基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠肾脏的保护作用机制

目的 基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏的保护作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱（阳性对照,0.03 mg · kg^-1）组和白藜芦醇高、中、低剂量（1 000、500、250 mg·kg^-1）组,连续7 d ig给药,给药过程中,除对照组外,其余各组使用氧嗪酸钾合并尿酸钠的方法制备大鼠痛风性肾病模型。ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-18、尿酸、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平,肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、环氧合酶-2（COX-2）水平;HE、Masson染色观察肾脏组织细胞形态变化;PAS染色检测大鼠肾组织中肾小球损伤情况,TUNEL观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;实时荧光定量PCR （qRT-PCR）、免疫组化法检测肾脏组织中核因子-κB （NF-κB）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA以及蛋白的表达量,最后采用分子对接研究白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1的结合情况。结果 与模型组比较,秋水仙碱组及白藜芦醇各给药组大鼠血清中IL-1β、IL-18、SCr、BUN及肾脏TNF-α、MCP-1、COX-2水平显著降低（P<0.01）,白藜芦醇高剂量组尿酸、中和高剂量组BUN显著降低（P<0.05）;白藜芦醇各剂量组不同程度降低肾组织中胶原纤维化面积、肾小球阳性率以及肾组织细胞TUNEL染色阳性率,减缓病理损伤情况,其中高剂量组作用最显著（P<0.05）;qRT-PCR、免疫组化结果表明,白藜芦醇各给药组均抑制肾脏组织细胞中NF-κB、NLRP3、Caspase-1mRNA和蛋白的表达,其中高剂量组作用最显著（P<0.05）;分子对接结果进一步表明,白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1结合状态良好,即白藜芦醇对NF-κB、NLRP3、Caspase-1具有良好的靶向调控作用。结论 白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用可能为抑制NF-κB信号通路,进而抑制NLRP3的激活从而阻断Caspase-1招募IL-1β、IL-18,降低其分泌,遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生,从而逆转痛风性肾病大鼠肾组织的炎症损伤。     

姜黄素抑制HMGB1-NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导新生大鼠急性肺损伤实验研究

目的 分析姜黄素抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）-核转录因子κB（NF-κB）信号通路减轻脂多糖（LPS）诱导新生大鼠急性肺损伤（ALI）的作用。方法 将60只新生SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（阳性药,2 mg·kg^-1）组和姜黄素低、中、高剂量（1.5、3.0、6.0 mg·kg^-1）组,每组10只。除对照组外,所有大鼠采用腹膜内注射LPS （3 mg·kg^-1）建立ALI模型。注射LPS约6 h后开始ip给药,每天1次,连续7 d,模型组和对照组大鼠ip等体积的0.1% DMSO。通过血氧分压（PaO₂）和肺干湿质量比（W/D）评估新生大鼠肺水肿情况;HE染色检测各组大鼠肺组织损伤;ELISA法检测新生大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平,BALF中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和HMGB1水平;Western blotting法检测大鼠肺组织胞核NF-κB、胞浆NF-κB和磷酸化核因子κB抑制因子α（p-IκBα）蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组新生大鼠肺泡腔有渗出、肺组织结构紊乱、细胞核固缩深染、伴随大量的炎性细胞浸润,病理评分显著升高（P<0.01）; PaO₂、BALF中SOD和GSH水平显著降低（P<0.01）;肺W/D,BALF中MPO和MDA水平,BALF中IL-6、TNF-α和HMGB1水平,NF-κB胞核/胞浆比例和胞浆p-IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组相比,姜黄素高、中剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤减轻,肺泡腔渗出、炎性细胞浸润明显减少,病理评分显著降低（P<0.05、0.01）; PaO₂、BALF中SOD和GSH水平显著升高（P<0.05、0.01）;肺W/D,BALF中MPO、MDA水平,BALF中IL-6、TNF-α和HMGB1水平,NF-κB胞核/胞浆比例和胞浆p-IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.05、0.01）。结论 姜黄素可以通过抑制HMGB1-NF-κB信号通路减轻LPS诱导的新生大鼠ALI。     

湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物（+）-chlorahupetenes B对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用

