组胺诱导胶质瘤原代培养细胞凋亡的实验研究

目的观察组胺诱导人脑胶质瘤原代培养细胞凋亡的作用，探讨组胺诱导人脑胶质瘤原代培养细胞凋亡与钙离子内流之间的关系。方法取手术中获得的新鲜脑胶质瘤组织，加入含10％小牛血清的1640培养液中培养；取生长良好的细胞分别加入含0．01mg／ml，0．05mg／ml和0．1mg／ml不同浓度组胺的培养液，进行细胞的原代培养。激光共聚焦显微镜检测细胞膜内游离钙离子浓度；流式细胞仪检测不同浓度组胺作用下细胞的凋亡率。结果加入含0.05mg／ml和0.1mg／ml组胺培养液的人脑胶质瘤原代培养细胞内游离钙离子浓度明显升高，诱导细胞凋亡，细胞凋亡的发生在一定范围内与加入的组胺呈剂量、时间依赖关系。结论组胺通过增加人脑胶质瘤原代培养细胞内游离钙离子浓度诱导细胞凋亡的发生。     

JAK2/STAT3信号转导通路在缺血性脑损伤中作用机制的研究

目的 探讨磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白在局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达及JAK2-STAT3信号转导通路在缺血性脑损伤中的作用.方法 采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,应用Western blotting检测大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达水平的变化.利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化.同时应用JAK2特异性抑制剂AG490观察其影响.结果 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,再灌注损伤3h P-JAK2、P-STAT3蛋白可见少量表达,12h表达增强,24h达高峰,以后逐渐下降,168h后仍有少量表达.缺血再灌注损伤后凋亡细胞也显著增多,再灌注24～48h达高峰,凋亡细胞的变化与磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达变化一致.应用JAK2特异性抑制剂AG490不但阻断JAK2的磷酸化、STAT3的酪氨酸磷酸化,而且具有抗细胞凋亡作用.结论 脑缺血再灌注损伤后可引发JAK2、STAT3的活化,JAK2/STAT3信号通路可能参与了脑缺血再灌注损伤机制.     

转染TRAIL的神经干细胞对神经胶质瘤凋亡的诱导作用

神经干细胞对颅内胶质瘤有很强的趋向作用，而对正常脑组织无此特性。TRAIL能选择性地促使肿瘤细胞凋亡而对正常组织无毒性。本文就神经干细胞、TRAIL及神经干细胞转染TRAIL后与胶质瘤的关系作一综述。     

细胞因子在淋巴细胞介导胶质瘤细胞凋亡中的作用

目的 细胞因子ＴＮＦ、ＩＦＮ等在淋巴细胞介导胶质瘤细胞凋亡方面的作用和特点。方法 采用免疫组化,分子生物学、ＭＴＴ法及ＰＢＬ对培养的胶质瘤细胞凋亡形成的直接观察方法。结果 正常人ＰＢＬ对Ｕ２５１ＭＧ的杀伤活性明显高于ＴＮＦ或ＩＦＮ的单独作用,ＩＦＮ＋ＰＢＬ组对Ｕ－２５１ＭＧ的杀伤作用较ＰＢＬ及ＴＮＦ＋ＰＢＬ组的杀伤作用凋亡细胞很少而核分裂相细胞多;ＰＢＬ＋ＩＦＮ组出现大量肿瘤细胞凋亡。结论 细胞凋     

TRAIL与硝普钠联合诱导胶质瘤细胞株U251凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)与硝普钠(SNP)联合诱导U251细胞凋亡的协同作用.方法 将TRAIL和SNP单药或联合作用于U251胶质瘤细胞系.MTT比色法、流式细胞术检测细胞生长抑制率、凋亡率;Western blot法检测DR5、Caspase-3、Bcl-2、Survivin 蛋白表达.结果 TRAIL和SNP单药组对U251细胞活性均有抑制作用;联合作用组细胞凋亡率明显高于单药组和对照组(P＜0.01),并存在协同作用;联合作用组较对照组DR5、Caspase-3蛋白表达明显上调,Survivin、Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 TRAIL和SNP可显著抑制U251细胞增殖,具有协同细胞凋亡诱导作用.其机制与上调DR5、Caspase-3,下调Bcl-2、Survivin 蛋白表达有关.     

