乙酰胆碱对人表皮细胞冷存的影响基础研究

目的：探讨乙酰胆碱（ Ach）对人表皮细胞冷存活力的影响。方法：应用人表皮细胞的分离、培养技术,并进行 MTT检测、病理切片以及电镜检测等手段进行观察。结果：不同浓度的 Ach对冷存的表皮细胞均有一定的保存活力作用,其中以 10－ 8～ 10－ 10mol/L的浓度为最佳。结论：认为 Ach对冷存中的人表皮细胞有一定的保护作用,它可提高表皮细胞的保存活力。     

神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞增殖及表皮生长因子基因表达的作用

目的：探讨感觉神经肽P物质（SP）对离体培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用及其对表皮生长因子（EGF）基因表达的调控作用。方法：采用MTT法测定SP对肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用；采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测SP对成纤维细胞EGF基因表达的调控作用，观察时间及剂量－效应关系。结果：10^-9～10^-5mol/L的SP在体外对肉芽组织成纤维细胞均具有明显的促增殖作用（P＜0．01），且具有明显的剂量依赖性（γ=0.594,P＜0．01），EGF抗体只能部分抑制这一作用（与对照组比较，P＜0．01；与10^-7mol/L SP组比较，P＜0．05）。10^-7mol/L SP可诱导成纤维细胞EGF mRNA的表达，在作用后6h与对照组比较，差异有非常显著性意义（P＜0．01）；SP在10^-8～10^-6mol/L范围内可以显著促进成纤维细胞EGF mRNA表达，在10^-7mol/L达到峰值，当浓度＞10^-7mol/L时，其促EGF mRNA表达的效应强度随浓度升高而有所降低，至10^-5mol/L时与对照组比较，差异无显著性意义。结论：SP对肉芽组织成纤维细胞具有明显的促增殖作用，这种作用与其诱导成纤维细胞EGF表达有关。     

吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42刺激BV-2细胞产生一氧化氮的抑制作用

目的研究吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42（A-β1—42）刺激小胶质细胞（MG）释放一氧化氮（N0）的抑制作用。方法应用高度纯化的BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，应用不同浓度吲哚美辛（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）与20μmol／L Aβ1—42单独或同时培养12h，测定细胞上清NO含量及细胞iNOS活性；RT-PCR法测定BV-2细胞iNOS mRNA的表达。结果吲哚美辛单独作用对BV-2细胞产生NO、iNOS活性及iNOS mRNA表达无明显作用。Aβ1—42可以刺激产生NO、提高细胞iNOS酶活性、增加iNOS mRNA表达，这些作用均可被吲哚美辛所抑制，吲哚美辛浓度为10^-7～10^-5mol／L时抑制作用较为明显。结论在体外吲哚美辛可以降低Aβ1—42介导的BV-2细胞iNOS活性及iNOS mRNA表达，从而减少NO的产生，上述抑制作用可能参与了吲哚美辛在AD治疗中的神经元保护机制。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察不同浓度地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化、增殖能力及凋亡率的影响。方法以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞进行体外培养,以1×10^-9、1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L4种不同浓度地塞米松分别处理细胞。检测各组细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性;RT-PCR法检测骨桥蛋白（OPN）基因的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定各组细胞的增殖率;流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果低浓度（1×10^-9mol／L）地塞米松对ALP的表达无显著作用（P〉0．05）,而1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可明显增加ALP的活性（P〈0．01）;所有实验组的hMSCs均有OPN mRNA表达,其表达强度随着地塞米松浓度增加而增强;1×10^-9mol／L地塞米松对细胞增殖无明显影响（P〉0．05）,1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0．01）;体外培养的hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0．01）。结论1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可显著增强hMSCs成骨分化能力,同时抑制细胞增殖并促进其凋亡。     

