新生儿脐血血红蛋白电泳对α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断的价值

目的研究脐血血红蛋白电泳在α-珠蛋白生成障碍性贫血及异常血红蛋白病中的诊断价值,了解东莞厚街地区新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率、基因类型和异常血红蛋白种类。方法用脐血标本进行血红蛋白电泳,对电泳区带进行扫描定量分析,对检出HbBart's带的标本进行α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断。结果2369例脐血标本共检出HbBart's带的标本有92例,携带率为3.88%;经基因诊断为α-珠蛋白生成障碍性贫血的有87例,其中--SEA/69例占79.3%,-α3.7/12例占13.8%,-α4.2/6例占6.9%;检出异常血红蛋白病11例占0.46%。2369例标本中母亲为α-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者,新生儿脐血检出HbBart's带的有16例。结论脐血血红蛋白电泳对新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血及异常血红蛋白病的筛查和诊断是一种简便、有效的方法。     

贵州江口土家族β-地中海贫血筛查及基因分析

目的 分析贵州省江口县土家族人群β-地中海贫血（β-thalassemia）的发病状况、基因突变类型及特点。方法随机选取贵州省江口县太平乡土家族居民485名，抽取静脉血，采用血红蛋白电泳分析法、一分钟碱变性法初筛β-地中海贫血阳性参考指标，同时应用全自动血细胞分析仪进行红细胞计数（RBC）等7项血液学指标分析；用常规酚-氯仿抽提法提取筛检阳性者DNA，经PCR／反向斑点杂交（PCR／RDB）技术确定基因突变类型。结果江口县土家族人群中，共检出β-地中海贫血杂合子携带者13例，检出率为2．68％。基因分析显示，该人群β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42（TCTT）移码突变9例，占69．2％，CD17（A→T）无义突变3例，占23．1％和pE（Codon26）1例，占7．7％。结论贵州省江口土家族β-地中海贫血具有自身特点，检出率较高，可能与当地土家族通婚区域半径小有关，应深入研究该地区β-地中海贫血患病特征，指导当地积极预防该病，提高少数民族人口素质。     

静止型珠蛋白生成障碍性贫血平均红细胞体积与脆性

目的评价外周血平均红细胞体积(MCV)以及红细胞渗透脆性试验(RBC脆性试验)在诊断静止型珠蛋白生成障碍性贫血中的临床价值。方法53例经过基因分析确诊为静止型珠蛋白生成障碍性贫血患者行外周血MCV、RBC脆性试验,评价二者在筛查静止型珠蛋白生成障碍性贫血的价值。结果53例静止型珠蛋白生成障碍性贫血患者中,MCV值小于80fl占84.9%(45/53),大于80fl占15.1%(8/53);MCV筛查的漏诊率15.1%(8/53);RBC脆性全部大于70%。结论MCV试验是筛查静止型珠蛋白生成障碍性贫血的一个重要手段,而RBC脆性试验筛查不到静止型珠蛋白生成障碍性贫血,应逐步被淘汰。     

联合检验对缺铁性贫血/珠蛋白生成障碍性贫血的鉴别诊断价值

目的探讨联合检验在鉴别诊断缺铁性贫血(IDA)与珠蛋白生成障碍贫血(又称地中海贫血,简称地贫)中的价值。方法选取我院2012年1月~2016年1月收治的IDA患者45例、地贫患者30例、健康体检者30例为研究对象,均进行平均红细胞比容(MCV)、血红蛋白(Hb)等联合检验,对比分析检验结果。结果地贫组MCV水平下降、Hb A2上升、RBC脆性下降;IDA组MCV水平下降、RDW上升、RBC脆性下降,分别与健康组比较差异有统计学意义(P﹤0.01);MCV联合Hb电泳、Hb电泳联合RBC脆性、MCV联合Hb电泳和RBC脆性并联试验的灵敏度较高,分别为100%,96.7%,100%,其串联试验的特异度较高,分别为96.7%,100%,100%。结论联合检验MCV、Hb A2、RBC脆性及RDW等血液学指标对准确鉴别诊断IDA与地贫有较高的应用价值。     

