碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0 ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化。结果bFGF可促进人牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时。结论bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞多配体蛋白聚糖-4基因表达的影响

目的 通过研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLC)多配体蛋白聚糖-4 mRNA水平表达的影响,探讨bFGF在人PDLC迁移中的作用.方法 收集正畸拔除的12～18岁青少年健康前磨牙68颗,体外原代培养人PDLC,用外源性bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内多配体蛋白聚糖-4 mRNA的表达.结果 培养24h时,实验组多配体蛋白聚糖-4 mRNA表达量显著高于对照组(P＜0.01),其中1.0 ng·mL-1组升高最为显著;培养48h时,1.0 ng·mL-1组多配体蛋白聚糖-4 mRNA表达量高于对照组(P＜0.05);培养72h时,1.0 ng·mL-1组多配体蛋白聚糖-4mRNA表达量低于对照组(P＜0.05).结论 初期bFGF促进人PDLC内多配体蛋白聚糖-4mRNA合成,但随着时间的延长,bFGF抑制多配体蛋白聚糖-4mRNA合成,这种改变是促进PDLC迁移过程中一个重要的调节因素.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞内核心蛋白多糖（decorin）的影响,探讨bFGF在牙周再生中的意义。方法体外原代培养人牙周膜成纤维细胞,用外源性bFGF刺激细胞,半定量RTPCR法检测牙周膜成纤维细胞内decorin基因表达的变化。结果电泳结果表明,bFGF抑制人牙周膜成纤维细胞内decorin的mRNA合成,并且随着质量浓度的增加抑制作用减弱。结论decorin具有很多生物学功能,bFGF对decorin的抑制作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为bFGF在牙周组织再生中的作用提供理论基础。     

bFGF对人牙髓、牙周膜成纤维细胞生物学效应的研究

目的：了解碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙髓、牙周膜成纤维细胞的生物学效应,为bFGF在牙髓、牙周病中的治疗研究提供新的实验依据。方法：利用3H-TdR掺入法观察在bFGF作用下人牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA和胶原蛋白合成的情况。结果：20ng/mL～60ng/mLbFGF可明显促进人牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA的合成（P〈0.01）,在40ng/mL浓度时牙髓,牙周膜成纤维细胞DNA合成最高,40ng/mLbFGF作用于牙髓,牙周膜成纤维细胞,24～48h可使细胞DAN合成显著增多,牙髓成纤维细胞在36h时DNA合成达最高峰,牙周膜成纤维细胞在24h时DNA合成达最高峰;bFGF对牙髓,牙周膜成纤维细胞胶原蛋白的合成无明显促进作用（P〉0.05）。结论：人牙髓、牙周膜成纤维细胞是bFGF的靶细胞,其胞膜上可能有bFGF特异性受体的存在,也表明bFGF在牙髓、牙周组织的创伤愈合中可能起重要作用。     

张应力刺激下人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素、细胞骨架的变化

目的:研究不同动态张应力刺激下体外培养的人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素β1和细胞骨架的变化.方法:刮取牙根中1/3牙周膜组织,采用Ⅰ型胶原酶消化结合组织块贴附法进行人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)原代培养并传代.用四点弯曲加载装置,通过对体外培养的hPDLF分别施加不同动态的张应力,采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白和整合素β1亚单位mRNA表达的影响.经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张应力后细胞形态的变化.采用SPSS 13.0软件包对荧光定量PCR所得数据取常用对数后行ANOVA分析.结果:张应力的大小及加力时间都对hPDLF纤连蛋白mRNA表达产生影响.加力后,hPDLF整合索β1亚单位mRNA表达下调,这种下调变化与所施加应力大小和作用持续时间相关.机械力刺激越强,整合素β1表达越明显.加力后,细胞骨架形态发生变化.加力前呈梭形,排列呈漩涡状,F-actin纤维粗且分布均匀;加力后,形态不规则,沿力的方向排列整齐,F-actin纤维细且分布不均匀;加力12h后,形态恢复到加力前形态,细胞F-actin荧光染色强度也由正常到下降再到正常.结论:动态张应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进纤连蛋白、整合素βmRNA表达改变,hPDLF细胞骨架的形态结构也发生一定规律的变化.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶（ALP）活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。方法：采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度（0．1－10ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5％和10％胎牛血清（FBS）体外培养的第3代人牙周膜细胞（PDLCs）的作用。结果：与对照组比较,①10％FBS,5ng／ml和10ng／ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖（P＜0．01－0．05）,5％,10ng／ml的bFGF在24、48小时,5ng／ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用（P＜0．01）。②10％FBS,1ng／ml的bFGF在48、72小时,5ng／ml的bFGF在24、48、72小时,10ng／mlbFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0．01－0．05）;5％FBS,10ng／ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用（P＜0．05）。结论：以上结果提示：在一定的作用时间内一定条件下,5ng／ml和10ng／ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化。     