六亚早基二乙酰胺体外诱导人粘液表皮样癌细胞分化的实验研究

用六亚甲基二乙酞胺（ＨＭＢＡ）作为分化诱导剂，对人涎腺粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１细胞进行体外诱导（诱导浓度１ｍｍｏｌ／Ｌ），探讨ＨＭＢＡ对粘液表皮样癌细胞的诱导分化作用。实验经细胞生长动力学、细胞ＤＮＡ含量、核仁区嗜银蛋白染色指标观察，显示在ＨＭＢＡ作用下ＭＥＣ－１细胞有向成熟细胞分化的趋势，而且诱导所需浓度低，分化作用明显，有进一步研究价值。     

雷公藤甲素及地塞米松对哮喘豚鼠体外嗜酸细胞凋亡与Fas mRNA表达的影响

目的：观察雷公藤甲素及地塞米松在体外对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中不同密度嗜酸细胞（Eos）凋亡及Fas mRNA表达的影响，探讨其促进哮喘Eos凋亡的机制。方法：卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型48h后行支气管肺泡灌洗，分离不同密度Eos。雷公藤甲素（TP）（10^-7～10^-4mot／L）或地塞米松（DM）（10^-10～10^-5mot／L）干预24h，原位杂交检测Eos的Fas mRNA表达。TUNEL法检测细胞凋亡。结果：TP或DM干预24h，Eos凋亡增加，Fas mRNA表达增强，并且呈剂量依赖性。Fas mRNA的表达与Eos凋亡呈正相关。结论：TP及DM可提高Fas mRNA表达，促进Eos凋亡。Fas可能是TP及DM调节Eos凋亡的通路之一。     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞PAI-1 基因表达的调节作用及其机制

为探讨血管紧张素Ⅱ与系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAI－1）基因表达的关系，从健康成人肾（肾移植配型不合）培养肾小球系膜细胞，经过10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L浓度的血管紧张素Ⅱ刺激后，分别检测系膜细胞血管紧张素ⅡAT1和AT2受体基因表达以及PAI－1基因表达，并测定培养上清中纤溶酶原激活物的活性。结果发现，在血管紧张素Ⅱ刺激下，系膜细胞AT1受体mRNA表达明显增强，而AT2受体的基因表达不论是在正常状态下，还是在血管紧张素Ⅱ刺激后均未检测到；血管紧张素Ⅱ诱导48h后，系膜细胞PAI－1的基因表达显著增强，并呈现浓度依赖性，而培养上清中纤溶酶原激活物的活性则下降。说明血管紧张素Ⅱ能显著促进系膜细胞PAI－1基因的表达，其作用可能是通过AT1受体介导的。     

稀土元素La、Gd和Ce对培养大鼠细胞生物学效应的研究

目的 在细胞水平上研究稀土元素（REE）La,Gd和Ce对培养大鼠细胞的生物学作用及机。方法 采用同位素示踪、质子激发X荧光分析（PIXE）结合生化及细胞学等技术观察La对细胞的生物学作用,La,Gd及Ce的亚细胞分布及Gd,Ce对细胞钙含量及钙内流的影响。结果 La^3 在10^－10（或10^-9)-10^-6mol/L时促进细胞蛋白质合成、线粒体琥珀酸脱氢酶活性增加、DNA合成以及S期细胞比率增加,但La^2 在高剂量时（10^-4-10^-3mol/L)降低平滑肌细胞总蛋白质含量、抑制线粒体琥珀酸脱氢酶酸活性以及S期细胞比率减少。通过PIXE发现La,Gd,Ce可进入细胞,且在核内含量最高,其次为胞膜。Gd和Ce使细胞内钙含量增加,促进细胞钙内流。结论（1）La^3 对细胞有明显剂量－效应关系,在10^-10(或10^-19)-10^-6mol/L剂量范围内有促进细胞增殖作用。在10^-4-10^-3mol/L时有细胞毒性作用。（2）REE可进入细胞,且在核内富集。（3）REE可促进细胞外钙进入细胞。     