阳江市地区新生儿珠蛋白生成障碍性贫血筛查结果分析

目的调查阳江市地区新生儿珠蛋白生成障碍性贫血筛查检出阳性率及探讨对新生儿进行筛查的必要性。方法采用海伦娜全自动电泳仪对2863份新生儿脐血标本进行Hb电泳，对Hb区带进行扫描定量分析。结果2863份新生儿脐血进行Hb电泳定量分析中有Hb异常者293份。α珠蛋白生成障碍性贫血检出HbBart’s（≥1、0％）284份，检出阳性率为9．91％，其中静止型85份，标准型194份，HbH病5份，阳性率为2．96％、6．77％、0．17％；疑为β-珠蛋白生成障碍性贫血1份，阳性率为0．03％；其他异常Hb病8份，阳性率为0．28％。脐血电泳β-珠蛋白生成障碍性贫血阳性率（0．03％）与婚检、产检标本阳性率（4．4％）有显著性差异（p〈0．05）。结论阳江市地区是珠蛋白生成障碍性贫血高发地区，应用新生儿脐血Hb电泳筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血方便、快捷、经济、可靠，值得推广。欠缺之处是β-珠蛋白生成障碍性贫血检出率低，客观存在有难以判断的误差，脐血电泳筛查阴性者临床医生必须根据临床症状和其父母筛查情况建议1周岁后复查或做基因分析确诊，避免初筛漏诊和医疗纠纷。     

阳江市地区新生儿珠蛋白生成障碍性贫血筛查结果分析

目的调查阳江市地区新生儿珠蛋白生成障碍性贫血筛查检出阳性率及探讨对新生儿进行筛查的必要性。方法采用海伦娜全自动电泳仪对2863份新生儿脐血标本进行Hb电泳,对Hb区带进行扫描定量分析。结果2863份新生儿脐血进行Hb电泳定量分析中有Hb异常者293份。α-珠蛋白生成障碍性贫血检出HbBart’s(≥1.0%)284份,检出阳性率为9.91%,其中静止型85份,标准型194份,HbH病5份,阳性率为2.96%、6.77%、0.17%;疑为β-珠蛋白生成障碍性贫血1份,阳性率为0.03%;其他异常Hb病8份,阳性率为0.28%。脐血电泳β-珠蛋白生成障碍性贫血阳性率(0.03%)与婚检、产检标本阳性率(4.4%)有显著性差异(p<0.05)。结论阳江市地区是珠蛋白生成障碍性贫血高发地区,应用新生儿脐血Hb电泳筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血方便、快捷、经济、可靠,值得推广。欠缺之处是β-珠蛋白生成障碍性贫血检出率低,客观存在有难以判断的误差,脐血电泳筛查阴性者临床医生必须根据临床症状和其父母筛查情况建议1周岁后复查或做基因分析确诊,避免初筛漏诊和医疗纠纷。     

贵州地区β-地中海贫血基因诊断

目的:探讨β-地中海贫血基因诊断的临床应用价值。方法:采用反向点杂交技术,对84例可疑β-地中海贫血患者进行基因分析。结果:84例患者中检出49例β-地中海贫血,检出率为58.3%。共检出8种突变基因型,其中CD17杂合子占46.9%,CD41-42杂合子占22.5%;检出的5种突变等位基因按发生频率由大到小排列为:CD17、CD41-42、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、βE(CD26),其中CD17(A→T)的发生频率为51.7%。结论:反向点杂交技术是临床确诊β-地中海贫血的一种准确可靠的基因诊断方法;CD17(A→T)是贵州地区最常见的β-地中海贫血基因突变类型。     

血细胞分析鉴别珠蛋白生成障碍性贫血与缺铁性贫血的价值

目的 探讨血细胞分析鉴别诊断成人珠蛋白生成障碍性贫血与缺铁性贫血的价值。方法 选取2020年2月—2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院收治的珠蛋白生成障碍性贫血成人患者150例与缺铁性贫血成人患者205例,为其开展红细胞（red blood cell,RBC）、血红蛋白（hemoglobin,Hb）、平均红细胞比容（mean hematocrit,MCV）、红细胞/血红蛋白（RBC/Hb）等指标检测,比较缺铁性贫血患者、珠蛋白生成障碍性贫血患者、常模的Hb、MCV、RBC、平均红细胞血红蛋白浓度（mean erythrocyte hemoglobin concentration,MCHC）、平均红细胞血红蛋白量（mean corpuscular hemoglobin,MCH）、RBC/Hb及红细胞分布宽度（erythrocyte distribution width,RDW）水平。结果 缺铁性贫血患者、珠蛋白生成障碍性贫血患者的Hb、MCV、RBC、MCHC、MCH低于常模水平,RBC/Hb及RDW水平高于常模水平,差异有统计学意义（P <0.05）;珠蛋白生成障碍性贫血患...     

