成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

目的:研究在中性条件和Th2极化条件下CD3单克隆抗体(CD3mAb)激活的人外周血αβT细胞Th1/Th2型细胞因子的表达.方法:用CD3mAb、IL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),作为CD3mAb激活的T淋巴细胞(CD3AT)的中性条件培养;用CD3mAb、IL-2、rhIL-4和抗人IL-12抗体,作为Th2极化条件.分别收集PBMC和培养后第7、14和21天细胞,加PMA、ionomycin和monensin作用6 h后,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测αβT细胞中胞内IFN-γ或IL-4产生细胞的比例.结果:PBMC中IFN-γ 或IL-4 αβT细胞分别为23.6%、2.4%.与中性条件相比,Th2极化条件下培养3周,αβT细胞中IFN-γ产生细胞明显减少(P＜0.001),IL-4 产生细胞显著增加(P＜0.001);同时产生IFN-γ IL-4 细胞从3.6%增加至6.1%.结论:体外Th2极化条件可以使人外周血αβT细胞分化为Th2功能亚群.     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量与外周血单核细胞产生的Th1/Th2类细胞因子的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)血清HBV DNA含量与外周血单核细胞(PBMC)产生的Th1／Th2类细胞因子的关系，为慢性乙型肝炎的治疗提供依据。方法 分离42例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞，加入PHA体外培养48h，ELISA法检测培养上清液中的Th1类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4、IL-10，荧光定量法检测血清HBV DNA载量；以12位健康献血者的血清为对照。结果 与正常对照相比，慢性乙型肝炎组IFN-γ显著降低，而IL-4、IL-10明显升高。慢性乙型肝炎患者随着HBV DNA的升高，IFN-γ降低，而IL-4、IL-10升高。结论 慢性乙型肝炎患者存在Th1／Th2类细胞因子失衡，HBV DNA对IFN-γ有抑制作用，对IL-4、IL-10有促进作用。     

特应性皮炎患儿外周血Th17、Th1/Th2细胞亚群的研究

目的检测特应性皮炎(AD)患儿外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、Th2和Th17)数量和比例的变化,探讨其在AD发病机制中的作用。方法选择40例AD患儿,分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并进行相关分析。结果AD患儿PBMC中CD4+IL-4(+Th2)细胞的数量、CD4+IL-17(+Th17)细胞的数量均高于健康对照组([19.56±4.9)%vs(12.91±1.7)%,P0.05;(26.61±2.6)vs(11.4±1.2),P0.05],Th1/Th2细胞的比值低于健康对照组([0.98±0.13)vs(1.84±1.6),P0.05]。结论IL-17+Th17细胞与Th1/Th2比值变化可能参与AD患儿的免疫学发病机制。     

内毒素休克性肺损伤与IFN-γ/IL-4失衡

目的:探讨内毒素休克肺损伤与TH1/TH2平衡的关系.方法:采用颈静脉注入LPS复制大鼠急性肺损伤模型,用ELISA法检测其外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值.结果:与正常对照组相比,急性肺损伤组外周血PBMC产生IFN-γ水平,IFN-γ/IL-4比值明显升高(P＜0.05;P＜0.001),而IL-4水平差异无显著性(P＞0.05),肺组织病理切片显示大鼠发生ALI.结论:LPS休克肺损伤时,体内存在Th1/Th2类细胞因子水平失衡.     

