反义PKCζ对角质形成细胞增殖的调节

目的:探讨角质形成细胞中,反义蛋白激酶Cζ与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶ERK1/2信号转导网络以及与核因子NF-κB的相互作用关系。方法:通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法,研究反义PKCζ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果:表达反义PKCζ的角质形成细胞中,PI3K的基因表达显著下调,ERK1/2和NF-κB的核内表达水平以及ERK1/2的激酶活性明显降低。结论:表达反义PKCζ可通过下调PI3K和ERK1/2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

反义蛋白激酶Cξ下调角质形成细胞中增殖相关基因的表达

自从1997年发现蛋白激酶C（PKC）以来，研究证明PKC信号转导通路在细胞生长、分化等功能的调节中起关键的作用，我们以往的研究已证明细胞的增殖与增殖相关基因的表达密切相关。我们在以前研究的基础上，从细胞增殖相关基因的角度，进一步探讨了反义PKCξ抑制Colo16角质形成细胞增殖的机制，为弄清PKCξ在角质形成细胞增殖调控中的作用提供实验依据。     

反义蛋白激酶Cζ对角质形成细胞增殖的影响

目的 研究蛋白激酶C(PKC)ζ亚类在角质形成细胞增殖中的作用.方法 采用基因转染的方法将PKCζ基因导入角质形成细胞株Colo16中,初步研究了表达反义PKCζ对Colo16角质形成细胞增殖的影响.结果 表达反义PKCζ的角质形成细胞形态发生改变,生长速率明显减慢,被阻抑在G1期.结论 反义PKCζ抑制Colo16角质形成细胞的增殖.     

VEGF-VEGFR2信号通路在银屑病中作用的研究进展

 VEGF-VEGFR2信号通路在银屑病病程中发挥重要作用。血管内皮因子(VEGF)与VEGFR2结合可以在多个酪氨酸位点诱导受体二聚化和自身磷酸化，同时促进下游信号ERK1/2通路的激活。磷酸化的ERK1/2在银屑病皮损处角质形成细胞中高表达，而VEGFR2被VEGF激活后又可诱导ERK1/2磷酸化，促进角蛋白K6、K16和K17的表达，同时激活的ERK1/2又将促进炎症反应的发生以及血管增生。因此通过阻断VEGF介导的VEGF-VEGFR2信号转导通路，可影响VEGF-VEGFR2信号转导通路下游基因的表达。VEGF-VEGFR2信号通路上的关键分子VEGF和VEGFR2可以作为银屑病治疗的潜在靶点。VEGF抑制剂可以通过抑制VEGF或VEGFR2来阻断VEGF-VEGFR2信号通路，从而发挥对银屑病的治疗作用。本文对近年来VEGF-VEGFR2通路参与银屑病机制的研究进行综述。     

反义寡核苷酸阻遏角蛋白14的表达

目的 研究脂质体介导角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)阻遏人角质形成细胞K14基因和蛋白的表达及抑制体外增殖活性的效果.方法 人表皮角质形成细胞原代培养,3~10代用于实验,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞,应用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化(SABC)方法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响.结果 脂质体介导的K14反义寡核苷酸转染角质形成细胞后,能有效地抑制角质形成细胞中K14基因的表达;48h后可阻遏K14蛋白表达;流式细胞仪检测见反义寡核苷酸处理组细胞周期发生明显改变,G₁期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降.而正义寡核苷酸1组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此变化.结论 应用反义技术封闭K14基因,可以阻遏角蛋白K14基因和蛋白的表达,并可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖.     

反义蛋白激酶Cζ下调角质形成细胞中增殖相关基因的表达

自从1977年发现蛋白激酶C(PKC)以来,研究证明PKC信号转导通路在细胞生长、分化等功能的调节中起关键的作用[1],我们以往的研究已证明细胞的增殖与增殖相关基因的表达密切相关[2,3]。我们在以前研究的基础上,从细胞增殖相关基因的角度,进一步探讨了反义PK C灼抑制Colo16角质形成细胞增殖的机制,为弄清PK C灼在角质形成细胞增殖调控中的作用提供实验依据。一、材料和方法(一)材料:PTB654-PKC灼、PcD NA3、Colo16角质形成细胞株分别由日本神户大学Ono教授、北京大学医学部生化系侯维敏教授及日本北里大学H ikaru教授惠赠。Dulbecco…     

