Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

复方红花对地鼠的抗早孕作用与子宫内膜上皮细胞凝集素受体表达的相关性研究

目的 :本研究应用亲和细胞化学技术观察复方红花抗早孕的作用机理。方法 :以刀豆凝集素 (Con A)、花生凝集素 (PNA)、荆豆凝集素 (UEA)为分子探针 ,检测怀孕地鼠灌服复方红花后子宫内膜上皮细胞表面相应的凝集素受体表达的变化。结果 :(1 )受孕鼠灌服复方红花 d4,子宫内膜上皮细胞 Con A受体合成增加 ,呈强阳性反应 ;(2 ) PNA受体合成缓慢 ,至灌胃 d 6时合成出现高峰期 ;(3) UEA受体合成始终未出现高峰期 ,至灌胃 d 8时呈弱阳性反应。结论 :中药复方红花在抗早孕作用中影响子宫内膜上皮细胞凝集素受体的表达 ,阻止胚胎正常发育。停药后 ,动物可恢复动情周期及正常妊娠。表明本实验所用中药复方红花抗早孕作用是可逆的     

不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素α_v和Le~y寡糖的表达

目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素av和Ley寡糖的表达及对着床窗开放的影响。方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组。对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎。各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素av。结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化。②整合素av在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达。对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P <0.05)。结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素av的表达高峰无明显差异。③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异。在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律。结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素av的表达与子宫内膜着床窗的开放一致。②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素av的表达,延迟着床窗的开放;孕     

白血病抑制因子在小鼠早孕期子宫内膜表达规律及调节的研究

目的 :研究在小鼠胚泡着床中白血病抑制因子 (LIF)的生物学作用以及卵巢激素对LIF表达的调节。方法 :收集孕 1～ 8d小鼠子宫内膜 ,并以动情间期小鼠子宫内膜作为对照 ;将孕 2～ 4d小鼠随机分为 4组 ,分别灌服戊酸雌二醇 (10 0 0 μg/kg)、安宫黄体酮(10 0 0 μg/kg)、戊酸雌二醇 (10 0 0 μg/kg) +安宫黄体酮 (5 0 0 μg/kg)或植物油 ,孕 4d收集子宫内膜。采用流式细胞仪检测LIF在小鼠早期妊娠子宫内膜中的表达规律以及卵巢激素对LIF的调节作用。结果 :LIF呈时序性表达 ,孕第 1、2天表达量与未孕期相似 ,第 3天开始升高 ,第 4天达高峰 ,此后缓慢下降 ,第 7天降到未孕期水平 ;戊酸雌二醇对小鼠孕早期子宫内膜的LIF表达有上调作用。结论 :LIF可能是小鼠胚泡着床过程中的一个重要细胞因子 ,它在孕早期子宫内膜的表达受卵巢激素的调控     

白细胞抑制因子(LIF)对离体小鼠子宫内膜岩藻糖基转移酶(FuT7)表达的影响

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)对小鼠子宫内膜细胞岩藻糖基转移酶(FuT7)因子表达的影响。方法:分别用含LIF和抗LIF-抗体(LIF-Ab)培养液孵育子宫内膜细胞10h,通过PCR、免疫荧光和免疫印迹方法分析各组培养液中FuT7因子的表达。结果:PCR结果显示:与空白对照组比,LIF对离体子宫内膜细胞FuT7基因表达有上调作用(0.26±0.02vs0.18±0.01),而LIF-Ab可抑制子宫内膜细胞FuT7的表达(0.14±0.04vs0.18±0.01)。免疫荧光和免疫印迹结果同样显示经LIF孵育后,子宫内膜细胞FuT7蛋白量有所增加。结论:LIF在体外可调控子宫内膜细胞FuT7表达,并有可能借此来调控着床阶段特异表达的sLeX寡糖抗原量,继而影响整个着床调控网络。     

PCNA在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的作用。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)及免疫组化方法分别检测未孕(d0)及早孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜PCNA mRNA和蛋白的表达。结果:随着小鼠妊娠天数的增加,PCNAmRNA及蛋白表达量也逐渐增高,在孕d4、d5达到峰值,孕d6、d7逐渐下降。结论:在胚泡植入窗口期子宫内膜PCNA的高表达,可能参与了子宫内膜蜕膜化过程,在胚泡早期植入中发挥作用。     

