砷中毒大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶活性及其行为学变化

脑中化学物质的稳定性影响着正常人的思维、学习和行为变化 ,所以砷对脑发育的影响不容忽视。据Ｂｉｓｗａｓ[1 ] 报道 ,在全身各器官中脑砷的浓度最低。但仍有部分砷通过脑脊液、血液进入脑实质 ,产生脑损伤。本研究通过测定不同剂量染砷大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)的活性 ,及其行为学变化 ,揭示砷中毒与大脑皮层ＡＣｈＥ活性和行为学变化之间的关系 ,同时为阐明砷对脑发育的影响及砷的神经毒性机制提供依据。材料与方法一、动物与药品　选用刚断乳Ｗｉｓｔａｒ大鼠 32只 ,体重 80～1 0 0ｇ ,由天津医学实验动物中心提供。Ａｓ2 …     

还脑益聪方组分对β淀粉样前体蛋白转基因痴呆小鼠行为学及胆碱能系统的早期干预作用

目的：观察还脑益聪方复方组分早期干预对阿尔茨海默病（Alzhei mer disease,AD）模型β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）转基因小鼠行为学及脑胆碱能系统的影响。方法：将60只3月龄APP695V717I转基因小鼠随机分为4组：模型组、大剂量还脑益聪方组[2.80g/（kg.d）]、小剂量还脑益聪方组[1.40g/（kg.d）]及盐酸多奈哌齐阳性对照组[0.65mg/（kg.d）],每组15只。15只遗传背景相同的非转基因C57BL/6J小鼠作为正常对照组。所试药物稀释至相同体积灌胃给药,正常组和模型组给以等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃6个月。采用Morris水迷宫实验和避暗实验进行小鼠行为学测试,采用酶联免疫吸附测定法分别检测小鼠大脑皮层和海马组织的乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）含量及胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase,ChAT）的活性,采用考马斯亮蓝法测定脑组织中蛋白的含量。结果：与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆成绩均显著下降（P〈0.05,P〈0.01）,海马和皮层组织的ACh含量和ChAT活性显著降低,AChE含量显著增加（P〈0.01,P〈0.05）。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠的学习记忆能力均有明显提高（P〈0.05）;盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方大剂量组小鼠海马ACh含量明显提高（P〈0.05）,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠海马AChE含量显著降低,ChAT活性显著升高（P〈0.01,P〈0.05）;盐酸多奈哌齐组和还脑益聪方两组小鼠皮层ACh含量均明显提高（P〈0.05）,AChE含量有不同程度的降低,还脑益聪方两组小鼠皮层ChAT活性均明显提高（P〈0.05）。结论：还脑益聪方能明显改善APP转基因小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与调控小鼠海马与皮层胆碱能系统相关酶的含量有关。     

原花青素对大鼠创伤性脑损伤的保护性作用的实验研究

目的 研究原花青素(Procyanidins,PC )对创伤性脑损伤大鼠大脑皮层脑组织含水量、超氧化物歧化酶 (SOD) 活性及丙二醛 (MDA) 含量及超微结构的影响,探讨PC 的脑保护作用机制.方法 采用自由落体撞击伤方法制作创伤性脑损伤模型,致伤后5 min腹腔注射 PC,测定脑损伤后 2 h 大鼠大脑皮层脑组织含水量、SOD活性及 MDA含量并观察超微结构的变化.结果 创伤性脑损伤后大脑皮层脑组织含水量增高、SOD活性降低,MDA含量升高;PC 处理能部分反转这种变化,使脑水肿减轻.结论 PC对创伤性脑损伤有保护作用,其机制可能与原花青素抗氧化活性和自由基作用有关.     

