喉鳞癌细胞原代体外培养中癌组织分离方法的对比分析

探讨喉鳞癌细胞体外原代培养过程中癌组织块的适宜分离法。方法采用机械分离法、胰蛋白酶消化分离法和胶原酶消化分离法,分别对于手术切除的喉鳞状细胞癌标本进行单细胞分离。结果３种分离方法中,以胶原酶法最佳。结论胶原酶对喉鳞癌细胞间质具有良好的分离作用,且对癌细胞不造成损害。     

TPA抑制人喉鳞癌细胞增殖作用的研究

目的　探讨TPA对人喉鳞癌细胞的抗增殖作用。方法　应用MTT、流式细胞 (FCM)技术对Hep - 2细胞进行观察和检测。结果　 10nMTPA作用 12h ,可明显抑制Hep - 2细胞的增殖 ;下调PCNA的表达量 ;细胞分裂阻滞于G1期。结论　TPA能够抑制人喉鳞癌细胞的增殖 ,这种作用与细胞核PCNA的变化有密切的关系。     

抑癌基因p21与喉癌生物学行为和临床的相关性

目的 探讨抑癌基因p21在喉鳞癌中表达及其与临床的关系。方法 采用免疫组化LSAB方法对37例喉原发性鳞癌、癌旁1.0cm组织及20例声带息肉组织行p21检测研究。结果 p21表达定位于胞浆,癌旁组织中有3例软骨细胞出现胞核阳性。喉癌组与癌旁组及声带息肉组之间表达率相比较,差异有显著性(P<0.05)。组织分化高者表达高。结论 p21在喉癌细胞的生长调控中起重要作用。     

原代骺板软骨细胞的高效分离和体外培养观察

目的　设计原代骺板软骨细胞的高效分离法 ,并对骺板软骨细胞的体外培养进行初步观察。　方法　改良设计以 1g L的胰蛋白酶 / 1g L的乙二胺四乙酸 (EDTA)、1g L的透明质酸酶和 2g L的Ⅰ型胶原酶系列消化分离原代软骨细胞的三步酶消化分离法 ,观察其对幼兔骺板原代软骨细胞的分离效果 ;倒置显微镜和光镜下观察体外培养条件下细胞生物学特性。　结果　 ( 1)三步酶的消化可使软骨基质完全解离降解 ,细胞均得以分离 ,收获量与组织湿重呈非常显著的正相关 ,每克软骨的细胞收获量平均为 32 .3× 10 6 个 ,细胞存活率平均为 97.6 %。 ( 2 )原代和第 1代细胞附壁生长呈三角形或多角形 ,生长融合时呈卵圆形 ,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝 (TB)异染反应均呈阳性 ;第 3代以后细胞逐渐变为梭形 ,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性 ,TB异染反应明显减弱。结论　 ( 1)原代骺板软骨细胞三步酶消化分离法具有细胞收获率高、细胞存活率高、操作简便等特点。 ( 2 )随着传代培养次数的增加 ,骺板细胞出现去分化 ,逐渐失去软骨细胞的特异性表型。     

IL-34对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的作用研究

目的 研究白细胞介素-34(interleukin 34, IL-34)在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学染色检测IL-34在食管鳞癌组织标本中的表达情况,采用qRT-PCR法探究IL-34在不同食管鳞癌细胞系中mRNA表达水平。利用慢病毒感染,过表达食管鳞癌细胞系ECA-109中IL-34,高内涵筛选后通过Celigo细胞计数检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡能力,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 癌组织中IL-34水平高于正常组织,但由于临床样本过少差异无统计学意义(P>0.05);食管鳞癌细胞系中IL-34的mRNA水平显著高于正常食管上皮细胞(P<0.01)。IL-34过表达可显著减少ECA-109细胞凋亡,促进其增殖和迁移(P<0.01)。结论 IL-34在食管鳞癌中过表达,并与食管鳞癌细胞的增殖、迁移和凋亡显著相关,可能成为食管鳞癌新的标志物。     

抗角蛋白自身抗体对培养人舌鳞癌细胞表达表皮生长因子受体的免疫组化研究

 目的 探讨抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)对培养人舌鳞癌细胞表达表皮生长因子受体(FGFR)的作用.方法 用不同浓度AK aut Ab作用于培养人舌鳞癌细胞后,用免疫组化方法,测鳞癌细胞表达ECFR的变化,并做图像分析.结果 研究发现AK auto Ab对鳞癌细胞EGFR的表达有抑制作用,并呈浓度依赖性,经统计学检验显示有极显著意义(P<0.01).结论 AK auto Ab对鳞癌细胞EGFR的表达有抑制作用.     