皮肤科学基础

20 0 4 196 7　反义寡核苷酸阻遏角蛋白 14的表达 /陈玉欣 (四军大西京医院皮肤科 )… / /中华皮肤科学杂志 .-2 0 0 4 ,37( 4) .- 2 2 4～ 2 2 6人表皮角质形成细胞原代培养 ,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配 K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞 ,应用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)和免疫组化 ( SABC)法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响。结果显示 ,应用反义技术封闭K14基因 ,可以阻遏角蛋白K14基因和蛋白的表达 ,并可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖。提示以 K14为靶…     

干扰NDRG1表达通过调控PI3K/Akt信号通路对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将siRNA-NDRG1干扰质粒转染至人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;采用CCK-8、流式细胞术分别检测A431细胞增殖活性和凋亡率;采用Western blot检测A431细胞中凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT表达水平。采用100μg/L的PI3K/AKT信号通路特异性激活剂IGF-1与si-NDRG1单独或联合处理A431细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡率以及PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果 NDRG1 siRNA干扰可显著抑制A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;干扰NDRG1基因表达可显著抑制A431细胞增殖活性,提高细胞凋亡率,并上调Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白水平;然而,IGF-1与si-NDRG1联合作用时,IGF-1可抑制NDRG1基因干扰后对A431细胞凋亡的促进作用以及对p-PI3K和p-AKT蛋白的下调作用。结论干扰NDRG1基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路活化诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡。     

角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响

目的：研究角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)对人角质形成细胞(KC)体外增殖活性的影响。方法：利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导人体外培养的角质形成细胞，应用细胞生长抑制实验、透射电镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)检测ASODN对角质形成细胞的增生、超微结构改变和细胞增殖周期的影响。结果：脂质体介导的K14反义寡核苷酸组KC增殖活性受到明显抑制；电镜下可见KC增殖活性受到抑制的改变，角蛋白合成明显减少；流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变，G1期细胞百分率上升，S期细胞百分率下降。而正义寡核苷酸组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此改变。结论：K14反义寡核苷酸可抑制KC体外增殖活性，应用反义寡核苷酸技术封闭K14基因，有望为银屑病的基因治疗提供新的思路。     

3种糖皮质激素对HaCaT细胞核因子-κB/抑制蛋白IκBα调节的比较

目的:比较3种不同糖皮质激素对角质形成细胞的核因子(NF)-kB/IkBα调节效应的差异.方法:将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松组、地塞米松组、倍他米松组,采用反转录(RT)-PCR和蛋白印迹试验检测各组HaCaT细胞的IkBα mRNA和蛋白质表达,用蛋白印迹试验检测NF-kB核蛋白的表达情况.结果:3种糖皮质激素均具有诱导HaCaT细胞IkBα的表达而抑制NF-kB核转位的作用,其中氢化可的松作用最弱,地塞米松与倍他米松无明显差异.结论:不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞NF-kB/IkBα的调节效力不同.提示临床上正确选用不同效力糖皮质激素外用制剂的必要性.     

人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞对蛋白激酶C激活的不同生物学效应

细胞信号传导调节通路主要包括蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸激酶等酶系统。它们广泛参与细胞的各种生物学过程如增殖、分化、基因的表达和功能蛋白的合成等^[1,2]。PKC是其中重要的调节通路。已发现人角质形成细胞和真皮成纤维细胞中均有PKC的多种亚型,但是对这两种细胞在PKC激活后生物学效应的比较研究甚少。我们通过体外实验,观察了PKC激活剂乙酸肉寇佛泊酯(PMA)刺激后角质形成细胞和真皮成纤维细胞在形态学、细胞增殖以及细胞因子产生等方面的变化,发现这两种细胞在PKC激活后生物学效应存在差异。     

