双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立

目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.     

HIV p24抗原的检测及意义

艾滋病 (ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ ,ＡＩＤＳ)在全球广泛流行 ,亚洲是继北美、非洲之后成为全球ＨＩＶ (ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ)感染上升最迅速、流行最严重的地区之一。我国ＡＩＤＳ也呈加速流行的趋势 ,截止到 2 0 0 0年 9月 ,共报告ＨＩＶ感染者 2 0 711例。据专家估算 ,我国实际感染人数超过 60万人。ＨＩＶ主要通过性、母婴和血液三种途径传播。为监控流行情况 ,评价新的疫苗和药物 ,建立简便、灵敏、特异的检测方法特别关键。理想的检测试剂应该是拥有一套…     

长期ART中HIV-1抗体的水平变化特点及其与HIV-1储存库相关关系的研究

目的 分析HIV-1感染者在长期抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前后血浆中p24抗体和总HIV-1特异性抗体水平变化特点及其与HIV-1储存库关系.方法 选取2009年11月-2013年7月于我中心接受ART满5年的27例HIV-1感染者作为研究对象,采用荧光素酶免疫吸附试验和酶...     

HIV-1 p24和gp41融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化

目的用基因重组技术将HIV-1p24基因以及gp41基因具有抗原线性中和表位的部分重组连接，构建重组质粒，并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白。方法设计带有酶切位点的引物，分别PCR扩增p24和gp41两个基因，将它们分别连接到pMD18-T载体中，测序验证后，挑选出含有目的基因的正确克隆。将p24片段酶切后连接到gp41基因所在的pMD18T载体中，再将连接后的两个基因酶切，重新连接到pET21a表达载体中。将表达载体转染大肠埃希菌诱导表达，经Western-blot验证表达正确。结果融合蛋白p24-gp41在大肠埃希菌中高效表达。结论融合蛋白p24-gp41可以在pET21a表达载体中高效表达。     

应用流式细胞术检测HIV-1感染者外周血p24、gp41和gp120抗原表达的研究

目的分析HIV-1感染者外周血CD4^＋T淋巴细胞p24、gp41和gp120抗原的表达状况,探讨流式细胞术用于检测HIV-1感染的可行性。方法应用三色流式细胞术,对192例HIV-1感染者和29例健康者外周血CD4^＋T淋巴细胞表达的HIV-1 p24、gp41和gp120抗原进行检测。结果HIV-1 p24、gp41和gp120抗原阳性率HIV-1感染组与健康对照比较差异有统计学意义（P均〈0.01）;CD4^＋T细胞数〈200 cells/μl的HIV-1感染人群与CD4＋T细胞数〉200 cells/μl的人群比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）;静注吸毒途径感染人群与性途径感染人群比较差异有统计学意义（P〈0.01）。在HIV-1感染人群中,p24、gp41和gp120抗原阳性率四分位数25%75%区间范围分别为1.67%5.95%、1.61%8.12%和0.56%2.35%。结论流式细胞术简便、快速、敏感,可用于HIV-1感染检测。     

抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB／c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体（mAb）,用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵（SAS）纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb：7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。     

ELISA法检测尿液中HIV-1抗体的研究分析

目的 探讨艾滋病病毒(HIV)感染者晨尿、非晨尿和血液中HIV-1抗体检测结果的一致性，引进尿液HIV-1抗体检测方法。方法 平行采集吸毒人员血液和尿液标本，分别用血液和尿液酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HIV抗体，阳性血清标本送云南省疾病预防控制中心确认。结果 检测483人，血检阳性91人，晨尿检测阳性96人，两种方法一致性98．96％。对应晨尿阳性者采集非晨尿和阴性对照尿液标本各91份(其中血液标本检测HIV抗体阳性者86份)，检出阳性86份，阴性5份，非晨尿标本与血液标本检测结果一致。以血液标本检测结果为准，晨尿标本检测HIV-1抗体的灵敏度100％，特异度98．72％；非晨尿标本检测HIV-1抗体的灵敏度和特异度均为100％。结论 尿液ELISA法检测HIV-1抗体结果可靠，非晨尿可代替晨尿作HIV-1抗体筛查。     