动脉平滑肌细胞和心肌细胞钾通道的膜片钳全细胞记录技术

目的：介绍一种动脉平滑肌、心室肌细胞急性酶分离方法，并在该分离技术的基础上采用膜片钳全细胞记录方式研究细胞钾离子通道的特性。方法：采用胶原酶Ⅰ(1mg／ml)、木瓜蛋白酶(5mg／ml)消化分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞；用链霉蛋白酶E(1mg／ml)、胶原酶Ⅰ(1mg／ml)消化分离大鼠尾动脉平滑肌细胞；用链霉蛋白酶E(0．5mg／ml)灌流消化、分离得到豚鼠心室肌细胞。结果：以上分离的细胞数量多，形态正常，胞壁光滑完整，活性好。于4℃无钙液中保存，8h内可用于膜片钳全细胞记录。记录出的外向电流可被钾通道阻断剂CsCl及TEA所阻断。结论：用酶急性分离的动脉平滑肌和心室肌细胞应用于膜片钳研究中具有快速、经济、简便易行等优点。     

大鼠胰岛细胞原代培养方法比较研究

目的：比较减碎消化法和原位灌注消化法在大鼠胰岛细胞原代培养中的优缺点,探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法。方法：雄性SD大鼠30只随机分成减碎组（CC组,n=15）,胰腺剪为小组织块后,Ⅴ型胶原酶逐级消化分离;原位灌注组（YY组,n=15）,采用胆总管逆行灌注Ⅴ型胶原酶分离胰岛。双硫腙（DTZ）染色检测胰岛纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果：2组获得的胰岛对于葡萄糖刺激均具有良好的分泌活性（P〈0.01）;YY组比CC组获得的胰岛数量多（P〈0.01）,形态较好,等量胰岛的胰岛素释放量亦多（P〈0.05）。结论：胆总管原位灌注Ⅴ型胶原酶消化可以获取数量多,活性和纯度较好的胰岛。     

大鼠胰岛分离与纯化的实验研究

为探讨胰岛移植物的制备方法，采用胰管注射胶原酶、胰腺静止消化方法，分离成年大鼠胰岛，葡聚糖离心纯化。纯化后胰岛收获量为６１０～８２０个／胰腺，纯度达９２％；胰岛形态结构完整，内分泌细胞超微结构保持良好；对葡萄糖刺激反应胰岛素释放量是基础分泌水平的８倍；异种移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达１周。结果表明：胰管注射胶原酶胰腺静止消化可获得高产量、高纯度、功能良好的胰岛。为临床胰岛移植开辟了新的途径。     

9-顺维甲酸对肺鳞癌细胞周期及细胞分化的生物学作用

目的　观察 9 顺维甲酸 (9 cis RA)对肺鳞癌细胞周期及分化作用的影响。方法　采用流式细胞仪 (FCM )分析 9 cis RA处理前后L78和A2 两肺鳞癌细胞株各周期时相细胞比率 ,同时在光镜下观察用药前后细胞形态与结构的变化。结果　应用 9 cis RA后 ,L78和A2 两肺鳞癌细胞株G0 /G1期细胞比率较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,S期细胞比率显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;经 9 cis RA处理后 ,两肺鳞癌细胞株分化特征明显。结论　 9 cis RA对两肺鳞癌细胞株具有抑制细胞分裂、诱导细胞分化的作用。     

CK（AE1/AE3）在喉鳞癌淋巴结微转移诊断中的应用

目的研究细胞角蛋白广谱抗体CK（AE1/AE3）作为免疫标志物在喉鳞癌淋巴结微转移诊断中的应用与临床病理意义。方法对50例喉鳞癌患者喉标本及其常规病理报告为阳性的140个淋巴结和阴性的756个淋巴结重新切片,以CK（AE1/AE3）作为免疫标志物,采用免疫组化PV9000两步法检测。结果在50例喉鳞癌原发灶和病理检查阳性淋巴结中,CKAE1/AE3全部表达,和临床T分期、病理分级无明显相关（P〉0.05）,756个阴性淋巴结标本中,有9例（18.0%）16个淋巴结（2.1%）发现了微转移灶。结论CK（AE1/AE3）免疫组化法是检测喉鳞癌淋巴结转移的敏感而便捷的方法,特别对筛选组织学检查淋巴结阴性但存在微转移的患者有一定实用价值。     