强记片对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的影响及机理研究

目的探讨强记片对东莨菪碱致小鼠学习记忆能力损伤的改善作用及其作用机理。方法小鼠灌胃不同剂量强记片后腹腔注射东莨菪碱造成学习记忆障碍模型,造模后测定各组小鼠Morris水迷宫和跳台行为学实验中的学习记忆能力和胆碱乙酰化酶(choline acetylase,ChAT)及胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性。结果强记片各剂量可改善东莨菪碱所致痴呆小鼠在行为学实验中表现出的学习记忆障碍,并可提高小鼠脑内ChAT活性,降低AChE活性,并具有一定的量效关系。结论强记片可明显增强东莨菪碱致痴呆小鼠的学习记忆能力,机制可能与其能增加小鼠脑内乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、改善胆碱能神经系统功能有关。实验结果证明中药复方强记片在阿尔茨海默氏病的治疗方面有一定的开发价值。     

卵巢切除及雌激素替代对大鼠脑单胺氧化酶和行为学的影响

目的观察卵巢切除对大鼠脑内单胺氧化酶和学习记忆的改变及雌二醇对其影响的可能机制.方法采用Morris水迷宫方法观察切除卵巢后大鼠的行为学改变,用比色法测定了大鼠大脑皮层和海马中单胺氧化酶(MAO)活性.结果大鼠切除卵巢后6周,Morris水迷宫试验逃避潜伏期(88.9±35.1)明显延长,记忆频度(18.7±2.7)减退,大鼠大脑海马组织中单胺氧化酶(MAO)活性升高(223.0±66.8),与Sham组比较,P均＜0.05.应用雌激素可以改善记忆障碍,并能拮抗因卵巢切除造成大鼠大脑海马组织中MAO活性的升高(134.2±46.6,P＜0.01),大脑皮层MAO活性无变化.结论大鼠卵巢切除可以造成学习记忆减退,雌激素替代能改善学习记忆,同时雌激素能抑制海马组织中MAO活性,这可能是改善大脑功能的机制之一.     

砷对大鼠大脑皮层SOD的影响及其相关性的研究

目的 探讨不同剂量砷对大鼠大脑皮层SOD的影响.方法 以剂量递增法建立染砷大鼠动物模型.12周后,测定不同剂量砷对大鼠大脑皮层生化指标SOD.结果 不同剂量砷对大鼠大脑皮层超氧化物歧化酶(SOD)与正常对照组相比,有显著性差别 (P<0.05).随剂量增加SOD值升高(P <0.05).结论随染砷剂量增加,大鼠大脑皮层SOD指标发生变化.     

醒脑化痰针法对血管性痴呆大鼠海马组织乙酰胆碱酯酶的影响

目的:探讨醒脑化痰针法对血管性痴呆大鼠海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。方法:采用4-血管阻断法反复夹闭大鼠双侧颈总动脉,造成一种慢性脑低灌注状态,使脑组织产生缺血缺氧性损害,尤其易损害海马、皮层等与认智功能有关的组织,从而形成血管性痴呆模型;处死大鼠测量海马组织乙酰胆碱酯酶(Ache)活性。结果:与假手术组比较,VD模型对照组大鼠大脑纹状体AChE活性明显降低,而皮层脑组织无明显变化;针刺及阳性药均能显著降低皮层、纹状体AChE活性,与模型对照组比较均有显著性差异(P0.01),阳性药组对皮层和纹状体AChE均无明显影响。结论:醒脑化痰针法对胆碱能神经元具有保护作用。     

深低温停循环间断灌注脑保护液对大脑皮层组织一氧化氮化氮合酶的影响

目的　研究深低温停循环 (DHCA)下间断灌注充氧脑保护液对大脑皮层组织一氧化氮合酶 (NOS)的影响。方法　 10条健康杂种犬随机分为两组 ,A组单纯DHCA 12 0min ,B组DHCA后经双侧颈动脉间断灌注充氧脑保护液。两组动物于不同时相取大脑皮层组织测其NOS的活性。结果　DHCA 12 0min及恢复循环 45min后 ,A组大脑皮层组织NOS阳性神经细胞的数量明显多于CPB前 (P <0 .0 5及P <0 .0 1) ,B组变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论　DHCA间断灌注充氧脑保护液抑制大脑皮层组织NOS的活性 ,减少大脑皮层组织一氧化氮 (NO)的过量合成     