PTEN基因在早孕小鼠子宫内膜的表达规律

目的:探讨PTEN基因在早孕小鼠子宫内膜,细胞凋亡中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕小鼠及孕d1、d3、d4、d5、d7子宫内膜PTEN基因和蛋白的表达。结果:妊娠子宫内膜组织PTEN的表达高于未妊娠的,且随妊娠天数的增加呈逐渐增加的趋势,到妊娠d5达到最高。免疫组化分析显示PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:在小鼠胚胎着床过程中PTEN诱导子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

整合素α~6和β_4亚单位在人类月经周期和早孕时子宫内膜中的表达

目前认为,整合素在子宫内膜中参与调节细胞与细胞之间及细胞与间质之间的相互反应。本研究通过单克隆抗体免疫组化法,了解整合素α~6和β~4亚单位在月经周期和早孕子宫内膜表面和腺上皮表达。32例妇女(平均年龄34.14±3.4岁)分成两组,A组13例,孕6周～孕9周自愿要求人工流产时取子宫内膜;B组19例非妊娠者因妇科疾患需行宫腔镜下活检、子宫内膜诊刮或子宫切除时取子宫内膜。B组子宫内膜分为三期,植入前期(7例):病理学检查表现为增生期至排卵后3天之间;植入期(6例):病理学枪查表现为排卵后4天至排卵后9天之间;植入后期(6例):病理学检查表现为排卵后10天至排卵后14天之间。所有子宫内膜切片行单克隆抗体免疫组化染色。     

白血病抑制因子对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的调节

目的:研究白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和MMPs组织抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:以不同浓度的LIF作用于体外培养的细胞滋养细胞,于2h、4h、12h收集细胞。用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达。结果:LIF对人早孕滋养细胞MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达无明显作用。LIF作用4h和12h,实验组MMP-9 mRNA明显上升(P<0.01),并呈明显剂量依赖关系。结论:LIF可以在一定的时间和剂量范围内促进滋养细胞MMP-9的表达。推测LIF可能通过节制性调节MMPs的表达,进而分解子宫内膜细胞外基质,介导滋养细胞的入侵。     

中药红藤方对大鼠的异位子宫内膜芳香化酶表达的影响

目的:探讨中药红藤方对异位子宫内膜的抑制作用。方法:用手术自体移植法成功建立的子宫内膜异位症大鼠模型,随机分成5组:红藤方高剂量组(80g生药/kg,A组)、低剂量组(20g生药/kg,B组)、达那唑组(60mg/kg,C组)、去势组(D组)和模型组(E组),连续给药21d后,检测各组的血清E2水平及异位内膜和卵巢的芳香化酶的变化;另测定异位内膜的体积。结果:A组、C组和D组的异位内膜生长均明显受到抑制,且3组间无统计学差异(P>0.05),与E组比有统计学差异(P<0.05);组织学观察可见,异位内膜呈退化趋势,A、C和D组间大鼠血清中的E2水平无统计学差异(P>0.05),与E组相比有统计学差异(P<0.05);A组、C组及D组异位内膜、卵巢组织的芳香化酶P450低表达,A组与E组间有统计学差异(P<0.05)。结论:红藤方可通过抑制异位内膜、卵巢的芳香化酶活性表达,降低局部雌激素含量,抑制异位内膜的生长,使异位内膜萎缩。     

Bcl-2和Bax在子宫腺肌病中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2和Bax在子宫腺肌病的表达及意义。方法:应用免疫组化技术检测子宫腺肌病组织43例(实验组)和正常子宫内膜45例(对照组)中Bcl-2和Bax的表达情况。结果:Bcl-2蛋白在实验组中异位内膜的阳性率要高于在位内膜及正常子宫内膜,Bcl-2在对照组中增生期要高于分泌期;在AM中,其原位子宫内膜和异位子宫内膜中Bax的表达要高于对照组正常子宫内膜组织,AM中增生期和分泌期内膜Bax表达无显著性差异。结论:Bcl-2和Bax的表达可能与子宫腺肌病的发生、发展具有密切的关系。     