聚合酶链反应-反向点杂交法检测遗传性耳聋相关基因的热点突变

目的探讨聚合酶链反应-反向点杂交(PCR-RDB)法对遗传性耳聋相关基因突变检测的准确性和实用性。 方法选择2014年1月至2016年10月,于广东省妇幼保健院临床诊断为非综合征型耳聋(NSHI)的250例患者为研究对象。采用PCR-RDB法检测其外周血遗传性耳聋相关基因突变。PCR-RDB法采用遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒,可检测中国人群常见的4个耳聋相关基因的12个热点突变,即GJB2(35del G、176_191del 16、235del C、299_300del AT),GJB3(538C>T),SLC26A4(1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS7-2A>G、2168A>G)及线粒体MTRNR1(1494C>T、1555A>G)。同时,所有DNA样本均采用金标准Sanger测序法进行对比验证。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》,并征得受试者知情同意。 结果①本研究来自250例受试者的250例DNA样本中,耳聋相关基因突变检出率为51.6%(129/250),其中GJB2基因突变检出率为28.4%(71/250),SLC26A4基因突变为19.2%(48/250),线粒体MTRNR1基因突变为4.4%(11/250),GJB3基因突变为2.0%(5/250);129例检出的耳聋相关基因突变中,符合遗传病致病特征的耳聋相关基因突变的几率为86.8%(112/129)。②PCR-RDB法与Sanger测序法,对12个耳聋相关基因热点突变的检测结果均相同。③PCR-RDB法检测12个耳聋相关基因热点突变的灵敏度、特异度、总一致性、阳性预测值及阴性预测值均为100.0%。 结论虽然PCR-RDB法检测耳聋相关基因突变的结果与金标准Sanger测序法一致,但是本研究样本量尚小,因此是否可满足临床对遗传性耳聋基因检测的需求,则需多中心、大样本随机对照试验进一步研究、证实。     

荧光定量聚合酶链式反应种植前胚胎β-地中海贫血基因诊断

目的 用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法进行种植前β-地中海贫血一种中国人常见突变类型CD41／42(-TCTT)的基因诊断。方法 来源于β-地中海贫血病人或携带者的289个淋巴细胞和人体外受精-胚胎移植志愿者剩余的胚胎分离137个单细胞用荧光定量PCR方法进行分析。结果 用单个淋巴细胞诊断p地中海贫血扩增效率达96％，准确率达99％～100％，等位基因丢失(ADO)率仅0～5％。单个胚胎细胞扩增效率86％。结论 荧光定量PCR技术是一种敏感、快速、可靠和准确的技术。适合包括β-地中海贫血在内的单基因疾病的种植前诊断。     

PCR结合反向点杂交技术在β-地中海贫血基因诊断中的应用评价

目的 评价PCR结合反向点杂交技术在β-地中海贫血基因诊断中的临床应用. 方法 应用PCR结合反向点杂交技术对4 133例受检者进行β-地中海贫血基因检测,并对检测结果进行分析. 结果 4 133例受检者共检出β-地中海贫血患者428例,阳性检出率10.36％,其中41-42杂合子178例,占的比率最高41.59％;其次为654杂合子150例(35.05％);另外还有17杂合子38例(8.88％)、-28杂合子32例(7.48％)、βE杂合子13例(3.04％)、27-28杂合子5例(1.17％)、71-72杂合子4例(0.93％)、Int杂合子2例(0.47％)、CAP杂合子2例(0.47％)、-29杂合子2例(0.47％)、14-15杂合子1例(0.23％)、IVS1-1杂合子1例(0.23％). 结论 PCR结合反向点杂交技术操作快速简便、结果准确可靠,适用于β-地中海贫血的基因诊断和实验研究,值得临床推广应用.     

导流杂交基因芯片法和聚合酶链反应-反向点杂交法检测人乳头瘤状病毒亚型的比较

目的 探讨导流杂交基因芯片法和聚合酶链反应-反向点杂交法检测人乳头瘤状病毒(HPV)亚型的差异.方法 随机选取HPV标本50例,分别用导流杂交基因芯片法和聚合酶链反应-反向点杂交法检测HPV亚型,比较检测结果,结果不相符或部分相符的标本采用基因测序方法验证.结果 两种方法检测结果,19例阴性标本和25例阳性标本完全相符...     