补元聪脑汤对AD大鼠胆碱能系统的影响

目的:以补肾祛痰化瘀立法组方(补元聪脑汤)治疗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠,并观察其海马区胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性变化。方法:在大鼠海马区内注入鹅膏蕈氨酸(IBO)和β样淀粉蛋白1-42肽段(Aβ1-42)混合液造成AD模型,以补元聪脑汤和西药脑复康混悬液分别灌胃治疗。通过比色法测定大鼠海马内ChAT和AchE活性。结果:补元聪脑汤能增加AD大鼠海马内的ChAT和AChE活性。结论:补元聪脑汤对AD模型大鼠海马区ChAT和AChE活性变化有明显改善。     

慢性染砷对大鼠大脑皮层组织细胞DNA损伤及细胞凋亡的影响

目的:通过单细胞凝胶电泳(SCGE)和免疫组织化学的方法探讨慢性染砷对大鼠大脑皮层组织细胞的影响及机制.方法:60只3周龄Wistar大鼠随机分为低剂量染砷组(A1)、高剂量染砷组(A2)和对照组(C),分别自由饮用10.0 mg/L、40.0 mg/L的三氧化二砷水溶液和自来水,喂养6个月后处死大鼠,取新鲜的大脑皮层进行SCGE实验,检测各组大脑皮层凋亡蛋白Bax的表达.结果:SCGE实验提示,染砷组大脑皮层细胞DNA损伤明显高于对照组,P＜0.01.凋亡蛋白Bax在3组均有表达,随着染毒剂量的增加Bax表达增强,A2组与C组比较P＜0.01.结论:慢性染砷可引起大鼠大脑皮层组织细胞DNA损伤和诱导细胞凋亡.     

SE大鼠认知、情感障碍与海马乙酰胆碱酯酶纤维分布改变的关系

目的 探讨实验性癫痫持续状态(status epilepsy,SE)对大鼠认知功能的影响及与乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)阳性神经纤维在脑部分布变化的关系.方法 戊四氮诱导大鼠SE,行为学检测大鼠情感反应和学习记忆功能的改变.组织化学的方法观察海马、皮层AChE纤维分布的改变.结果 SE可引发实验动物活动习性发生改变,警觉水平、恐惧、焦虑等防护性情感反应下降及空间学习和记忆能力受损,伴有海马、皮层分子层AChE阳性神经纤维密度减低.结论 SE使大鼠情感行为发生改变和学习记忆功能受损,可能与海马、皮层AChE阳性神经纤维减少有关.     

卵巢切除及雌激素替代对大鼠脑单胺氧化酶和行为学的影响

目的观察卵巢切除对大鼠脑内单胺氧化酶和学习记忆的改变及雌二醇对其影响的可能机制。方法采用Morris水迷宫方法观察切除卵巢后大鼠的行为学改变 ,用比色法测定了大鼠大脑皮层和海马中单胺氧化酶 (MAO)活性。结果大鼠切除卵巢后 6周 ,Morris水迷宫试验逃避潜伏期 ( 88.9± 3 5 .1)明显延长 ,记忆频度 ( 18.7± 2 .7)减退 ,大鼠大脑海马组织中单胺氧化酶 (MAO)活性升高 ( 2 2 3 .0± 66.8) ,与Sham组比较 ,P均 <0 .0 5。应用雌激素可以改善记忆障碍 ,并能拮抗因卵巢切除造成大鼠大脑海马组织中MAO活性的升高 ( 13 4.2± 46.6,P <0 .0 1) ,大脑皮层MAO活性无变化。结论大鼠卵巢切除可以造成学习记忆减退 ,雌激素替代能改善学习记忆 ,同时雌激素能抑制海马组织中MAO活性 ,这可能是改善大脑功能的机制之一。     