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

目的：探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。方法???体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）,72?h内以5μg?L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-β1诱导hPDLF向MFB转化,免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。分别进行12、24、48、72、96和120?h的MFB观察,采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性,采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的α-SMA表达情况。结果??经TGF-β1诱导后α-SMA呈阳性;诱导至120?h,α-SMA仍呈阳性,72?h内其表达稳定。结论5μg?L-1终质量浓度的TGF-β1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。MFB体外培养具有时效性,培养0~72?h,其状态稳定。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞表皮生长因子受体基因表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜细胞（PDLC）表达表皮生长因子受体（EGFR）的影响,探讨bFGF在牙周组织分化再生中的意义。方法体外原代培养人PDLC,有限稀释法形成单细胞克隆,用外源性bFGF刺激单细胞克隆,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测克隆细胞内EGFR基因表达的变化。结果bFGF促进人PDLC内EGFR mRNA的合成,并且随着质量浓度的增加促进作用增强。结论bFGF对EGFR的促进作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为牙周组织分化再生提供部分理论基础。     

LPS调控人牙龈成纤维细胞表达uPA的研究

目的：观察LPS对牙龈成纤维细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)的影响。方法：采用Western blotting和Northern blotting分别观察LPS对牙龈成纤维细胞内uPA蛋白质表达水平和mRNA表达水平的影响。结果：经1.0μg/mL LPS处理8h后，牙龈成纤维细胞内uPA蛋白表达量明显增强，且这一增强作用可持续24h；经1.0μg/mL LPS处理4h后，牙龈成纤维细胞内uPA mRNA表达量明显增强。结论：LPS能够促进牙龈成纤维细胞表达uPA，参与牙周组织的破坏。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞多配体蛋白聚糖-4基因表达的影响

目的 通过研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLC)多配体蛋白聚糖-4 mRNA水平表达的影响,探讨bFGF在人PDLC迁移中的作用.方法 收集正畸拔除的12～18岁青少年健康前磨牙68颗,体外原代培养人PDLC,用外源性bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检...     

白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响

目的　明确碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响,以 探讨在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法　同一只SD大鼠来源的成骨细胞和 牙周膜成纤维细胞经传代培养至第4代,建立体外创伤模型,分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养,观察 细胞迁移情况,四唑盐比色实验(MTT)测定细胞的增殖速度。结果　普通培养基中,成骨细胞迁移速度快于成纤维 细胞。加bFGF培养基中牙周膜成纤维细胞迁移速度明显快于其他各组,同时MTT结果显示加入bFGF能明显促进 两种细胞的增殖。结论　bFGF能明显促进牙周膜成纤维细胞的增殖、移行。     

TLR4在人牙周膜成纤维细胞中的表达研究

目的：探讨TLR4在体外培养的人牙周膜成纤维细胞中的表达情况。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,采用免疫荧光染色检测TLR4蛋白在该细胞中的表达;用半定量RT—PCR法检测TLR4基因的表达及0．1ng／mL牙龈卟啉菌脂多糖刺激24h后细胞内TLR4基因表达水平的改变。结果：免疫荧光检测显示体外培养的人牙周膜细胞中有TLR4表达,0．1ng／mL牙龈卟啉菌脂多糖刺激24h,其TLRd基因表达水平显著性增高（P〈0．05）。结论：TLR4在牙周膜成纤维细胞中有表达,牙龈卟啉菌脂多糖成分可刺激TLR4基因上调,提示与该细胞参与牙周免疫应答有关。     

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力（强度为1 000、2 000、4 000 μstrain，加力时间为0、0.5、1、4、8、12 h），采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后，人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调，这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致，机械力刺激越强，整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变，不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。     