多重聚合酶链反应在缺失型ɑ-地中海贫血诊断中的应用

目的：探讨多重聚合酶链式反应（PCR）在缺失型α-地中海贫血患者基因类型快速诊断中的应用价值。方法：对应用多重PCR进行α-地中海贫血检测后确诊为正常的30份样本及缺失型α-地贫的78份样本进行基因类型及血液实验学参数的回顾性比较与统计分析。结果：在78例缺失型α地中海贫血中，8例为左缺失静止型α-地贫（-α^37／α α）、3例为右缺失静止型α-地贫（-α^42／α α）、60例为东南亚型缺失α-地贫（--^sea／α α）、5例为左缺失血红蛋白（HbH）病（--^sea／-α^37）、2例为右缺失血红蛋白（HbH）病（--^sea／-α4．2），分别占缺失型α-地贫的10．3％、3．8％、76．9％、6．4％、2．6％。静止型α-地贫血液学参数MCV为（84．0±3．76）fl，红细胞脆性为（68．0±12．7）％；东南亚（标准）型α-地贫MCV为（71．7±5．1）fl，红细胞脆性为（42．3±15．2）％；HBH病MCV为（61．9±5．0）fl，红细胞脆性为（25．0±6．5）％。结论：与传统的血液学参数筛查比较，多重PCR可以准确、简便、快速地检殒，1常见的-α^37、-α^42、--^sea3种缺失型α-地贫，对静止型α-地贫的检出是一种较为理想的方法。     

β-地中海贫血基因诊断及临床应用

摘要:β-地中海贫血是β-珠蛋白基因突变导致β-珠蛋白链合成减少或缺乏所引起的一种遗传性溶血性贫血,本病发病范围广,各地区有不同的发病率。β-珠蛋白基因最常见的突变类型是点突变,中国南方地区已发现β-地中海贫血基因突变有46种。随着分子生物学研究技术的不断发展,β-地中海贫血的基因诊断方法也不断改进和完善。本文从β-地中海贫血的基因诊断角度出发,对目前仍在使用及新近出现的β-地中海贫血点突变检测技术及其在临床上的应用进行综述。     

清远区儿童珠蛋白生成障碍性贫血发生情况及基因检测的结果分析

目的 分析清远区儿童珠蛋白生成障碍性贫血发生情况及基因检测的结果。方法 研究总共纳入3 430例观察对象,均是清远市妇幼保健院2019年7月—2021年6月收治的珠蛋白生成障碍性贫血患儿,所有患儿均进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检查。观察并分析珠蛋白生成障碍性贫血发生率以及相应的基因检测结果情况。结果 3430例患儿中,珠蛋白生成障碍性贫血的阳性率为74.29%(2 548/3 430)。α-珠蛋白生成障碍性贫血的占比为78.1%(1990/2548),β-珠蛋白生成障碍性贫血的占比为21.90%(558/2548),其差异有统计学意义（P <0.05）。结论 清远区儿童珠蛋白生成障碍性贫血的发生率较高,α-珠蛋白生成障碍性贫血与β-珠蛋白生成障碍性贫血是主要的贫血类型。基因检测用于儿童珠蛋白生成障碍性贫血的检测效果理想,为珠蛋白生成障碍性贫血的诊断与防治提供了参考依据,临床可进一步推广应用。     

侗族人群β地中海贫血的调查

目的 了解贵州从江县侗族人群B地中海贫血的发病状况、基因突变类蛩及特点。方法 抽取受检者静脉血，应用HbF和HbA2定量测定对人群进行β-地中海贫血初筛，同时应用全自动血细胞分析仪进行红细胞计数(RBC)、血红蛋白测定(Hb)、红细胞比容测定(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)等7项血液学指标分析，然后用常规酚-氯仿抽提法提取受检者DNA，经PCR-反向点杂交法对β珠蛋白基因进行突变分析。结果 从江县侗族人群中，β地中海贫血的检出率为7．85％，检出CD41-42(TCTT)移码突变(9例,23％)和CD17(A→t)无义突变(30例，77％)2种基因突变类蛩。结论 该地区侗族人群中β地中海贫血患病率较高，β珠蛋白基因变异情况独特，可能与族内婚配、家族发病聚集性和通婚地理半径狭小有关。     