藏药独一味对肺结核患者Th1/Th2平衡调节作用的研究

目的探讨藏药独一味对肺结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的影响。方法葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离20例肺结核病患者和15例健康对照者PBMC。按加入刺激物的不同,将每份标本分为:RPM I1640组、PPD组、PPD 独一味组。加入相应刺激物后培养72h,收集上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平。结果与PPD组相比,加入独一味能有效促进肺结核病患者及健康对照者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05),IL-4水平无差异(P>0.05)。结论独一味通过诱导IFN-γ分泌,调节Th1/Th2平衡,对结核分枝杆菌感染患者发挥保护性的免疫反应。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞与CD4+Th细胞分化的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞(dendritic cells,DCs)与CD4+Th细胞亚群分化的关系.方法 分离慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞,以rhlL-4(50ng/mL)、rhGM-CSF(10ng/mL)和rhTNF-α(100μ/mL)诱导培养DC.以流式细胞仪检测DCs表面CD1a、CD83、CD80、CD和HLA-DR分子的表达情况.免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测Th细胞内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化.ELISA法检测DCs或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量.结果 慢性乙型肝炎患者的DCs表达CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR分子的水平明显低于正常人;培养至第7天.慢性乙型肝炎患者DCs分泌的IL-12水平低于正常人,而分泌的IL-6水平高于正常人.与正常人相比,慢性乙型肝炎患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低,Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低.患者DCs与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人.结论 慢性乙肝患者体内DCs功能的异常可能导致了外周血Th1分化不足.     

黄芪对慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2功能平衡的影响

目的探讨黄芪对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者外周血Th1/Th2功能平衡的影响。方法CHB患者和健康人的外周血单个核细胞体外经黄芪作用,培养48h后,用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测培养上清中Th1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)的含量变化。结果在黄芪诱导下:①健康对照组和CHB患者组Th1类细胞因子明显增高(P<0.01),Th2类细胞因子水平无明显变化(P>0.05);②CHB患者组IFN-γ水平明显高于健康对照组(P<0.01),IL-2水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05);③Th2类细胞因子水平CHB患者组比健康对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄芪可明显提高CHB患者Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)的产生水平,改善CHB患者Th1/Th2功能失衡状态,可使CHB患者Th2优势应答状态部分得到纠正。     

Th1/Th2细胞因子在丙型肝炎慢性化中的作用

目的探讨Th1/Th2细胞因子在丙型肝炎慢性化中的作用。方法用ELISA法检测15例慢性丙型肝炎(简称慢丙肝)、10例丙肝后肝硬化(简称肝硬化)、6例丙肝相关性肝癌患者和18例健康人群血清IL-10、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)水平,放射免疫分析法检测IL-4水平,另外检测血清谷丙转氨酶(ALT)以及总胆红素(TBIL)水平。结果各组患者IL-4、IL-10水平明显高于正常对照组,IL-12、IFN-γ水平明显低于对照组;3组患者间比较,IL-4水平没有明显差别,IL-10水平随着病情的发展逐渐升高(肝癌组>肝硬化组>慢丙肝组),IL-12、IFN-γ水平在肝癌组明显低于慢丙肝组和肝硬化组。结论Th1/Th2失衡可以引起丙型肝炎慢性化,并与肝细胞性肝癌的发生密切相关。     

银杏叶提取物对有遗传过敏倾向脐血Th1/Th2免疫状态的影响

目的:观察银杏叶提取物对有遗传过敏倾向新生儿脐血单个核细胞增殖和Th1/Th2失衡调节的影响.方法:选择20例新生儿父或母有过敏性疾病史(AD组)和20例新生儿父母均无过敏性疾病史(对照组)的正常足月新生儿脐血为研究对象.收集脐血血浆并分离单个核细胞(CBMCs),体外分别用银杏叶提取物联合植物血凝素(PHA)刺激培养24,48,72 h,单独PHA刺激组设为对照.MTT比色法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测银杏叶提取物对细胞培养上清液中IL-2,IL-4,IFN-γ,GM-CSF的影响.结果:AD组IL-2,IL-4和GM-CSF高于对照组(P<0.05),IFN-γ无明显差异.银杏叶提取物干预培养48 h后细胞因子中IL-2,IL-4,IFN-γ,GM-CSF均增多,且AD组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).AD组中GB干预组与单纯PHA组比较IFN-γ/IL-4差异有统计学意义(P<0.01),IL-2/IL-4差异无统计学意义.AD组中GB干预后分析GM-CSF与IL-2和IFN-γ呈正相关关系(P<0.05)、与IL-4无相关性.结论:GB干预CBMCs后能调节Th1/Th2平衡,在上调Th1,Th2因子的同时,以上调Th1因子为主,从而调节过敏体质患儿的Th1/Th2失衡,为儿童变应性疾病的预防提供帮助.     