目的 评价湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物（+）-chlorahupetenes B[（+）-CHB]对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症反应的影响及作用机制。方法 RAW264.7细胞分为对照组（给予等体积DMSO）、模型组（给予等体积DMSO）、地塞米松磷酸钠注射液（Dex,阳性对照,1 μmol·L^-1）组和（+）-CHB低、中、高浓度（5、10、20 μmol·L^-1）组。各组分别加入相应药物孵育细胞1 h,除对照组外,其余组加入LPS （1 μg·mL^-1）诱导24 h造成炎症应答模型。细胞增殖检测法用于评估细胞活力;Griess反应检测一氧化氮（NO）浓度;酶联免疫分析检测炎症细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的生成;实时荧光定量PCR （qRT-PCR）检测IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、环氧合酶-2（COX-2）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、IL-6和TNF-α mRNA表达;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB （NF-κB） p65、p-NF-κB p65、NLRP3、嘌呤能受体（P2X7）蛋白表达水平。结果 与模型组比较,（+）-CHB减少了梭形细胞数量,使大部分细胞恢复正常形态;显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β生成（P<0.01）,显著降低COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α、NLRP3、IL-1β mRNA水平（P<0.05、0.01）;显著降低TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κBp65、NLRP3、P2X7蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 （+）-CHB通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路和P2X7/NLRP3/IL-1β炎症小体轴激活缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。     

对羟基苯甲酸通过抑制NF-κB/caspase-1信号通路抗类风湿性关节炎的研究

目的 探讨天然酚酸类化合物对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid，HA）对完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）诱导的佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）模型的治疗作用，并对HA的作用机制进行初步分析。方法 除正常组外，向大鼠足跖皮内注射CFA 0.1 mL诱导AA大鼠模型。将AA模型大鼠随机分为模型组，HA低、中、高剂量组（2.5，5，10 mg·kg^-1）和阳性药物组（吲哚美辛，5 mg·kg^-1），灌胃给予药物进行治疗干预，记录每组大鼠足肿胀体积、足肿胀厚度并进行关节肿胀评分；通过ELISA和qPCR检测不同剂量HA对炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达的影响；采用X-射线和HE染色观察足爪组织形态学和病理学变化；Western blotting检测caspase-1和NF-κB的表达。结果 HA能减轻AA大鼠关节肿胀（P<0.05）；从蛋白质和mRNA水平显著抑制炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的产生（P<0.05），并显著降低caspase-1和NF-κB蛋白表达水平；X-射线显示HA能减轻大鼠踝关节损伤，HE染色结果显示HA能显著抑制炎症细胞的浸润和软骨表层破坏等情况（P<0.05），且这些结果均呈剂量依赖性。结论 HA可能通过抑制NF-κB/caspase-1信号通路缓解关节炎症状。     

基于TGF-β/Smad与MAPK/NF-κB信号通路探讨龟鹿二仙胶对去势大鼠骨质疏松的保护作用

目的 评价龟鹿二仙胶对去势大鼠骨质疏松的保护作用并探讨其机制。方法 120只大鼠，随机分为正常组，模型组，龟鹿二仙胶低、中、高剂量组和阿法骨化醇组，共6组，除正常组外均去势造模。龟鹿二仙胶按低、中、高剂量（0.5，1.5，2.5 g·kg^-1·d^-1），阿法骨化醇按0.1 μg·kg^-1·d^-1分别灌胃干预，正常组和模型组分别给予等量生理盐水。采用HE染色检测大鼠股骨病理改变，采用试剂盒检测股骨钙（calcium，Ca）、磷（phosphorus，P）、羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP），同时采用蛋白质印迹法检测去势大鼠股骨TGF-β、p-Smad-3蛋白的表达以及p-JNK、p-ERK、p-P38、p-NF-κB P65蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠股骨Ca、P、Hyp、ALP水平显著下降（P<0.01），TRAP水平显著升高（P<0.01），骨小梁结构排列紊乱、形态变薄且有断裂迹象，TGF-β、p-Smad-3蛋白表达水平下调以及p-JNK、p-ERK、p-P38与p-NF-κB P65蛋白表达水平上调（P<0.01）。与模型组比较，龟鹿二仙胶显著增加大鼠股骨Ca、P、Hyp、ALP水平（P<0.01），降低股骨中TRAP水平（P<0.01），改善股骨病理改变，同时龟鹿二仙胶显著诱导TGF-β、p-Smad-3蛋白表达并显著降低p-JNK、p-ERK、p-P38与p-NF-κB P65蛋白表达（P<0.01）。结论 龟鹿二仙胶能显著改善去势大鼠的骨质疏松，其机制与激活TGF-β/Smad信号通路和抑制MAPK/NF-κB信号通路有关。     

