c-met原癌基因的表达及其与人肝细胞癌转移关系的研究

以β-actin为内标,用逆转录—多聚酶链反应（RT－PCR）技术,研究c－metmRNA在32例肝癌组织、26例癌旁肝组织中的表达。结果表明,32例肝癌组织、26例癌旁肝组织中均有c-met基因表达（表达率100％）,但肝癌c－met基因的表达值显著高于癌旁肝组织（46.75％±13．03％对2531％±11,03％,P＜0．001）。32例肝癌中c－met基因过度表达者有14例,统计分析发现c-met基因过度表达与肝细胞癌的分化程度及肝内转移有关。结果提示c－met基因在人肝细胞癌中高表达,并可能与肝癌的侵袭转移有关。     

大蒜素抑制人肝癌细胞中VEGFmRNA表达的研究

目的：研究大蒜素对人肝癌细胞中VEGFmRNA表达的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法。以HPRT（hypoxanthine phosphoribosyltransferase）为内标。结果：大蒜素有明显抑制人肝癌细胞VEGF mRNA表达的作用,与对照组相比,其VEGFmRNA表达水平降低了约66．36％（P＜0．05）。结论：大蒜素是人肝癌细胞表达VEGF基因的调节剂,能抑制人肝癌细胞VEGF基因的表达。     

胃癌组织中miR－381与PCNA、CyclinD1、p21表达的关系及临床意义

目的：检测微小RNA（miR－381）、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21基因在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,探讨miR－381在胃癌组织中表达的情况及临床意义。方法实时定量PCR技术检测85例胃癌组织、50例癌旁正常组织中miR－381、PCNA、Cyclin D1、p21的表达情况;记录患者的临床病理资料。分析miR－381与患者临床病理特征的关系;同时分析miR－381与PCNA、Cyclin D1、p21的关系。结果 miR－381在胃癌组织中表达低于癌旁组织;PCNA、Cyclin D1的mRNA在胃癌组织中高于癌旁正常组织,而p21基因的表达在胃癌组织中低于癌旁正常组织（ P ＜0．05）。 miR－381与胃癌的分化、淋巴结转移有关（ P ＜0．05）,与胃癌其他病理特征无明显关系（ P ＞0．05）。相关分析显示,miR－381与Cyclin D1存在负相关（ r ＝－0．3864, P ＜0．05）,与p21存在正相关（ r ＝0．3223, P ＜0．05）。结论 miR－381与胃癌的临床病理特征有关,miR－381可能通过调节Cyclin D1、p21而参与胃癌的进展。     

MMP-9/TIMP-1与肝癌侵袭转移及HBsAg表达的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）在人肝癌及癌旁组织中的表达和肝癌生物学行为及HBsAg表达之间的关系。方法应用免疫组织化学法（SP）研究40例肝癌及癌旁组织中MMP-9、TIMP-1和HBsAg的表达。结果MMP-9在肝癌和癌旁组织表达阳性率分别为72．5％和75．0％．癌组织明显减低（P〈0．01）。TIMP-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为57．5％和62．5％，肝癌中的表达较癌旁肝组织表达减低，但差异无统计学意义。转移组癌及癌旁组织MMP-9的表达显著高于无转移组（P〈0．05）：而TIMP-1则明显低于无转移组（P〈0．05）。本组肝癌患者组织HBsAg阳性率为82．5％，HBsAg阳性组中癌及癌旁组织MMP-9表达明显高于HBsAg阴性组（P〈0．05），TIMP-1在HBsAg阳性组的表达略高于HBsAg阴性组．但差异无统计学意义。MMP-9、TIMP-1在癌旁组织中与HBsAg的表达有相关性（P〈0．05），而在癌组织中则无相关性（P〉0．05）。结论MMP-9、TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达明显增高，可能对于判断肝癌的浸润、转移有重要价值：HBV感染可能与MMP-9表达增加有关。     