TRAIL对原代培养胶质瘤细胞的凋亡诱导作用

目的研究TRAIL对原代培养的胶质瘤细胞的凋亡诱导作用,探讨其临床应用的实际价值。方法对22例脑胶质瘤和5例正常脑组织进行原代培养,用流式细胞仪检测TRAIL作用后肿瘤细胞和正常胶质细胞的凋亡率。结果成功培养出18例胶质瘤细胞和4例正常胶质细胞。800ng mlTRAIL作用48h后,凋亡率在80%以上的5例,50%～80%9例,50%以上14例,占总数的77.78%,50%以下的4例;正常胶质细胞无明显凋亡发生。结论TRAIL能有效地选择性地杀死某些胶质瘤细胞,对正常胶质细胞则无损害作用,TRAIL为胶质瘤的安全治疗提供了一个新的备选方法。     

TRAIL对原代培养胶质瘤细胞的凋亡诱导作用

目的研究TRAIL对原代培养的胶质瘤细胞的凋亡诱导作用，探讨其临床应用的实际价值。方法对22例脑胶质瘤和5例正常脑组织进行原代培养，用流式细胞仪检测TRAIL作用后肿瘤细胞和正常肢质细胞的凋亡率。结果成功培养出18例胶质瘤细胞和4例正常胶质细胞。800ng／ml,TRAIL作用48h后，凋亡率在80％以上的5例，50％。80％ 9例。50％以上14例．占总数的77．78％，50％以下的4例；正常胶质细胞无明显凋亡发生。结论TRAIL能有效地选择性地杀死某些胶质瘤细胞，对正常胶质细胞则无损害作用，TRAIL为肢质瘤的安全治疗提供了一个新的备选方法。     

白藜芦醇诱导U87胶质瘤细胞凋亡及caspase-3的激活

目的探讨白藜芦醇(Res)抑制体外脑胶质瘤细胞系U87生长并诱导其凋亡,激活 caspase-3的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制不同浓度Res作用6 h、24 h、48 h后的细胞生长曲线,流式细胞仪Annexin V—FITC和PI双染检测凋亡率,Hoechst 33342荧光染色及透射电镜 (TEM)观察细胞增殖改变:Western-blot分析caspase-3酶原的变化,半定量RT—PCR检测caspase-3 mRNA水平的改变,比色法测定caspase-3的相对活性。结果 Res明显抑制U87细胞的增殖 (P<0．01),呈浓度及时问依赖性反应;Res可诱导U87胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。用不同浓度 Res处理U87细胞24 h,随药物浓度增加,caspase-3酶原的蛋白水平减少,caspase-3 mRNA水平增加 (P<0．01)。用200 μmol／L Res分别处理细胞0．5、2、6、12、24 h,caspase-3活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P<0．01);用不同浓度的Res处理细胞12 h,caspase-3活性呈浓度依赖性的升高(P<0．01)。结论 Res明显抑制U87细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有caspase-3的激活。     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。     

Stem-cell-like glioma cells are resistant to TRAIL/Apo2L and exhibit down-regulation of caspase-8 by promoter methylation

Tumour necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL/Apo2L) is a promising cancer drug. However, many tumours are resistant to TRAIL-based therapies. Glioma cells with stem cell features (SCG), such as CD133 expression and neurosphere formation, have been recently identified to be more resistant to cytotoxic drugs than glioma cells lacking stem-cell-like features (NSCGs). Here we report that SCGs are completely resistant to 100–2,000 ng/ml TRAIL, whereas NSCGs revealed a moderate sensitivity to TRAIL. We found that SCGs exhibited only low levels of caspase-8 mRNA and protein, known to be indispensable for TRAIL-induced apoptosis. In addition, we detected hypermethylation of CASP8 promoter in SCGs, whereas NSCGs exhibited a non-methylated CASP8 promoter. Reexpression of caspase-8 by 5-Aza-2′-deoxycytidine was not sufficient to restore TRAIL sensitivity in SCGs cells, suggesting that additional factors cause TRAIL resistance in SCGs. Our data suggest that therapy with TRAIL, either as monotherapy or in combination with demethylating agents, is not effective in treating glioblastoma because SCGs are not targeted by such treatment.     

重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素诱导胶质瘤细胞凋亡作用的初步研究

目的探讨重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素DT389-IL13对胶质瘤细胞的杀伤作用机制.方法在U251细胞中加入不同浓度的嵌合毒素DT389-IL13,作用72 h后分别进行H-33342染色,观察胶质瘤细胞核形态,电镜观察细胞超微结构,用流式细胞仪计数亚二倍体细胞百分数等.结果3种检测结果均表明,嵌合毒素DT389-IL13可诱导U251胶质瘤细胞发生凋亡,1×10-9mol/L嵌合毒素作用72 h后亚二倍体细胞百分比为38%,1×10-8mol/L作用后亚二倍体细胞百分比为99%,明显高于对照组(3.63%),与荧光染色观察的结果一致;电镜下还可见固缩的线粒体.结论嵌合毒素DT389-IL13可诱导胶质瘤细胞凋亡.