重组腺病毒介导多重基因对喉癌的治疗研究

目的　探讨携带p5 3、B7 1和GM CSF基因的重组腺病毒 (BB 1 0 2 )对荷瘤裸鼠体内人喉癌细胞的基因治疗效果。方法　建立喉癌裸鼠模型 ,瘤内注射BB 1 0 2、Ad GFP和PBS ,观察肿瘤生长情况 ,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果　经多因素析因方差分析 ,实验组与对照组肿瘤重量和瘤体积差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。经治疗后 ,实验组肿瘤中未发现突变型 p5 3的表达 ,Ki6 7阳性表达率极低 ;光镜和透射电镜下可见肿瘤细胞凋亡。结论　BB 1 0 2可在喉癌细胞中有效表达 ,抑制其生长 ,诱导其凋亡 ,在喉癌基因治疗中具有较好的应用前景 ,可望发展成临床上的一种抗癌剂     

下咽癌的CT检查

目的：确定ＣＴ扫描对下咽癌的诊断价值。材料与方法：７例下咽癌行ＣＴ检查。所有病例均经手术和病理证实为鳞癌。对下咽癌的ＣＴ表现进行了分析。结果：下咽癌表现为等密度或混杂密度的实性肿块，无囊变、坏死或钙化，多位于梨状窝或环状软骨后区。由肿瘤所致杓状软骨－椎体距离和环状软骨－椎体距离明显增大。与６０例正常成人对照，统计学表明有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。杓－椎距和（或）环－椎距测量值大于１０ｍｍ为下咽癌的特征性改变，可用来作为下咽癌的定性诊断指标，并可与喉癌进行鉴别。下咽癌的间接表现包括有：患侧梨状窝变形或消失，喉旁间隙受侵犯、杓会厌皱襞肿胀和甲状软骨板破坏等。结论：薄层ＣＴ扫描可提供下咽癌大小、部位、范围等有用的信息，这对肿瘤的临床分期及手术计划的制定是非常重要的。     

葡萄籽原花青素联合顺铂对喉癌细胞Hep-2生物学作用及机制研究

目的利用葡萄籽原花青素及其联合顺铂在体外作用于喉癌细胞Hep-2,观察其对喉癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨抗肿瘤作用的可能机制。方法 MTT法检测各组药物对喉癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;TUNEL法检测各组药物对喉癌细胞凋亡率的影响;采用流式细胞仪分析凋亡细胞比例,Western blot法检测各组药物对喉癌细胞Bax/Bcl-2表达情况的影响。结果 MTT和TUNEL结果显示,GSPE+顺铂组的喉癌细胞抑制增殖作用明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果显示,GSPE+顺铂组处于S+G2M期的细胞数明显低于单纯GSPE和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示,GSPE+顺铂组的Bax/Bcl-2的表达明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽原花青素可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡;与单纯应用葡萄籽原花青素或顺铂比较,葡萄籽原花青素联合顺铂可以起到更好的增殖抑制并诱导喉癌细胞凋亡,两者具有协同作用。     

Prediction of survival and therapy outcome with 11C-tyrosine PET in patients with laryngeal carcinoma.