胃黏膜病变组织COX-2蛋白表达的研究

目的：研究胃黏膜病变组织中环氧化酶－2（COX－2）蛋白的表达，探讨其与胃癌类型，分期，分化，转移及幽门螺杆菌（Hp)感染之间的内在关系。方法：外科手术中取30例胃癌者的癌组织，癌旁非癌组织各两块，石蜡包埋，切片HE染色作病理及免疫组织化学检查COX－2蛋白表达，Hp阳性感染由快速尿素酶试验结合病理染色／^14C尿素呼气试验而确立。结果：COX－2在胃癌中阳性表达率（66．7％），癌旁组织（26．7％），差异具有显著性（P＜0．01），其表达强度差异也有非常显著性意义（P＜0．001）。COX－2蛋白阳性表达率；进展期胃癌（76．0％）显著高于早期胃癌（20．0％）（P＜0．05）；有淋巴结转移（79．2％）显著高于无淋巴结转移（16．7％）（P＜0．05）；肠型胃癌（66．7％）与胃型胃癌（66．7％），低，未分化癌（80．0％）与高、中分化癌（57．1％），相比统计学上均无显著性差异（P＞0．05）。Hp阳性肠化或异型增生组COX－2的表达显著高于Hp阴性组（P＜0．05）。结论：COX－2蛋白在胃癌有较高水平的表达，它的异常表达多与胃癌的进展及淋巴结转移有关而与胃癌类型，病理学上分化程度关系上。COX－2基因在胃癌早期发生发展过程中可能起重要的作用，并与Hp感染有一定关系。     

胶质瘤中的多基因突变的分析

研究胶质瘤中癌基因c－myc的扩增、H－ras的突变及抑癌基因p53的5～8外显子的突变情况以及与胶质瘤的恶性程度的关系。采用差异性PCR（DPCR）及PCR－SSCP、PCR－RFLP等方法检测22例脑胶质瘤的基因突变情况。22例胶质瘤中c－myc扩增率为63．6％（14／22），H－ras的突变率为36．4％（8／22），p53的突变率45．5％（10／22）。结论：癌基因c－myc的扩增及抑癌基因p53的突变与胶质瘤的恶性程度有关（P＜0．05），而癌基因H－ras的突变则与胶质瘤的发生有关，与胶质瘤的恶性程度似乎无关（P＞0．05）。     

KAⅠ1基因的表达与大肠癌转移关系的研究

目的：研究KAⅠ1mRNA在大肠癌中的表达及其与肿瘤转移的关系。方法：采用RT－PCR方法检测大肠癌及其相应癌旁正常组织中KAⅠ1mRNA的表达。结果：KAⅠ1mRNA在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织（P＜0．05）；有淋巴结或肝转移的癌组织中KAⅠ1表达明显低于无转移的癌组织（P＜0．01）。结论：KAⅠ1mRNA表达降低可能与大肠癌的转移有关。     

咪喹莫特抑制哮喘大鼠气道炎症转录水平的研究

目的：探讨咪喹莫特拮抗支气管哮喘气道炎症的分子机制。方法：卵清蛋白腹腔注射与雾化吸入建立大鼠哮喘模型，采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）测定了不同剂量咪喹莫特对哮喘大鼠肺组织白介素（IL）－4mRNA、IL－5mRNA、IL－12mRNA和干扰素（IFN）－γ mRNA表达的影响。结果：咪喹莫特各治疗组及地塞米松组能显抑制哮喘大鼠肺组织中IL－4、IL－5mRNA的表达（与哮喘相比，均为P＜0．001；与空白对照组比，均为P＞0．05），各咪喹莫特组同时能显增加IL－12、IFN－γ mRNA表达（与哮喘组比，均为P＜0．001；与空白对照组比，均为P＞0．05），而地塞米松组不能增加IL－12、IFN－γ mRNA的表达（与哮喘组比，均为P＞0．05；与空白对照组比，均为P＜0．001）。咪喹莫特各治疗组间无显性差异。结论：咪喹莫特能降低哮喘大鼠肺组织中IL－4和IL－5基因转录，增加IL－12和IFN－γ基因转录，进而 抑制嗜酸性粒细胞的聚集、活化，发挥其抗气道炎症的作用。     