注射用益气复脉（冻干）联合顺铂对乳腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 观察并探讨注射用益气复脉（冻干）（YQFM）联合顺铂对乳腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法 接种4T1肿瘤细胞悬液0.1 mL （细胞总数约1×10⁷）于SPF级BALB/C小鼠第4对乳头下方的皮下脂肪垫制备乳腺癌模型。造模小鼠随机分为模型组、顺铂（1 mg/kg）组、YQFM（914 mg/kg,临床等效剂量）组、1/2顺铂（0.5 mg/kg）＋YQFM（914 mg/kg）组、顺铂（1 mg/kg）＋YQFM（914 mg/kg）组,各组小鼠均于接瘤后第7天开始给药,顺铂均ip给药,隔天给药1次,共7次;YQFM均尾iv给药,每天1次,共14 d。模型组同法给予9%氯化钠注射液。观察小鼠生活状态、体质量变化;检测实体瘤质量并计算抑瘤率;测量瘤体积变化;ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-2 （IL-2）、白细胞介素-4 （IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）、乳酸脱氢酶（LDH）和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）水平。结果 与模型组比较,顺铂组、顺铂＋YQFM、1/2顺铂＋YQFM组小鼠从顺铂第3次给药左右开始出现毛发稀疏、掉毛严重、发呆、行动迟缓、喜抱团等现象,1/2顺铂＋YQFM组比单纯顺铂组稍好。与模型组比较,YQFM组体质量显著增加（P<0.05、0.001）;顺铂组体质量增长显著减缓（P<0.05、0.001）; 1/2顺铂＋YQFM组和顺铂＋YQFM组2组小鼠体质量无显著性差异。与模型组比较,顺铂组、1/2顺铂＋YQFM组及顺铂＋YQFM组瘤质量均显著减轻（P<0.05）,YQFM＋顺铂组的抑瘤率最佳,1/2顺铂+YQFM组与顺铂组抑瘤效果相当。与模型组比较,顺铂＋YQFM组、顺铂组、1/2顺铂＋YQFM组分别是在给药后第7、9、11天时瘤体积出现显著降低（P<0.05）。与模型组比较,顺铂组、1/2顺铂＋YQFM组及YQFM＋顺铂均能够显著提高IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α水平和降低ATP的含量（P<0.01、0.001）;顺铂组和1/2顺铂＋YQFM组的LDH含量显著提高（P<0.05）; YQFM也能显著性提高IL-2、IFN-γ、TNF-α含量和降低ATP的含量水平（P<0.01、0.001）。与顺铂组比较,1/2顺铂＋YQFM组的TNF-α含量显著降低（P<0.01）。结论 YQFM与顺铂联合使用对乳腺癌荷瘤小鼠具有一定的增效协同作用。     

秦皮甲素通过调节TLR/NF-κB途径抑制脂多糖诱导的心肌损伤

目的 研究秦皮甲素对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠心肌损伤及TLR/NF-κB途径的影响。方法 构建LPS诱导心肌损伤模型，将大鼠分为对照组、LPS组、秦皮甲素低剂量组（20 mg·kg^-1）、秦皮甲素中剂量组（40 mg·kg^-1）、秦皮甲素高剂量组（80 mg·kg^-1）和阳性对照组（地塞米松2 mg·kg^-1）。心脏超声检测心脏功能，HE染色检测心脏组织损伤程度。ELISA检测血液中肌钙蛋白（cardiac troponin I，cTnI），肌酸激酶同工酶[creatine kinase （CK）-MB，CK-MB]，肌红蛋白（myoglobin，Mb），肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），白介素-6（interleukin-6，IL-6），IL-1β，丙二醛（malondialdehyde，MDA），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和髓过氧物酶（myeloperoxidase，MPO）的含量。Western blotting检测Toll样受体2（Toll-like receptor 2，TLR2），TLR4，骨髓分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88），白介素1受体相关激酶（interleukin-1 receptor-associated kinases，IRAK1）和磷酸化核因子-κB （phosphorylated-nuclear factor-κB，p-NF-κB）的蛋白相对表达量。结果 与LPS组相比，在秦皮甲素治疗后，心率、左室壁相对厚度和左心室射血分数均显著升高（P<0.05），而左室收缩末容积显著降低（P<0.05）。心肌酶cTnI、CK-MB和Mb的表达量显著下调（P<0.05）；促炎细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的表达量下调（P<0.05）；氧化应激标记物中SOD含量显著升高（P<0.05），而MDA和MPO含量均显著降低（P<0.05）；TLR2、TLR4、MyD88、IRAK1和p-NF-κB蛋白表达水平均显著下调（P<0.05）。结论 秦皮甲素对LPS诱导心肌损伤具有保护作用，并抑制TLR/NF-κB信号通路。     

