RT—PCR法与病毒分离结合快速检测腮腺炎病毒核酸

目的结合病毒分离技术，运用RT—PCR法对腮腺炎病毒的核酸进行检测，为快速确诊提供参考。方法采用中国疾病预防控制中心提供的RT-PCR法，结合病原学检测技术对2010—2013年已检测出的腮腺炎病毒进行复检。结果对近4年分离到的18份腮腺炎病毒分离液进行检测，病毒核酸结果均为阳性；应用病毒分离技术检测，有15份为阳性，经中国疾病预防控制中心鉴定为F基因型。结论该方法比病毒分离方法敏感性高，所需时间短，仅需要5～6个小时即可得出结果，为可靠的实验室诊断方法。     

PCR技术快速探测一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒暴发

目的：探讨PCR技术快速检测引起食物中毒的副溶血性弧菌。方法：以分离培养及PCR技术并用，对采集到的3份剩余食物和10份患者粪便样本进行检测。结果：1份剩余食物茶鸡蛋和5份患者粪便样本PCR技术均扩增出了425bp阳性条带，分离培养结果与PCR吻合。结论：采用PCR技术检测引起食物中毒的副溶血性弧菌方法简便、快速。可谓提供了一种有用的诊断工具。     

PCR快速检测沙门菌试剂盒的研制与应用

目的 在优化聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌程序的基础上,研制沙门菌PCR检测试剂盒。方法 通过样品检测，确定试剂盒的组成及各种组分对保存期的影响，对PCR和ELISA2种快速检测试剂盒进行比较。结果 该试剂盒能检测出20Pg的沙门菌DNA；在含有Taq酶、未冻干、-20℃的条件下，试剂盒保存期为12个月；以国标法做参照，ELISA试剂盒的敏感性和特异性分别为100％，97.2％．PCR试剂盒的敏感性和特异性均为100％；ELISA和PCR试剂盒的符合率为97．2％；PCR试剂盒检测临床粪便样品150份，检测结果与国标法相符。结论 沙门菌PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速等优点，适用于沙门菌快速检测。     

致病微生物PCR检测方法研究进展

致病微生物常规检测方法（如分离培养、生化鉴定等）操作复杂、特异性不强、所需时间长。自从1985年PCR技术问世以来，这一技术已被应用到生命科学的各个领域。八十年代末，研究人员将其应用于微生物的检测，因其特异位强、敏感性高、操作简便、所需时间短等优点，目前已被广泛用于各种致病微生物的快速检测。然而，常规PCR技术也存在一些新问题，如出现非特异性扩增产物、形成引物二聚体等；由于不同微生物的核酸之间可能存在同源序列，使PCR检测的特异性下降，还需进行PCR产物杂交检测，或进行套式PCR等，使操作复杂化，传统的PCR…     

食品中单增李斯特菌PCR检测方法建立与评价

目的建立单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）快速、敏感、特异的PCR诊断方法。方法采用聚合酶链式反应技术（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特菌溶血素基因（hlyA），并评价该方法的特异性与敏感性。结果在706bp处出现nuc基因的目的片断，只有单增李斯特菌的目的片段获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性；该方法可以检测到3．3ng／L的DNA。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便。为食品中单增李斯特菌的快速检测提供了新的手段。     

LAMP法和PCR法快速检测阪崎肠杆菌的比较

[目的]建立阪崎肠杆菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测技术,并与PCR检测方法进行比较,为阪岐肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。[方法]根据阪崎肠杆菌外膜蛋白OmpA基因,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术体系,并对2种方法检测的灵敏度、特异性和实际样品的检测结果进行比较。[结果]建立了优化的LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限为101cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对36株近源菌进行特异性检测,结果显示,LAMP仅8株阪崎肠杆菌得到阳性结果,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP特异性比PCR高。应用于46份奶粉样品的检测,LAMP和PCR均有清晰、特异的预期条带和结果产生,并与常规检测结果一致。[结论]LAMP检测技术作为一种快速检测阪崎肠杆菌的方法具有简便、灵敏快速,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速检测阪岐肠杆菌的有效手段。     

诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR的检测研究

目的建立特异、灵敏的诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR快速检测方法。方法根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅱ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan～MGB探针，调整引物、探针浓度，优化最佳反应条件，建立一步法实时荧光PCR快速检测反应体系，进行灵敏度、特异性、稳定性试验，以评价反应体系，并与引物P289／P290常规RT—PCR进行灵敏度比较。结果诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR检测时限短，仅1h就出结果；最低检出下限为100拷贝/mL，比引物P289／P290常规RT—PCR灵敏度高100倍；与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒无交叉反应；4份核酸含量不同的标本重复检测5次，平均G值变异系数范围0．96％-2．27％。结论诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏、稳定性好。可应用于突发公共卫生应急检测，提高快速检测能力。     

Taq Man-MGB探针Real-timePCR快速检测单增李斯特菌的研究

目的：建立TaqMan—MGB探针Real—time荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术。方法：在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上，设计一对特异性TaqMan—MGB探针法引物及探针，通过Real—timePCR反应条件和反应体系的优化，实现对单增李斯特菌的快速检测；用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性。结果：方法的灵敏性高，其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系，最低可检测57个拷贝数，经18h增菌，可检测低至4．5cfu／ml的细菌；特异性强，检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值（cT值）均小于25，而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值（CT值）大于35；快速，最快1h可出结果，实际样品20h可出结果，而常规细菌培养法需要一周以上；对103份速冻米面食品进行检测，13份阳性，与常规方法无显著性差异（P〉0．05）。结论：TaqMan—MGB探针的单增李斯特菌Real—time荧光PCR检测方法具有特异性强，敏感性高，易操作等优点，可推广应用。     

聚合酶链反应在流行性脑脊髓膜炎检测中的应用

目的应用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides)进行检测。方法应用脑膜炎奈瑟菌的的特异性DNA引物片断,对传统经典方法确诊的流脑病例阳性标本进行检测。结果 13例阳性流脑标本采用PCR方法检测与传统经典方法检测的结果一致;并且操作简便、快速、准确率高。结论为流脑的早期、快速诊断提供了一种技术手段。     

环介导等温扩增（LAMP）技术检测沙门菌属方法的建立

建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白（invA）基因序列的六个区域设计四条LAMP引物，65℃保温约60min，完成对沙门菌属的扩增，扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌（对照组）来验证LAMP方法的特异性；将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带，9株非沙门菌没有出现LAMP扩增，LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实；LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同，但其敏感性比普通PCR高10倍，LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu／ml，PCR检测下限为100cfu／ml。LAMP检测速度相比PCR更快速，在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。