卵巢上皮癌组织中HLA抗原和CD80的表达

目的：了解卵巢上皮癌（EOC）中HLA、CD80的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法检测HLA I和HLA Ⅱ的表达,用RT－PCR检测CD80mRNA的表达。结果：44份EOC中,HLA I、HLA Ⅱ的阳性表达率分别为59．09％和43．18％;CD80mRNA的表达率为9．09％。HLAI类分子的阳性表达在Ⅲ-Ⅳ期显著低于I－Ⅱ期（P＜0．05）,有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组（P＜0．05）,肿瘤复发组显著低于未复发组（P＜0．01）。HLAⅡ类分子的表达在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组（P＜0．05）,HLAⅡ表达组较不表达组复发率有降低趋势,但差异未达显著水平（P＝0．074）。CD80mRNA阳性者4例均未复发,而CD80mRNA阴性者复发率为57．5％,两组有显著性差异（P＜0．05）。HLAI与HLAⅡ、HLAI与CD80同时缺乏时,患者复发率分别较HLAI与HLAⅡ、HLAI与CD80共表达时显著升高（P＜0．01）。结论：EOC可能通过HLAI的降调、CD80的缺乏多种途径逃避机体的免疫监视,检测上述调节分子的表达,可能对判断患者预后及指导免疫治疗有一定的意义。     

miRNA－223,－99a 检测在儿童急性白血病中的临床应用

目的：探讨骨髓微小RNA（MicroRNA,miRNA）－223、－99a检测在儿童急性白血病（AL）中的临床应用。方法收集30例急性白血病患儿的骨髓染色及临床资料,分为复发组（ n ＝13）和缓解组（ n ＝17）,另选取健康体检儿童8例作为对照组,采用实时荧光定量PCR（ Realtime－PCR,RT－PCR）技术检测儿童骨髓miR－223和 miR－99a的表达。比较分析以上两标志物在儿童急性白血病疾病中的变化。结果复发组和缓解组miR－223和miR－99a表达与对照组比较,差异均有统计学意义（ P ＜0．01）;复发组miR－223和miR－99a表达与缓解组比较差异有统计学意义（ P ＜0．01）。复发组和缓解组miR－223和 miR－99a表达呈负相关（r值分别为－0．529、－0．587, P ＜0．01）。结论骨髓miR－223和miR－99 a表达与儿童急性白血病的病变发展有关,其可作为儿童急性白血病诊断和治疗的分子标志物。     

原发性肝癌患者血清及肝癌组织中HBV前C区1896位突变株的研究

为了解HBV前C区1896位G→A突变株和原发性肝细胞癌（HCC）的关系，采用错配引物PCR（m少PCR）扩增结合限制性片段长度多态性分析（RFLP），检测了83例HBsAg阳性HCC患者血清样本中的HBV前C区突变株，并与66份HBsAg（＋）的慢性乙型肝炎患者的血清标本对照。结果发现：HCC组有47例检出HBV前C区基因（56．6％），其中16例存在HBV前C区突变株（34．0％）；慢性乙肝组有33例检出HBV前C区基因（50．0％），其中仅4例存在HBV前C区突变株（12．1％），两组HBV前C区突变株检出率有显著差异（P＜0．05）。为进一步研究HBV前C区突变株在HCC患者中的状况，同步检测了8例HBsAg阳性HCC患者肝癌组织和血清中HBV前C区突变株，发现在HBV前C区基因阳性的肝癌组织、癌周组织和血清中HBV前C区突变株分别为3／8（37．5％）、3／7（42.9％）和1／5（20．0％），均比慢性肝炎组高，提示HBV前C区1896位G→A突变珠在原发性肝癌的发生中可能有一定作用。     

降脂膏方治疗非酒精性脂肪肝的临床观察

目的：观察降脂膏方对非酒精性脂肪肝的治疗作用。方法将例患者随机分为治疗组与对照组两组,治疗组予以降脂膏方治疗;对照组予以普伐他汀治疗。两组治疗8周后观察患者的肝功能（ALT、AST、GGT）、血脂（TCH、TG、LDL－C）、和临床症状积分。结果所有病例均完成治疗。治疗组总疗效86．67％,对照组总疗效63．33％,两组比较有显著性差异（ P ＜0．05）;临床症状积分,治疗组较前有明显下降（ P ＜0．05）,与对照组比较有显著差异性（P＜0．05）;治疗后,治疗组的ALT、AST、TC、TG水平均较前明显降低（P＜0．05）,对照组肝功能（ALT、AST、GGT）降低效果不明显（P＞0．05）,血脂（TC、TG、LDL－C）下降较治疗组明显（P＜0．05）。结论降脂膏方能有效治疗非酒精性脂肪肝患者。     