乐果亚慢性染毒对大鼠自发活动的影响

目的探讨有机磷农药乐果90d染毒对大鼠自发活动的影响。方法48只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别使用生理盐水(对照),5mg/kg(低剂量)、10mg/kg(中剂量)和20mg/kg(高剂量)的乐果灌胃给药,每周染毒5d,每天1次,实验周期90d。定期尾静脉采血,测定全血AChE活性,实验结束时随机取半数动物,用DigBehv-LR型自发活动视频分析系统测定其自发活动;其余动物均断头处死,测定脑AChE活性。结果实验期间,各乐果染毒组动物全血AChE活性明显抑制,实验后期有所恢复。实验结束时,低、中、高剂量组脑组织AChE活性分别为对照组的78%、63%和42%,存在剂量-效应关系。大鼠自发活动测试结果显示,随染毒剂量的增加,低、中、高剂量大鼠的总路程、活动时间、平均速度有下降趋势,而休息时间有升高趋势。其中高剂量组的变化最为明显,总路程、活动时间、平均速度同对照组相比分别下降了54.6%、55.3%、54.7%,而休息时间增加了41.3%,同对照组相比都有显著性差异(P<0.05)。对大鼠自发活动指标和全血及脑AChE活性的相关性进行分析,发现染毒大鼠的总路程、活动时间、平均速度和休息时间和脑AchE活性呈显著相关(P<0.05),而与全血AchE活性在统计学上无相关性(P>0.05)。结论乐果亚慢性染毒会使大鼠自发活动降低,这可能同脑组织AChE活性受到长期抑制有关。     

小鼠大脑乙酰胆碱酯酶提取、测定优化及异喹啉类生物碱乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的优化小鼠大脑乙酰胆碱酯酶(AChE)提取、测定方法,评价异喹啉类生物碱的AChE抑制活性。方法采用蔗糖密度梯度离心及Ellman法评价不同提取方法对小鼠大脑AChE亚型表达及提取影响,优化测定方法,并在此基础上对异喹啉类生物碱的AChE抑制活性及构效关系进行考察。结果匀浆+超声、匀浆提取法对大脑AChE亚型表达一致,但前者AChE提取效果较优。随着反应温度、显色时间增加,药物AChE抑制活性增强,但显色时间超过30 min时,药物AChE抑制活性趋于平缓。随着大脑裂解液稀释倍数增加,药物AChE抑制活性未明显变化,且稀释10～20倍时,空白组AChE吸光度值为0.6～1.5。异喹啉类生物碱具有较好AChE抑制活性,而叔胺型生物碱AChE抑制活性降低。结论匀浆联合超声对小鼠大脑AChE有较好提取效果;反应温度37℃,显色时间30 min,大脑裂解液稀释10～20倍时,药物AChE抑制活性灵敏度、准确性好。异喹啉类生物碱的AChE抑制活性与其季胺型结构密切相关。     

褪黑素对大鼠创伤性脑损伤保护作用的实验研究

目的研究褪黑素(melatonin,MT)对创伤性脑损伤大鼠大脑皮层谷胱甘肽过氧化物酶(CPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(ME)A)含量及超微结构的影响,探讨MT的脑保护作用机制。方法采用自由落体撞击伤方法制作创伤性脑损伤模型,致伤前30min腹腔注射MT,测定脑损伤后1h大鼠大脑皮层GPx、SOD活性及MDA含量并观察超微结构的变化。结果创伤性脑损伤后大脑皮层GPx、SOD活性降低,MDA含量升高;MT预处理能部分反转这种变化;脑水肿减轻。结论MT、对创伤性脑损伤有保护作用,其机制可能与保护GPx、SOD活性,减少脂质过氧化有关。     

脑低灌注触发脑内tau过度磷酸化和胆碱能神经损害

目的 探讨脑低灌注对脑内tau蛋白的过度磷酸化和胆碱能指标变化的影响.方法 40只SD大鼠随机分为低灌注组和假手术组,永久性阻断双侧颈总动脉制作脑低灌注模型;应用Y迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组化法检测大脑皮质和海马组织色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404-Tau)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达,用考马斯亮蓝法检测海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性.结果 脑低灌注术后14 d和21 d,大鼠学习记忆能力明显减退,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.01);大脑皮质和海马组织Pser404-Tau阳性细胞数较假手术组明显增加(P＜0.01);大脑皮质和海马组织ChAT阳性细胞计数较假手术组明显减少(P＜0.01);海马组织AChE活性较假手术组明显降低(P＜0.01).结论 脑低灌注后出现认知功能障碍,可能与脑缺血导致脑内tau蛋白过度磷酸化、损害胆碱能神经功能有关.     