菥蓂正丁醇部位抑制TLR-4/NF-κB信号通路抗脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应作用研究

目的 研究菥蓂Thlaspi arvense水提醇沉部位、正丁醇部位的抗炎活性以及正丁醇部位的作用机制。方法 将菥蓂水提物经过乙醇、正丁醇萃取后制得菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位。采用MTT法确定水提醇沉部位、正丁醇部位（15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000 μg/mL）对RAW264.7细胞的毒性。采用脂多糖（LPS）1 μg/mL诱导RAW264.7细胞产生炎性反应,建立体外炎症细胞模型。Griess法检测水提醇沉部位、正丁醇部位（7.812 5、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000 μg/mL）对LPS诱导RAW264.7细胞后NO释放量的影响;ELISA法检测水提醇沉部位、正丁醇部位（125、250、500 μg/mL）对白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放量的影响;Western Blotting法检测正丁醇部位（125、250、500 μg/mL）对环氧合酶-2（COX-2）、一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素1β（IL-1β）、核因子-κB（NF-κB）p-P65、Toll样受体4（TLR-4）、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）蛋白表达的影响。结果 菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位质量浓度在1 000 μg/mL以下时对RAW264.7细胞几乎无毒性作用。与模型组比较,菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位62.5、125、250、500、1 000 μg/mL组NO释放量显著下降（P<0.01）;菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位125、250、500 μg/mL组IL-6、TNF-α的分泌量显著降低（P<0.01）,且正丁醇部位作用优于水提醇沉部位;菥蓂正丁醇部位500 μg/mL组的iNOS和250、500 μg/mL组COX-2、IL-1β、NF-κB p-P65、TLR-4、p-IκBα蛋白表达量显著降低（P<0.01）,作用均呈浓度相关性。结论 菥蓂正丁醇部位显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌以及COX-2、iNOS蛋白的表达,其抗炎作用机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路相关。     

硫酸化修饰对玄参多糖抗炎活性的影响

目的 比较研究玄参多糖经硫酸化修饰前后其抗炎活性的变化及机制。方法 ♂ ICR小鼠经腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）建立急性炎症反应模型，分别给予玄参多糖和硫酸化玄参多糖进行药物干预，以阿司匹林作为阳性对照，运用Real time RT-PCR检测肝脏组织白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的mRNA表达，运用ELISA检测血清中的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α的蛋白表达，运用Western blotting法检测肝脏组织中核因子κB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）、phospho-NF-κB的表达水平。结果 硫酸化玄参多糖和玄参多糖均可显著抑制LPS诱导的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α mRNA和蛋白表达增加，玄参多糖经硫酸化修饰后，其抗炎活性显著增强，其作用机制可能与调控NF-κB信号转导通路活化有关。结论 硫酸化修饰可显著提高玄参多糖的抗炎活性，具有更好的应用前景，为玄参的开发应用提供了理论基础。     