高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞bax和bc1-2基因表达的影响

目的：探讨高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法：体外培养的人腹膜间皮细胞经含1．5％，2．5％，4．25％葡萄糖M199培养基培养24小时，以正常M199和含4．25％甘露醇的M199培养基为对照，应用半定量RT－PCR检测bax,bcl－2基因，mRNA表达。结果：bax mRNA表达量在2．5％葡萄糖组，25％葡萄糖组显著高于1．5％葡萄糖组，M199对照组及4．25％甘露醇渗透压对照组（P＜0．05），且呈葡萄糖浓度依赖性，而bcl-2 mRNA表达量在2．5％葡萄糖组，4．25％，葡萄糖组显著低于1．5％葡萄糖组，M199对照组及4．25％甘露醇渗透压对照组（P＜0．05），并表现为葡萄糖浓度依赖性。结论：高浓度葡萄能上调bax基因表达和下调bcl-2基因表达，此作用与葡萄糖浓度相关。     

尼尔雌醇影响OVX大鼠骨细胞IL—6 mRNA表达水平的研究

目的：研究尼尔雌醇对OVX大鼠IL－6 mRNA表达水平的影响,探讨绝经后骨质疏松的分子细胞学机制。方法：将30只3月龄雌性Wistar大鼠随机分成3组,每组10只,即OVX组、假手术组和尼尔雌醇组（雌醇组）。对OVX组和雌醇组行双侧卵巢切除制备绝经后骨质疏松模型,雌醇组于术后1周予尼尔雌醇治疗。3个月后处死全部实验动物,直接从骨组织中提取总RNA,采用相对半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测IL－6 mRNA表达情况。结果：雌醇组IL－6mRNA水平显著低于OVX组（P＜0．01）,与假手术组相比无显著性差异（P＞0．05）。结论：IL－6参与调节雌激素撤退所致的骨吸收,尼尔雌醇可以抑制IL－6的基因表达,减少骨丢失,维持骨量。     

急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的：研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）患的表达与临床疗效的关系。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测了31例ALL患bcr/abl融合基因的表达。结果：患bcr/abl融合基因阳性表达9例（29％），其中完全缓解3例（33．3％）；bcr/abl融合基因阴性表达22例（71％），其中完全缓解17例（77．3％），两组比较具有差异性（P＜0．05）。结论：bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患临床疗效较差。     

48例非小细胞肺癌MDR1及MRP基因表达结果分析

目的：探讨多药耐药（MDR1）基因,多药耐药相关蛋白（MRP）基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及其与组织类型的关系。方法：用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测新鲜肺癌组织标本。结果：48例NSCLC标本MDR1,MRP基因阳性表达率分别为62．5％,66．7％,二种基因共同表达率为43．8％,肺鳞癌MRP基因表达明显高于腺癌（P＜0．01）,而鳞癌与腺癌之间MDR1基因表达无显著性差异（P＞0．05）,结论：MDR1,MRP基因可以共同或分别存在于肺癌组织中,肺鳞癌MRP基因表达率较腺癌高。     

肝细胞肝癌组织TGF-β1和IGF-Ⅱ异常表达与HBV复制

目的分析肝细胞肝癌（HCC）组织转化生长因子β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）表达与HBV复制间的关系。方法以自身对照法收集HCC组织及非癌组织，以生物素标记的HBVDNA探针检测HCC组织中HBVDNA，采用免疫组织化学法检测组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ的表达，以巢式PCR扩增TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA基因片段，并分析TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制间的临床病理学关系。结果HCC组TGF-β1和IGF-Ⅱ表达阳性率均为83．3％，TGF-β1 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA阳性率均为100％，HCC组明显高于非癌组（P〈0．01）。HCC组中TGF-β1和IGF-Ⅱ阳性表达与肿瘤分化程度显著相关（P〈0．05），与肿瘤直径、数目间未见明显相关（P〉0．05）；TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制显著相关（94．7％），且HBV DNA阳性组显著高于HBV DNA阴性组（P〈0．05）。结论HCC组织中TGF-β1和IGFⅡ过度表达，且与HBV复制和肿瘤的分化程度有关。     

