成骨蛋白-1在人牙髓组织中的表达研究

目的：探讨成骨蛋白-1在正常人牙髓组织中的免疫定位、分布规律。方法：采用免疫组织化学技术,检测正常人牙髓组织中成骨蛋白-1表达。结果：正常人牙髓组织中成牙本质细胞成骨蛋白-1呈强阳性染色,毛细血管内皮细胞呈阳性表达,邻近成牙本质细胞的少数牙髓细胞可见阳性染色。结论：成骨蛋白-1参与成牙本质细胞的合成和分泌,在诱导新生牙本质样细胞形成和分化过程中可能起重要作用。     

同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4成骨效应中的作用

目的:研究同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)成骨效应中的作用,并探讨Msx1与BMP-4的调控关系。方法:体外培养成纤维细胞C2C12,BMP-4处理C2C12细胞24h和36h后,用携带Msx1基因的腺病毒转染C2C12细胞,过度表达同源盒蛋白Msx1,4d后检测细胞中碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)的活性,单独用BMP-4处理组和BMP-4连同空白腺病毒组为对照组,未用BMP-4处理组为阴性对照组。结果:在BMP-4处理24h后,Msx1腺病毒转染的细胞ALP活性非常低,而BMP-4处理36h后,Msx1腺病毒转染的细胞显示强ALP活性,单独用BMP-4处理和BMP-4连同空白腺病毒处理的细胞同样显示强ALP活性。结论:同源盒蛋白Msx1能抑制BMP-4的成骨效应,且具有一定的时段特性。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

hOP-1成熟肽基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :构建hOP - 1成熟肽基因表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为研究OP - 1的功能作用以及制备OP - 1抗体奠定基础。方法 :构建hOP - 1/pEH4表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达OP- 1,SDS -PAGE对表达产物进行检测 ,凝胶薄层扫描判定蛋白表达量。结果 :pEH4/OP - 1重组表达载体转化DH5α,经温度诱导后 ,SDS -PAGE显示Mr约为 14× 10 3 的新蛋白条带。薄层扫描测定 ,表达蛋白占菌体总蛋白量的 33%。结论 :构建的hOP - 1/pEH4表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中获得OP - 1成功表达     

重组人骨形成蛋白-2复合1%透明质酸钠骨膜内诱导成骨的实验研究

目的　观察重组人骨形成蛋白 - 2 (rhBMP 2 )复合 1%透明质酸钠骨膜内诱导成骨的组织学过程 ,探讨其诱导成骨的机制。方法　将rhBMP - 2和 1%透明质酸钠复合后植入 9只新西兰大白兔胫骨骨膜下骨皮质的表面 ,对侧植入 1%透明质酸钠作为对照 ,分别于术后第 4、8、12周处死 3只动物取标本进行大体和组织学观察。结果　rhBMP - 2复合 1%透明质酸钠组骨膜内侧有明显的新骨形成 ,新骨呈渐进性的成熟过程 ,12周时和原有骨的组织结构一致。结论　rhBMP - 2和 1%透明质酸钠复合后可以用于骨缺损的修复。     

骨形态发生蛋白-7真核表达载体的构建及其在MC3T3-E1细胞中的表达

目的构建一个能在MC3T3-E1细胞中表达骨形态发生蛋白-7（bmp-7）基因表达载体。方法采用RTPCR技术从人胚肾中扩增人bmp-7基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1（+）真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞,转染后72 h提取细胞全蛋白,采用Western blot检测BMP-7蛋白表达。结果通过基因测序表明获得的bmp-7与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒为bmp-7/pcDNA3.1（+）质粒,Westernblot检测结果表明bmp-7基因转染MC3T3-E1后能在细胞中表达。结论成功构建能在MC3T3-E1细胞中表达BMP-7的真核表达载体。     

基因重组人骨形成蛋白-2和牛骨形成蛋白异位诱导成骨的比较

目的：观察基因重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2)和牛骨形成蛋白（bBMP)分别与珊瑚/聚乳酸形成复合人工骨的异位诱导成骨活性，同时比较两种骨形成蛋白的成骨效率，方法：把rhBMP-2和bBMP分别与珊瑚/聚乳酸形成复合人工骨，进行小鼠肌内种植1、3、6周后，组织学观察和组织形态测量，比较其异位诱导成骨活性。结果：rhBMP-2和bBMP存在骨诱导差异，rhBMP-2诱导成骨量相对较少但血管，骨髓含量丰富，bBMP则相反，结论：两种BMP都具有良好的诱骨活性，但在居骨量和血管，骨髓样组织的形成量上有明显不同。     

