牛黄抗间二硝基苯所致氧化作用的研究

[目的]研究牛黄的抗氧化作用。[方法]分离培养原代大鼠肝细胞,采用正交试验设计,在0、0.1和0.5mmol/L间二硝基苯(m-DNB)诱导大鼠肝细胞氧化损伤的基础上,观察不同时间(0.5、2和5h)、不同剂量(0、5和10μmol/L)牛黄的抗氧化作用,测定大鼠肝细胞孵育系统丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。同时,观察10μmol/L牛黄预处理对m-DNB0、0.01、0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L不同剂量组肝细胞悬液水平和m-DNB0、0.01、0.05、1.00mmol/L组肝细胞悬液OH·水平的影响。[结果]经牛黄处理后,大鼠肝细胞孵育系统MDA含量明显下降,GSH含量下降,GSH-Px活力升高。10μmol/L牛黄预处理可以显著降低含m-DNB的肝细胞孵育系统中和OH·水平,水平分别由2.38、3.49、5.08、6.35、9.20、10.95μmol/L降为1.74、2.38、3.17、3.65、5.08和6.19μmol/L(P<0.05),而OH·水平由31.27、45.50和52.87mm降为20.60、26.30和30.6mm峰高(P<0.05)。[结论]牛黄可能通过抑制脂质过氧化,清除自由基和GSH发生联合抗氧化作用。     

胆红素的抗氧化作用及血红素加氧酶对胆红素的调控作用

目的在间二硝基苯(m-DNB)诱导的大鼠氧化损伤的基础上,观察胆红素、血红素加氧酶的变化,并分析两者在抗氧化方面的作用和意义。方法用5,10,20 mg/kg的m-DNB染毒大鼠后,分别于2周和4周测定大鼠血清胆红素(bilirubin,BR)含量及肝脏微粒体血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)活力及血清GSSG/GSH比值。另用一定量的m-DNB加锌卟啉(ZnPP)或血红素(heme)染毒,1周后测定大鼠血清BR含量、HO活力和GSSG/GSH比值。结果染毒2周时,各染毒组BR含量和HO活力均明显上升,且与m-DNB剂量呈显著正相关(P<0.01),染毒4周时,BR含量明显降低,仅在高剂量组仍高于对照组,低、中剂量组回落至正常水平,但与m-DNB仍呈显著相关(P<0.01);HO活力在低、中剂量组进一步升高,而高剂量组回落至正常水平。同时,m-DNB ZnPP组和m-DNB heme组HO活力显著低于对照组和m-DNB染毒组(P<0.05),BR水平高于对照组而低于m-DNB染毒组(P<0.05),GSSG/GSH比值高于对照组和m-DNB染毒组(P<0.05)。结论BR和HO两者均具有抗氧化作用,提示,HO在机体氧化应激时对胆红素可能具有双相调控作用。     

硒对氟致人肝细胞脂质过氧化、DNA损伤及凋亡的影响

[目的 ]研究硒对氟致离体培养人肝细胞脂质过氧化、DNA损伤及诱导凋亡的作用。 [方法 ]体外培养的正常人肝细胞分别接触 80 μg/ml氟化钠和 /或 1.73 μg/ml亚硒酸钠 12h后 ,检测细胞脂质过氧化物 (LPO)水平、还原型谷胱甘肽 (GSH)含量、细胞DNA损伤率、凋亡率和细胞周期构成比的情况。 [结果 ]氟组肝细胞LPO( 2 .88± 0 .5 9)nmolMDA/mg·prot、DNA损伤率 5 9.0 %、凋亡率 15 .5 6%± 2 .0 6%和S期细胞数 4.82 %± 0 .45 % ,均明显高于对照组 ,而GSH含量 ( 4 .2 3± 0 .78) μg/mg .prot则明显低于对照组 ;硒通过增加细胞GSH含量 ,降低LPO水平、DNA损伤率、凋亡率和S期细胞数而拮抗氟产生的毒性作用。 [结论 ]一定剂量的硒可拮抗氟所诱导的脂质过氧化、DNA损伤与细胞凋亡。     