胃癌组织中 COX－2与 PTEN 的表达及临床病理的关系

目的：探讨环氧化酶－2（COX－2）与第10号染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因（PTEN）在胃癌组织中的表达及临床意义,探讨两者在胃癌发生、发展及转移中的相互作用。方法采用免疫组织化学 Elivision 方法分别检测 COX－2与 PTEN 在80例胃癌组织中的表达情况,并以80例癌旁组织作为对照,分析两者的相关性及其与胃癌临床病理特征的关系。结果（1）PTEN 在胃癌中的阳性表达率为41．3％（33／80）,显著低于癌旁组织中的阳性表达率80％（64／80）,差异具有统计学意义（P ＜0．01）。（2）COX－2在胃癌组织中的阳性表达为70％（56／80）,显著高于癌旁组织中的阳性表达15％（12／80）,差异具有统计学意义（P ＜0．01）。（3）PTEN 和 COX－2在胃癌组织中的表达与组织分化程度、有无淋巴转移及临床分期相关（P ＜0．05）;在胃癌组织中的表达与患者的年龄、性别无相关性（P ＞0．05）。（4）PTEN 和 COX－2两者在胃癌组织中表达呈负相关。结论COX－2、PTEN 可能参与胃癌的发生且影响癌细胞转移;胃癌中 COX－2与 PTEN 的表达呈负相关性;联合检测 COX－2、PTEN 的表达可能成为胃癌淋巴结转移预测指标及判断预后的重要指标。     

橙皮苷对化学性肝纤维化大鼠α－SM A表达的影响

目的：观察橙皮苷对化学性肝纤维化大鼠α－平滑肌肌动蛋白（α－smooth muscle actin,α－SMA）表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用50％四氯化碳（ carbon tetrachloride,CCl4）每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,每天按50,100,200 mg· kg－1灌胃给予不同剂量的橙皮苷（hesperidin,HDN）和秋水仙碱（0．1 mg· kg－1）,共6周。末次给药后,禁食8 h,处置大鼠,分光光度法检测血清丙氨酸转氨酶（ alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量;取固定部位肝脏组织,HE和Masson染色观察肝组织病理损伤程度,免疫组化和RT－PCR技术检测肝组织中α－SMA蛋白与mRNA的表达。结果与模型组相比,HDN （100,200 mg· kg－1）组不仅可改善大鼠肝纤维化损伤程度,降低ALT、AST、Hyp含量（P＜0．05或P＜0．01）,还可减少肝组织中α－SMA蛋白与mRNA的表达（P＜0．05或P＜0．01）。结论 HDN对化学性肝纤维化大鼠具有很好的保护作用,其机制可能与抑制肝星状细胞的活化、增殖有关。     

癌基因c-erBb-2和抑癌基因nm-23蛋白产物与鼻咽癌临床行为关系的初步探讨

为探讨癌基因c-erBb-2和抑癌基因nm-23的编码蛋白与鼻咽癌的关系，用免疫组化法对51例鼻咽癌组织中的两种蛋白产物进行检测，随访4年，对复发（死亡）组与未复发（存活）组间蛋白阳性率的差别进行比较。结果表明，未分化癌组c-erBb-2和nm-23蛋白阳性率为81．8％、27．3％，分别显高于或低于高分化癌组的58．3％和50％（P＜0．05）；复发和死亡组c-erBb-2（77．8％、79．2％）和nm-23(33.3%、25％），分别高于或低于未复发组（58．3％、59．3％）及存活组（54．2％、51．9％），P＜0．05。c-erBb－2蛋白阳性或nm－23蛋白阴性组，复发死亡的发生概率较大。结论：癌基因c-erBb－2和抑癌基因nm－23的表达蛋白是了解病情、评估预后及复发死亡的临床检测指标之一。