大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

采用大鼠可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,应用原位杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤后早期生长反应基因-1(Egr-1)mRNA动态变化,旨在探讨缺血损伤后Egr-1mRNA表达的细胞种类及规律,为脑I/R损伤的病理生理机制提供实验依据。1材料与方法1.1动物分组及模型制备:健康雄性SD大鼠200~250g,由中国医科大学实验动物中心提供。按随机数字表法分为假手术组、局灶性脑缺血2h组及再灌注2、4、22、46、70、118和166h组,每组10只。采用栓线法阻塞大鼠大脑中动脉(MCA)制备I/R损伤模型〔1〕。用体积分数…     

肾上腺髓质素对骨骼肌缺血再灌注损伤的影响

背景:作为一种新发现的内分泌激素,研究表明肾上腺髓质素能在多种重要器官的缺血再灌注损伤中起到保护作用,是否能对骨骼肌缺血再灌注有保护作用有待研究.目的:观察肾上腺髓质素对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/07在湖南师范大学医学院机能实验室、分子生物学实验室完成.材料:健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组,缺血再灌注组,0.1,0.5,1.0 nmol/kg肾上腺髓质素处理组,每组6只.方法:无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h,再灌注3 h,建立后肢骨骼肌缺血再灌注损伤模型.对照组仅暴露出股动静脉,不做血管夹闭和环扎.肢体再灌沣前肾上腺髓质素处理组分别自尾静脉注射0.1,0.5,1.0 nmol/kg肾上腺髓质素生理盐水溶液,对照组及缺血再灌注组注射等量生理盐水.主要观察指标:测定各组血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性;取术侧腓肠肌,测定组织中超氧化物歧化酶、髓过氧化物酶的活性、丙二醛水平并观察骨骼肌组织形态学变化.结果:30只大鼠均进入结果分析.①与对照组比较,缺血再灌注组肌酸激酶、乳酸脱氯酶、丙二醛、髓过氧化物酶值增高(P<0.01),超氧化物歧化酶值降低(P<0.01);腓肠肌超微结构损伤明显加重.②与缺血再灌注组比较,肾上腺髓质素处理组肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛、髓过氧化物酶值减低,超氧化物歧化酶值增高.0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组与缺血再灌注组比较,肌酸激酶、丙二醛的变化无统计学意义(P>0.05),其他均有统计学意义(P<0.05～0.01).③0.5 nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶、髓过氧化物酶、丙二醛值低于0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05),1.0 nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶值低于0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05).0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组腓肠肌超微结构损伤相对加重.结论:肾上腺髓质素可减轻缺血再灌注对骨骼肌造成的损伤,对缺血再灌注骨骼肌具有保护作用.     

肾上腺髓质素与脑缺血再灌注损伤的研究进展

肾上腺髓质素（adrenomedullin，ADM）是日本学者Kitamura等于1993年4月从人嗜铬细胞瘤组织中提取出的一种新的肽类物质，其广泛分布在体内并有多种生物学效应，与许多疾病的发生发展密切相关。ADM具有调节脑循环和血脑屏障功能．对脑血管有较强的舒张效应．在中枢神经系统内作为细胞保护因子．对脑缺血及损伤性脑缺氧起保护作用．从而可防治脑血管及神经变性等疾病。为此，本文复习相关文献，对ADM与脑缺血的相关研究作简要综述如下。[第一段]     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在局灶性脑缺血-再灌注损伤中的表达及作用。方法采用免疫组化染色、原位杂交技术检测缺血3h以及缺血3h、再灌注3、6、24、48和72h大脑中动脉栓塞模型大鼠脑组织VEGF蛋白及mRNA表达。结果正常对照组脑组织有极低水平的VEGF表达，脑缺血后表达主要位于半影区，随缺血及缺血-再灌注时间延长，中心区由表达增强降低至正常水平，半影区表达逐渐增强。结论内源性VEGF表达增强，对局灶性脑缺血-再灌注损伤具有保护作用。     

肾上腺髓质素真核表达载体对皮瓣缺血再灌注损伤的影响

背景：肾上腺髓质素可在心、脑、肾、肝等器官的缺血再灌注过程中起保护作用。目的：观察肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法：构建大鼠肾上腺髓质素真核表达载体,将SD大鼠随机分假手术组、模型组、维拉帕米组、重组质粒组。重组质粒组腹部皮内注射肾上腺髓质素真核表达载体,其余各组注射等量生理盐水,各组注射4次后建立缺血再灌注模型,维拉帕米组于皮瓣内注射维拉帕米。结果与结论：与模型组相比,重组质粒组皮瓣组织中丙二醛、血管内皮素1的含量分别降低了38.50%（P〈0.01）,54.73%（P〈0.01）,超氧化物歧化酶的含量增加了50.67%（P〈0.05）。皮瓣组织学检查结果显示重组质粒组皮瓣炎性细胞浸润与水肿程度也较模型组明显减轻。结果证实肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与减轻脂质过氧化及减少炎症细胞浸润有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注早期DNA修复功能的研究

