大鼠BPDE-DNA加合物生成及其高效液相色谱测定

目的 研究苯并(a)芘(BaP)诱导大鼠产生(7R,8S)-二羟基-(9S,10R)-环氧-7,8,9,10-四氢苯并(a)芘(BPDE)-DNA加合物的生成.建立以血液为样品的检测染毒大鼠BPDE-DNA加合物的高效液相色谱法.方法 选用清洁级SD大鼠,一次性腹腔注射苯并(a)芘二甲基亚砜溶液(以1%羧甲基纤维素钠为助溶剂)100 mg/kg,5 h后取股静脉血.提取抗凝全血中的DNA,采用琼脂糖凝胶电泳确认DNA的提取效果.将提取的DNA在 0.1 nmol/L HCl、90 ℃恒温水浴箱中酸水解4 h,乙酸乙酯提取酸水解产物--四醇-苯并(a)芘.高效液相色谱法检测,最后用高效液相色谱-质谱法确认.结果 BaP 染毒组与溶剂对照组和阴性对照组比较,高效液相色谱检测有新的色谱峰产生,质谱确定其相对分子质量与四醇-苯并(a)芘一致.结论 本实验的染毒方法能使大鼠产生 BPDE-DNA 加合物;建立的高效液相色谱法可以血液为样品检测 BPDE-DNA 加合物.     

高效液相色谱法测定外周血BPDE-DNA加合物的含量

【目的】建立高效液相色谱（high performance liquid chromatographv,HPLC）紫外检测法测定反式二羟基环氧苯并（a）芘[（＋）-anti-benzoa）pyrene diol-epexide,BPDE]在人体内形成的BPDE—DNA加合物的含量,对其质量进行控制。【方法】采用Kromasil—C18柱（150mm×4．6mm,5μm）为分析柱,以甲醇-水-磷酸（80：20：0．1,v／v）为流动相,流速1．0ml／min紫外检测器检测,检测波长254nm。【结果】在4．016-803．2ng／ml的浓度范围内,BPDE峰面积与浓度呈良好的线性,相关系数r=0．9997;平均回收率均在85％～115％之间,RSD为1．32％-1．72％。【结论】本法准确、方便,可用于测定空气中苯并（a）芘在体内代谢产物BPDE～DNA加合物的含量。     

高效液相色谱检测DNA加合物的方法研究

目的 建立高效液相色谱检测DNA加合物的方法.方法 确定样品处理方法,对多个因素进行分析,建立HPLC检测BPDE-DNA加合物的方法,最后用质谱对DNA加合物的结构进行验证.结果 色谱柱为Phenomenex,C18(ODS)柱,5μm,250×4.6mm;柱温为室温;流动相A为甲醇,B为乙酸-乙酸铵缓冲液(pH4.5±0.2);梯度洗脱流速1.0ml/min;荧光检测器检测λex=338nm,λem=425nm.结论 所建立的HPLC检测DNA加合物的方法具有简单快速、操作简便、成本低廉等特点.     

凝胶色谱净化-高效液相色谱法测定油炸面制品中苯并（a）芘

目的建立油炸面制品中苯并（a）芘的测定方法。方法样品经石油醚（沸程30℃～60℃）浸提油脂,乙酸乙酯＋环己烷（1：1）溶解,凝胶色谱（GPC）净化,溶剂转换浓缩后采用高效液相色谱法C18柱分离,以乙腈：水（95：5）作为流动相,流速1．0ml／min,检测器激发波长290nm、发射波长430nm进行检测,外标法定量。结果苯并（a）芘标准曲线在0．10—10．0μg／L范围内呈线性关系,r=0．999,回收率为90．0％-93．7％,相对标准偏差（RSD）均小于4％,方法检出限0．1μg／kg。结论该测定方法具有前处理简单、快速、准确、灵敏度高等优点,可适用于油炸面制品样品苯并（a）芘的测定。     

高效液相色谱测定脑脊液单胺递质及其代谢产物

介绍同时测定脑脊液中单胺类遂质及代谢产物5-HT,5-HTP,Trp,MHPG,HVA和5-HIAA的高效液相色谱法。50μ脑脊液样品,不需预处理,20分钟可完成6种物质的分析。本文还讨论了室温、流动相pH值、检测器检测条件等因素对分离及检测的影响。     

高效液相色谱-紫外可见检测器检测大鼠肝组织中的还原型谷胱甘肽

目的 建立一种高效液相色谱-紫外可见检测器测定大鼠肝组织中还原型谷胱甘肽含量的方法.方法 肝组织在冰浴条件下匀浆后经乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液在硼酸缓冲液中与荧光剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)进行衍生化反应.流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(23∶77,V/V),流速1.0 mL/min,检测波长470 nm,进样量10 μL;采用外标法定量.结果 还原型谷胱甘肽在0.200～125μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9999(n=5),最低检测限为0.040 0μg/mL(S/N=3);样品加标回收率为96.2%～104.5%;日内相对标准偏差为1.1%～4.6%,日间标准偏差为1.9%～7.5%.结论 本方法操作简便,快速,准确,灵敏度高,稳定性好,适合肝组织中还原型谷胱甘肽的测定.     

