健骨颗粒对大鼠成骨细胞OCN、Cbfal的影响

骨质疏松症主要是由于骨形成、骨吸收偶联的破坏,使骨形成减少,骨量降低所导致.成骨细胞是骨形成的关键细胞,而成骨细胞的分化成熟、功能活性与骨形成密切相关.前期在体、体外实验表明.补肾健脾中药健骨颗粒能明显增强成骨细胞的功能活动.     

健骨颗粒对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的探讨健骨颗粒对骨组织成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法通过切除6月龄SD雌性大鼠卵巢,建立绝经后骨质疏松症动物模型,分假手术组、模型组、治疗组,运用RT-PCR实时荧光定量SYBR GREEN法检测雌激素受体ERα、ERβmRNA的表达。结果治疗组与模型组比较,ERα、ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P0.01)。结论健骨颗粒能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的成骨细胞ERα、ERβ的表达,促进成骨细胞增殖。     

抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠降钙素和骨钙素的影响

目的观察抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠降钙素和骨钙素的影响，探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理。方法使用不同剂量的抗疏健骨颗粒对骨质疏松大鼠进行治疗，并与正常组、模型组、双磷酸盐组进行对比。采用放射免疫分析法测定各组大鼠外周血清中降钙素、骨钙素的含量。结果抗疏健骨颗粒各剂量组可使骨质疏松大鼠血清CT、BGP含量增加，与模型组相比，有显著性意义（P〈0．01或P〈0．05）。结论CT、BGP含量增加是抗疏健骨颗粒防治糖皮质激素致骨质疏松症的机理之一。     

补肾中药醇提活性部位对成骨细胞Cbfa1基因表达的影响

【目的】观察补肾中药提取物(AS-RKCB)对体外培养人的成骨细胞株TE85和编码因子(Cbfal)基因表达的影响。【方法】原位杂交组织化学技术。【结果】(1)TE85细胞经AS-RKCB(10-7g/L)培养液培养9 d后Cbfal mRNA表达的阳性细胞数高于空白对照组,与对照组比较有统计学意义;(2)检测同期培养液中的骨钙素分泌值显著高于对照组,细胞中骨钙素分泌量在CbfalmRNA高表达3 d后达峰值。【结论】Cbfal基因表达与成骨细胞标志物表达之间的时差关系,提示Cbfal基因在成骨细胞增殖和分化中有重要作用。     

超高分子聚乙烯颗粒对体外培养成骨细胞活性的影响

目的 建立小鼠胚胎成骨细胞和超高分子聚乙烯(UHMWPE)颗粒的体外联合培养的新模型,初步研究超高分子聚乙烯颗粒对成骨细胞活性和核心结合因子α1(Cbfctl)表达的影响.方法 分为空白对照组和UH-MWPE颗粒干预组,2组常规培养小鼠胚胎成骨细胞,待细胞贴壁后装满培养基,UHMWPE颗粒干预组加入UH-MWPE颗粒,封闭倒置培养瓶,颗粒漂浮至贴壁细胞层.应用流式细胞技术分析各组细胞早期凋亡情况.分别在共培养的第3、5、7天检测细胞Cbfα1在mRNA和蛋白水平上的表达情况.结果 封闭条件下小鼠胚胎成骨细胞正常生长可达10天;UHMWPE颗粒不影响细胞增殖活性,对细胞无明显毒性作用;UHMWPE颗粒干预组的目的 基因Cbfα1表达增强.结论 超高分子聚乙烯颗粒可以独立、直接影响成骨细胞相关因子的分泌.     

抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠胰岛素样生长因子-I的影响

目的观察抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠血清IGF—I的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理。方法用抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠进行不同剂量的药物治疗,并与假手术组、模型组、尼尔雌醇进行对比,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中IGF—I含量。结果模型组血清中IGF—I的含量明显低于假手术组（P〈0．01）;尼尔雌醇组明显高于模型组（P〈0．05）;抗疏健骨颗粒小刺量组与模型组无明显差异;中、高剂量组明显高于模型组（P〈0．05）,但与尼尔雌醇组比较无明显差异。结论抗疏健骨颗粒是通过升高血清IGF—I含量,抑制破骨细胞的活性,改善骨代谢而达到防治绝经后骨质疏松症的作用。     

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模鼠骨代谢的影响

通过对去卵巢骨质疏松模鼠血、尿相关骨代谢生化指标的检测,进一步明确健骨颗粒的药物疗效,并探讨其作用机制。实验结果显示：健骨颗粒能明显减少骨质疏松模鼠骨钙及胶原蛋白的分解代谢,提高血液中镁、雌二醇、降钙素等含量,从而抑制骨吸收,促进骨形成,明显改善骨质疏松模鼠的骨代谢负平衡状况,达到治疗骨质疏松的目的。     

抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠胰岛素样生长因子-Ⅰ的影响

目的 观察抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠血清IGF-Ⅰ的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理.方法 用抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠进行不同剂量的药物治疗,并与假手术组、模型组、尼尔雌醇进行对比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中IGF-Ⅰ含量.结果 模型组血清中IGF-Ⅰ的含量明显低于假手术组(P<0.01);尼尔雌醇组明显高于模型组(P<0.05);抗疏健骨颗粒小剂量组与模型组无明显差异;中、高剂量组明显高于模型组(P<0.05),但与尼尔雌醇组比较无明显差异.结论 抗疏健骨颗粒是通过升高血清IGF-Ⅰ含量,抑制破骨细胞的活性,改善骨代谢而达到防治绝经后骨质疏松症的作用.     

抗疏健骨颗粒对去卵巢大鼠骨组织形态学的影响

目的观察抗疏健骨颗粒对去卵巢大鼠骨组织形态学的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理。方法切除大鼠双侧卵巢诱发大鼠骨质疏松症模型,连续灌胃给药12 W,各组动物于处死前15 d和前5 d分别进行四环素荧光标记,处死动物后取右侧胫骨,制作切片,在荧光显微镜下观察骨小梁形态;采用图象分析系统进行骨组织形态参数计量,并与手术组、模型组和尼尔雌醇组进行比较。结果与模型组比较,抗疏健骨颗粒大、中剂量组骨小梁显著增加,骨小梁排列较紧密,骨小粱间可见网状连接,骨小梁厚度增加;与假手术组比,模型组较骨小梁体积百分比(TBV%)明显下降(P<0.01);尼尔雌醇组、抗疏健骨颗粒大、中与模型组比较,TBV明显增加(P<0.01),并呈一定的剂量依赖性。模型组较假手术组骨吸收参数(TRS)、骨形成参数(TFS)明显增加(P<0.01);与模型组比较抗疏健骨颗粒大、中均能降低骨吸收参数TRS、骨形成参数(TFS)、MAR、mAR和osw(P<0.01或P<0.05)。结论抗疏健骨颗粒能改善骨形态计量学参数,对骨质疏松症具有一定的治疗作用。     

电离辐射对大鼠类成骨细胞的影响

目的：探讨不同剂量电离辐射后大鼠类成骨细胞生物学性状的改变。方法：成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠乳鼠颅骨中获取传代；将第2代细胞分别进行0，1，4，6，9GY的γ线辐射，检测成骨细胞的增殖，碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量。结果：细胞增殖，功能和分化受γ线电防辐射抑制的程度不同，1Gy时增即受到抑制，骨钙素分泌量在4Gy时才受到显著地抑制，而碱性磷酸酶活性值甚至在6Gy下抑制作用才有意义。结论：电离辐射后，成骨细胞的增殖，功能和分化均受到抑制，但各指标对电离辐射的敏感性不同。γ     

健骨胶囊含药血清对体外培养成骨细胞增殖和分化作用的影响

[目的]观察健骨胶囊含药血清对体外培养新生大鼠成骨细胞增殖和分化的干预作用。[方法]三天给药法制备健骨胶囊含药血清;酶消化法由新生大鼠头盖骨体外分离和培养成骨细胞,应用MTT法测定增殖率及PNPP法测定ALP活性,来评价健骨胶囊对成骨细胞的增殖和分化的作用。[结果]健骨胶囊能提高体外成骨细胞的增殖率、提高ALP活性。[结论]健骨胶囊含药血清对成骨细胞体外增殖与分化具有刺激作用,为健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症提供血清药理学依据。     

电离辐射对大鼠类成骨细胞的影响

【目的】探讨不同剂量电离辐射后大鼠类成骨细胞生物学性状的改变。【方法】成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠乳鼠颅骨中获取传代 ;将第 2代细胞分别进行 0、1、4、6、9Gy的 γ线辐射 ,检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量。【结果】细胞增殖、功能和分化受γ线电离辐射抑制的程度不同 ,1Gy时增殖即受到抑制 ,骨钙素分泌量在 4Gy时才受到显著地抑制 ,而碱性磷酸酶活性值甚至在 6Gy下抑制作用才有意义。【结论】电离辐射后 ,成骨细胞的增殖、功能和分化均受到抑制 ,但各指标对电离辐射的敏感性不同。     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞成骨分化的影响