17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌Mc3增殖周期的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对体外培养的人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系增殖周期的影响。方法 以不同浓度、时间的E2处理Mc3细胞,采用MTT法、流式细胞术、免疫组织化学染色法,检测E2对人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系细胞群体倍增时间、细胞周期分布以及对CyclinDl、P27^Kip1阳性表达的影响。结果 浓度分别为10^-9、10^-8、10^-7mol／L的E2作用于细胞第5天时,MTT法测得E2处理组细胞增殖促进率分别为29％、54％、59％,CyclinDl的阳性表达率分别增加了16％、9％、24％,P27^Kip1。的阳性表达率分别减少了33％、30％、55％。流式细胞术检查结果显示,10^-7mol／L的E2处理12、18、24h后,细胞周期中S期细胞比相应对照组分别增加了11．3％、6．6％、46．7％,细胞增殖指数分别增加了6．0％、3．6％、205．5％。结论 生理浓度的E2可以促进CyclinD1的表达、降低．P27^Kip1的阳性表达,从而促进细胞周期Gη／s期转换,增加S期细胞数量,加速DNA合成,刺激肿瘤发生、发展。     

表皮细胞培养最佳条件的探索

目的：研究表皮细胞培养的最佳条件,为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法：以DMEM作为基础培养液,改变培养条件后,计数2周内克隆形成数,检测细胞增殖能力,确定最佳条件。结果：表皮细胞以分离酶分离可得到大多数基底细胞,在培养液pH值为7．0－7．2,钙离子浓度为0．4mmol/L,血清浓度为18％,温度为36℃,CO2浓度为6％时,表皮细胞克隆形成数量高。结论：在最佳培养条件下,表皮细胞生长状态良好,为人工表皮的构建奠定了基础。     

利用HaCaT细胞构建新型组织工程皮肤检测模型

 目的 构建以人永生化角质形成细胞HaCaT为种子细胞的组织工程皮肤模型。方法 以丝素蛋白修饰聚酯聚酰胺无纺布为支架,以人永生化角质形成细胞和成纤维细胞为种子细胞,构建检测用的新型组织工程皮肤模型。选取10 种化学品作为检测物质,局部接触皮肤模型表面15 min,应用MTT 比色法测定细胞相对活力。结果 3个不同批次的模型中,根据相对细胞活力值作为判定,构建的新型检测模型能够判断出8种化学品的刺激性,加入IL-1α试验后提高了模型的准确性,准确率达到75%。结论 这个新的体外模型提供了有效的试验结果并证明了模型的可行性。同时它应该使用更多数量的物质进行进一步的验证,并测试在不同的实验室以适当评估重现性。     

丝素蛋白对表皮细胞生长的影响

目的：了解丝素的生物学性能和丝素对表皮细胞生长的影响。方法：试验组采用培养液ＤＭＥＭ 加５％ 丝素蛋白原液,对照组采用培养液ＤＭＥＭ 加５％ 生理盐水的方法,对表皮细胞培养结果进行比较观察;观察指标为表皮细胞形态、细胞生长曲线、３Ｈ－ 胸腺嘧啶核苷测定等。结果：培养后３ 天试验组大量细胞贴壁生长,而对照组在培养后５ 天才大量贴壁生长;试验组细胞数在５ 天明显增多,对照组在７ 天才迅速增加;３Ｈ－ 胸腺嘧啶核苷测定试验组及对照组的增殖活力均在第７ 天达高峰,但同一时相点试验组增殖活力明显高于对照组。结论：丝素蛋白对表皮细胞生长具有促进作用。     

