α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:研究α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以浓度2 000 U/ml的α干扰素与不同浓度的阿糖胞苷作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化，检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率的变化，并对细胞端粒酶活性及P53蛋白的表达水平进行检测。结果:α干扰素与阿糖胞苷联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并降低K562细胞端粒酶活性，升高P53蛋白的表达水平，其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论:α干扰素与阿糖胞苷联合应用对白血病K562细胞具有明显的生长抑制及诱导凋亡作用，降低细胞端粒酶活性及升高P53蛋白的表达水平是其重要作用机制之一。     

γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响

[目的] 研究γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响。[方法] 以浓度1000U／ml的γ-干扰素与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。[结果] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并降低K562细胞端粒酶活性，其作用呈现出明显的量-效与时-效关系。[结论] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用对白血病K562细胞具有明显的增殖抑制作用，降低细胞端粒酶活性足诱导细胞发生凋亡。可能是其重要作用机制之一。     

六亚甲基二乙酰胺对K562细胞作用的实验研究

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）体外对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化的作用。方法：MTT法检测不同浓度HMBA对于K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪（FCM）检测HMBA对于K562细胞周期分布的影响;Annexin V／PI染色方法检测HM—BA诱导K562细胞凋亡的作用;通过瑞氏染色、联苯胺染色和FCM检测分化抗原研究K562细胞分化情况。结果：HMBA可以抑制K562细胞增殖,1、2、3和4mmol／L对K562细胞增殖抑制率分别为21．97％、36．05％、41．56％和47．59％;HMBA可以阻滞K562细胞周期,主要表现为G0／G1期的阻滞;HMBA诱导K562细胞凋亡的作用不明显,4mmol／L的HMBA对K562细胞诱导凋亡率〈5％;HMBA处理后,瑞氏染色显示K562细胞有一定程度的成熟表现,联苯胺染色基本为阴性;K562细胞膜表面CD11b、CD14、CD68和胞质内溶茵酶抗原的表达在HMBA处理前后均为阴性。结论：HM—BA可以抑制K562细胞的增殖,提示具有一定的治疗作用;HMBA对K562的作用机制和阻滞细胞周期有关,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA有促进K562细胞分化的迹象,但分化方向和机制有待进一步研究。     

TNFα诱导K562/VCR和K562细胞凋亡及逆转其耐药作用的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)体外诱导K562/VCR及K562细胞凋亡,及其逆转K562/VCR细胞多药耐药(MDR)的作用机制.方法以光镜、电镜、流式细胞仪观察细胞凋亡;流式细胞仪检测P-gp和bcl-2表达.MTT检测药物敏感性.结果 (1)TNFα浓度>100 U/ml,作用时间>48小时,2株细胞均可见典型凋亡现象,以K562/VCR细胞明显.(2)以TNFα 1 000 U/ml处理后,K562/VCR和K562细胞凋亡率分别为29.4%和10.7%.(3)K562/VCR经TNFα 1 000 U/ml处理72小时P-gp表达率从93.6%降至82.4%,bcl-2表达率从32.9%降至7.0%.(4)K562/VCR和K562细胞分别经TNFα 100 U/ml和1 000 U/ml处理后,VCR、Ara-C和VP-16的药物敏感性增加(P<0.05).结论 (1)TNFα可诱导K562/VCR和K562细胞凋亡,以前者更加敏感,且存在时间和剂量依赖性.(2)高浓度TNFα可下调bcl-2表达,但不显著改变P-gp表达.(3)TNFα能增加K562/VCR和K562细胞对VCR、Ara-C和VP-16的药物敏感性,以K562/VCR细胞更明显.(4)TNFα逆转K562/VCR多药耐药是通过诱导细胞凋亡,降低bcl-2表达,而非下调P-gp表达途径实现.     