FOXO转录因子参与银屑病表皮增殖失调

转录因子FOXO是叉头框基因家族的成员,其编码的FOXO蛋白家族在细胞代谢、增殖和凋亡等方面发挥重要作用。3-磷酸肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)和丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路以及microRNA等参与FOXOs翻译后修饰调节,调控FOXOs转录活性和亚细胞定位。FOXOs可能参与调控银屑病皮损角质形成细胞的过度增殖,但具体机制尚不明确。该文对FOXOs参与银屑病表皮过度增殖的可能机制进行综述。     

K17反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和K17表达的影响

目的研究脂质体介导角蛋白17(K17)反义寡核苷酸对培养人角质形成细胞增殖和K17表达的影响。方法利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K17寡核苷酸基因片段导入体外培养的人角质形成细胞系HaCaT,应用MTT法检测其对HaCaT细胞增殖的影响,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测K17mRNA水平的变化,并以蛋白质印迹法、免疫荧光细胞化学结合激光扫描共聚焦显微镜检测K17蛋白水平的改变。结果脂质体介导的K17反义寡核苷酸转染HaCaT细胞后,细胞增殖受到明显抑制,同时细胞中K17mRNA和蛋白的表达明显下降,而正义寡核苷酸组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无明显变化。结论应用反义技术封闭K17基因,可以阻遏角蛋白K17基因和蛋白的表达,抑制角质形成细胞的体外生长和增殖能力。     

葡萄籽原花青素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的：明确葡萄籽原花青素（GSP）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养A431细胞,用不同浓度的GSP（5、10、20、40、80 μg/mL）处理,采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞活力和增殖能力,Western blot检测细胞通路PI3K/Akt/GSK-3β信号转导通路蛋白的表达。结果：随着GSP浓度增加,A431细胞活力及细胞克隆逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加。GSP处理后A431细胞中p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β表达水平明显降低。结论：GSP可以诱导A431细胞凋亡和抑制A431细胞增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化有关。     

皮肤科学基础

20042639　角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响/陈玉欣(四军大西京医院全军皮肤性病中心)…//临床皮肤科杂志.-2004,33(5).-263～265采用脂质体将人工合成的正义、反义及错配寡核苷酸基因片段导入体外培养的角质形成细胞,应用细胞生长抑制实验、透射电镜和流式细胞仪分别检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖、超微结构和细胞增殖周期的影响。结果显示,脂质体介导的K14反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖活性有明显抑制作用;电镜下见角质形成细胞中角蛋白合成明显减少;流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变,G1期细胞百分率上…     

砷剂对角质形成细胞CDK2、CDK4和Cyclin-E蛋白表达的影响

目的：研究砷剂对角质形成细胞细胞周期调控因子蛋白表达的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，一定浓度砷剂处理细胞后，用免疫印迹方法研究HaCaT细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、周期蛋白依赖激酶4（CDK4）和细胞周期蛋白E（Cyclin—E）的表达情况及砷剂对其表达的影响。结果：未受到砷剂处理的对照组细胞稳定表达CDK2、CDK4和Cyclin—E，当1nmol／L三氧化二砷处理24h后，HaCaT细胞表达CDK4、Cyclin—E水平升高，但CDK2的表达水平无明显变化。结论：一定浓度砷剂可刺激角质形成细胞增殖，可能与其升高细胞周期调控因子CDK4、Cyclin—E蛋白表达，导致S期细胞比例升高有关。     