葡萄籽提取物与柳氮磺吡啶联合用药对实验性溃疡性结肠炎的作用

目的 研究葡萄籽提取物（GSPE）与柳氮磺吡啶（SASP）联合用药治疗葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎的效果及作用机制。方法 将SPF级C57小鼠随机分为对照组、模型组、GSPE （250 mg/kg）组、SASP （250 mg/kg）组、联合用药（SASP 250 mg/kg+SASP 250 mg/kg）组,对照组给予正常饮用水,其他组均自由饮用3% DSS水溶液,连续饮用7 d,诱发小鼠溃疡性结肠炎模型;造模第1天同步开始ig给药,每天记录小鼠体质量、便血、便型等症状变化;7 d后断头取血,收集结肠和脾脏,记录结肠长度、脾脏质量变化情况。HE染色评估小鼠结肠黏膜组织病理变化,ELISA法检测血清和结肠组织中炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6和NO的表达变化以及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）细胞因子的含量变化,免疫组化分析结肠组织上皮细胞中NF-κB-p65、Nrf2、HO-1和Keap-1含量的变化。应用金氏Q值法分析联合用药的作用效果。结果 与模型组比较,各给药组的小鼠体质量下降幅度显著降低（P<0.01）,小鼠腹泻、便血症状改善明显,其中联合用药组小鼠体质量较单独给药组下降更缓,小鼠腹泻、便血程度改善更明显（P<0.05）。各给药组小鼠血清及结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、MDA含量较模型组显著降低,SOD含量则显著升高（P<0.01）;病理组织切片分析发现,各给药组小鼠结肠黏膜病理损伤较模型组显著减轻,其中联合用药组小鼠结肠黏膜病理损伤较单独给药组降低更为显著（P<0.05）。免疫组化分析结果也显示,各给药组小鼠的NF-κB-p65、Keap-1蛋白表达与模型组比较显著下调（P<0.01）,Nrf2、HO-1蛋白表达显著上调（P<0.01）。联合给药组与单独给药组比较,NF-κB-p65、Keap-1蛋白表达显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P<0.05）。金氏Q值法评价两药合用后对IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、MDA、NF-κB-p65、Keap-1的作用效果均大于1.15,说明GSPE与SASP具有协同作用。结论 GSPE与SASP联合用药治疗实验性溃疡性结肠炎效果优于单独给药,联合用药增强GSPE和SASP的抗氧化和抗炎作用,GSPE与SASP配伍治疗溃疡性结肠炎可进一步发挥协同增效的作用。     

泽泻多糖激活PPAR-γ/LXR-α/ABCG1信号通路发挥对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的 探究泽泻多糖对糖尿病大鼠肾损伤的改善作用。方法 SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组,模型组,吡格列酮［过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激活剂,20 mg·kg^-1］组,泽泻多糖低、中、高剂量（100、200、400 mg·kg^-1）组和泽泻多糖（400 mg·kg^-1）＋ GW9662（PPAR-γ抑制剂,10 mg·kg^-1）组,除对照组外均采用高糖高脂＋链脲佐菌素（STZ）柠檬酸钠缓冲液法制备糖尿病肾病（DN）大鼠模型,造模后各组ig给药,每天1次,连续6周。血糖仪测定大鼠空腹血糖（FBG）水平;全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐、尿酸、尿素氮水平,检测24 h尿蛋白及尿肌酐,计算内生肌酐清除率（Ccr）;处死大鼠,计算大鼠肾脏指数;HE染色观察大鼠右侧肾脏组织病理学变化;Western blotting法检测肾脏组织PPAR-γ/肝X受体-α（LXR-α）/ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠毛色枯黄,体质量显著减轻（P<0.05）;肾小球细胞空泡化、肾小球基底膜增厚;肾脏指数、FBG、24 h尿蛋白、尿酸、尿素氮、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著升高（P<0.05）,Ccr和PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,吡格列酮组和中、高剂量泽泻多糖组大鼠毛色及饮食、饮水逐渐恢复,体质量显著增加（P<0.05）;肾损伤程度减轻;FBG、24 h尿蛋白、尿酸、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低（P<0.05）,Ccr及PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白水平显著升高（P<0.05）;泽泻多糖高剂量组肾脏指数显著降低（P<0.05）。高剂量泽泻多糖组与吡格列酮组各指标差异比较无统计学意义,GW9662可逆转高剂量泽泻多糖对大鼠肾脏功能的保护作用。结论 泽泻多糖可能通过激活PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路保护DN大鼠肾脏。     