GDF 11改善老龄鼠内皮依赖性血管舒张功能的实验研究

  目的 探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11, GDF11)对老龄小鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响。 方法 选择20只18个月龄C57小鼠随机分为实验组(GDF11组,n=10)和对照组(Vehi组,n=10), GDF11组按0.3 mg/(kg·d)的剂量腹腔注射重组GDF11,Vehi组注射等量生理盐水。4周后取材,检测脂代谢相关的血液学指标,分离小鼠的胸主动脉,测定血管舒张功能和主动脉Samd2/3的磷酸化水平。 结果 与Vehi组比较,GDF11干预显著增强乙酰胆碱(Ach)诱导的内皮依赖性血管舒张功能[10^-6 mol/L Ach: (37.1±5.2)% vs (59.7±4.3)%;10^-5 mol/L Ach: (48.2±4.0)% vs (78.4±5.6)%;10^-4 mol/L Ach: (61.1±4.7)% vs (90.2±7.4)%],降低血清中三酰甘油的水平[(76.6±11.2) vs (64.5±10.4) mg/dl],升高脂联素的浓度[(11.9±1.1) vs (14.2±1.7) μg/ml],并能提高主动脉Samd2/3的磷酸化水平[Smad2: (1.00±0.05) vs (1.78±0.10)]、Smad3 [(1.00±0.09) vs (1.57±0.12)]。 结论 GDF11对血管内皮细胞有保护作用。     

晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤

目的 研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物(AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制。方法 用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白(BSA)体外制备AOPP-BSA,将人血管内皮细胞株ECV304与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP-KSA共同培养,用MTT法测定细胞活性,用VICTOR Wallac 1420多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量。结果 AOPP-BSA使血管内皮细胞活性降低,其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP-BSA的浓度有关;AOPP-BSA刺激内皮细胞生成活性氧,细胞内活性氧的生成量随KSA氧化程度和AOPP-BSA浓度增加而升高。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞,可使AOPP-BSA诱导产生的活性氧减少53％,并可保护细胞免受AOPP-BSA造成的细胞损伤。结论 晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤。     

Preservation of food products by irradiation

The use of irradiation to preserve food has the potential to significantly enhance our capacity to maximize the quality and quantity of the food we consume. In a world in which distribution of food occurs across continents and in which malnourished populations are in dire need of basic food products, any safe, effective, and efficient means of preserving food is more than welcome. Irradiation, as a method for food preservation, has been studied for more than 30 years. This discussion focuses on this most recent method for the preservation of food with particular emphasis on its effects on the safety, nutritive, and aesthetic values of the food preserved by irradiation. The use of ionizing radiation as a method to preserve foods is one that has been demonstrated to be effective for a variety of food classes. Irradiation offers a means to decontaminate, disinfest, and retard the spoilage of the food supply. At the same time, it appears that the wholesomeness of these food products is maintained. Nutritive value can be sustained by use of effective doses of radiation. Concerns over the safety of irradiated food are rooted in questions regarding the potential induction of radioactivity, harmful radiolytic products, and pathogenic radiation-resistant or mutant strains of microorganisms. Research findings have allayed concerns over safety. However, more research is necessary to conclusively resolve these safety issues. Food irradiation is a promising technology that has and will contribute to our ability to feed the people of this world. This technology is but one of many available ways to preserve our greatest natural resource, the food supply. Enhancement of the ability to preserve food by irradiation will facilitate the distribution of food from fertile developed regions to the malnourished peoples of underdeveloped countries. It is in diminishing the problem of malnourishment and starvation that irradiation as a means to preserve food may find the greatest acceptance.     

运动疲劳的生物化学机理新探

本文用不同实验方法从不同角度研究了运动疲劳与乳酸,运动疲劳与Ach以及乳酸与Ach的相互关系,指出疲劳时肌肉中的Ach量的堆积可导致肌肉工作能力下降。作者认为,Ach堆积与乳酸增加的并存。是疲劳的重要成因。     

Petrous surgical approaches in tumors of the cerebellopontine angle]

Three petrous incisions, performed by an ENT-neurosurgery team, can be used for the resection of tumours of the cerebellopontine angle: transpetrosal incisions (posterior translabyrinthine and transcochlear) which provide large access to the IAM and the posterior surface of the petrous bone, but they sacrifice hearing. The suprapetrosal incision (reserved for tumours in the meatus) and the mastoidoretrosigmoid incision (for tumours less than or equal to 20 mm) preserve the labyrinth in an attempt to preserve hearing. The principal objectives of surgical resection of tumours of the cerebellopontine angle (85% of which are acoustic neuromas) are total resection (to preserve the vital prognosis) and preservation of facial nerve function. Attempts to preserve hearing must be confined to cases selected by a complete clinical otological and audiometric examination.     

