨羟喜树碱联合应用热疗(thermotherapy)对体内外血管生成的抑制作用。方法:采用MTT法观察羟喜树碱联合热疗对人微血管内皮细胞(HMVEC)、人肝癌细胞HepGⅡ增殖的影响。利用三维血管模型观察羟基喜树碱联合热疗对HMVEC迁移的影响。利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察羟喜树碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果:羟喜树碱在20~40ng/ml、5~80ng/ml浓度范围内,具有抑制血管内皮细胞增殖和迁移作用,内皮细胞存活率(68.2%~44.7%),均与浓度呈负相关(相关系数r分别为-0.906、-0.469,P值分别为0.00003、0.0051);具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用;而在5~80ng/ml浓度范围内,对人肝癌细胞无细胞毒作用(细胞存活率:100%~90%)。20ng/ml的羟喜树碱与热疗联合应用在体外具有抗血管生成的协同效应;40ng/ml的羟喜树碱与热疗联合应用在体外具有抗血管生成的次加效应。结论:小剂量羟喜树碱(20~40ng/ml)联合热疗在体内外均具有抑制血管增殖和迁移协同或次加作用。     

重组人血管内皮抑素对血管新生的影响研究

目的 探讨重组人血管内皮抑素（Endostar,恩度）对血管内皮细胞趋化、迁移、粘附、增殖及小管形成等与血管新生相关生物学行为的影响。方法 以原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为细胞模型,通过Boyden小室荧光定量分析、划痕试验、HUVEC荧光定量粘附分析、CFSE染色流式细胞术、CCK-8定量检测、小管形成试验和Matrigel栓试验研究恩度对HUVEC与血管新生相关的生物学行为的影响。结果 恩度在5～50 000ng／ml范围内可抑制血管内皮生长因子诱导HUVEC的迁移运动,且浓度为50ng／ml和500ng／ml时效果最明显;恩度在5～50 000ng／ml间可呈剂量依赖的方式抑制HUVEC向损伤部位的迁移。与0ng／ml相比,50、500和5000ng／ml 恩度处理的HUVEC的粘附率、增殖率及HUVEC形成网状小管结构的数量、面积和长度均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）; Matrigel栓实验结果显示,恩度在50～5000ng／ml间对SCID小鼠体内血管新生有明显的抑制作用。结论 恩度在细胞水平能抑制HUVEC与血管新生相关的生物学行为,包括HUVEC的趋化、迁移、粘附、增殖和小管形成;在动物水平能抑制SCID小鼠体内的血管新生,据此推断恩度能抑制血管新生。     

sCD40L联合长春瑞滨对肺腺癌A549细胞的作用

背景与目的 CD40信号对肿瘤细胞化疗敏感性的影响存在争议.本研究旨在观察可溶性CD40配体(sCD40L)联合长春瑞滨对肺腺癌A549细胞的作用.方法 以sCD40L处理AS49细胞,MTT法和流式细胞仪检测CD40激发前后长春瑞滨作用下A549细胞的生长、细胞周期及凋亡率等生物学行为的变化,同时用Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3活性的改变.结果 sCD40L对CD40分子的激发可增强长春瑞滨对表达CD40肺癌细胞株A549增殖的抑制率(P＜0.05),但并不显著影响细胞周期时相和细胞凋亡率(P＞0.05),Caspase-3活性反而显著下降(P＜0.05).结论 以sCD40L激发CD40信号可增强肺腺癌细胞A549对长春瑞滨的敏感性,可能通过非凋亡的、Cas-pase非依赖性的机制,且可能与抑制细胞周期进程无关.     

HIF-1α靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究

目的:探究HIF-1α对食管鳞状细胞癌转移及血管生成的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR检测细胞HIF-1α和SP1 mRNA表达;Western blot检测细胞HIF-1α和SP1蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;体外血管生成实验检测人脐静脉血管内皮细胞HUVEC血管形成能力;ChIP-PCR实验检测HIF-1α和SP1启动子的结合。结果:与人食管上皮细胞HEEC相比,在食管鳞状细胞癌细胞Ec109、KYSE30、KYSE150和KYSE410中HIF-1α和SP1 mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.05）,其中Ec109细胞变化最为明显。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与oe-NC组相比,oe-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。HIF-1α靶向结合SP1启动子区。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与sh-HIF-1α+oe-NC组相比,sh-HIF-1α+oe-SP1组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。结论:HIF-1α通过靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成。     

自噬在长春瑞滨诱导的肺癌细胞A549死亡中的作用

背景与目的已有的研究表明,很多药物可以诱导肿瘤细胞发生自噬。本研究旨在明确自噬在肺癌A549细胞长春瑞滨处理过程中的存在,研究自噬在长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中的作用。方法MTT法检测细胞生存率;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性及定量检测自噬特异性蛋白LC3的表达;AnnexinV-FITC流式细胞术检测细胞凋亡;自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和长春瑞滨共同作用细胞后用MTT法和流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果长春瑞滨处理肺腺癌细胞早期(24h内)可出现明显的自噬性变化,自噬高峰期出现在长春瑞滨诱导(6-12)h,在长春瑞滨给药前阻断自噬,长春瑞滨对A549细胞的毒性作用增强,而在其给药后阻断自噬则长春瑞滨对A549细胞的细胞毒性作用有所减弱。结论长春瑞滨可以诱导肺癌A549细胞自噬,在长春瑞滨给药前期,自噬对细胞有保护作用,可以延迟凋亡的发生;而在长春瑞滨给药后期,自噬则作为一种细胞的的死亡程序,与凋亡一起促进细胞死亡。     