内毒素对重组人成骨蛋白-1诱导人牙髓细胞活性的影响

目的：研究具核梭杆菌的内毒素（ＬＰＳ）对重组人成骨蛋白－１（ｒｈＯＰ－１）诱导牙髓细胞增殖、分化的影响。方法：采用噻唑盐比色测定（ＭＴＴ）、酶动力学方法和放射免疫技术。结果：在较低浓度ＬＰＳ作用时,可协同增加ｒｈＯＰ－１对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性,但对骨钙素（ＢＧＰ）无明显影响,而高浓度ＬＰＳ则起抑制作用。结论：提示适度的ＬＰＳ在牙髓对龋病的防御反应过程中起着一定调节作用。     

基因重组人骨形成蛋白—2与珊瑚／聚乳酸复合异位诱导成骨的实验研究

目的：观察基因重组人骨形成-2(rhBMP-2)和珊瑚／聚乳酸形成复合人工骨的异位诱导成骨活性。方法：把rhBMP-2和珊瑚／聚乳酸形成复合人工骨。进行小鼠肌内种植1，3，6周后，组织学观察其异位诱导成骨活性。结果：rhBMP-2赋予珊瑚／聚乳酸骨诱导能力，珊瑚／聚乳酸则充当rhBMP-2的载体和释放系统，对BMP的活性未不利影响。与单纯的珊瑚／聚乳酸相比，这种复合人工骨以软骨内成骨的方式诱导成骨。结论：rhBMP-2／珊瑚／聚乳酸复合人工骨具有良好的生物相容性和骨诱导活性，是一种较理想的骨移植替代材料。     

原核表达重组人 OP-1促进拔牙创愈合的实验研究

目的：检测原核表达基因工程重组人OP-1(rhop—1)促进拔牙创愈合，减少牙槽嵴吸收的的效能方法：采用大白兔建立拔牙创的动物模型，以明胶海绵作为裁体，将大肠杆菌原核表达的重组人OP—1与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行干预治疗，通过观察其组织学改变、钙含量及碱性磷酸酶活性测定的变化，探讨原核表达的基因工程重组产品rhOP—1是否促进拔牙创的愈合修复。结果：大体观察结果显示：两组牙槽嵴高度的吸收差异有显著性；组织学HE切片显示：实验组的骨创愈合比对照组大约提前4～6周：碱性磷酸酶(AIP)活性及钙含量测定均显示实验组均明显高于对照组，差异有统计学意义：结论：原核表达基因工程重组人骨形态发生蛋白具有良好的促进骨创愈合、减少或防止牙槽骨吸收的作用     

Modulation of osteogenic potential by recombinant human bone morphogenic protein-2 in human periodontal ligament cells: effect of serum, culture medium, and osteoinductive medium

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Bone morphogenic proteins are known, in animal models, to promote many developmental processes, including osteogenesis. Clinical trials are currently underway to evaluate the potential of bone morphogenic proteins to promote bone and periodontal regeneration in humans. The aim of this study was to establish an optimal cell culture condition for using to study the biological effects of recombinant human bone morphogenic protein-2 on periodontal ligament cells. MATERIAL AND METHODS: The roles of serum concentration, types of culture medium (alpha-modified essential medium or Dulbecco's modified Eagle's medium), the presence of osteoinductive medium (including dexamethasone, ascorbic acid and beta-glycerophosphate), and timing of addition of the osteoinductive medium and recombinant human bone morphogenic protein-2, on the expression of alkaline phosphatase were investigated in cultured periodontal ligament cells. Cytochemical stainings and biological assay of alkaline phosphatase were also demonstrated. RESULTS: Our results suggested that an increased concentration of serum might mask the effect of recombinant human bone morphogenic protein-2 on the expression of alkaline phosphatase in periodontal ligament cells. alpha-Modified essential medium was found to induce a stronger cytochemical staining of the alkaline phosphatase than Dulbecco's modified Eagle's medium under similar culture conditions. Pre-incubation of cells with osteoinductive medium before the addition of various concentrations of recombinant human bone morphogenic protein-2 enhanced greater alkaline phosphatase expression than the simultaneous presence of both osteoinductive medium and recombinant human bone morphogenic protein-2. CONCLUSION: The findings of this study suggest that the effect of recombinant human bone morphogenic protein-2 on periodontal ligament cells could be efficiently investigated after the proper selection of culture variables and temporal sequence of adding bioactive factors. The optimal culture condition identified in this study might be useful in further studies to elucidate the regulatory mechanism of periodontal ligament cells in periodontal regeneration after stimulation with recombinant human bone morphogenic protein-2.     