液相色谱-串联质谱联用法测定大鼠血浆中葫芦茶苷及其代谢物

目的:研究大鼠分别灌胃和静脉给药葫芦茶苷溶液后,血浆中的葫芦茶苷及其代谢产物.方法:雌性Sprague Dawley大鼠分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予葫芦茶苷溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆.取5、15、30min和1、2h血浆样品各40μL,合并,混匀,加入600 μL甲醇,漩涡振摇5 min,13 000 r/min离心10min,取上清液,在N2下吹干,残渣用50 μL甲醇复溶,再次振摇和离心,取上清液40 μL,利用液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)进行分析.根据葫芦茶苷在血浆样品中的LC-MS/MS出峰情况,比较空白血浆样品与不同途径给药后相应的生物样品,结果:大鼠血浆中可以检测到葫芦茶苷原形物质,也可检测到脱糖代谢物对羟基桂皮酸.通过中性丢失扫描,确定对羟基桂皮酸再发生结合代谢形成硫酸酯化代谢物.同时,对羟基桂皮酸发生脱氢反应,形成对羟基苯丙酸.结论:给药后大鼠血浆中形成葫芦茶苷多种代谢物,对羟基桂皮酸可能是发挥药效活性的代谢产物.     

高效液相色谱法测定山核桃外蒲壳中4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量

目的 采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定山核桃外蒲壳中4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量.方法 采用HPLC,色谱柱为Shim-pack C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水(40∶60)为流动相,流速为0.8 ml/min,检测波长为333 nm,柱温为25 ℃.结果 4,8-二羟基-1-四氢萘酮在1.13～20.34 μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率为101.8%,相对标准偏差为1.21%(n=6).结论 所建立的HPLC准确可靠、结果稳定、重现性好,可用于山核桃外蒲壳4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量测定.     

光叶淫羊藿的化学成分研究

目的 研究光叶淫羊藿全草的化学成分,为阐明其有效成分提供依据。方法 利用硅胶柱色谱进行分离,根据化合物的光谱数据鉴定其结构。结果 从光叶淫羊藿根、茎中分离得到了8个化合物,其中1个木脂素类成分,1个甾体类成分,6个黄酮类成分,分别为( 7S,8R,8′R)-3,3′-二甲氧基-4,4′,8′-三羟基-9-乙酰氧基-7,9-环氧木脂素(Ⅰ)、胡萝卜苷(Ⅱ)、淫羊藿次苷C(Ⅲ)、2″-鼠李糖大花淫羊藿苷A(Ⅳ)、淫羊藿苷(Ⅴ)、淫羊藿次苷A(Ⅵ)、朝藿定C(Ⅶ)和柔藿苷(Ⅷ);从光叶淫羊藿叶中分离得到了4个化合物,其中2个黄酮类成分,2个苯乙醇苷类成分,分别鉴定为thalictoside(Ⅸ)、sutchuenoside A(Ⅹ)、icariside D2(Ⅺ)和山柰苷(ⅩⅡ)。结论 所有12个化合物均为首次从该植物中分离得到。     

反相高效液相色谱法测定新西兰兔血浆中壬苯醇醚-9的浓度及其药代动力学研究

目的:建立兔血浆中壬苯醇醚-9（NP-9）的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法,研究NP-9栓剂在健康雌性新西兰兔体内的药代动力学。方法:6只健康雌性新西兰兔(体质量2.0~2.2 kg)单剂量(64 mg/只)阴道给药NP-9栓剂;取血浆经预处理后采用DiamonsilTM ODS柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水(955)作为流动相,流速 1.0 ml/min,荧光检测的激发波长226 nm,发射波长300 nm,柱温30℃,测定NP-9经时血药浓度,计算药代动力学参数。结果:NP-9在0.05～5.00 μg/ml范围内线性关系良好,日内、日间精密度均小于10％,低、中、高3种浓度(0.10、0.50、2.00 μg/ml)的方法回收率分别为(101.67±8.12)%、(100.84±5.42)%、(100.29±3.81)%。主要药代动力学参数为：t1/2 (3.75±0.87) h,tmax (3.2±0.4) h,Cmax (2.75±0.32) μg/ml,AUC0~12 (12.72±2.14) μg·h·ml-1,AUC0~∞ (15.05±2.84) μg·h·ml-1,平均滞留时间(6.85±1.13) h。结论:本方法简便、灵敏、专属性好,可用于NP-9栓剂在健康雌性新西兰兔体内的药代动力学研究。     

N-(4-氯苄基)-2,3-亚甲二氧基-9-乙酰氧基-10-甲氧基-7,8,13,13a-四氢-8H-二苯骈[a,g]喹嗪氯化物的结构研究

N- (4-氯苄基 ) - 2 ,3 -亚甲二氧基 - 9-乙酰氧基 -1 0 -甲氧基 - 7,8,1 3 ,1 3 a-四氢 - 8H-二苯骈 [a,g]喹嗪氯化物 (ZH )是以小檗碱为先导物进行热解、酯化、还原、季铵化所得的原小檗碱类衍生物 ,初步药理试验表明此类化合物对乌头碱诱发的心律失常有一定的预防作用。本文通过 IR、MS、HRMS,特别是NMR谱 (包括1HNMR、13 CNMR、 COSY及HETCOR谱 ) ,对其结构进行了研究 ,结合四氢小檗碱核磁共振谱[1-3 ] ,确证了 ZH 的结构 ,并对其核磁共振信号进行了归属。1　仪　器1HNMR、13 CNMR、 COSY、 HETCOR谱用Bruker AM…