重组多肽EnpepNGR-27aa对人HUVEC细胞的抑制作用研究

[目的]研究含新生血管靶向基序NGR的血管内皮抑素（Endostafin）多肽对人HU．VEC细胞的抑制作用。[方法]固相法合成Endostatin多肽Enpep。27aa和含NGR序列多肽EnpepNGR．27aa。MrI-r和BrdU法检测两种多肽对HUVEC细胞增殖的影响;Mr丌1法分析两种多肽对HUVEC细胞黏附能力的影响;Transwell法检测两种多肽对HUVEC细胞迁移的影响。[结果]当干预浓度大于10nmol／L时,两种多肽均对HUVEC细胞增殖有明显的抑制作用,且EnpepNGR．27aa组抑制率高于Enpep．27aa组（P〈0．05）;两种多肽均能明显降低HU—VEC细胞的黏附能力,且EnpepNGR．27aa的效果更明显（P〈0．05）;两种多肽均显著降低HUVEC细胞的迁移能力,但两组之间无显著差异（码O．13）。[结论]NGR基序的引入显著增强了Endostatin短肽对HUVEC细胞的增殖抑制能力,并降低了其黏附能力。     

人arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的抑制

目的:观察人arresten因子对人脐静脉内皮细胞HUVEC与LOVO细胞黏附的影响,探讨与之相关的黏附分子表达的变化。方法:半定量RT-PCR检测arresten对人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mrRNA的影响,Western-hlot检测VCAM-1蛋白表达的变化。孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的影响。结果:RT-PCR及Western-blot结果表明VCAM-1在HUVEC细胞中高表达,但经过arresten因子处理的HUVEC细胞,其VCAM-1在mRNA水平及蛋白水平的表达均显著下降(P< 0．05)。孟加拉玫瑰红活细胞染色法显示arresten能抑制HUVEC细胞与LOVO细胞的黏附。结论:arresten因子通过降低内皮细胞VCAM-1的表达抑制内皮细胞与肿瘤细胞的黏附,这可能是其抑制肿瘤转移的一种途径。     

RNA干扰技术下调CEACAMl基因表达对胶质瘤血管生成的影响

目的：利用RNA干扰技术下调胶质瘤细胞中癌胚抗原相关细胞黏附分子1（ CEACAM1）基因的表达情况,探讨胶质瘤细胞CEACAM1表达变化后其培养上清液诱导人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）增殖、血管生成的情况及其可能机制。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞,收集细胞培养上清液作为条件培养基。分别采用RT－PCR检测RNA干扰后细胞中CEACAM1及血管内皮生长因子（ VEGF） mRNA表达的变化情况,ELISA法检测上清液中VEGF蛋白的含量。 MTT比色法及Transwell侵袭实验检测共培养刺激后HUVEC增殖及迁移能力的变化,体外血管生成实验检测体外血管生成能力。结果与正常对照组和阴性对照组相比,转染CEACAM1－siRNA后胶质瘤细胞中CEACAM1 mRNA的表达水平下调（P＜0．01）,以CEACAM1－siRNA3组最为显著。 RNA干扰后SHG44细胞VEGF mRNA及上清液中的VEGF蛋白含量均减少,HUVEC的增殖受到抑制,迁移及体外血管生成能力下降。结论 CEACAM1－siRNA能够下调SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达,并通过减少VEGF分泌,从而影响HUVEC的增殖、迁移和体外血管生成能力。     

多西他赛联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌

目的：比较多西他赛及长春瑞滨联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和不良反应.方法：67例晚期非小细胞肺癌患者随机分为2组.多西他赛组：多西他赛37.5mg/m^2,d1,8,顺铂80 mg/m^2,分为3天,d1～3.长春瑞滨组：长春瑞滨25 mg/m^2,d1,8,顺铂用法同前.结果：多西他赛组有效率50%,1年生存率46.9%,2年生存率15.6%.长春瑞滨组有效率25.7%,1年生存率31.4%,2年生存率11.4%（P＜0.05）.主要毒副作用为骨髓抑制、恶心、呕吐.结论：一线治疗晚期非小细胞肺癌多西他赛较长春瑞滨联合顺铂疗效高,生存期长.     

AEG-1基因促进乳腺癌细胞株MCF-7转移

目的 观察AEG-1基因在细胞水平对乳腺癌细胞MCF-7转移的影响。方法 通过将siRNA转染进MCF-7细胞,沉默细胞中AEG-1表达量,以转染阴性siRNA作为对照组。分别采用Transwell小室检测细胞迁移侵袭能力、CCK8实验检测细胞增殖能力。同时通过检测细胞中VEGF的变化及HUVEC细胞体外管腔形成实验考察AEG-1对于血管新生的影响。结果 沉默AEG-1,MCF-7细胞的迁移能力、侵袭能力和增殖能力明显受到抑制。沉默AEG-1,MCF-7细胞的VEGF表达明显降低。上清处理HUVEC细胞,沉默AEG-1组的血管新生能力明显受到抑制。结论 沉默AEG-1基因能显著抑制MCF-7细胞转移的多个层面,包括细胞迁移、侵袭、增殖以及血管新生。表明AEG-1基因在乳腺癌转移过程中起着重要作用,也为将来乳腺癌治疗开拓了新思路。     

紫杉醇抗血管生成作用的实验研究

 目的　探讨紫杉醇的抗血管生成作用。方法　以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)原代培养模型 ,MTT法测定紫杉醇对HUVEC增殖的影响 ;采用鸡胚尿囊膜血管形成模型 (CAM模型 ) ,观察紫杉醇对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。结果　紫杉醇在非细胞毒浓度下可在体外抑制HUVEC的增殖 ,在体内抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。结论　紫杉醇在非细胞毒浓度下具有抗血管生成作用。