化香树果序挥发油的气相色谱-质谱联用分析及体外抗肿瘤活性研究

目的：研究化香树果序挥发油的化学成分及其体外抗肿瘤活性。方法：采用水蒸气蒸馏法从化香树果序中提取挥发油,通过气相色谱-质谱联用技术对其挥发油成分进行分析;采用MTT法观察其对人肝癌HepG2细胞、人鼻咽癌CNE-2细胞及人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率及半数抑制浓度（IC50）。结果：从挥发油中共鉴定出28个化合物,占总离子流图峰面积的94．10％,其中含量较高的组分为（Z,Z,Z）-9,12,15-十八碳三烯酸（44．48％）、十六烷酸（23．30％）和斯巴醇（3．20％）等。化香树果序挥发油对人肝癌HeDG2细胞、人鼻咽癌CNE-2细胞及人宫颈癌HeLa细胞均表现出不同程度的抑制活性,IC50值分别为848．554、451．835、301．253μg／mL。结论：化香树果序挥发油具有多种活性成分,对人肝癌HepG2细胞、人鼻咽癌CNE2fi~胞及人宫颈癌HeLa细胞均显示出了一定的抑制活性。     

苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用研究

目的：观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响。方法：采用倒置显微镜观察苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;采用CCK．8法检测苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞生长的影响。结果：苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变,细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱能抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显。结论：苦参碱能够抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞基质金属蛋白酶-9的抑制作用

的　探讨口虾蛄提取物对CNE - 2Z细胞基质金属蛋白酶 - 9(MMP - 9)的作用。方法　采用细胞免疫化学法及明胶酶谱法检测药物对CNE - 2Z细胞MMP - 9表达及分泌的影响 ;体外侵袭试验检测药物对CNE - 2Z细胞侵袭能力的影响。结果　口虾蛄提取物能抑制CNE - 2Z细胞MMP - 9表达及分泌 ,以量效方式抑制CNE - 2Z细胞体外侵袭能力。结论　口虾蛄提取物能通过抑制MMP - 9表达及分泌而降低CNE - 2Z细胞体外侵袭能力     

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的：观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法：倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC／PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果：苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变：细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0／G1期比例明显增高,S期、G0／M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论：苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。     

茶黄素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究茶黄素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:采用不同浓度茶黄素处理人鼻咽癌CNE2细胞;使用CCK-8法检测CNE2细胞在24、48、72 h的增殖抑制情况并计算细胞抑制率;细胞平板克隆形成实验观察CNE2细胞的克隆形成能力;细胞划痕实验检测CNE2细胞的迁移情况;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测CNE2细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平。结果:CCK-8检测结果显示随着茶黄素药物浓度的升高及作用时间的延长,药物对CNE2细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用呈时间及浓度依赖性;细胞平板克隆实验显示茶黄素能显著降低CNE2细胞的克隆形成能力;Hoechst33258染色显示茶黄素作用于CNE2细胞后出现核固缩、碎裂等凋亡现象;细胞流式术检测显示经茶黄素处理后CNE2细胞凋亡率升高;RT-PCR显示茶黄素能上调CNE2细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、P21 mRNA的表达。结论:茶黄素能抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈时间及浓度依赖性,其作用机制可能与调节细胞增殖和凋亡基因的表达有关。     

杠柳苷对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究杠柳苷对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其影响细胞迁移的机制。方法:通过CCK-8法检测CNE2细胞在24、48、72 h的增殖抑制情况并计算细胞抑制率;细胞平板克隆形成实验观察CNE2细胞的克隆形成能力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测CNE2细胞凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测CNE2细胞的迁移情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测与迁移相关基因MMP2、MMP7、MMP9 mRNA的表达情况。结果:杠柳苷呈浓度和时间依赖性抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖;与对照组比较,不同浓度的杠柳苷作用CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并显著降低了细胞的迁移能力,与迁移相关基因MMP2、MMP7、MMP9 mRNA表达水平显著降低。结论:杠柳苷可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,诱导CNE2细胞凋亡,并通过下调MMP2、MMP7、MMP9 mRNA的表达抑制CNE2细胞的迁移。     