慢病毒介导β-珠蛋白基因添加在β-地中海贫血基因治疗中的应用

目的:构建全长人β-珠蛋白基因慢病毒载体,稳定转染K562细胞使得β-珠蛋白高效表达,为β-珠蛋白基因添加治疗奠定基础。方法:采用PCR扩增人正常β-珠蛋白基因,加上Sph I和Not I两个酶切位点进行T载体克隆,获得重组质粒p UC57-β-globin。用限制性内切酶连接目的基因片段和慢病毒载体,筛选获得慢病毒表达载体LV-β-globin,测序。将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒。用LV-β-globin感染K562细胞。采用流式细胞仪检测荧光效率,运用实时PCR及Western Blotting检测K562细胞中β-珠蛋白mRNA及蛋白表达情况。结果:通过PCR获得长度为2 128 bp的目的基因。连接p UC57载体和慢病毒表达载体,慢病毒表达载体LV-β-globin构建成功,序列正确。LV-β-globin转染K562细胞72 h后,显示大量绿色荧光表达,荧光效率为94.8%。β-珠蛋白mRNA 2-ΔΔCt值为4.080±0.078,高于对照组;β-珠蛋白灰度值为1.063±0.082,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建并包装含人β-珠蛋白基因的慢病毒载体并高效稳定表达。     

畲族居民β-海洋性贫血基因突变类型

目的：探讨畲族居民β—海洋性贫血患者基因突变类型。方法：采集血红蛋白电泳检测HbA2和HbF阳性患者的静脉血，从白细胞中提取DNA，然后用反向点杂交法检测基因突变。结果：35例基因点突变有2种类型，3个组合，即—28(A→G)／—28(A→G)占11．4％(4／35)，—28(A→G)／N占71．4％(25／35)，IVS—Ⅱ—654(C→T)／N占17．1％(6／35)。4例重症β海洋性贫血具有典型临床症状者均为—28(A→G)／—28(A→G)基因突变类型，其他2种基因突变组合均为外观正常的β—海洋性贫血基因携带者。结论：浙西南地区畲族居民β—海洋性贫血基因突变类型有别于所报道的其他少数民族。提示每个民族或群体均可能有其特定的基因突变类型。反向点杂交检测β—海洋性贫血基因突变具有快速、简便、针对性强等特点，应用价值较大。     

PCR结合导流杂交技术在育龄妇女α和β地中海贫血诊断中的应用

目的探讨PCR结合导流杂交技术诊断试剂盒在育龄妇女α和β地中海贫血诊断中的应用。方法以平均红细胞体积(MCV)<80fl筛查出141表型阳性病例,凯普α和β地中海贫血诊断试剂盒检测地贫。结果检测出80例存在α-地中海贫血,包括9种类型,常见类型为--^(SEA)/αα、-α(SEA)/αα、-α^(3.7)/αα、-α(3.7)/αα、-α^(4.2)/αα,其中4例存在两种缺失;53例存在β-地中海贫血,包括11种类型,常见β地贫基因型β41-42、β654、β17、β28,其中2例存在两种突变;5例同时存在α-地贫和β-地贫;13例未检测到缺失或突变;同时还检测出5例MCV>80fl的α-地中海贫血病例,其中1例合并β-地贫。结论本试剂盒优势为同一基因芯片上进行α和β地贫的测定,缩短了检测时间,降低检测成本,减少复合地贫漏诊,适合基层实验室用于常见地贫的诊断。但仅能检测常见类型α和β地贫,具有一定局限性,在出现该试剂无法检测到的地贫基因缺失或突变,而MCV<80fl时,建议进行缺铁性贫血的筛查和地贫基因序列的检测。     

排除β-肌动蛋白假基因对反转录聚合酶链反应的干扰

目的筛选合适的β-肌动蛋白(β-actin)引物以排除RNA样本中残存的DNA对人类基因表达分析的干扰。方法利用EMBL、PSEUDOGENE等生物信息数据库,寻找β-actin的假基因。同时自行设计和从国内外文献中筛选了众多β-actin引物。选用其中具有代表性的5对跨过内含子的引物,分别将基因组DNA、未经逆转录的RNA、cDNA作为模板,对这5对引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增。结果生物信息学分析发现β-actin有37个假基因并且发现绝大多数的研究者所使用的引物都存在假基因干扰问题。当分别用DNA和cDNA作为模板时,5对引物中的1对跨过内含子的引物能扩增出大小不同的条带。结论使用该对引物能有效发现和排除RNA样本中所残存的DNA的干扰,令人类基因表达分析得出更准确的结果。