青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

三氧化二砷联合甲磺酸伊马替尼、咖啡因对K562白血病细胞的协同作用

 目的 探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）与酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼（实验药物代号STI571）以及细胞周期调节剂咖啡因联合诱导K562细胞凋亡的作用及机制,为寻找克服K562细胞对As2O3抵抗的有效手段提供实验依据。方法 以As2O3与STI571、咖啡因联合作用于K562细胞,采用MTT方法检测细胞增生活性,PI染色流式细胞仪检测细胞周期,PI和Annexin V双染色流式检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期相关调节蛋白的表达。结果 5.0 μmol／L浓度的咖啡因对K562细胞增生无抑制作用,亦不能增强As2O3的抑制作用,单独以STI571 1.0 μmol／L处理,即可有效抑制K562细胞的生长,与As2O3联用能明显增加其抑制增生的效应;咖啡因与As2O3联合作用,不增加As2O3诱导的K562细胞凋亡率[（14.7±3.6）%vs（15.3±3.3）%,P＞0.05]; STI571具有轻度诱导K562细胞凋亡的作用[（18.3±4.5）%],与As2O3合用可显著增加诱导凋亡率[（14.7±3.6）%vs（42.8±4.2）%,P＜0.01],并明显降低As2O3诱导的G2／M期细胞比例。与单用As2O3比较,As2O3 + STI571明显抑制cdc2、cdc2-p及survivin蛋白表达,而As2O3与咖啡因合用不能诱导survivin蛋白表达下调,对cdc2、cdc2-p蛋白的表达无明显影响。结论 周期调节药物咖啡因对As2O3诱导K562细胞凋亡无增敏作用;酪氨酸激酶抑制剂STI571能协同As2O3诱导K562细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白survivin的表达可能是其机制之一,值得深入研究其临床应用效果。     

槲皮素诱导K562细胞凋亡机制探讨

目的:研究槲皮素(quercetin)作用于白血病K562细胞后,诱导K562细胞发生凋亡,并探讨此过程中Caspase-3酶活性的变化.方法:体外培养K562细胞,应用MTT比色试验测定IC50,观察槲皮素的细胞毒性作用;应用Hoechst33342/PI双荧光染色观察细胞核形态变化;应用CaspACETM分析试剂检测槲皮素诱导K562细胞凋亡时Caspase-3酶活性变化.结果:quercetin浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度quercetin处理K562细胞48h后,应用MTT比色试验计算IC50为4×10-5mol/L;Hoechst3334/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡的形态学改变;Caspase-3酶活性明显升高(P＜0.05),且升高程度与给药剂量呈正相关.结论:quercetin通过诱导白血病细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用,Caspase-3途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一.     

2-甲氧基雌二醇对白血病细胞K562增生、凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对体外培养的慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞系bcr-abl（+）K562细胞增生、凋亡及细胞周期的影响。方法 将不同浓度和作用时间的2-ME与K562细胞共同培养，采用相差显微镜观察细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2-ME对K562细胞增生的抑制作用；流式细胞术分析2-ME对K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 1~ 16μmol／L浓度的2-ME在24、36、48及60 h均可明显抑制K562细胞增生，并在一定范围内呈时间和剂量依赖性；2-ME作用后G0／G1期细胞增加，并伴随细胞凋亡峰和凋亡率的升高。结论 2-ME可抑制K562细胞增生，诱导其凋亡，为2-ME的临床应用提供实验依据。     

miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表达的影响

背景与目的：BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法：实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果：miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论：miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。     

紫杉醇诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡及与Bcl-2基因表达的关系

目的探讨紫杉醇对人膀胱癌EJ细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养人膀胱癌EJ细胞,以不同浓度紫杉醇处理12～72 h后,应用流式细胞仪检测凋亡率,测定细胞周期;原位杂交法检测紫杉醇作用后Bcl-2基因表达的变化。结果流式细胞仪检测结果发现紫杉醇诱导后的膀胱癌EJ细胞周期阻滞于G2/M期,高浓度紫杉醇（100、1 000 nmol/L）更明显,出现凋亡峰,细胞凋亡率随紫杉醇浓度的增加而增高;紫杉醇作用后Bcl-2基因表达发生明显变化,随紫杉醇浓度的增加而降低。结论紫杉醇能够诱导EJ细胞凋亡,细胞凋亡率随紫杉醇浓度的增加而增高;紫杉醇通过抑制Bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,为其诱导凋亡的作用机制之一。     