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注不同时相DNA修复酶Ku70的表达变化及其意义。方法：采用免疫组织化学方法检测大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO)2h再灌注不同时间点缺血脑组织区Ku70的表达情况。结果：正常对照组、假手术组、手术组非缺血侧大脑半球Ku70广泛表达，定位于细胞核；手术组缺血侧尾壳核于再灌注0．5h，额顶叶皮质于再灌注2hKu70阳性细胞数开始减少[分别为(83.3&;#177;5.3)及(105．5&;#177;5．1)个／视野，t=2．561及14．934，P均&;lt;0．05]，于再灌注6h，上述区域Ku70表达水平显著降低[分别为(23．8&;#177;3．8)及(37．8&;#177;4．3)个／视野，t=3．149及20．771，P均&;lt;0．01]，并持续至再灌注48h。结论：大鼠局灶性脑缺血再灌注早期，DNA修复酶Ku70在损伤区域的表达水平降低，提示再灌注早期DNA修复功能降低，在促进缺血再灌注区域细胞损伤中可能起有重要作用。     

肾上腺髓质素真核表达载体对皮瓣缺血再灌注损伤的影响

背景:肾上腺髓质素可在心、脑、肾、肝等器官的缺血再灌注过程中起保护作用.目的:观察肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法:构建大鼠肾上腺髓质素真核表达载体,将SD大鼠随机分假手术组、模型组、维拉帕米组、重组质粒组.重组质粒组腹部皮内注射肾上腺髓质素真核表达载体,其余各组注射等量生理盐水,各组注射4次后建立缺血再灌注模型,维拉帕米组于皮瓣内注射维拉帕米.结果与结论:与模型组相比,重组质粒组皮瓣组织中丙二醛、血管内皮素1的含量分别降低了38.50%(P < 0.01),54.73% (P < 0.01),超氧化物歧化酶的含量增加了50.67%(P < 0.05).皮瓣组织学检查结果显示重组质粒组皮瓣炎性细胞浸润与水肿程度也较模型组明显减轻.结果证实肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与减轻脂质过氧化及减少炎症细胞浸润有关.     

高压氧大鼠脑缺血-再灌注损伤细胞凋亡的作用研究

目的 :证实全脑缺血再灌注损伤 (CIRI)中凋亡的存在及高压氧 (HBO)的治疗作用。方法 :72只 SD大鼠随机分为假手术组、常压空气组、高压空气组和 HBO组。用四血管法制备 CIRI模型 ,缺血 15分钟后再灌注 2小时 ,HBO组每日置于 2 .5 ATA (0 .2 5 MPa)纯氧 (体积分数 95 % )环境中 70分钟 ;高压空气组则置于2 .5 ATA和 2 1%的氧浓度环境。再灌注 72小时后 ,所有大鼠断头取脑。用流式细胞仪 (PI染色 )、原位末端标记法 (TUNEL )检测细胞凋亡情况。结果 :在常压空气组和高压空气组中 ,海马 CA1区 TU NEL染色阳性细胞计数分别为 (10 3± 15 )个和 (96± 12 )个 ,明显多于假手术组和 HBO组的 (5± 3)个和 (17± 6 )个 (P均 <0 .0 1)。在常压空气组和高压空气组 ,流式细胞术显示明显的亚二倍体峰 ,凋亡细胞百分比分别为 (1.0 6± 0 .4 8) %和(0 .87± 0 .5 0 ) % ,明显高于假手术组和 HBO组的 (0 .34± 0 .0 8) %和 (0 .5 7± 0 .37) % (P均 <0 .0 5 )。结论 :在脑缺血再灌注后凋亡机制在海马 CA1区可能有重要作用 ,这可能为防止 CIRI提供一条新的途径。HBO能减少海马 CA1区的细胞凋亡 ,提示 HBO防止 CIRI的机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

脂氧素对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨脂氧素(lipoxin A_4,LXA_4)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后炎症反应的影响.方法 雄性健康SD大鼠48只,体质量200～250 g,随机分为假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I/R组),小剂量脂氧素A_4组(L组)和大剂量脂氧素A_4组(H组).建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型,缺血2 h后拔出线栓实施再灌注.分别于再灌注后24 h观察大鼠神经功能缺损和脑组织病理学变化,测定脑梗死体积,脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量及白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α的表达变化.结果 与I/R组比较,LXA4组缺血/再灌注24 h后神经功能改善,脑梗死体积缩小,MPO活性和MDA含量下降,IL-1β和TNF-α表达水平下调,脑组织病理学损伤减轻.结论 LXA4可能通过抑制缺血/再灌注所致脑组织损伤和促炎细胞因子的表达而起到脑保护作用.     