基于PERK-eIF2α-NF-κB信号通路研究甘草酸苷对小鼠肠上皮细胞内质网应激的保护作用

目的 从蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）-真核细胞起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α，eIF2α）-核因子κB （nuclear factor kappa B，NF-κB）信号通路角度观察甘草酸苷（glycyrrhizin，GL）对肠上皮细胞（intestinal epithelial cells，IECs）的保护作用，并探讨其治疗溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的可能作用机制。方法 体外培养并通过免疫荧光法鉴定小鼠IECs，H₂O₂刺激法建立细胞内质网应激模型，GL组于造模同时给予不同剂量的GL干预。采用CCK8法检测细胞的存活率；流式细胞术检测细胞的凋亡水平；细胞跨膜电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐（fluorescein isothiocyanate-dextran，FITC-dextran）法共同明确细胞屏障的通透性；Western blotting检测细胞中PERK-eIF2α-NF-κB通路核心蛋白的表达水平。结果 与模型对照组相比，GL中、高剂量组的存活率均升高（P<0.05或P<0.01），凋亡率均下降（P<0.05或P<0.01）；GL各剂量组单层膜细胞的细胞跨膜电阻抗值均显著升高（P<0.01）、FITC-dextran浓度均显著下降（P<0.01），p-PERK、p-eIF2α和NF-κB蛋白的水平均下降（P<0.05或P<0.01）。结论 GL通过抑制PERK-eIF2α-NF-κB信号通路的活化，从而提高小鼠体外细胞内质网应激状态下IECs的存活率，降低其凋亡水平，并改善细胞屏障的通透性，这可能是GL保护IECs、治疗UC的部分作用机制。     

莪术油对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其联合顺铂的协同作用研究

目的 探讨莪术油对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并探讨其与顺铂联合的协同作用。方法 建立卵巢癌细胞株HO-8910PM荷瘤裸鼠模型,随机分为模型对照组、莪术油组、顺铂组和联合给药组（莪术油+顺铂）4组,每组6只,分别腹腔注射莪术油（300 mg·kg^-1）、顺铂（2 mg·kg^-1）、莪术油联合顺铂（300 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1）以及空白对照液（0.4 mL生理盐水）,给药3周后处死小鼠并测瘤体积变化,计算肿瘤生长抑制率,免疫组化检测各组肿瘤组织中NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA的蛋白表达。ELISA检测裸鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。结果 与模型对照组比较,莪术油、顺铂及其联合给药后均能显著抑制裸鼠肿瘤体积的增长（P<0.05或P<0.01）,且联合给药的抑瘤率（55.06%）要高于莪术油（20.5%）和顺铂（52.52%）单独给药。免疫组化检测结果显示各组药物治疗后,能显著降低裸鼠肿瘤组织中NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA的阳性表达（P<0.05或P<0.01）,且降低程度从低到高依次为莪术油组、顺铂组、联合给药组。ELISA检测结果也表明顺铂以及莪术油联合顺铂给药3周后能显著提高裸鼠血清IL-2、IFN-γ水平（P<0.01）,且含量上升程度由低到高依次为莪术油组、顺铂组、联合给药组。结论 莪术油能够抑制卵巢癌荷瘤裸鼠移植瘤的增长,具有一定的抗肿瘤效果,其机制可能与调节肿瘤生长因子NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA及免疫相关因子IL-2、IFN-γ的表达有关。莪术油联合顺铂用药对卵巢癌肿瘤的抑制具有潜在的协同作用,但还需更深入实验研究。     

丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt通路逆转人喉癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 研究丹参酮Ⅱ_A对人喉癌细胞顺铂耐药的影响作用及机制。方法 以不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞和人喉癌顺铂耐药细胞（Hep-2/DDP）48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。以不同质量浓度（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L）丹参酮Ⅱ_A干预对数生长期Hep-2细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC₅₀;采用丹参酮Ⅱ_A（IC₅₀5.32 mg/L）＋不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期Hep-2/DDP细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算2种药物联用的IC₅₀和逆转倍数（RF）。取对数生长期Hep-2/DDP细胞,设置对照组、顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。各组分别给药干预48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、激活型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（Akt）蛋白表达情况。结果 顺铂对Hep-2细胞的IC₅₀为4.58 mg/L,对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为14.09 mg/L,RI为3.08;丹参酮Ⅱ_A对Hep-2细胞的IC₅₀为5.32 mg/L;丹参酮Ⅱ_A联合顺铂对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为3.34 mg/L,RF为4.22。与对照组比较,顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.01）;与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）;与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化（p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt）水平显著降低（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著降低（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A可逆转人喉癌细胞顺铂耐药,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路活化而促进喉癌细胞凋亡有关。     