新生霉素与格尔德霉素的联合及序贯应用对K562细胞的作用

目的研究Hsp90C-端抑制剂新生霉素（NB）与Hsp90N-端抑制剂格尔德霉素（GA）的联合应用对K562细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的作用，该作用与细胞色素C释放、Caspase-9和Caspase-3活性的关系，并且研究序贯应用NB和GA对K562细胞的作用。方法细胞用NB和GA联合处理后，采用AO／EB双染检测细胞凋亡，分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性，用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C和procaspase-3的含量。用MTT法检测NB→GA和GA→NB序贯处理对K562细胞增殖的抑制作用。结果NB和GA合用抑制K562细胞增殖有单独相加的作用；NB和GA合用激活caspase-3／9的活性程度高于单独使用NB或GA，协同触发K562细胞凋亡；预先用NB处理可增强K562细胞对GA的敏感性，相比之下，预先用GA处理不影响K562细胞对NB的敏感性。结论NB和GA合用可协同抑制K562细胞生长，诱导凋亡；NB可增强GA对K562细胞的抑制能力，而GA不影响NB对K562细胞的抑制作用。     

ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K 562细胞凋亡的调控作用

目的：探讨辛伐他汀（simvastatin）作用于裸鼠体内K562细胞后Ras-MAPK信号转导通路胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated protein kinase，ERK）分子水平的变化，以说明ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用。方法：体外培养慢性髓细胞白血病（CML）细胞株K562细胞，构建BALB／c-nu／nu裸鼠的K562细胞移植瘤模型。流式细胞术（FCM）检测对照组和两个辛伐他汀处理组的K562细胞周期变化，TUNEL法检测K562细胞晚期凋亡情况。采用RT-PCR检测K562细胞中Ras-MAPK信号通路N-Ras、ERK1mRNA的差异表达。免疫组织化学标记葡聚糖聚合物（labbled dextran polymer，LDP）法检测P-ERK蛋白水平变化。结果：辛伐他汀能够明显抑制裸鼠K562移植瘤组织的增长，随着辛伐他汀剂量的增加，K562细胞移植瘤体积和质量明显减小（P〈0．05，P〈0．01）。每次注射0．05mg的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的G0／G1期停滞，不同剂量的辛伐他汀能够诱导K562细胞发生明显的凋亡，并随剂量的增加，凋亡率逐渐增高（P〈0．01）；不同剂量的辛伐他汀能够引起N-Ras、ERK1mRNA的表达下调（P〈0．01）。与对照组相比，两个处理组的p-ERK蛋白分别出现表达下调（P=0．01，P〈0．01）。结论：辛伐他汀在体内可能依赖Ras—MAPK信号转导通路ERK基因和蛋白水平的表达下调诱导K562细胞凋亡发生。     

整合素信号转导通路对K562细胞凋亡的影响

目的探讨整合素介导的细胞凋亡抑制途径是否参与了慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞株K562细胞的凋亡耐受机制,以求为CML的治疗提供新思路。方法流式细胞术和丫啶橙双色荧光显微镜分析检测抗整合素α5β1单抗（Anti-α5β1）对K562细胞凋亡的影响,Western blot 技术和RT-PCR技术分析Anti-α5β1对K562细胞内凋亡相关因子PI3K、AKT和survivin表达的影响。结果Anti-α5β1可通过抑制K562细胞内PI3K和survivin mRNA的表达,下调AKT和PI3K蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平诱导K562细胞凋亡。抗整合素α5β1抗体的促凋亡能力强于IFNα-2b,其原因可能与IFNα-2b不能显著降低PI3K和p-AKT表达水平有关。结论整合素α5β1介导的PI3K-AKT-survivin信号转导通路参与了K562细胞的凋亡耐受。     

槲皮素对K562细胞生长及血管内皮生长因子分泌的影响

 目的 探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子（VEGF）的表达影响。方法 以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright染色法;AnnecxinⅤ标记检测细胞凋亡率;VEGF表达采用ELISA法。结果 经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加;槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF的表达。结论 槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF。     

冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制

目的：研究冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，检测细胞生长抑制率．观察细胞凋亡时的形态学变化．对细胞凋亡前后的端粒酶活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著降低K562细胞的端粒酶活性．抑翻细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生凋亡．降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