葡萄籽油对镉致大鼠肝脏细胞氧化损伤的保护作用

[目的]探讨葡萄籽油（grape seed oil,GSO）对氯化镉（CdCl2）诱导大鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用。[方法]将40只SPF级雌雄各半SD大鼠随机分为对照组（腹腔注射生理盐水和灌胃生理盐水）、染镉组（腹腔注射1．0mg／kg的CdCl2和灌胃生理盐水）、GSO低、中、高剂量干预组（均腹腔注射1．0mg／kg CdCl2,同时分别灌胃0．66、1．32、2．64mg／kg GSO）,硫代巴比妥酸法检测肝中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量,采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测各组肝脏细胞DNA损伤情况。[结果]1．0ms／kg CdCl2可诱导大鼠肝脏细胞合成MDA,使其含量明显增加并加速DNA的氧化损伤;GSO高剂量干预组中MDA含量较染镉组差异具有统计学意义（P〈0．05）,3个GSO干预组MDA的清除率分别为54．55％、54．55％和100．00％,不同剂量的GSO对MDA清除呈较好的剂量-效应关系。各GSO干预组DNA氧化损伤较染镉组均明显下降（P〈0．05）.[结论]一定剂量葡萄籽油可降低大鼠肝脏中MDA含量和镉致DNA氧化损伤,具有明显的抗脂质过氧化损伤的作用。     

食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞毒性及与氧化应激的关系

[目的 ]研究食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞的细胞毒性、DNA损伤及其与氧化应激的关系。 [方法 ]采用MTT比色法、溴乙锭荧光法和单细胞凝胶电泳技术 ,分别测定食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞的细胞毒性、DNA交联和DNA链的断裂作用 ,并用抗氧化剂N 乙酰半胱氨酸 (NAC)进行干预。 [结果 ]食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞具有细胞毒作用 ,对DNA既有交联作用又有链断裂作用 ,在受试剂量范围内呈剂量 反应关系。染毒前对大鼠肺Ⅱ型细胞用抗氧化剂NAC预处理 ,可降低食用油烟对大鼠肺细胞的细胞毒性和DNA损伤作用。 [结论 ]食用油烟对大鼠Ⅱ型细胞以及DNA的损伤与氧化应激有关     

邻苯二甲酸二乙基己基酯对大鼠肝细胞和睾丸细胞DNA单链断裂水平的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二乙基已基酯(DEHP)对大鼠肝细胞和睾丸细胞DNA的损伤.方法 选用雄性Wis-ter大鼠25只,随机分为5组,每组5只,通过灌胃的方法摄入DEHP,4个染毒组剂量浓度分别为1 500、3 000、4 500、6 000 mg·kg-1·d-1,1个阴性溶剂对照组,用单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)检测大鼠肝细胞和睾丸细胞DNA的损伤.结果 各染毒组和对照组大鼠肝细胞DNA损伤率分别为28.0%、69.0%、86.0%、94.0%和18.0%,各染毒组肝细胞DNA损伤程度与对照组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01),且大鼠肝细胞损伤率与染毒剂量之间呈剂量-反应关系(r=0.942,P<0.01);各染毒组和对照组大鼠睾丸细胞DNA损伤率分别为29.0%、71.0%、89.0%、95.0%和15.0%,各染毒组睾丸细胞DNA损伤程度与对照组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01),且大鼠睾丸细胞损伤率与染毒剂量之间呈剂量-反应关系(r=0.930,P<0.01).结论 DEHP可造成大鼠的肝细胞和睾丸细胞DNA的损伤,并随染毒剂量的增加有加重的趋势.     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用

[目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。     

氯乙烯致大鼠DNA损伤与肝代谢酶活性动态变化的研究

[目的]研究氯乙烯(VC)对大鼠肝细胞和外周血淋巴细胞DNA的损伤作用，及对VC代谢酶[谷胱甘肽硫转移酶(GST)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)]活性的影响；探索VC所致损伤的早期敏感检测指标。[方法]大鼠染毒12周，分别在第3、6、9和12周处死动物，DNA损伤采用单细胞凝胶电泳(彗星试验)法，代谢酶活性测定采用分光光度法。[结果]彗星细胞数目随染毒剂量和染毒时间的增加而增加，肝细胞DNA损伤细胞百分率第12周中剂量组和高剂量组分别为12.38％和17.88％，外周血淋巴细胞DNA损伤细胞百分率第3周高剂量组为7．33％，第12周中剂量组和高剂量组分别为16．25％和28、25％，均显著高于相应对照组，彗星细胞发生率与VC染毒剂量间存在显著相关关系。ALDH和CYP2E1活性随染毒时间和染毒剂量的增加发生改变，差异具显著性。肝细胞DNA损伤与CYP2EI活性相关。[结论]VC可导致肝细胞和外周血淋巴细胞DNA发生损伤，且存在剂量．反应和时间一效应关系；VC致肝细胞DNA损伤与CYP2E1代谢酶活性相关。彗星细胞率可作为VC所致肝脏损伤的早期检测指标。     