益气解毒方上调miR-34a抑制鼻咽癌细胞生长增殖研究

目的：研究益气解毒方调控的miR-34a变化在抑制鼻咽癌细胞增殖中发挥的作用。方法：采用qRT—PCR法,分别检测鼻咽癌细胞株（益气解毒方处理组和DMSO对照组）中miR-34a的表达水平;采用MTT法研究益气解毒方调控的miR-34a抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长增殖的能力。结果：MTT结果显示,与DMSO对照组细胞相比,益气解毒方处理组的CNE2细胞的增殖能力明显受到抑制,抑制效应呈剂量依赖关系。qRT—PCR结果发现,益气解毒方处理组中的miR-34a表达量较DMSO对照组显著升高,差异具有统计学意义（P％0．01）。结论：益气解毒方可通过上调miR-34a表达而抑制鼻咽癌细胞增殖。     

榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的:探讨榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响.方法:分别用20,10,5,2.5,0g·L-1榄香烯注射液处理CNE1细胞12,24,48 h后,Prestoblue法检测细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞形态变化,Hoeehst-PI双染、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果:榄香烯注射液对CNE1细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,处理12,24,48 h的IC50值分别为(10.70±0.26),(7.06±0.11),(5.52±0.10) g·L-1;光镜下显示,给药后细胞大量凋亡,折光性下降;榄香烯注射液可诱导CNE1细胞凋亡.结论:榄香烯注射液能抑制CNE1细胞增殖并诱导其凋亡.     

抗EB病毒口服液对EB病毒抗原表达的抑制作用及其细胞毒作用

目的 观察抗EB(Epstein-Barr)病毒口服液对EB病毒抗原表达的影响及对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。方法 用间接荧光法测定抗EB病毒口服液对Raji细胞早期抗原(early antigen，EA)表达及B95-8细胞病毒壳抗原(virus capsid antigen，VCA)表达的影响；用MTT法测定其对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。结果 抗EB病毒口服液在无毒的浓度下，对Raji细胞EB病毒EA抗原表达有较强的抑制作用，其IC50值为0．667mg／mL：对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有较强的抑制作用。其IC50值为0．89mg／mL；对正丁酸钠激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达亦有较强的抑制作用，其IC50为1．1mg/mL。抗EB病毒口服液对人鼻咽癌细胞CNE2的IC50为7．57mg／mL。结论 抗EB病毒口服液能抑制EB病毒抗原的表达,在较高的浓度下对鼻咽癌细胞CNE2具细胞毒作用。     

锯叶棕提取物与AG490合并应用对MM细胞增殖作用的影响

目的：探讨锯叶棕提取物与AG490合并应用后对MM细胞增殖的影响。方法：将体外培养的U266和PRM182：26细胞与0—2uL／mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育,应用MTT比色法测定细胞增殖活性;同时应用台盼蓝不相容实验检测锯叶棕提取物与AG490单独使用或合并使用时的细胞成活率。结果：锯叶棕提取物抑制U266与RPM18226细胞的增殖,其抑制生长50％（ED50S）的有效剂量分别为1．2和0．7灿L／mL;U266细胞用锯叶棕提取物（0．5uL／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（79．7±1．1）％和（67．2±6．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±12.0）％（P〈0．001）;RP—M18226细胞用锯叶棕提取物（0．5ul／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（74．7±2．1）％和（37．2±5．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±4．1）％（P〈0．001）。结论：锯叶棕提取物与AG490合并应用抑制MM细胞的增殖作用较单独使用效果好。     

半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法以台盼蓝活细胞计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用FCM检测5F对细胞周期和凋亡的影响;用PI/Hoechst33258荧光双染法和DNA ladder检测凋亡。结果 5F作用后,生长曲线测定和MTT比色法实验结果显示,5F对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪、DNA ladder和荧光双染法结果提示5F可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论半边旗提取物5F能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨口虾蛄提取物(EOS)对人鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,腹腔给药,然后观察不同剂量EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤生长的影响。结果对照组及400mg/kgEOS组裸鼠移植瘤成瘤率均为100%(8/8),而800mg/kg、1600mg/kgEOS组成瘤率分别为87.5%(7/8)及62.5%(5/8),成瘤率有随EOS剂量增高而下降的趋势;同时随EOS剂量的增高,裸鼠移植瘤生长速度减慢,平均瘤质量也有降低的趋势,其中800mg/kgEOS组抑瘤率达57.1%。结论EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长可能具有一定的抑制作用。     