目的:研究辛伐他汀体内给药后对大鼠骨髓基质细胞在体外培养过程中成骨分化和增殖的影响,探讨其刺激成骨的作用机制. 方法:30只SD雌性大鼠,随机分为3组,每组10只. G1组(C)为对照组;G2组(SIM-10)给予辛伐他汀10 mg/(kg·d);G3组(SIM-20)给予辛伐他汀20 mg/(kg·d). 连续给药28 d后,取大鼠的骨髓细胞体外培养,诱导14 d后用RT-PCR和Western blot分别检测cbfa1 mRNA和蛋白表达的变化;收集上清液,检测细胞碱性磷酸酶;应用cell counting kit(CCK-8) 测定细胞增殖情况. 结果:辛伐他汀体内干扰28 d后,再经过骨髓细胞体外培养诱导14 d后,cbfa1因子的mRNA及蛋白表达水平均增高,呈剂量依赖关系. 上清液碱性磷酸酶表达增高,呈剂量依赖关系. 实验组与对照组比较,G2组(10 mg)组促进细胞增殖,而G3组(20 mg组)未见显著性差异. 结论: 辛伐他汀可促进骨髓基质细胞中cbfa1 mRNA和蛋白的表达,碱性磷酸酶活性增高,辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关.     

熟地、鳖甲对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶蛋白和核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂(3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3 d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清。原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况。结果低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组。结论熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的。     

RT-PCR法检测杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响

目的了解杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞骨钙素的mRNA表达的影响。方法杜仲总黄酮以10 g.mL-1、100 g.mL-1、200 g.mL-1浓度分别加入2d的SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用Realtime-PCR法检测对骨钙素mRNA的表达。结果与对照组相比,各实验浓度的杜仲总黄酮均能促进骨钙素mRNA的合成。结论杜仲总黄酮成分能直接促进体外成骨细胞中骨钙素mRNA的表达。     

杜仲总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞增殖的影响，筛选杜仲防治骨质疏松的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮，以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml浓度分别加入新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中，用MTT法评价对成骨细胞增殖的影响。结果50、100μg/ml杜仲总黄酮剂量组的OD570吸光值明显增高，与对照组比较，差异显著（P〈0．05）。结论杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的增殖。     

等离子喷涂硅灰石涂层对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究硅灰石涂层的细胞相容性和成骨诱导能力。方法 将硅灰石等离子喷涂于Ti-6Al-4V表面，成骨细胞于其表面培养，测定培养液的碱性磷酸酶活性、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽和骨钙素的含量，并观察硅灰石涂层表面成骨细胞的形态和数量。结果 培养7～12d，Ⅰ型前胶原羧基末端前肽含量和碱性磷酸酶活性最高；13～21d，骨钙素内含量最高，涂层表面细胞增殖明显。结论 硅灰石涂层具有良好的细胞相容性和成骨诱导能力。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的 观察瘦素（leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法 培养人成骨细胞,并观察其形态及功能变化。采用MTT比色法检测不同浓度的Leptin对人成骨细胞增殖的影响,同时观察不同浓度Letptin条件下骨钙素浓度的变化,并用细胞总蛋白较正。结果 体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性,培养液中加入β-甘油磷酸及L－抗坏血酸后钙茜素红染色阳性,在加入不同浓度Leptin后1、2、3天,人成骨细胞增殖无显著变化。Leptin可刺激骨钙素分泌,呈浓度依赖性（P＜0．05）,但无时间依赖性（P＞0．05）。结论 Leptin对人成骨细胞增殖无影响,但可刺激人成骨细胞功能。     

补肾健骨汤对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的考察补肾健骨汤体外对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响.方法采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第3代为实验模型,用常规计数法每日同时间检测成骨细胞增殖情况,连续7 d,观察补肾健骨汤提取液及载药血清对成骨细胞增殖的影响;以酶免法测定培养第5天细胞内骨钙素的含量.结果补肾健骨汤提取液及载药血清对体外培养的成骨细胞增殖均有显著的促进作用,其中提取液的作用在0～100 μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性;提取液与载药血清均提高细胞内碱性磷酸酶和骨钙素含量,与空白对照组比较均有显著差异(P＜0.05).结论补肾健骨汤体外对成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶、骨钙素的合成具有促进作用.     

普伐他汀对激素性坏死股骨头内Cbfa1表达的影响

目的 研究普伐他汀对激素性坏死股骨头内Cbfal基因表达的影响．方法 54只新西兰白兔随机分为正常组（A组）、模型组（B组）和普伐他汀治疗组（C组），每组18只．B、C两组应用大肠杆菌内毒素及甲强龙造成股骨头坏死模型，C组于造模后4周开始用普伐他汀灌胃，A、B两组以等量蒸馏水灌胃．分别于喂药后第4、8、12周分批取兔股骨头行实时荧光定量PCR检测股骨头内Cbfal mRNA的表达．结果 B、C两组各时相点Cbfal mRNA的表达水平均低于A组，但C组喂药后第8、12周的表达量明显高于B组，差异有显著性（P〈0．01）．结论 普伐他汀可促进激素性坏死股骨头内Cbfal mRNA的表达，有可能成为临床治疗激素性股骨头坏死的有效药物．