锰的遗传毒性及锌对其毒性的拮抗作用

[目的]研究锰的遗传毒性及锌对其毒性的拮抗作用。[方法]昆明种小鼠分为7组,对照组、染锰组(分3个剂量给小鼠腹腔注射氯化锰)、干预组(注射相应3个剂量的氯化锰并在饮水中添加硫酸锌),6周后检测小鼠胸骨骨髓细胞微核情况,用彗星试验检测其外周血淋巴细胞DNA损伤。[结果]随染锰剂量的增加小鼠骨髓细胞微核率随之上升,中、高染锰组显著高于对照组(χ~2值分别为63.32,222.82,P<0.01),淋巴细胞DNA损伤程度逐渐加重,低、中、高染锰组均高于对照组(χ~2值分别为934.11,3 357.21,6 277.45,P<0.01);锌干预后,加锌染锰组微核率均低于相应不加锌染锰各剂量组,低锰组细胞微核率接近于对照,而加锌中、高锰组与相应不加锌染锰各剂量组比较差异均有统计学意义(χ~2值分别为2.33,158.27,P<0.01)。加锌染锰组DNA损伤均低于相应不加锌染锰各剂量组,差异均有统计学意义(χ~2值分别为83.15,81.66,241.76,P<0.01)。[结论]过量锰可导致小鼠淋巴细胞DNA损伤,具有遗传毒性,锌对其毒性有一定拮抗作用。     

甲基叔丁基醚的遗传毒性研究

[目的 ]探讨国产甲基叔丁基醚 (MTBE)的遗传毒性。 [方法 ]应用单细胞凝胶电泳试验、DNA交联试验和程序外DNA合成试验 ,测试MTBE对大鼠肺Ⅱ型细胞和肝细胞的遗传毒性。 [结果 ]MTBE可引起大鼠肺Ⅱ型细胞和肝细胞的DNA链断裂及程序外DNA合成的增加 ,不引起小牛胸腺DNA、大鼠肺Ⅱ型细胞DNA和肝细胞DNA交联。 [结论 ]MTBE在DNA水平有一定的遗传毒性     

胆红素对m—DNB所致大鼠肝细胞DNA合成抑制效应影响的初步探讨

本研究通过对大鼠肝细胞ＤＮＡ摄入［３Ｈ］－ＴｄＲ量的检测，主要探讨了ｍ－ＤＮＢ对大鼠肝细胞ＤＮＡ合成的抑制效应及胆红素对ｍ－ＤＮＢ染毒后肝细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明：ｍ－ＤＮＢ组计数值／ｍｉｎ（ｃｐｍ）显著低于对照组，并呈明显量－效关系；当肝细胞受损时，低剂量及后加高剂量胆红素组的ｃｐｍ显著高于ｍ－ＤＮＢ、空白及胆红素对照组；ｍ－ＤＮＢ染毒前、中、后三种给胆红素方式ｃｐｍ值无显著差异。提示胆红素对ｍ－ＤＮＢ所致ＤＮＡ合成抑制效应有拮抗作用，可促进肝细胞ＤＮＡ的合成，从而对肝细胞再生有促进作用。     

石棉与烟雾溶液对人肺肺细胞DNA的损伤作用

目的 探讨石棉与烟雾溶液联合作用对人胚肺细胞ＤＮＡ的损伤作用。方法 采用非程序ＤＮＡ合成试验，对石棉与烟雾溶液单独及联合作用时人胚肺细胞ＤＮＡ修复合成情况进行了观察。     

煤烟导致非细胞体系DNA氧化应激损伤的机制

目的 探讨煤烟导致非细胞体系氧应激损伤的机理。方法 以N－乙酰半胱氨酸（NAC）和甘露醇等不同作用位点的抗氧化剂作为实验干预手段,采用溴乙锭荧光法观察煤烟所致非细胞体系的DNA交联形成作用。结果 甘露醇可以有效地降低煤烟经DNA染毒所致的小牛胸腺DNA和肺细胞NDA的交联作用;而NAC却没有观察到相类似的作用。结论 煤烟在不需要经过细胞酶代谢条件下,可以通过产生羟自由基的途径而导致DNA氧应激损伤。     

Neuroprotection against oxidative injury by a nucleic acid-based health product (Squina DNA) through enhancing mitochondrial antioxidant status and functional capacity