IGF1R在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的:检测IGF1R在正常子宫内膜及卵巢子宫内膜异位囊肿(EMs)患者异位内膜中的表达,并探讨其与疾病发生的关系。方法:免疫组化SP染色及Western blot法检测IGF1R在50例正常子宫内膜及55例卵巢EMs异位内膜中的表达情况,并根据月经周期对样本进行分期分析。构建IGF1R的反义寡核苷酸,转染至正常内膜的原代细胞,运用Ed U技术研究IGF1R对细胞增殖的影响。结果:免疫组化检测显示,IGF1R表达于正常内膜及EMs组织的腺上皮细胞质及胞膜,异位内膜中表达量较高(P=0.014)。增生期正常内膜及异位内膜中IGF1R的表达差异无统计学意义;分泌期异位内膜中IGF1R的表达量高于分泌期正常子宫内膜(P=0.036)。分泌期子宫内膜中IGF1R表达显著高于增生期子宫内膜,差异有统计学意义(P0.001)。Western blot检测结果显示,异位内膜中IGF1R表达量较正常内膜高(P0.05);增生期正常内膜和异位内膜中IGF1R表达量差异无统计学意义;分泌期正常子宫内膜和异位内膜中IGF1R表达量分别为(0.26±0.13)和(0.65±0.16),差异有统计学意义(P=0.023)。正常内膜的原代细胞中沉默IGF1R表达后,细胞增殖能力明显下降(P=0.014)。结论:IGF1R在异位内膜中的表达量较正常内膜高,并且参与异位内膜的细胞增殖,提示IGF1R可能通过促进异位内膜细胞的增殖参与EMs的发生发展。     

Asoprisnil抗小鼠孕卵着床效果及对子宫内膜容受性的影响

目的:探讨Asoprisnil抗小鼠孕卵着床的效果及其对小鼠着床窗期子宫内膜容受性的影响。方法:将孕第1日小鼠随机分成4组,分别为Asoprisnil低(5μg/g)、中(10μg/g)、高(20μg/g)剂量组和对照组,每组22只,于孕第1~3日每日灌胃给药1次,对照组以体积分数1%羧甲基纤维素钠替代,第5日每组处死孕鼠5只取子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态学改变,免疫组织化学S-P法检测子宫内膜PCNA表达。第8日处死余下的孕鼠,计数着床点数。结果:①Asoprisnil高、中和低剂量组的妊娠率分别为11.76%、35.29%和76.47%,与对照组(94.12%)比较差异有统计意义(P<0.001)。②Asoprisnil高、中、低剂量组着床胚泡数第50百分位数(P50)分别为13(10.5~14)、10(0.5~11)和0(0~12),与对照组0(0~0)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。③对照组围着床期子宫内膜腺体弯曲折叠,为复层高柱状上皮细胞;基质细胞蜕膜变,细胞大且排列疏松,胞质丰富透亮;内膜中腺体和血管丰富。Asoprisnil组子宫内膜腺体为单层或者复层上皮细胞;内膜基质细胞蜕膜变不明显,基质细胞较小,排列致密;腺体和血管增生不明显。④围着床期小鼠子宫内膜腺体和基质中均有PCNA表达。内膜腺体中Asoprisnil高、中、低剂量组PCNA表达强度(AIOD)分别为0.15±0.01、0.16±0.03和0.14±0.02,与对照组(0.21±0.03)比较差异有统计学意义(P<0.001)。Asoprisnil高、中、低剂量组内膜基质细胞中PCNA表达强度(AIOD)分别为0.17±0.01、0.18±0.03和0.17±0.02,与对照组(0.15±0.02)比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Asoprisnil能显著抑制着床窗期子宫内膜腺体增殖,促进子宫内膜基质细胞增殖,但阻止基质细胞蜕膜化,降低子宫内膜容受性而发挥抗小鼠胚胎着床效应,显示出潜在的子宫内膜靶向避孕前景。     