己酮可可碱对慢性心力衰竭患者细胞因子免疫调节及B型利钠肽的影响

目的 探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对慢性心力衰竭患者外周血辅助性T淋巴细胞(Th)Th1/Th2细胞因子免疫调节及B型利钠肽(B-type natriuretic peptide, BNP)的影响.方法 心力衰竭患者分为己酮可可碱治疗组(PTX组,17例)和常规治疗组(常规组,18例),采用流式细胞分析法,检测35例心力衰竭患者和正常对照者(10例)外周血CD4+Th1型细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素-10(IL-10)细胞百分率的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定心力衰竭患者外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10及B型利钠肽的水平;应用彩色多普勒超声诊断仪测定左心室射血分数(LVEF)的变化.结果 心力衰竭患者基线水平CD4+Th1(IFN-γ)细胞百分率及Th1/Th2 比值显著高于正常对照组[(18.42±5.63) vs (6.69±1.39), P< 0.01];(1.58±0.78) vs (0.17±0.04),P<0.01),心力衰竭患者治疗1个月后,PTX组与常规组比较,PTX组CD4+Th1(IFN-γ)细胞百分率[(11.97±2.75) vs (15.20±4.13 )]和Th1/Th2 比值[(0.82±0.31) vs (1.33±0.40)]显著降低(P<0.01),外周血TNF-α及B型利钠肽水平显著降低[(80.42±43.70)pg/ml vs (114.31±46.38) pg/ml, P< 0.05;(247.94±105.33)ng/L vs (335.12±106.57) ng/L, P<0.01],IL-10水平轻度升高[(9.81±3.13 )pg/ml vs (8.11±2.66) pg /ml, P>0.05];左心室射血分数显著提高[(36.54±5.21) vs (30.76±4.80),P<0.01].结论 心力衰竭患者在常规治疗的基础上应用己酮可可碱,左心功能得到改善,可能与己酮可可碱对心力衰竭患者Th1/Th2细胞失衡起到免疫调节作用,并通过免疫调节影响炎性细胞因子的激活与分泌有关.     

遗传因素对脐血Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨遗传影响因素(父母有无过敏性疾病(Allergic diseases,AD)史)对新生儿脐血单个核细胞Thl/Th2平衡的影响.方法:取正常足月新生儿脐血为研究对象,其中20例父母有过敏性疾病史(AD组)和20例无过敏性疾病史(对照组).收集脐血浆并分离单个核细胞(CBMC),体外经植物血凝素(PHA)刺激,MTT比色法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养48h后细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IFN-r、GM-CSF的水平.结果:数据显示:AD组与对照组相比:(1)脐血血浆中IL-2、IL-4、GM-CSF有显著性差异(P<0.05),IFN-r无显著性差异;(2)PHA干预培养48h后细胞培养上清夜中IL-2、IL-4、IFN-r,GM-CSF均有显著性差异(P相似文献   

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群

目的建立人和小鼠Th1和Th2细胞的检测方法,探讨两者在流式细胞仪检测方面的不同.方法采用PMA和离子霉素共同刺激外周血单个核细胞,观察在不同时间和不同剂量的PMA刺激下外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8表达的变化;采用多色荧光共同标记分析技术检测外周血单个核细胞IL-4和IFN-γ的表达.结果在PMA和离子霉素共同刺激后4 h,人外周血T淋巴细胞表面CD4表达迅速下降,而小鼠T淋巴细胞表面CD4表达仅轻度下降;采用多色分析技术可以有效的检测Th1细胞和Th2细胞;采用CD3、CD8设门分析可以有效的区分人Th细胞;采用CD4设门可以有效区分小鼠Th细胞.结论人Th细胞检测宜采用4色染色分析技术,小鼠Th细胞检测采用3色染色技术即可.     