和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞增殖和凋亡的作用

目的:研究和厚朴酚、青蒿素及二者联合应用在体外能否抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长以及对其细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测和厚朴酚、青蒿素单独或联合对细胞生长的抑制作用,以IC50评判抗肿瘤的效果,应用金氏公式进行联合用药的结果分析;DAPI染色观察细胞的凋亡形态,流式细胞仪检测和厚朴酚、青蒿素单独或联合作用对CNE-2凋亡率的影响。结果:和厚朴酚能显著抑制CNE-2细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC50)为8.58 mg.L-1;青蒿素对CNE-2细胞生长没有明显的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为62.24 mg.L-1;和厚朴酚与青蒿素联合应用对CNE-2细胞的增殖抑制作用优于各单药组,q>1.15。DAPI染色可观察到和厚朴酚与青蒿素联合组核碎裂、凋亡小体,而单药组则不明显;凋亡分析显示联合用药组作用48 h细胞凋亡率显著高于各单药组。结论:和厚朴酚单独能够杀伤CNE-2细胞,并呈量-效关系,青蒿素单独作用不杀伤CNE-2细胞,两者联合应用对CNE-2细胞具有协同杀伤作用。     

莪术油对鼻咽癌细胞X-连锁凋亡抑制蛋白mRNA表达的影响

目的:研究莪术油对鼻咽癌细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)mRNA表达的影响及其作用机制。方法:体外培养鼻咽癌CNE-2细胞,MTT(噻唑蓝)法观察莪术油(400,300,200,100 mg·L-1)对CNE-2细胞的抑制作用,RT-PCR法检测莪术油对CNE-2细胞XIAPmRNA表达的影响。结果:MTT法结果显示,莪术油对CNE-2细胞的抑制率呈时间-剂量依赖性(P<0.01)。与对照组相比,莪术油139.41 mg·L-1组XIAPmRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:莪术油能明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长,其机制可能是通过抑制XIAP基因的表达。     

小柴胡汤对鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨复方小柴胡汤对鼻咽癌高分化鳞癌细胞株1(nasopharyngeal carcinoma cell line, CNE1)和鼻咽癌低分化鳞癌细胞株2(CNE2)生长的抑制作用，试图为该药物的临床开发与应用提供实验数据。方法：按浓度梯度配置复方小柴胡汤，用MTT实验检测不同浓度复方小柴胡汤对CNE1/2细胞生长的影响，同时运用软琼脂克隆形成实验检测其对CNE1/2细胞增殖能力的影响；在BALB/cAnu裸鼠右背后皮下接种对数生长期细胞悬液(5×105个/mL)02 mL，成功复制肿瘤模型后随机分为5组，每组8只，于次日复方小柴胡汤按05 , 025，0125 g·mL-1高、中、低3个剂量给药，同时设阳性对照组和阴性对照组，连续给药15 d后，测量肿瘤的体积和质量，计算体积抑制率和瘤重抑制率，研究复方小柴胡汤对CNE2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。结果：MTT法和克隆形成实验结果提示，与阴性对照组相比，不同浓度的复方小柴胡汤处理CNE1和CNE2 细胞24，48,72 h，发现对两株的细胞生长和增殖能力均存在不同程度的抑制作用，并随药物浓度和作用时间的增加而增强，两者结果显示其半数抑制浓度约为25 g·L-1；与阴性对照组比较，裸鼠体内抑瘤实验发现给复方小柴胡汤治疗组裸鼠肿瘤生长速度明显减慢，阴性对照组(076±028) g,(96288±24596) mm3和复方小柴胡汤低浓度治疗组(088±040) g,(1 23966±42193) mm3肿瘤生长明显快于高、中浓度治疗组(022±014) g,(23931±13707) mm3;(020±016) g,(26342±16657) mm3及CTX阳性对照组(020±010) g,(24672±1946) mm3(P<005)。结论：复方小柴胡汤能抑制鼻咽癌CNE1和CNE2细胞的生长、增殖，对CNE2裸鼠移植瘤的生长有抑制作用。     

鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2生长抑制作用的实验研究

目的:观察鹅不食草不同提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:采用系统溶剂法制备鹅不食草不同提取物,MTT法观察不同浓度的各提取物对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测鹅不食草乙酸乙酯提取物对该细胞的凋亡作用。结果:鹅不食草石油醚和乙酸乙酯提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2有一定的抑制,其中乙酸乙酯提取物抑制作用最明显,呈现较好的剂量-效应曲线,其作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。结论:鹅不食草乙酸乙酯提取物可能是其抗鼻咽癌作用的有效部位之一。     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

疏风解毒胶囊治疗EB病毒感染致裸鼠肿瘤模型的药效学探讨

目的:通过观察疏风解毒胶囊对EB病毒转染的人鼻咽癌细胞株CNE-2Z移植感染Balb/C裸小鼠致肿瘤模型的影响,评价疏风解毒胶囊体内抗EB病毒作用。方法:在Balb/C裸鼠右腋皮下接种鼻咽癌CNE-2Z细胞悬液,接种1周后,将移植瘤模型成功的裸鼠随机分为6组,分别为模型组、阿昔洛韦组、连花清瘟胶囊组、疏风解毒胶囊高、中、低剂量组(2.2,1.1,0.55 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组7只,分组当天开始给药,每日1次,连续给药3周。给药当天测定裸鼠的体重,肿瘤体积,隔日测定1次,3周后称体重处死裸小鼠,取出肿瘤组织、脾脏和胸腺称质量,计算每组肿瘤体积、相对肿瘤体积、相对肿瘤增殖率、脾脏指数、胸腺指数。结果:与模型组比较,疏风解毒胶囊高、中、低剂量组均可在一定程度上降低Balb/C裸小鼠脾脏指数,升高其胸腺指数;疏风解毒胶囊高剂量组可显著降低给药8~20 d后裸鼠肿瘤体积(P0.05,P0.01);中剂量组可显著降低给药8~14,18 d后肿瘤体积(P0.05,P0.01),低剂量组可显著降低给药8,12 d后肿瘤体积(P0.05)。在相对肿瘤增值率方面疏风解毒胶囊表现出一定的抑制肿瘤增长的趋势。结论:疏风解毒胶囊对EB病毒转染的CNE-2Z细胞移植裸小鼠肿瘤模型具有抑制作用。     

和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞周期阻滞的作用

目的:观察和厚朴酚(HNK)联合青蒿素(ART)对人鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期的调控作用,探讨其可能的机制。方法:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷(TdR,终浓度为2 mmol.L-1)处理16 h,2次PBS洗脱后用RMPI-1640培养基10 h,再次加入终浓度为2 mmol.L-1的TdR处理16 h,PBS洗脱后收集细胞用于下一步的实验研究。HNK(7.5 mg.L-1),ART(7.5 mg.L-1)单独及联合作用于已同步化的CNE-2细胞24 h,同时设立对照组,流式细胞仪检测细胞周期分布的改变;RT-PCR检测cyclin D1,cyclin E1,p27 mRNA表达。结果:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷2次处理后,流式细胞仪检测显示,G1,S,G2期细胞比例分别为(72.64±5.01)%,(24.60±4.35)%,(0.00)%,表明细胞处于G1/S交界处。HNK+ART组、HNK组、ART组的G1期细胞比例分别为(90.78±9.49)%,(67.86±1.59)%,(66.77±2.25)%,提示HNK+ART组较HNK组或ART组显著地将CNE-2细胞阻滞在G1期(P<0.05)。RT-PCR检测显示HNK+ART组、HNK组、ART组的cyclin D1mRNA表达分别为(0.237±0.014),(0.328±0.002)及(0.368±0.007);cyclin E1 mRNA的表达各组依次是(0.445±0.027),(0.572±0.005)及(0.542±0.006);p27 mRNA的表达各组分别是(1.069±0.046),(0.543±0.022)及(0.388±0.004),与单药组比较,HNK+ART组显著下调cyclin D1,cyclin E1 mRNA的表达(P<0.05),显著上调p27 mRNA的表达(P<0.05)。结论:HNK+ART应用以协同方式诱导CNE-2细胞阻滞于G1期,这可能与通过下调cyclin D1及cyckin E1的mRNA表达及上调p27 mRNA表达有关。