Choosing the optimal treatment for an individual with squamous cell carcinoma of the head and neck is a difficult challenge because of the unpredictable clinical behavior of this malignancy. A reliable method for assessing the clinical behavior and predicting the radiocurability of tumors would assist in the therapy strategy and prognosis. This study evaluated whether quantitative PET using l-[1-(11)C]-tyrosine (TYR) has predictive value for survival and therapy outcome in patients with primary squamous cell carcinoma of the larynx. METHODS: Thirty-four patients with histologically confirmed laryngeal carcinomas underwent dynamic (11)C-TYR PET before receiving definitive therapy. Various methods for quantification of tumor activity were used: assessment of protein synthesis rate (PSR), calculation of standardized uptake value, and estimation of tumor-to-nontumor ratio. Treatment consisted of radiotherapy (n = 20) or surgery (n = 14). The median follow-up was 40 mo. RESULTS: All malignancies were identified correctly, with no false-negative results. Cumulative survival was compared between patients with tumor PSR equal to or higher than the median (2.0 nmol/mL/min) and those with tumor PSR lower than the median and was found not to be significantly different (P = 0.07). When the radiotherapy group was evaluated separately, the difference in survival was significant (P = 0.03; 5-y survival, 30% vs. 73%) and high (11)C-TYR uptake correlated with poor prognosis. In multivariate analysis, PSR was an independent predictor for survival. Because differences (P = 0.08) between patients with and patients without recurrence were not significant, no predictive value of PSR for disease recurrence could be demonstrated. CONCLUSION: Prediction of survival of patients undergoing radiotherapy for laryngeal squamous cell carcinoma is feasible primarily by using (11)C-TYR PET to quantify activity before treatment.     

Renal metastases from a squamous cell carcinoma of the larynx

Laryngeal squamous cell carcinoma (SCC) tends to exhibit local spread with a low incidence of distal metastases. The majority of distal metastases are to the lungs and renal involvement is extremely rare. We present a case of laryngeal SCC with metastatic spread to the left kidney presenting as a large, mainly cystic mass. The radiological differentiation of renal metastases from primary renal tumours is discussed.     

VEGF、Cath-D在喉复发癌组织芯片中的表达和意义

目的　研究VEGF、Cath D蛋白的表达与喉癌复发的关系 ,对预后进行估计。方法　回顾性分析 195 8～1999年喉癌手术病例 5 74例 ,术后随访 3年 ,确诊术后复发 5 6例 ;正常喉对照标本 39例。标本制成组织芯片 ,采用免疫组化SABC法对芯片标本进行染色。结果　VEGF、Cath D在喉癌组织中有表达 ,其阳性率不同。VEGF、Cath D蛋白的表达在喉癌复发组明显增强 ,与未复发组的表达差异有统计学意义 (P <0 0 0 1) ,与喉癌复发呈正相关。VEGF、Cath D蛋白在喉癌组织的表达与正常组织的表达比较差异有统计学意义 (P <0 0 0 1)。结论　VEGF、Cath D蛋白的表达可作为估计喉癌预后的指标     

黏附分子E-cadherin、CD44和Tenascin在喉复发癌组织芯片中的表达和意义

目的　研究E cadherin、CD4 4和Tenascin黏附分子的表达与喉癌复发的关系 ,以对预后进行评估。方法　回顾分析 195 8～1999年喉癌手术病例 5 74例 ,术后随访 3年 ,确诊术后复发 5 6例 ;正常喉对照标本 39例。标本制成组织芯片 ,采用免疫组化SABC法 ,对芯片标本进行染色。结果　E cadherin、CD4 4和Tenascin在喉癌组织中有表达 ,其阳性率各有不同。E cadherin蛋白的表达在喉癌复发组明显降低 ,与未复发组比较差异显著 (P <0 0 0 1) ,与喉癌复发呈负相关。而CD4 4、Tenascin蛋白的表达在喉癌复发组明显升高 ,与未复发组比较差异显著(P <0 0 0 1) ,与喉癌复发呈正相关。E cadherin、CD4 4和Tenascin黏附蛋白在喉癌组织的表达与正常组织比较差异有统计学意义 (P <0 0 0 1)。结论　黏附分子E cadherin、CD4 4和Tenascin的表达可作为喉癌预后估计的指标。     

CT扫描在喉及下咽癌术后评价中的应用价值

目的探讨CT扫描在评价喉及下咽癌术后状况中的应用价值。材料与方法回顾性分析了45例（术后1～120月共作了69次CT扫描）经喉镜、活检或手术病理证实的喉及下咽癌术后正常和异常的CT表现。结果10例患者呈喉及下咽癌术后正常改变,8例水肿或瘢痕形成,2例术后滞溜囊肿。25例有术后肿瘤复发或/和转移,包括局部肿瘤复发18例、颈部淋巴结转移13例及远处转移2例。结论CT扫描能很好地显示喉及下咽癌术后的正常和异常改变,判断有无肿瘤复发及其侵犯范围,为临床治疗提供重要的帮助。