溃疡性结肠炎患者Th17和Th1／Th2细胞亚群的研究

目的检测溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis,UC）患者外周血中辅助性T细胞亚群（Th1、Th2和Th17）数量和比例的变化,探讨其在UC发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞（PBMc）,采用流式细胞术（FCM）检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1／Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γIL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患儿的病情进行相关性分析。结果UC患者PBMC中IFN-γ＋Th1细胞的数量、IL--γ7＋Th17细胞的数量均高于健康对照组[（27．0±2．9）％,（23．2±1．7）％,P〈O．05;（26．61±2．6）,（11．4±1．2）,P〈0．011;Th1／Th2比值高于健康对照组[（12．8±1．6）,（8．60±1．9）,P〈0．01],Th17细胞的数量与疾病程度呈正相关（P〈0．05,r=0．42）。结论IL-17＋Th17细胞与Th1／Th2比值变化可能参与UC患者的免疫学发病机制。     

哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移及卡介苗干预的影响

目的研究哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移情况,同时观察卡介苗（BCG）对Th1/Th2偏移的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分成哮喘组、BCG干预组和对照组。用卵清蛋白（OVA）致敏、激发建立哮喘模型。ELISA法测定肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平。结果肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ/IL-4比值在OVA致敏后均明显降低,初次激发后进一步降低,多次激发后继续降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。BCG干预后IFN-γ/IL-4比值较哮喘组增高,但仍低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论致敏状态下Th1/Th2比例发生偏移,随着抗原激发,Th1/Th2偏移愈加明显,在哮喘气道炎症中,以Th2亢进为主,而代表全身性炎症的脾脏中,则以Th1分泌减少为主。BCG干预后可以部分纠正Th1/Th2偏移,但BCG作用有时限性。     

特应性皮炎Th1／Th2／Th17平衡的研究

目的：探讨特应性皮炎（AD ）外周血清T h1／T h2／T h17平衡的变化规律及相关细胞因子的变化规律,以进一步探讨AD发病的免疫机制。方法采用流式荧光技术测定47例AD患者（AD组）和40例健康自愿者（对照组）外周血清中的γ‐干扰素（IFN‐γ）、白细胞介素（IL ）‐4、IL‐17、IL‐21、IL‐23水平并进行统计分析,从而分析T h1／T h2／T h17／T reg平衡在AD中变化规律。结果在AD患者血清中,IL‐4水平较对照组升高（ P＜0．05）,IL‐17、IL‐23的水平显著高于对照组（ P＜0．05）;IFN‐γ／IL‐4和IFN‐γ／IL‐17较对照组明显降低（P＜0．01）;IL‐17与AD严重程度（SCORAD）评分呈正相关（P＜0．05）。结论在 AD病程中T h1／T h2、T h1／T h17降低,T h1／T h2／T h17平衡的漂移可能是AD发病的重要机制。     

人外周血树突状细胞诱导Th1/Th2细胞分化的研究

目的 :研究人外周血树突状细胞 (DC)与Th0细胞在不同比例条件下 ,诱导Th0向Th1/Th2分化的关系。方法 :健康人外周血单个核细胞经传统的方法诱导得到DC ,将DC与自体的Th0细胞以 1∶4和 1∶30 0的比例混合培养 4天 ,收集Th细胞 ,经CD3和CD2 8抗体扩增 4 8h ,ELISA法测上清中IFN γ和IL 4的浓度。　结果 :从外周血中诱导出DC高表达CD83(73.4 % )、CD86 (90 .3% )、HLA DR(6 8.5 % )和CD4 0 (73.7% ) ,DC与Th0以 1∶4混合 ,产生的IFN γ与 1∶30 0混合组比有显著差异〔(34± 4 .3) μg/Lvs(3.5± 1.2 ) μg/L〕 ,产生的IL 4亦有显著差异〔(2 5 ± 4 .3)ng/Lvs (35 0± 12 0 )ng/L〕。　 结论 :人外周血DC与Th0高比例混合时 ,诱导Th0向Th1分化 ;低比例混合时 ,诱导Th0向Th2分化。显示人外周血DC在调控T淋巴细胞免疫应答类型上具有可塑性 ,为临床移植物抗宿主病 (GVHD)免疫干预治疗奠定基础。     