应用亲和层析分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶的初步研究

目的 分离纯化小脑乙酰胆碱酯酶（AChE)。材料和方法 采用ConA和B10亲和层析法纯化小人脑AChE，以纯化的人小脑AChE为免疫原，免疫6只BALB/c小鼠制备小鼠抗人小脑AChE抗血清，并检测其与电鳐AChE和人红细胞膜AChE的交叉免疫反应性。结果 SDS-PAGE还原状态下呈一条主带，相对分子质量为67000，比活性为373U/mg。结论 免疫亲和层析法操作简单，可快速纯化人小脑AChE。     

银杏叶提取物对点燃模型幼鼠学习记忆及海马乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶活性的影响

目的研究银杏叶提取物（EGb）对点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能,对大鼠海马乙酰胆碱酯酶（AChE）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）活性的影响。方法21、35日龄SD大鼠各40只,经初筛后随机分为生理盐水对照组、点燃对照组及EGb大、中、小剂量治疗组,采用戊四氮（PTZ）诱导幼鼠点燃模型,以Y型电迷宫及生化检测方法,观察用药前后大鼠学习记忆功能和海马AChE、ChAT活性的变化。结果EGb呈剂量依赖性显著改善实验大鼠的学习记忆能力,并显著抑制海马AChE活性、增强ChAT的活性。结论EGb可以通过抑制功能脑区AChE活性、增加ChAT的活性,增强中枢胆碱能神经系统的功能,改善发育期癫痫大鼠学习记忆功能。     

MT对大鼠创伤性脑损伤作用的实验研究

目的 研究大鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）后早期给予褪黑素（melatonin,MT）对脑内抗氧化损伤的作用以及作用的量效关系;探讨MT作为自由基清除剂对抗TBI后脑内氧化损伤可能的机制,为MT的临床应用提供实验依据.方法采用自由落体撞击伤方法制作创伤性脑损伤模型,致伤后5min腹腔注射MT及维生素C,测定脑损伤后2h大鼠大脑皮层谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）及丙二醛（MDA）含量并观察超微结构的变化.结果创伤性脑损伤后大脑皮层GSH-Px,CAT活性降低,MDA含量升高,通过早期给予MT能部分对抗这种变化,且MT剂量越大,作用越强.结论大鼠TBI后早期给予MT可以对抗脑内的氧化损伤,有脑保护作用,其机制可能与保护GSH-Px、CAT活性,减少脂质过氧化有关.     

三七皂苷Rg1对动物学习记忆功能的影响及其机理研究

目的评价三七皂苷Rg1对动物学习记忆功能的影响及其初步作用机理.方法采用东莨菪碱、乙醇、亚硝酸钠复制小鼠和大鼠记忆障碍模型,运用跳台法研究三七皂苷Rg1对动物学习记忆功能的影响,同时探讨其对脑组织乙酰胆碱酯酶（AChE）活性、丙二醛（MDA）及脂褐质水平的影响.结果与东莨菪碱所致记忆获得障碍、亚硝酸钠所致记忆巩固障碍及40%乙醇所致记忆再现障碍的模型组比较,中、高剂量（小鼠200和400mg/kg,大鼠100和200mg/kg）的三七皂苷Rg1均明显减少5min内的错误次数,并显著延长潜伏期.大鼠大脑皮层生化代谢产物含量测定结果表明,与东莨菪碱所致记忆获得障碍模型组相比,中、高剂量（100和200mg/kg）的三七皂苷Rg1均显著降低AChE活性、MDA及脂褐质的含量.结论三七皂苷Rg1能明显改善记忆的获得、促进记忆的巩固、有利于记忆的再现,具有明显的促智作用,其机制可能与降低脑组织AChE活性及改善单胺类神经系统功能、降低脑组织中脂质过氧化物及脂褐质等的含量有关.