抗HIV p24多肽单克隆抗体和抗血清的制备及初步应用

检测p2 4抗原的诊断试剂在AIDS研究和防治方面具有重要意义。为研制国产HIVp2 4抗原诊断试剂 ,根据国内外文献 ,合成了HIVp2 4抗原的六个肽段 :G -A 12 ,D -R 16 ,P -S 18,A -G 2 3(HIV - 2ROD) ,P -S 18,N -I 15以及D -C 2 2。六个肽段中 ,N -I 15肽和D -C 2 2肽用于制备McAb ,其余 4个用于制备山羊抗血清。除D -R 16肽的滴度较低 (1∶2 0 0 0 )外 ,其余三个肽的抗血清滴度都在 1∶10 0 0 0以上。McAb中 ,N -I 15肽的反应比D -C 2 2肽要强 ,但两者的腹水滴度相同 ,均为 1∶10 0 0。单抗铺板检测病毒 p2 4抗原的非特异性反应比较强。用山羊抗血清铺板 ,1∶80 0 0的稀释度检测效果最好。用我们研制的抗体检测不出裂解HIV - 1ⅢB中 p2 4 ,却能够测出Abbott公司p2 4抗原诊断试剂盒的阳性对照 (HIVAG - 1)。用北海道大学免疫科学研究所研制的单抗和人阳性血清做的交叉对照实验表明 ,可能是由于合成肽免疫产生的抗体与裂解病毒p2 4的亲和力较差引起     

HIV／AIDS病人肝脏HIV-1 RNA和p24抗原的检测

目的了解艾滋病病毒I型（HIV-1）在肝组织的表达和分布情况,探讨HIV／艾滋病（AIDS）病人发生肝损害的可能机制。方法先后采用免疫组织化学方法和核酸原位杂交方法,检测HIV／AIDS病人肝组织病理切片中的HIV-p24抗原和HIV-1核酸。结果14例HIV／AIDS病人肝切片组织的Kupffer细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞和肝细胞,均检测到HIV—p24抗原。所有切片组织的Kupffer细胞、淋巴细胞有HIVRNA阳性表达,其中4例标本的肝细胞浆内有HIVRNA表达。结论HIV-1可能在肝脏实质细胞和间质细胞内复制表达,并引起肝脏损害。     

HIV-2 antibody testing of blood donors with doubtful immunoblot results for HIV-1

Summary Antibodies against human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) in samples from blood donors are commonly detected by various enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) and by confirmatory tests, e.g., Western blot or immunofluorescence tests. Immunoblot reactivity, which is directed only towards the HIV-1 core proteins p 18, p 24 and p 55, may represent false-positive reactions. Out of 125,000 blood donations, 140 were repeatably HIV-1 antibody reactive by ELISA; of these, 20 were doubtful positive sera with isolated p 18 and/or p24 bands in the HIV-1 confirmatory assay. Antibodies to HIV-2 are known to cross-react with these HIV-1 core proteins. We therefore assayed the 20 sera by immunofluorescence and immunoblotting for the presence of antibodies to HIV-2. None of these doubtful HIV-1 antibody positive blood donor sera was found to have antibodies to HIV-2.     

Testing for human immunodeficiency virus (HIV-1) antigens in haemophiliacs positive for HIV antibody

Summary Sera collected from 28 haemophiliacs during the 2 years from 1985 to 1987 were examined for the presence of human immunodeficiency virus (HIV-1) antigen by two different methods using commercially available test kits. Of 28 patients, 18 had been positive for HIV antibody since at least 1985 and their HIV infection by blood products went back 3–6 years. Of these 18 antibody-positive patients, 8 were positive for HIV antigen according to one or both antigen tests on one or more occasions. The longest period of antigen expression was 21 months in two patients, one being in perfect health, the other showing AIDS-related complex (ARC) for the last 9 months. The detection of antigen expression was highly variable between the two tests used. Both positive and negative antigen-test results must therefore be used with great caution in clinical practice.     

应用免疫学和病毒学指标辅助判断HIV-1新发感染的可行性分析

目的 分析免疫学和病毒学指标作为预测1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染标志的可行性.方法 对2017-2018年浙江省、北京市、云南省三个现场的HIV抗体初筛、确证阳性样本1 382份,进行新发感染、CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数和病毒载量检测,采用Logistic回归模型比较新发感染和既往感染两组样本之间...     

Evaluation of the HIV-1 Polymerase Gene Sequence Diversity for Prediction of Recent HIV-1 Infections Using Shannon Entropy Analysis

HIV-1 incidence is an important parameter for assessing the impact of HIV-1 interventions. The aim of this study was to evaluate HIV-1 polymerase (pol) gene sequence diversity for the prediction of recent HIV-1 infections. Complete pol Sanger sequences obtained from 45 participants confirmed to have recent or chronic HIV-1 infection were used. Shannon entropy was calculated for amino acid (aa) sequences for the entire pol and for sliding windows consisting of 50 aa each. Entropy scores for the complete HIV-1 pol were significantly higher in chronic compared to recent HIV-1 infections (p < 0.0001) and the same pattern was observed for some sliding windows (p-values ranging from 0.011 to <0.001), leading to the identification of some aa mutations that could discriminate between recent and chronic infection. Different aa mutation groups were assessed for predicting recent infection and their performance ranged from 64.3% to 100% but had a high false recency rate (FRR), which was decreased to 19.4% when another amino acid mutation (M456) was included in the analysis. The pol-based molecular method identified in this study would not be ideal for use on its own due to high FRR; however, this method could be considered for complementing existing serological assays to further reduce FRR.