中药三甲益肝冲剂预防鼠肝纤维化

目的探讨中药三甲益肝冲剂对大鼠肝纤维化的预防作用．方法以四氯化碳造成大鼠肝纤维化模型，造模同时以三甲益肝冲剂（冲剂组）灌胃，观察其对大鼠肝纤维化的预防作用，并与促肝细胞生长素（ｐＨＧＦ）组和大黄庶虫虫丸预防组（虫丸组）比较．血清肝纤维化指标———透明质酸（ＨＡ）、Ⅳ型胶原（ⅣＣ）和层粘连蛋白（ＬＮ）用ＲＩＡ法测定，并作肝组织病理学检查．统计学处理分别采用方差分析和秩和检验．结果与模型组相比，冲剂组大鼠血清ＡＬＴ，ＡＳＴ，Ｇｌｂ，ＨＡ，ⅣＣ及ＬＮ均明显降低（Ｐ＜００１），肝纤维化程度降低（Ｐ＜００１）．与虫丸组相比，冲剂组大鼠血清ＨＡ及ＬＮ明显较低（Ｐ＜００５），倍量冲剂组ＡＬＴ降低（Ｐ＜００５）和ＨＡ，ＬＮ降低（Ｐ＜００１）有明显差异．结论三甲益肝冲剂对大鼠实验性肝纤维化有明显预防作用，其效果优于大黄庶虫虫丸．     

花生四烯酸和亚油酸对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨花生四烯酸和亚油酸对大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ）增殖的影响．方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以ＭＴＴ比色法观察花生四烯酸和亚油酸对ＨＳＣ增殖效应．结果花生四烯酸和亚油酸可影响ＨＳＣ的增殖．花生四烯酸２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ有增殖作用（Ｐ＜００１）,而５０,１００ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖有抑制作用（Ｐ＜００１）,倒置显微镜观察可见ＨＳＣ增殖非常缓慢,ＨＳＣ细胞轮廓非常明显,胞质粗糙,内有颗粒沉积,１２５,６２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖无影响．亚油酸６２５,１２５,２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖无明显影响（Ｐ＞００５）,但随着浓度增大,５０,１００ｍｇ／Ｌ则促进ＨＳＣ增殖（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）．结论花生四烯酸和亚油酸在一定浓度下可促进肝星状细胞增殖,高浓度对ＨＳＣ有毒性作用,其可能通过脂质过氧化作用而与脂肪肝肝纤维化的发生有关     

基质金属蛋白酶—2在肝纤维化时的表达

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）特异性地分解细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）,对胶原的沉积和组织结构的改建具有重要作用。肝星形细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ,又称ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌ,ｌｉｐｏｃｙｔｅ）不仅是肝纤维化时合成ＥＣＭ的主要来源［１］,而且能表达和分泌基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）［２］,直接参与ＥＣＭ的代谢。本文分别测定了正常与ＣＣｌ４诱导的肝纤维化大鼠肝组织和ＨＳＣ的ＭＭＰ…     

甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）和极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｉｏｎ，ＶＬＤＬ）对大鼠肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌａｔｅｃｅｌ，ＨＳＣ）增殖的影响。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流，Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠ＨＳＣ，并以ＭＴＴ比色法观察ＴＧ和ＶＬＤＬ对ＨＳＣ增殖效应。结果ＴＧ和ＶＬＤＬ可影响ＨＳＣ的增殖，ＴＧ和ＶＬＤＬ浓度分别在１２５ｍｇ／Ｌ和（２５～１００）ｍｇ／Ｌ时对ＨＳＣ增殖有促进作用（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。结论体外细胞培养表明，ＴＧ和ＶＬＤＬ可促进ＨＳＣ增殖，其与脂肪肝肝纤维化的发生可能有关。     

脾肾阴虚证血清氧自由基损伤初探

目的从氧自由基损伤及机体抗氧化能力方面探讨脾阴虚证、肾阴虚证患者的客观病理学改变．方法观察脾阴虚组３０例，肾阴虚组１６例和健康人对照组１６例．取受检者清晨空腹静脉血分离血清后分别测定：总ＳＯＤ，Ｃｕ，ＺｎＳＯＤ（黄嘌呤氧化酶法）；ＭＤＡ（ＴＢＡ法）；总抗氧化能力（比色法）．ＶｉｔＣ（２，４ＤＮＰＨ比色法）；ＶｉｔＥ（高效液相色谱法）；Ｃｕ，Ｚｎ（原子吸收法）；数据以均数±标准差表示．用单因素方差分析，Ｓｃｈｅｆｅ法作两两比较，Ｐ＜００５为显著性检验界值．结果总ＳＯＤ及Ｃｕ，ＺｎＳＯＤ肾阴虚组低于脾阴虚与健康人组（Ｆ＝１７６９和３０３２，Ｐ＜００５）．脾阴虚组和肾阴虚组ＭＤＡ高于健康人组（Ｆ＝４９１，Ｐ＜００５），而总抗氧化能力却低于健康人组（Ｆ＝５９０１，Ｐ＜００５）．ＶｉｔＥ肾阴虚组低于脾阴虚组和健康人（Ｆ＝６７２，Ｐ＜００５）．结论脾阴虚证、肾阴虚证患者都有一定程度的氧自由基损伤，但在形成的原因和机体防御消除的机制等方面是不同的     