T-bet对Th1/Th2分化调节作用与恶性肿瘤的关系

T-bet是T-box基因家族的新型转录因子,选择性地表达于Th1细胞,能诱导干扰素γ的产生,在Th1细胞的分化中起决定性的作用。在生理条件下,机体Th1和Th2细胞的免疫功能处于动态平衡态,这种平衡的偏离,对肿瘤发生、发展有重要的影响。现已发现,肿瘤宿主体内Th1/Th2向Th2漂移,Th2优势状态与肿瘤的免疫逃逸密切相关。研究表明,将T-bet基因导入肿瘤细胞,可将Th2细胞逆转为Th1细胞,这将对肿瘤的免疫治疗具有重要的意义。     

Coexistence of Th1/Th2 and Th17/Treg imbalances in patients with allergic asthma

Background  Recent recognition is that Th2 response is insufficient to fully explain the aetiology of asthma. Other CD4⁺ T cells subsets might play a role in asthma. We investigated the relative abundance and activities of Th1, Th2, Th17 and CD4⁺CD25⁺ Treg cells in patients with allergic asthma.

Methods  Twenty-two patients with mild asthma, 17 patients with moderate to severe asthma and 20 healthy donors were enrolled. All patients were allergic to house dust mites. Plasma total IgE, pulmonary function and Asthma Control Questionnaire were assessed. The proportions of peripheral blood Th1, Th2, Th17 and CD4⁺CD25⁺ Treg cells were determined by flow cytometry. The expression of cytokines in plasma and in the culture supernatant of peripheral blood mononuclear cells was determined by enzyme linked, immunosorbent assay.

Results  The frequency of blood Th2 cells and IL-4 levels in plasma and culture supernatant of peripheral blood mononuclear cells were increased in all patients with allergic asthma. The frequency of Th17 cells and the plasma and culture supernatant levels of IL-17 were increased, whereas the frequency of CD4⁺CD25⁺ Treg cells and plasma IL-10 levels were decreased in patients with moderate to severe asthma. Dermatophagoides pteronyssinus specific IgE levels were positively correlated with the percentage of blood Th2 cells and plasma IL-4 levels. Forced expiratory volume in the first second was negatively correlated with the frequency of Th17 cells and plasma IL-17 levels, and positively correlated with the frequency of Treg cells. However, mean Asthma Control Questionnaire scores were positively correlated with the frequency of Th17 cells and plasma IL-17 levels, and negatively correlated with the frequency of Treg cells.

Conclusions  Imbalances in Th1/Th2 and Th17/Treg were found in patients with allergic asthma. Furthermore, elevated Th17 cell responses, the absence of Tregs and an imbalance in Th17/Treg levels were associated with moderate to severe asthma. 

     

卡介苗多糖核酸对变应性鼻炎病人Th1/Th2失衡状态的调节

目的观察卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)治疗变应性鼻炎的机制及其疗效.方法将60例变应性鼻炎病人随机分为BCG-PSN治疗组和息斯敏对照组,治疗前后分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者外周血单个核细胞(PBMCs)培养上清液中的白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-5(IL-5),干扰素γ(IFN-γ),粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF).同时于治疗后1周、治疗后2个月进行疗效评定.结果病人组PBMCs上清液中IL-4、IL-5、GM-CSF含量显著增高,而IFN-γ含量显著减少.BCG-PSN治疗后病人组上清液IL-4、IL-5、GM-CSF水平明显降低,而IFN-γ含量显著升高,差异有显著性(P<0.01).息斯敏对照组治疗前后,上述指标变化差异无显著性.治疗2个月后疗效评定,BCG-PSN治疗组显效率为66.7%,优于息斯敏对照组(40%) (P<0.05).结论 BCG-PSN能纠正变应性鼻炎病人体内Th1和Th2细胞因子的失平衡状态,为治疗变应性鼻炎提供了理论依据,临床疗效也表明BCG-PSN治疗变应性鼻炎疗效可靠.