2019—2020年天津市宝坻区人民医院氟比洛芬酯注射液使用合理性分析

目的 探讨补骨脂乙醇提取物（PCEE）对人T细胞亚群增殖和活化的影响。方法 采集健康人EDTA抗凝血,分离外周血单个核细胞（PBMCs）,ADD染色流式细胞术检测PCEE（1、2 mg/mL）对PBMCs的毒性;PBMCs分为对照组、模型组、PCEE （1 mg/mL）组,模型组和PCEE组用植物血凝素（PHA） 5 μ g/mL刺激,对照组不加; 3 d后PCEE组加入终质量浓度为1 mg/mL的PCEE作用48 h,对照组和模型加入等体积的PBS。48 h后收集细胞,用流式细胞术检测CD4⁺和CD8⁺T细胞亚群增殖（ADD染色）、活化（CD69和CD25）以及AKT、NF-κB磷酸化水平。结果 PCEE 1 mg/mL组活细胞比例为（93.06±2.12）%,与对照组（95.16±1.39）%比较无显著差别;PCEE组CD4⁺和CD8⁺T细胞的增殖显著低于模型组（P<0.001）;PCEE组CD69⁺CD4⁺、CD69⁺CD8⁺和CD25⁺CD4⁺、CD25⁺CD8⁺T细胞比例显著低于模型组（P<0.05）;PCEE组pAKT⁺CD4⁺、pAKT⁺CD8⁺和pNF-κB⁺CD4⁺、pNF-κB⁺CD8⁺T细胞比例显著低于模型组（P<0.05）。结论 补骨脂通过抑制AKT/NF-κB信号传导通路显著抑制T细胞增殖和活化。     

五味子多糖通过Traf3/NF-кB通路降低脂多糖对大鼠肝细胞的炎症反应

目的 探讨五味子多糖对脂多糖（LPS）诱导原代大鼠肝细胞炎症反应的影响,并研究潜在机制。方法 体外原代培养大鼠肝细胞,并分为空白对照组、LPS诱导组、五味子多糖低、中、高剂量组,CCK-8法检测五味子多糖对大鼠肝细胞增殖的影响,ELISA法检测五味子多糖对大鼠肝细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,免疫印迹方法检测五味子多糖对Traf3/NF-кB信号通路的影响。结果 与LPS诱导组相比,五味子多糖能显著改善LPS对大鼠肝细胞增殖的抑制作用（P<0.05）;与LPS诱导组相比,不同剂量五味子多糖均显著降低了大鼠肝细胞分泌的IL-6和TNF-α炎症因子水平（P<0.05）;免疫印迹法检测发现,各剂量五味子多糖组相对LPS诱导组细胞中Traf3和p-NF-кB表达水平明显降低（P<0.05）。结论 五味子多糖可抑制大鼠肝细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf3/NF-кB信号通路活化有关。     

顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法 建立人卵巢癌COC1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组,每组5只：生理盐水组、8-硝基白杨素组、顺铂组、8-硝基白杨素+顺铂组。观察各组裸鼠移植瘤体积、重量及裸鼠体质量的变化;裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Western blot分析瘤组织细胞凋亡的可能分子生物学机制。结果 与顺铂组和8-硝基白杨素组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合作用COC1细胞裸鼠移植瘤后,移植瘤的体积、移植瘤的重量均明显降低(P<0.05);与顺铂组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合组裸鼠体质量无明显差异(P>0.05),裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数无明显差异(P>0.05);顺铂和8-硝基白杨素联合作用COC1细胞16 d后,COC1细胞发生凋亡,同时bcl-2蛋白表达降低,caspase-3蛋白表达增高。结论 顺铂联合8-硝基白杨素通过降低bcl-2蛋白表达,活化caspase-3蛋白表达来抑制人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长。     

奈达铂联合紫杉醇新辅助化疗方案在局部晚期宫颈癌患者中的应用效果

目的 探讨奈达铂联合紫杉醇新辅助化疗方案在局部晚期宫颈癌患者中的应用效果。方法 选取2010年9月至2013年3月徐州医学院附属医院收治的局部晚期宫颈癌患者60例,随机分成奈达铂组及对照组,每组30例。奈达铂组采用奈达铂联合紫杉醇新辅助化疗方案,对照组采用顺铂联合紫杉醇新辅助化疗方案,对比两组患者的疗效及不良反应。结果 奈达铂组与对照组患者短期总有效率分别为76.7%、80.0%,两组比较差异无统计学意义（χ²=0.098,P=0.754）。与化疗前相比,两组患者化疗后肿瘤直径较化疗前缩小[（5.3±0.9）vs（3.2±0.6）,（5.2±0.8）vs（3.3±0.7）];差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,奈达铂组患者治疗后Ⅰ~Ⅱ级恶心呕吐（36.7% vs 70.0%）、贫血（16.7% vs 40.0%）、肾功能损害（10.0% vs 36.7%）发生率较低,Ⅰ~Ⅱ级血小板降低（56.7% vs 30%）发生率较高,差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 奈达铂联合紫杉醇新辅助化疗方案治疗局部晚期宫颈癌疗效与顺铂类似,但不良反应少。     