应用小鼠月经模型对子宫内膜白细胞周期性变化的研究

目的:应用小鼠月经模型,通过免疫组织化学及计算机辅助图像分析系统(CAST2)研究巨噬细胞和T淋巴细胞随月经周期在子宫内膜的分布变化以及在子宫内膜所占体积分数(volume fraction)的变化。方法:用成年雌性去势C57BL/6小鼠34只,给予序贯性激素处理,在最末次激素处理后4~6h,实验组小鼠宫腔内注射0.2ml消毒花生油诱导子宫内膜蜕膜化反应,对照组小鼠给予同样序贯性激素处理但无宫腔油剂注射。分别取出各组子宫内膜组织,进行常规HE染色,以F4/80作为巨噬细胞的标记分子,CD4和CD8作为T淋巴细胞的标记分子进行免疫组织化学染色,用计算机辅助图像分析软件CAST2计算分析巨噬细胞、CD4和CD8T淋巴细胞和在子宫内膜组织中所占的体积分数。结果:HE染色子宫内膜组织切片显示激素撤退后实验组在宫腔内注射油剂后30~35h可观察到子宫内膜脱落,免疫组织化学组织切片显示在激素撤退早期实验组与对照组子宫内膜内的巨噬细胞均增加并且分布无明显差别(P=0.642),但在激素撤退晚期实验组子宫内膜内的巨噬细胞无明显减少(P=0.061),对照组与之相比则明显减少(P=0·032)。CD8T淋巴细胞的增多仅出现于激素撤退早期实验组子宫内膜。CD4T淋巴细胞在子宫内膜的数量很少且不随月经周期变化。结论:蜕膜化的子宫内膜在激素撤退后将导致内膜的脱落与白细胞的侵入,且数量与分布的变化与激素撤退的时间明显相关。     

Correlation between replicative senescence of endometrial gland epithelial cells in shedding and non-shedding endometria and endometriosis cyst during menstruation

Abstract

To investigate correlation between abnormal replicative senescence of endometrial gland epithelial cells (EGECs) in shedding and non-shedding endometria and endometriosis cyst during menstruation. Musashi-1 expression, β-catenin expression, and EGECs ultrastructure in shedding and non-shedding endometrium when menstruation were observed through real-time PCR and transmission electron microscopy technologies. (1) Musashi-1 and β-catenin exhibited a high expression in shedding and non-shedding endometria in experimental group, showing a positive correlation between each other; and were significantly higher than that in control group. However; there was no correlation between these two in control group. (2) Transmission electron microscopy results: In experimental group, organelles in EGECs in shedding endometrium obtained were abundant on the first day of menstruation, nuclei were irregular, double nucleoli could be observed, and chromatin was rich. Furthermore, morphology of EGECs in non-shedding endometrium was irregular, organelles were abundant, basement membrane was irregular with abnormal curvature, and a large amount of collagenic fibers were found in intercellular spaces. On the fifth day of menstruation, the cilia and microvilli on secretory cells in endometrium increased and prolongated, and organelles became extremely rich. EGECs have potentials of division, proliferation, invasion and migration; and is associated with formation of endometriosis cysts.     

Estrogen replacement therapy induces telomerase RNA expression in the macaque endometrium

OBJECTIVE: To evaluate the effects of hormonal therapies on the expression of telomerase RNA (TRNA) in the endometrium of ovariectomized female cynomolgus macaques (Macaca fascicularis). DESIGN: Randomized long-term experimental trial. SETTING: Animal study at an academic research institution. PATIENT(S): Surgically postmenopausal cynomolgus macaques. INTERVENTION(S): Treatments were given in the diet for three years and included conjugated equine estrogens (CEE), CEE + medroxyprogesterone acetate (MPA), and tamoxifen, at clinically relevant doses. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Expression of TRNA within the basal glands, basal stroma, superficial glands, and superficial stroma of the endometrium by radiolabeled in situ hybridization. RESULT(S): Conjugated equine estrogens increased glandular TRNA expression, and the addition of MPA decreased this effect. Tamoxifen induced glandular TRNA expression to a lesser degree. Both CEE + MPA and tamoxifen increased stromal TRNA expression. The expression of TRNA in the endometrial glands was always greater than TRNA expression in the stroma. Treatment groups with greater proliferation and progesterone receptor expression also had elevated TRNA; within-group correlations were not significant. No statistically significant difference occurred between the basal and superficial endometrial layers. CONCLUSION(S): These results show for the first time a cell-specific hormonal regulation of TRNA in the primate endometrium, with up-regulation of TRNA by treatments associated with increased risk of endometrial cancer in women.     

来曲唑对大鼠子宫内膜异位症病灶survivin表达的影响

目的:探讨来曲唑对大鼠子宫内膜异位症异位内膜survivin表达的影响。方法:用自体子宫内膜移植法建立大鼠子宫内膜异位症动物模型,随机将建模成功的大鼠分为生理盐水对照组、来曲唑治疗组,用免疫组化法检测各组异位内膜survivin的表达。结果:随着来曲唑治疗时间延长,异位内膜survivin表达显著降低,各组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:来曲唑治疗子宫内膜异位症可能与降低survivin的表达有关。