High levels of reactive oxygen species inflict oxidative damage on various cellular components that eventually culminate in a variety of diseases. This study investigated the cytoprotective effects of a nucleic acid-based health product (Squina [Hong Kong, China] DNA) against oxidative stress, particularly in neuronal cells. Adult female Sprague-Dawley rats were treated with Squina DNA, and changes in mitochondrial antioxidant status and functional capacity were assessed by the activities of antioxidant enzymes and ATP generation capacity in brain, heart ventricular, kidney, skeletal muscle, and liver tissues of control and Squina DNA-treated rats. The effects of Squina DNA pretreatment on brain/neuronal cell injury were investigated in a rat model of cerebral ischemia/reperfusion (I/R) injury and a neuroblastoma SH-SY5Y cell model of β-amyloid (Aβ) protein fragment 25-35-induced toxicity. Long-term Squina DNA treatment caused dose-dependent increases in mitochondrial antioxidant status and functional capacity in rat brain, heart ventricular, kidney, skeletal muscle, and liver tissues. Squina DNA pretreatment significantly prevented I/R injury in brain tissue. The cerebroprotection was associated with a reversal of I/R-induced impairment in mitochondrial antioxidant status and disruption in membrane integrity. Squina DNA ethanol extract also significantly inhibited the Aβ-induced apoptosis in SH-SY5Y neuronal cells, as evidenced by less caspase 3 and caspase 9 activation as well as mitochondrial cytochrome c release in Aβ-challenged cells. Squina DNA may enhance the resistance of tissues and cells to oxidative stress, particularly in pathological conditions such as stroke and aging-related neurodegenerative diseases.     

煤烟致大鼠肺细胞氧化应激损伤的机制探讨

目的：探讨煤烟导致细胞体系氧化应激损伤的机制。方法：以Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和甘露醇等不同作用位点的抗氧化剂作为实验干预手段，采用ＭＴＴ比色法和溴乙锭荧光法观察煤烟所致细胞毒性和肺细胞ＤＮＡ交联形成作用。结果Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡ）可以有效地降低煤烟气致的细胞毒性和细胞ＤＮＡ交联形成作用；而甘露醇却没有观察到上述作用。结论煤烟在细胞内经代谢活化后产生的某些代谢产物可以降低氏内谷胱甘肽含量，引起     

三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和氧化应激的影响

目的研究三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和肝组织氧化应激的作用。方法选用雄性SD大鼠,每组5只,用1500和3000mg／kg的三氯乙烯经口灌胃染毒,48h处死动物。用单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测肝细胞DNA损伤,并检测肝组织中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。结果三氯乙烯在1500和3000ms／ks剂量条件下,肝细胞DNA的Olive尾矩增加,DNA损伤细胞率分别为41．96％和54．13％,也明显高于对照组的9．30％（P〈0．01）;大鼠肝组织中的ROS、MDA均较对照组显著增高（P〈0．01）,同时GSH又较对照组明显下降（P〈0．01）。结论三氯乙烯在1500和3000mg／kg剂量条件下染毒大鼠后,造成肝组织明显的氧化应激并引起肝细胞DNA损伤。     

短果茴芹抗氧化活性成分的提取及筛选

目的对短果茴芹抗氧化活性成分进行提取,并了解其提取物的抗氧化效果。方法采用邻苯三酚自氧化体系、Fenton反应体系和H2O2诱导的氧化损伤模型,了解短果茴芹4种提取物的抗氧化作用。结果所获得的4种提取物均具有抗氧化作用,其中乙酸乙酯层提取物作用最强,这与乙酸乙酯层提取物具有较强的清除O.-2和.OH能力有关;石油醚层提取物虽然也具有较强的清除O.-2和.OH能力,但对人肝癌细胞BEL-7404的氧化损伤无保护作用,反而有抑制肿瘤的效果。结论短果茴芹富含抗氧化活性成分,值得深入研发。     

槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷对淋巴细胞DNA损伤修复的影响

目的　脱氧核苷是构成 DNA分子的重要组分 ,通过补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷探讨对 DNA损伤修复的影响。方法　采用“彗星”电泳技术分析 DNA断裂损伤 ,用 1 0 0 μmol/LH2 O2 诱导人体外周血淋巴细胞 DNA损伤后分为两组 :一组为对照组 ,另一组为脱氧核苷补充组( 2 0 μl,1 0 -4 mol/L)。结果　对照组淋巴细胞从初始到培养 2 h后 DNA损伤程度逐渐下降 ,由1 67.75下降为 68.1 ( AU) ;而补充脱氧胸苷组 DNA损伤修复能力与对照组相比无明显增高 ,同时补充 DNA合成所必须的四种脱氧核苷经过 3h的培养后也没有出现明显促进 DNA损伤修复的作用。结论　体外补充脱氧核苷对 DNA修复未显示有意义的作用 ,与 DNA损伤修复过程利用脱氧核苷的途径可能不同于 DNA的复制合成有关