基于NLRP3炎症小体的抑瘤汤联合紫杉醇对上皮性卵巢癌的作用研究

目的 研究抑瘤汤对上皮性卵巢癌中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体的作用。方法 通过免疫组化法比较人体的良性肿物和卵巢癌组织中NLRP3和白细胞介素（IL）-1β的表达水平;体外培养人上皮性卵巢癌细胞系A2780,分成对照组、化疗（给予DMSO溶解的紫杉醇100nmol·L^-1）组、化疗＋抑瘤汤（1、10、100mg·L^-1）组,对照组加入等量DMSO,干预12、24、48、72h后,CCK-8法检测细胞存活率,选取合适的抑瘤汤浓度及干预时间进行后续实验;Western blotting法检测NLRP3的蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和IL-1β的mRNA水平;ELISA法检测细胞上清液中NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白水平。结果 与卵巢良性肿物组相比,卵巢癌患者的卵巢组织中NLRP3及IL-1β蛋白表达显著上调（P＜0.05）;干预24、48、72h后,与对照组相比,化疗组的细胞存活率显著降低（P＜0.05、0.001）;与化疗组相比,化疗＋100mg·L^-1抑瘤汤组的细胞存活率显著降低（P＜0.01、0.001）,选取100mg·L^-1抑瘤汤干预48h进行后续研究。与对照组相比,化疗组的细胞中NLRP3蛋白表达水平降低,但无统计学意义;与对照组及化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的细胞中NLRP3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.001）。与对照组相比,化疗组和化疗＋抑瘤汤组的NLRP3 mRNA和上清中蛋白水平显著降低（P＜0.05、0.001）;与化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的NLRP3mRNA和上清中蛋白水平显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,化疗组的Caspase-1、ASC、IL-1β的mRNA水平降低,但无统计学意义;化疗＋抑瘤汤组的Caspase-1、ASC、IL-1β mRNA水平显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,化疗组和化疗＋抑瘤汤组细胞上清中的Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白水平显著降低（P＜0.01、0.001）;与化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白进一步降低,其中Caspase-1、ASC差异显著（P＜0.05、0.001）。结论 NLRP3炎症小体在卵巢癌中高表达,抑瘤汤可抑制卵巢癌细胞NLRP3炎症小体的表达。     

商陆皂苷甲抑制TLR4/NF-κB信号通路改善大鼠动脉粥样硬化的作用研究

目的 研究商陆皂苷甲（EsA）对动脉粥样硬化（AS）大鼠的作用及机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀片（SIMT,10mg·kg^-1,阳性对照）组和EsA高、低剂量（10、2.5mg·kg^-1）组,每组6只。对照组给予普通饲料,其余各组以高脂饲料联合ip7×10⁵U·kg^-1维生素D₃（在第3天注射）制备AS模型。造模的同时ip给药,每天1次。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平;HE染色法观察胸主动脉病理变化;Western blotting法检测胸主动脉Toll样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）蛋白表达;免疫组化法检测胸主动脉核因子κB（NF-κB） p65阳性细胞表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著降低（P＜0.01）;胸主动脉血管内皮损伤严重,可见明显蓝色钙状斑块;胸主动脉TLR4和MyD88蛋白表达以及NF-κB p65阳性细胞表达显著升高（P＜0.01）。与模型组比较,EsA高、低剂量组大鼠血清血脂和炎性因子水平明显改善（P＜0.05、0.01）;胸主动脉血管内皮大致恢复正常,蓝色钙状斑块减少;胸主动脉TLR4和MyD88蛋白表达以及NF-κB p65阳性细胞表达显著降低（P＜0.05、0.01）。结论 EsA可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路对大鼠AS发挥改善作用。