Role of stress responses in human cell survival following exposure to ultraviolet C radiation

PURPOSE: To investigate in human skin and other cells the role of tyrosine kinase and protein kinase-C (PKC) in eliciting cell-signalling responses to UV radiation (UVR) that affect the survival of irradiated cells. MATERIALS AND METHODS: The survival of HeLa S3 cells, NCTC 2544 human keratinocytes and A431 human epidermal carcinoma cells was measured following incubation with various tyrosine kinase or PKC inhibitors and exposure to UVC (254nm) radiation. In addition, Western blotting measured PKC isozyme expression in human keratinocytes following UVC exposure. RESULTS: It was confirmed that inhibition of tyrosine kinase activation reduces the survival of UV-irradiated HeLa S3 cells. However, no effect was seen on the survival of either NCTC 2544 human keratinocytes or A431 human epidermal carcinoma cells. In contrast, specific inhibition of PKC reduced the survival of UV-irradiated keratinocytes but had no effect on HeLa cells. Comparison of the effects of different inhibitors in keratinocytes suggested that this effect was mediated mostly through PKCmu and PKClambda/iota. In addition, keratinocyte exposure to UVC induced large and temporally distinct increases in PKCmu and PKClambda/iota. CONCLUSIONS: The survival of NCTC 2544 keratinocytes, but not HeLa S3 cells, following UVC exposure is mediated by signalling through PKC, mostly PKCmu and PKClambda/iota. Further study is required to confirm these results in normal human keratinocytes.     

Role of stress responses in human cell survival following exposure to ultraviolet C radiation.

Purpose : To investigate in human skin and other cells the role of tyrosine kinase and protein kinase-C (PKC) in eliciting cell-signalling responses to UV radiation (UVR) that affect the survival of irradiated cells. Materials and methods : The survival of HeLa S3 cells, NCTC 2544 human keratinocytes and A431 human epidermal carcinoma cells was measured following incubation with various tyrosine kinase or PKC inhibitors and exposure to UVC (254nm) radiation. In addition, Western blotting measured PKC isozyme expression in human keratinocytes following UVC exposure. Results : It was confirmed that inhibition of tyrosine kinase activation reduces the survival of UV-irradiated HeLa S3 cells. However, no effect was seen on the survival of either NCTC 2544 human keratinocytes or A431 human epidermal carcinoma cells. In contrast, specific inhibition of PKC reduced the survival of UV-irradiated keratinocytes but had no effect on HeLa cells. Comparison of the effects of different inhibitors in keratinocytes suggested that this effect was mediated mostly through PKC μ and PKC λ/ ?. In addition, keratinocyte exposure to UVC induced large and temporally distinct increases in PKC μ and PKC λ/ ?. Conclusions : The survival of NCTC 2544 keratinocytes, but not HeLa S3 cells, following UVC exposure is mediated by signalling through PKC, mostly PKC μ and PKC λ/ ?. Further study is required to confirm these results in normal human keratinocytes.     

盐酸小檗碱对血管内皮M胆碱受体作用的研究

盐酸小檗碱在≤０．１μｍｏｌ／Ｌ浓度时，对乙酰胆碱松弛带内皮血管环的作用有剂量依赖性的增强；当浓度≥２０μｍｏｌ／Ｌ时，则对带内皮血管环具浓度依赖性的直接舒张作用，而去内皮或阻断Ｍ受体后均完全被抑制。本品还引起离体气管条的浓度依赖性收缩，而阿托品可竞争性地抑制此作用。放射配基一受体结合实验显示，Ｂｅｒ对大鼠唾液腺、大脑皮质和心脏的Ｍ受体均有中度亲和力