紫杉醇对K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的　探讨紫杉醇体外抑制 K5 6 2细胞株及诱导凋亡的作用。方法　体外培养 K 5 6 2白血病细胞株 ,以不同浓度紫杉醇处理 12～ 72小时后 ,用 MTT法测定细胞生长抑制作用 ,用细胞形态学观察和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞 DNA含量及细胞周期。结果　 K5 6 2细胞经紫杉醇处理后细胞生长受抑 ,对 K5 6 2细胞的半数抑制浓度 IC50 为 0 .84μg/ ml。经药物作用后可见细胞染色质浓聚和凋亡小体形成 ,FCM显示细胞凋亡率明显增加 ,但电泳检测未见 DNA裂解。结论　紫杉醇能抑制 K5 6 2细胞的生长 ,诱导细胞凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一     

夜香树花甾体皂苷抑制K562细胞增殖及对PI3K／AKt信号通路的调控

目的探讨夜香树花甾体皂苷（SSFCN）抑制K562细胞增殖及作用机制。方法夜香树花用有机溶剂提取、分离并鉴定SSFCN,体外培养K562细胞,采用MTT比色法测定抑制率;流式细胞仪分析细胞周期、琼脂糖凝胶电泳检测DNA图谱的变化,Western blot法检测用SSFCN处理的K562细胞AKt磷酸化水平的变化。结果SSFCN能显著抑制人白血病细胞K562的生长,作用后细胞生长有明显凋亡特征性改变,凋亡率呈时间和剂量依赖性。60mg／L的SSF—CN作用K562细胞24h后,流式细胞仪检测出现亚G,峰及DNA电泳呈梯形条带。Western blot结果表明,SSFCN处理K562细胞72h后,K562细胞P—AKt磷酸化水平明显下调。结论SSFCN具有抑制K562细胞增殖和促进凋亡的作用,SSFCN通过抑制K562细胞PI3K／AKt信号通路,从而抑制K562细胞增殖。     

泛素异肽酶抑制剂Ⅰ抑制人类白血病K562细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的 探讨泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对人类白血病K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 K562细胞经不同浓度的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测其对K562细胞增殖的抑制作用,AnnexinV FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录-定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测bcl-2、bax和凋亡特异性酶Caspase-3表达水平.结果 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ能抑制K562细胞的增殖,随作用时间的延长和浓度的增加抑制作用增强.经100 nmol/L泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理72 h,K562细胞早期凋亡率为（15.4±1.3）％,与对照组的（4.1±0.9）％相比明显上升（P＜0.01）.用100 nmol/L的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理K562细胞72 h后,Caspase-3和bax mRNA表达增高,bcl-2表达降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对K562细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示其可能用于治疗白血病.     

人参皂苷Compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞系凋亡诱导作用及其机制的研究

[目的]探讨人参皂苷CompoundK（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的诱导作用及其机制。[方法]应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞术分析细胞凋亡情况,半定量RT—PCR检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax蛋白质的表达。[结果]人参皂苷CK能诱导K562细胞的凋亡,细胞凋亡率呈浓度依赖性增加。RT—PCR结果显示Caspase3、Caspase9mRNA的表达上调,Bcl-2mRNA的表达下调,WesternBlot实验显示蛋白质表达情况与RT—PCR结果-致,Caspase3、Caspase9蛋白质的表达上调,Bcl-2的表达下调。[结论]人参皂苷CK诱导K562细胞凋亡作用的机制可能是CK抑制Bcl-2基因的表达,进而使Caspase3、Caspase9表达量上调,启动凋亡途径,引起凋亡。     

硼替佐米联合伊马替尼诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的研究硼替佐米（BOR）单独或联合伊马替尼（IM）对慢性粒细胞性白血病（CML）急变期细胞株K562凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法不同浓度的BOR、IM处理K562细胞,于12、48、72h分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增生活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果MTT和流式细胞仪结果显示BOR单药可以抑制K562细胞增生,诱导其凋亡,并且能够增强IM对细胞的杀伤作用。RT-PCR结果显示BOR或IM可以下调LivinmRNA的表达,联合作用后,LivinmRNA的水平明显降低。结论BOR单药或联合IM可以诱导K562细胞的凋亡,其机制可能与下调LivinmRNA的表达有关,两药联合具有协同作用。