牙周膜肌成纤维细胞功能特点的体外研究

目的 体外实验研究牙周膜肌成纤维细胞（MFB）的作用特点。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）,采用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞向MFB转化。MFB为实验组,以hPDLFs为对照,连续培养两组细胞,按0、12、24、48、72 h共5个时间点终止培养收样。免疫细胞化学检测MFB标记物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况,检测实验组纤维粘连蛋白（FN）以明确细胞间接触作用情况。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测α-SMA mRNA、胶原（Col）ⅠmRNA、ColⅢ mRNA的表达情况,免疫印迹法检测α-SMA、ColⅠ蛋白的表达情况,用以比较两组细胞分泌细胞外基质情况。结果 实验组α-SMA持续稳定表达,从0 h开始表达均显著高于对照组（P<0.001）;细胞间FN阳性表达,提示MFB之间有细胞突触相互连接。从24 h开始,实验组ColⅠ、ColⅢ的表达均显著高于对照组（P<0.001）。结论 牙周膜MFB持续高表达α-SMA并且可能通过FN相互作用。MFB具有大量分泌细胞外基质的能力。     

糖基化终产物受体在大鼠牙周膜成纤维细胞中的表达

目的研究体外培养大鼠牙周膜成纤维细胞在糖基化终产物诱导下糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)的表达情况。方法收集第三代体外培养的大鼠牙周膜成纤维细胞,在含有终浓度为50、100、200 mg/L的糖基化牛血清白蛋白、200 mg/L的牛血清白蛋白以及不含上述蛋白成分培养基内孵育48 h,分别设为A组、B组、C组、D组、E组。免疫组织化学法、反转录-聚合酶链反应(reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内RAGE蛋白及mRNA表达。结果免疫组织化学结果显示A、B、C组中牙周膜成纤维细胞内RAGE蛋白表达均为阳性,且随浓度增高,表达强度略有增强,而D及E组无表达;RT-PCR检测发现A、B、C组RAGE mRNA均表达且表达强度随浓度增高而增强,D组有少量表达,E组不表达。结论体外培养的牙周膜成纤维细胞在糖基化终产物诱导下能够表达RAGE。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞中Fas/Apo-1（CD95）表达的影响

目的：研究尼古丁（nicotine）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）中Fas/Apo-1（CD95）表达的影响。方法：采用组织块培养法培养原代人牙周膜成纤维细胞并传代取处于对数生长期的第6代细胞用于实验,采用浓度为2mg/L的尼古丁处理第6代牙周膜成纤维细胞72h,通过免疫组织化学染色法检测尼古丁对人牙周膜成纤维细胞中Fas表达的情况。结果：证实尼古丁作用于人牙周膜成纤维细胞后,胞膜中Fas/Apo-1（CD95）抗原呈阳性表达。结论：提示尼古丁可通过Fas系统这一途径导致人牙周膜成纤维细胞的凋亡,从而加重牙周组织破坏的程度和影响牙周组织的再生。     

bFGF对成骨细胞和成纤维细胞生物学特性的影响

目的：明确bFGF埘体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、矿化相关蛋白合成的影响，以探讨bFGF促进牙周组织再生的内任机制以及在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法：同一只SD大鼠米源的两种细胞经传代培养至第四代，建立细胞迁移模型，分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养，观察测量细胞迁移速度，并分别测试两种细胞在普通培养基和含bFGF的培养基中的碱性磷酸酶（ALP）活性歧Ⅰ型胶原的含量。结果：普通培养基培养时，成骨细胞迁移速度快于成纤维细胞；但牙周膜成纤维细胞加bFGF培养辽移速度明显高于其他各组；bFGF抑制成骨细胞的Ⅰ型胶原的合成和ALP的活性。结论：bFGF能日月硅促进牙周膜成纤维细胞的移行；bFGF能抑制成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

雌激素与机械张应力对碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的研究雌激素与机械张应力共同作用对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)增殖分化相关因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达水平的影响。方法体外培养HPDLF,分为两组。实验组使用10-7mol/L雌激素干预后,使用4点弯曲加力装置对HP-DLF进行张应力加载;对照组不使用雌激素干预,只进行机械张应力加载。采用实时多聚酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和紫外线分析检测HPDLF加力时3、6、12 h时bFGF基因的表达。结果加力0、3、6、12 h时,对照组bF-GFmRNA表达量光密度值分别为1.000,3.245±0.261,4.498±0.431,7.969±0.597,实验组bFGFmRNA表达量光密度值分别为16.736±1.003,22.542±1.768,27.923±1.914,31.556±2.142。雌激素干预与张应力加载共同作用与单纯受到机械张应力作用相比,bFGF的mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞增殖分化相关因子bFGF有较强调控作用,表现为bFGF的mRNA表达量显著上升。