老龄大鼠脑缺血-再灌注神经细胞凋亡变化规律研究

目的　比较研究青年与老龄大鼠脑缺血再灌注 (I/R)后超微结构与神经细胞凋亡特征。方法　采用线栓法建立急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察缺血 3h及再灌注 3、6、12、2 4和 72 h脑组织超微结构变化及细胞凋亡。结果　老龄大鼠脑缺血 3h和 I/R12 h脑梗死面积较青年大鼠增大。随着 I/R时间延长 ,脑组织细胞损伤逐步加重 ,老龄大鼠较青年大鼠严重。细胞凋亡随着 I/R时间延长而明显增加 ,老龄大鼠出现的早、持续时间长。结论　老年脑缺血再灌注脑梗死面积增大、超微结构损伤和细胞凋亡出现得早且严重。     

黄皮酰胺对高血压局灶性脑缺血-再灌注大鼠Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的观察黄皮酰胺对肾性高血压大鼠(RHR)脑缺血-再灌注后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响,探讨其脑保护作用机制。方法75只RHR被随机分成假手术组、单纯缺血-再灌注组和黄皮酰胺组。采用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注模型,假手术组不造成缺血。用免疫组化法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)分别观察缺血2h后再灌注6、12、24、48和72h脑细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡细胞数。结果①再灌注6h即可见Bcl-2蛋白表达较多,24h达高峰,此后逐渐下降。与单纯缺血-再灌注组比较,黄皮酰胺组Bcl-2蛋白表达于再灌注后各时间点均明显增高,差异均有显著性(P均<0.01)。②再灌注6h后有较多凋亡细胞,于72h达高峰。与单纯缺血-再灌注组比较,再灌注6-24h黄皮酰胺组凋亡细胞均显著减少(P均<0.01),但再灌注48h后细胞凋亡的抑制作用不明显(P均>0.05)。假手术组及缺血-再灌注组的非缺血侧无Bcl-2阳性细胞,仅见0-2个凋亡细胞。结论局灶性脑缺血-再灌注后Bcl-2表达显著增高,细胞凋亡参与了脑缺血-再灌注损伤的过程。黄皮酰胺能显著上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,并可能与Bcl-2协同抑制细胞凋亡,这可能是黄皮酰胺脑保护作用的机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血 再灌注损伤神经细胞凋亡的调控

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在局灶性脑缺血再灌注损伤中对缺血后神经细胞凋亡的调控机制及作用。方法在缺血及再灌注不同时间点,采用免疫组化及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测缺血中心区及半影区内bFGF蛋白及mRNA表达的动态变化。结果缺血半影区bFGF蛋白及mRNA达表明显增加,缺血中心区表达略有增加。结论bFGF的表达趋势与缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡趋势相符,说明bFGFF对神经细胞有保护和修复作用。     

流式细胞术检测局灶性脑缺血再灌注Bcl-xL和Bax蛋白表达

目的：探讨Bcl-xL、Bax在局灶性脑缺血－再灌注中的表达及作用。方法：用线栓法复制大脑中动脉脑缺血－再灌注模型,流式细胞术（FCM）检测Bcl-xL、Bax蛋白表达。结果：缺血3小时再灌注,随缺血－再灌注时间延长,半影区Bax表达逐渐增强,再灌注24和48小时达高峰,而Bcl-xL表达早期增强后即呈下降趋势,Bcl-xL/Bax比率呈动态变化。结论：Bcl-xL表达增高,有利于促进神经细胞存活,Bcl-xL与Bax比率的转变,可促进神经细胞凋亡。     

神经生长因子预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注损伤脑神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤的脑保护作用的可能机制及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑I/R损伤模型。采用NGF侧脑室注射法进行预处理。沙土鼠30只随机分为5组,每组6只:假手术组(A组)、I/R损伤组(B组)、NGF预处理12、24和48h组(C、D、E组),除A组外各组分别于脑缺血20min、再灌注72h后处死取标本。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区凋亡神经细胞,用免疫组化法检测凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与B组比较,NGF预处理各组可显著减少沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区神经细胞凋亡数目(P均<0.05),诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白的表达(P均<0.05),其中以NGF预处理48h时脑皮质及海马CA1区细胞凋亡指数和Bax蛋白表达的阳性细胞指数最低,Bcl-2蛋白表达的阳性细胞指数最高。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠全脑I/R损伤引起的神经细胞凋亡,而以NGF预处理48h对脑保护效果最好;其抑制神经细胞凋亡的机制可能是通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2及Bax的不同表达来发挥作用。     