实验性肝纤维化中碱性成纤维细胞生长因子的免疫组化研究

目的研究实验性肝纤维化时碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在肝脏的表达．方法实验大鼠分肝硬变组（２４只）和正常对照组（８只），肝硬变组采用复合因子制作出肝硬变动物病理模型，通过免疫组化研究了ｂＦＧＦ在肝纤维化过程中的表达．同时还通过结蛋白（Ｄｅｓｍｉｎ，ＤＭ），ＥＤ１的免疫组化变化，反映肝纤维化过程中储脂细胞和肝枯否细胞增生情况．结果随着肝纤维化发展，ＤＭ，ＥＤ１和ｂＦＧＦ阳性细胞在肝窦，坏死区和纤维间隔逐渐增多，ｂＦＧＦ阳性细胞主要是在那些ＤＭ阳性细胞和ＥＤ１阳性细胞中表达，定量分析，各组均高于正常组，以６周组最高，ＥＤ１阳性细胞与ｂＦＧＦ和ＤＭ阳性细胞的变化成正相关关系（ｒ＝０９７７和ｒ＝０９８９，Ｐ＜００５），ｂＦＧＦ阳性细胞和ＤＭ阳性细胞的变化也成正相关关系（ｒ＝０９９７，Ｐ＜００５）．结论在肝纤维化发生时由于肝枯否细胞和储脂细胞的增生及二者表达ｂＦＧＦ增加，再通过ｂＦＧＦ的自分泌和旁分泌作用进一步造成储脂细胞的增生和ＥＣＭ的产生增加．     

肝性脑病患者脑脊液生长抑素和甲硫氨酸脑啡肽含量变化及意义

为探讨脑肠肽（ＢＧＰ）在肝性脑病（ＨＥ）发生和发展中的作用，应用放射免疫法测定了１０例ＨＥ患者和１０例无肝性脑病对照者脑脊液（ＣＳＦ）生长抑素（Ｓｓ）、甲硫氨酸脑啡肽（ＭＥ）的含量。结果表明，ＨＥ患者ＣＳＦＭＥ含量明显减低（Ｐ＜０．０５），ＳＳ含量明显增加（Ｐ＜０．０５）。ＭＥ含量与ＨＥ程度呈显著负相关（Ｐ＜＜０．０５），与ＣＳＦ糖和蛋白含量关系不密切（Ｐ＞０．０５）。随ＨＥ患者存活时间延长，ＭＥ含量渐增加（ｐ＜０．０１）。提示ＢＧＰ可能参与ＨＥ的发生发展并能在ＣＳＦ中反应出来，ＨＥ患者的一些神经精神症状亦可能与中枢神经元释放ＢＧＰ异常有关。     

IFNγ对培养大鼠肝细胞DNA和胶原的影响

目的观察ＩＦＮγ对培养大鼠肝细胞ＤＮＡ和胶原的影响．方法应用３Ｈ胸腺嘧啶核苷和３Ｈ脯氨酸掺入量及掺入抑制率测定的方法．结果在５ｋＵ／Ｌ～１００ｋＵ／Ｌ浓度范围内的ＩＦＮγ能明显抑制培养大鼠肝细胞ＤＮＡ（１００ｋＵ／Ｌ为６４６％）和胶原（１００ｋＵ／Ｌ为６７４％）合成，抑制程度与浓度和时间呈正相关（Ｐ＜００１）．结论ＩＦＮγ抗肝纤维化作用的机制之一是能抑制肝细胞增殖及胶原合成     

肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞整合素α_6β_1及粘着斑激酶表达的变化

目的 研究正常及肝纤维化时大鼠肝窦内皮细胞（ＳＥＣ）表面层粘连蛋白（ＬＮ）的整台素受体α６β１及粘着斑激酶（ＦＡＫ）的变化。方法 用胶原酶原位灌注、Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心法分离正常及四氯化碳（ＣＣｌ４）实验性大鼠肝纤维化模型中的ＳＥＣ,并进行体外培养。采用细胞－ＥＬＩＳＡ和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定的方法,分别观察ＳＥＣ细胞表面整合素α６β１表达及ＦＡＫ活性的变化。结果 正常大鼠ＳＥＣ细胞表面几乎不表达整合素α６β１;在肝纤维化时ＳＥＣ细胞表面α６β１蛋白表达却明显增加（Ｐ＜０．０５）,且细胞中ＦＡＫ活性明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论 在肝纤维化时ＳＥＣ细胞表面整合素α６β１的表达及ＦＡＫ活性明显增高,可能在ＳＥＣ的形态及功能改变中起重要作用。     

自由基在实验性胃癌及癌前病变发生中的作用

目的探讨自由基在胃癌及其癌前病变发生中的作用．方法将１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为２组，实验组（７０只），给予１００ｍｇ／Ｌ甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）水溶液自由饮用３０ｗｋ，对照组（３０只）饮用自来水．选５个时相点，动态观察ＭＮＮＧ诱发实验性胃癌及其癌前病变过程中大鼠体内丙二醛（ＭＤＡ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）等的变化情况．结果在实验组，ＭＤＡ平均含量在５２ｗｋ非常显著地大于０ｗｋ（Ｐ＜００１），并显著地大于１６ｗｋ以前（Ｐ＜００５）．胃癌组织ＭＤＡ含量显著高于胃癌癌前病变组织（Ｐ＜００５）．癌组织ＬＰＯ的含量显著高于癌前病变组织（Ｐ＜００５）．实验组，总ＳＯＤ和ＣｕＺｎＳＯＤ活性在５２ｗｋ明显低于１６ｗｋ之前（分别为Ｐ＜００５和Ｐ＜００１）．癌组织ＣｕＺｎＳＯＤ含量非常显著地小于正常胃粘膜（Ｐ＜００１），亦明显低于胃粘膜异型增生和肠上皮化生（Ｐ＜００５）．在３０ｗｋ和５２ｗｋＧＳＨＰＸ活性显著低于１６ｗｋ以前．结论自由基在实验性胃癌及其癌前病变发生中具有一定作用，自由基清除剂可能对胃癌的综合防治具有积极意义     

Primary hepatocyte culture in collagen gel mixture and collagen sandwich

AIM: To explore the methods of hepatocytes culture in a collagen gel mixture or between double layers of collagen sandwich configuration and to examine the functional and cytomorphological characteristics of cultured hepatocytes. METHODS: A two-step collagenase perfusion technique was used to isolate the hepatocytes from Wistar rats or newborn Chinese experimental piglets. The isolated hepatocytes were cultured in a collagen gel mixture or between double layers of collagen sandwich configuration respectively. The former was that rat hepatocytes were mixed with type I rat tail collagen solution till gelled, and the medium was added onto the gel. The latter was that swine hepatocytes were seeded on a plate precoated with collagen gel for 24 h, then another layer of collagen gel was overlaid, resulting in a sandwich configuration. The cytomorphological characteristics, albumin secretion, and LDH-release of the hepatocytes cultured in these two models were examined. RESULTS: Freshly isolated rat hepatocytes were successfully mixed and fixed in collagen gel, and cultured in the gel condition. During the culture period, the urea synthesized and secreted by rat hepatocytes was detected throughout the period. Likewise, newborn experimental piglet hepatocytes were successfully fixed between the double layers of collagen gel, forming a sandwich configuration. Within a week of culture, the albumin secreted by swine hepatocytes was detected by SDS/PAGE analysis. The typical cytomorphological characteristics of the hepatocytes cultured by the above two culture models were found under a phase-contrast microscope. There was little LDH-release during the culture period. CONCLUSION: Both collagen gel mixture and double layers of collagen sandwich configuration can provide cultural conditions much closer to in vivo environment, and are helpful for maintaining specific hepatic functions and cytomorphological characteristics. A collagen gel mixture culture may be more eligible for the study of bioartificial livers.     

Penicillamine and collagen metabolism.

Penicillamine blocks the crosslinking of collagen in man and in all the animal species it has been tested in. At the standard dose in which it is used it binds to the aldehydes present in collagen and prevents them from forming crosslinks. It is more efficient in inhibiting the crosslinking of soft tissues, where the aldehydes are derived from lysine, and less effective in preventing crosslinking of bone, where the aldehydes involved are primarily those derived from hydroxylysine. At very high doses it can inhibit lysyloxidase activity by making Cu unavailable to the enzyme.