小鼠重组PeriostinC端肽在大肠杆菌中的表达及其产的的活性检测

目的：利用大肠杆菌系统表达小鼠重组PeriostinC端肽。方法：将编码小鼠PeriostinC的基因自然克隆到大肠杆菌表达载体pRSET-B上,使其受控于T7启动子,构建成表达质粒pRS－B－Peri,以大肠杆菌E．coli BL219(DE3)为宿主菌。对工程菌用异丙基硫代－β－D－半乳糖苷（sopropylthio－β－D－galacto-side,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后进行复性处理,再通过观察成骨细胞的伸展性检测其生物活性。结果：经IPTG诱导5h,工程菌在SDS－PAGE上出现一条新蛋白带,相对分子质量（Mr）与预期的一致,约为36000,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化和复性处理,得到纯度高于95％的有良好活性的小鼠重组PeriosinC端肽。结论：小鼠重组PeriostinC端肽在大肠杆菌中得到表达并具有良好的生物学活性。     

小鼠牙本质涎磷蛋白在大肠杆菌的表达和纯化

目的：在大肠杆菌中表达牙本质涎磷蛋白,并对重组蛋白进行纯化,为进一步制备抗牙本质涎磷蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法：构建ＤＳＰＰ－ ｐＰｒｏＥＸＨＴｃ 表达载体,重组子以大肠杆菌ＢＬ２１ 为宿主细胞进行诱导表达,表达产物经镍－ 次氮基三乙酸（Ｎｉ－ ＮＴＡ）柱进行亲和层析纯化。结果：工程菌经２０ｈ 诱导后,在ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带,Ｍｒ１０７ ×１０３ 左右,经Ｎｉ－ ＮＴＡ 柱纯化后获得纯度为９５ ％ 的小鼠牙本质涎磷蛋白。结论：获得Ｍｒ １０７×１０３ 的牙本质涎磷蛋白。     

牙本质基质蛋白-1的研究进展

牙本质基质蛋白-1是牙发育过程中一种非常重要的非胶原性基质蛋白,对牙本质的形成和矿化起着重要的作用,但其具体的作用机制有待于进一步的研究.下面就牙本质基质蛋白-1的表达定位、基因结构、生物学功能以及表达调控因素作一综述.     

人骨形态发生蛋白-2基因克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人骨形态发生蛋白- 2（hBMP2）基因片段,构建pcDNA3.1- hBMP2真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT- PCR）技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形态发生蛋白- 2基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,构建pcDNA3.1- hBMP2重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。结果经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人BMP2- cDNA。结论本实验成功克隆了hBMP2基因并构建成其真核表达质粒。     

Syndecan-1 and Wingless-type protein-1 in human ameloblastomas

BACKGROUND: Aberrant Wingless type 1 glycoprotein (Wnt) pathway in ameloblastomas and a role of syndecan-1 (SDC1) in activating Wnt signalling were perspected. SDC1 shifting from epithelium to stroma was reported in invasive non-odontogenic neoplasms. The aim of this study was to reveal the role of SDC1 and Wnt1 in intraosseous ameloblastomas (IA(s)). METHODS: SDC1 and Wnt1 expressions were investigated in 29 ameloblastoma subtypes and seven tooth buds. RESULTS: SDC1 immunostaining strongly depicted stromal cells, extracellular matrix (ECM) and basement membranes of ameloblastomas. It also showed epithelial tumour cells in the acanthomatous and plexiform subtypes, and it often occurred in stellate reticulum cells and basal ameloblasts of tooth buds. Parallel Wnt1 expression occurred in ameloblastomatous epithelial cells, but it was common in basal cells of tooth buds too. Statistically, a significant correlation was found between the percentage of IA(s)-bearing SDC1-positive stromal cells and ECM and the percentage of IA(s)-bearing Wnt1-positive epithelial cells. CONCLUSIONS: A role of SDC1 in stromal cells and ECM can be hypothesized as a critical factor for carcinogenesis and local invasiveness of IA(s).