垂体腺苷环化酶激活肽对缺血再灌注脑神经元凋亡的作用

目的:观察垂体腺苷环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptide,PACAP)对缺血再灌注脑神经元凋亡的防治作用。方法:利用四血管结扎法,建立老龄大鼠脑缺血再灌注模型,侧脑室注射PACAP,观察脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,计数海马CA1区存活和凋亡神经元数目,电镜观察神经元的超微结构变化。结果:PACAP治疗后脑组织MDA含量为(1.35±0.39)nmol/mg,SOD和GSH-Px活性分别为(115±20)NU/mg、(10.3±2.0)U/mg,与缺血再灌注组有明显差异(P<0.05),海马CA1区存活和凋亡神经元数目为48.8±4.3,14.3±2.9,能促进神经元存活和减轻凋亡损伤(P<0.01),保护超微结构。结论:PACAP的保护作用可能与其降低脑组织氧自由基水平,提高抗氧化酶活性,防止神经元凋亡有关。     

银杏叶提取物对肾缺血-再灌注后细胞凋亡的影响

目的:观察银杏叶提取物对大鼠肾缺血-再灌注后细胞凋亡的影响.方法:采用动脉夹闭大鼠双侧肾蒂45 min、再灌注24 h的方法制成急性肾缺血-再灌注模型.光、电镜观察细胞结构改变;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况,流式细胞仪定量分析细胞凋亡;测定血浆肌酐、尿素氮,并观察肾功能变化.结果:缺血-再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多;银杏叶提取物处理组较缺血-再灌注组凋亡细胞数明显减少,组织损害明显减轻.结论:银杏叶提取物预防给药能减轻肾缺血-再灌注损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡有关.     

远程缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨远程缺血预处理(RIPC)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤的影响。方法SD雄性大鼠70只,随机分组,每组10只。对照组仅行单纯缺血后再灌注;RIPC组按RIPC与脑缺血间隔时间不同分为30min及1、2、12、24和48h组,即反复3次夹闭双侧股动脉造成肢体缺血5min、再灌注5min后,分别间隔30min及1、2、12、24和48h后,行大脑中动脉栓塞(MCAO)120min、再灌注24h。对各组动物进行神经功能缺损评分,然后行氯化三苯四唑(TTC)染色,计算脑梗死容积。结果与对照组比较,RIPC1、2和24h组神经功能缺损评分显著下降,差异有显著性(P均<0.05);而RIPC30min、12h和48h组与对照组比较差异均无显著性(P均>0.05)。脑梗死容积百分比RIPC1h组〔(17.9±7.5)%,P=0.016〕、2h组〔(18.3±11.2)%,P=0.019〕和24h组〔(20.2±11.9)%,P=0.047〕均明显小于对照组〔(30.5±9.8)%〕;而RIPC30min、12h和48h组与对照组比较差异无显著性(P均>0.05)。结论RIPC对大鼠局灶性脑I/R损伤有保护作用,其保护时程为预处理后1～2h,24h后再次出现。     

羚蝎胶囊对局灶性脑缺血-再灌注大鼠模型循环内皮细胞的影响

目的 :观察羚蝎胶囊对脑缺血再灌注损伤模型大鼠循环内皮细胞 (CEC)的影响 ,探讨其治疗脑梗死的可能机制。方法 :36只 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和羚蝎胶囊治疗组 ,用大脑中动脉栓塞 (MCAO)法复制大鼠局部脑缺血再灌注模型 ,观察各组大鼠神经功能缺损评分及血浆 CEC的变化。结果 :羚蝎胶囊组再灌注后 3h神经功能缺损评分〔(2 .30± 0 .34)分 )〕显著低于模型组同期〔(3.10± 0 .2 3)分〕;羚蝎胶囊组血浆CEC水平〔(5 .5 7± 0 .89)个 / 0 .9μl〕较模型组低〔(6 .38± 0 .91)个 / 0 .9μl,P<0 .0 5〕。结论 :羚蝎胶囊能降低局部脑缺血再灌注损伤模型大鼠的 CEC数量 ,这可能是该方治疗脑梗死的机制之一。