茶多酚EGCG及UVB对角质形成细胞水通道蛋白3表达及EGFR/ERK信号传导途径的影响

目的 探讨茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）及中波紫外线（UVB）对角质形成细胞水通道蛋白3（AQP3）的表达及信号传导途径的影响。 方法 20例健康人每日外涂不同浓度EGCG乳膏,2周后测定皮肤含水量及经皮水分丢失（TEWL）变化。对培养的人角质形成细胞分别予以10-7,10-6,10-5 mol/L的EGCG处理后予以UVB照射,或者用EGFR/ERK的磷酸化抑制剂处理后予以UVB照射,Western印迹检测AQP3蛋白表达变化以及EGFR/ERK信号传导途径变化。 结果 健康人皮肤予以不同浓度EGCG乳膏处理后,皮肤含水量显著增加,经皮水分丢失明显减少。UVB照射前予以10-7,10-6,10-5 mol/L EGCG处理,AQP3表达明显升高,分别为172.36 ± 12.42,320.66 ± 15.51,368.10 ± 11.39,与单纯UVB照射组（灰度值设为100.00）比较差异具有统计学意义（t值分别为12.16,26.75,38.62,P值均 < 0.05）。UVB照射前予以EGFR磷酸化抑制剂PD153035（1.0 μmol/L）和ERK磷酸化抑制剂U0126（10 μmol/L）处理后,AQP3表达也明显升高,分别为413.85 ± 25.27,268.85 ± 16.33,与单纯UVB照射组比较,差异具有统计学意义（t值分别为35.16,19.25,P值均 < 0.05）。UVB照射可以激活角质形成细胞EGFR/ERK信号传导途径,预先予以EGCG处理可以显著抑制EGFR/ERK的磷酸化。结论 EGCG可以增强皮肤屏障功能。UVB照射可以下调角质形成细胞AQP3表达,而EGCG处理可以上调AQP3表达,其机制可能与抑制UVB照射诱导的EGFR/ERK活化有关。     

STAT／SOCS在银屑病发病机制中的作用

银屑病的发病可能与异常活化的Th1细胞分泌IFN-γ等细胞因子有关，这些细胞因子主要通过Jak／sTAT信号传导通路实现胞内信息传递，诱导一系列炎症相关基因的过度表达，促使银屑病发生发展。STATl、STAT3、SOCS1、SOCS3在银屑病皮损角质形成细胞内的表达升高，STATl、STAT3的异常活化可以促进细胞过度的分化增殖并抑制细胞凋亡，而SOCSl、SOCS3能抑制Jak／sTAT信号传导通路的信息传递。银屑病角质形成细胞内STAT1、STAT3和SOCS1、SOCS3的表达水平可能是治疗银屑病的潜在药物作用靶点。     

窄谱中波紫外线对角质形成细胞角蛋白17表达的影响

【摘要】 目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对角质形成细胞角蛋白17（K17）表达的影响。 方法 不同剂量NB-UVB照射角质形成细胞后,培养6、12、24 h,分别用CCK8法检测细胞增殖情况,实时PCR、Western印迹检测K17 mRNA和蛋白表达以及Erk1/2、磷酸化Erk1/2的表达水平。 结果 低剂量（50、100 mJ/cm2）NB-UVB照射可刺激角质形成细胞增殖和K17表达,而较高剂量（200、400 mJ/cm2）NB-UVB照射则抑制细胞增殖和K17表达,其差异有统计学意义（P < 0.05或0.01）。通过对NB-UVB照射后相关信号通路进行筛查,发现100 mJ/cm2 NB-UVB照射可以上调角质形成细胞Erk1/2的磷酸化水平,而400 mJ/cm2 NB-UVB照射后Erk1/2的磷酸化水平明显下降,阻断这一信号通路可以抑制低剂量NB-UVB对K17的上调。 结论 NB-UVB对K17表达的影响受Erk1/2通路的调控。     

紫外线调节血管内皮生长因子分泌机制的研究

目的：探讨中波紫外线（UVB）增强血管内皮生长因子（VEGF）分泌的信号途径。方法：采用流式细胞仪检测表皮生长因子受体（EGFR）和磷酸化EGFR表达。ELISA检测上清液中VEGF水平。结果：UVB照射后15min可以检测到磷酸化EGFR表达．30min时达最高峰,1h开始下降,2～8h降至基础水平,而EGFR表达量不变。UVB（30mJ／cm^2）分别照射EGFR^＋/-、EGFR^＋/＋和EGFR^-/-小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）,结果显示EGFR^＋/＋MEF组VEGF分泌明显高于EGFR^＋/-MEF组和EGFR^-/-MEF组,UVB对EGFR^-/--MEF的VEGF分泌促进作用不明显。EGFR磷酸化酶抑制因子PD153035可明显抑制VEGF分泌,1μmol／L有抑制作用,5μmol／L抑制作用增强。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）高度选择性抑制剂LY294002及不可逆抑制剂wortmannin均可明显抑制VEGF分泌。结论：紫外线通过EGFR—PI3K-蛋白激酶（AKT）途径增强VEGF分泌。