温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究＊

目的 观察温阳解郁颗粒（Wenyang Jieyu granule，WYJY）对皮质酮（Corticosterone，CORT）诱导损伤型小鼠海马神经细胞（TH22 cell）的保护作用，基于脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor， BDNF）/酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase B， TrkB）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extra cellular regulated protein kinases， ERK）信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型，以不同浓度的WYJY和氟西汀（Fluoxetine，FXT）含药血清作用于模型细胞，细胞增殖-毒性检测（Cell Counting Kit-8， CCK-8）法分析细胞活性，倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变，采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）、实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR， qPCR）法检测神经细胞内凋亡因子（BCL2-Associated X， Bax）、抗凋亡因子（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶（Phospho-p90RSK， RSK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein， CREB）蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果 在浓度为459.5 μmol·L^-1的CORT作用24 h后，HT22细胞的活性抑制率达到50%，在此条件作用下细胞形态结构损伤明显，凋亡程度严重，细胞上清中BDNF的含量显著减少（P<0.05），细胞内凋亡相关因子Bax/Bcl-2的比值明显升高（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）；以5%的浓度为2.85 g·kg^-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后，HT22细胞存活率明显提升（P<0.01），细胞结构的损伤明显改善，细胞凋亡程度减轻，细胞外BDNF的含量显著升高（P<0.05），细胞内Bax/Bcl-2比值显著下调（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升（P<0.05，P<0.01）。结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路，放大CREB信号传导，影响Bcl-2、BDNF水平，可能是其保护海马神经元，发挥抗抑郁疗效的重要机制。     

荆防颗粒对马兜铃酸I致小鼠急性肾损伤的预防和保护作用研究

目的 研究荆防颗粒对马兜铃酸I致小鼠急性肾损伤的预防和保护作用。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和荆防颗粒低、中、高剂量（4、8、16 g/kg）组,各给药组连续7 d ig相应药物,第5天给药2 h后,除对照组外,其余各组ip马兜铃酸I（10 mg/kg）,连续3 d,建立急性肾损伤模型。末次给药后,检测血清中肌酐（creatinine,CRE）和血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色检测肾组织病理变化;采用TUNEL染色观察小鼠肾组织细胞凋亡情况;检测小鼠肾组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;采用ELISA检测小鼠肾组织中单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和IL-6水平;采用Western blotting检测肾组织蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、双微体扩增基因2（murine double minute 2,MDm2）、p53、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清BUN和CRE水平显著升高（P＜0.01）,肾脏出现明显病理损伤;肾组织MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平显著升高（P＜0.01）,SOD活性及GSH水平显著降低（P＜0.01）,提示肾脏细胞出现氧化应激损伤;肾组织中细胞凋亡数量明显增多（P＜0.01）,促凋亡因子p53、Bax蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）,Akt、MDm2和Bcl-2蛋白表达受到抑制（P＜0.01）。与模型组比较,荆防颗粒组能够明显改善小鼠肾组织病理损伤,降低血清中炎症因子水平,调节氧化应激,上调肾组织Akt、MDm2和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制肾组织p53和Bax的表达,减少肾组织细胞凋亡（P＜0.01）。结论 荆防颗粒可以通过抗氧化应激和炎症来减轻马兜铃酸造成的急性肾损伤,其作用机制可能与调控Akt/MDm2/p53通路、抑制细胞凋亡有关。     

清肝活血方调控Caspase-4/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡改善酒精性肝损伤

[目的] 研究清肝活血方（QGHXR）通过调控半胱天冬酶（Caspase）-4/Caspase-3/GSDME 细胞焦亡通路防治酒精性肝病（ALD）的作用机制。[方法] 将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和QGHXR组复制ALD小鼠模型。检测血清肝功能、血脂水平;苏木精-伊红（HE）染色及油红O染色观察肝脏病理改变及肝脏脂质沉积状况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）法及免疫荧光染色检测Caspase-4/Caspase-3/GSDME通路相关基因及蛋白表达情况。[结果] 与空白对照组比较,模型组小鼠肝组织三酰甘油（TG）水平明显升高（P＜0.01）,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平升高（P＜0.05）,血清白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平升高（P＜0.05）;肝脏组织出现病理改变及脂质沉积现象;肝组织IL-1B、IL-6、TNF-α、NLRP3 mRNA表达水平升高。与模型组比较,QGHXR组小鼠肝组织TG水平明显降低（P＜0.01）,血清ALT、AST、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）水平降低（P＜0.05）,血清TG、IL-6、TNF-α 水平降低（P＜0.05）以及血清高密度脂蛋白（HDL）水平升高（P＜0.01）;血清中血脂、肝脏病理改变及脂质沉积现象缓解;GsdmeN、Caspase-4、Caspase-3和C-Caspase-3基因及蛋白水平降低（P＜0.05）。[结论] QGHXR可通过调节Caspase-4/ Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡通路改善ALD小鼠肝损伤和脂质沉积。     

哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

目的 研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法 复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果 CCK-8法结果表明400 mmol·L^-1乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降（P<0.01）,细胞处于G₀/G₁期的细胞占比显著升高（P<0.01）,细胞总凋亡率显著升高（P<0.01）,线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）,细胞色素C（Cyt C）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（P<0.05,P<0.01）,且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β（IL-1β）表达明显增强（P<0.05）,Bcl-2显著下降（P<0.01）;与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（P<0.05,P<0.01）,细胞总凋亡率显著下降（P<0.01）,线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,Cyt C,Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（P<0.05,P<0.01）。结论 ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。     

基于轮廓分析的电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠CREB表达的多脑区联动效应研究＊

目的 观察电针长强穴对脆性X智障基因（Fragile X mental retardation 1，FMR1）敲除小鼠不同脑区环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein，CREB）及磷酸化CREB（p-CREB）蛋白表达量影响，以探讨针刺的多脑区联动效应。方法 选取适龄FMR1基因敲除小鼠，通过PCR鉴定其基因表型。将24只纯合子基因敲除小鼠通过随机数字表法分为3组，每组8只，即空白组（仅给予抓取动作）、非经非穴组（电针肋弓最低点上1 cm处）和长强组（电针长强穴）。2组针刺组采用电针仪进行干预，电针刺激频率2 Hz，强度2 mA，连续波，每日20 min，连续干预14 天。干预结束后通过免疫组化法检测海马、皮质及小脑CREB及p-CREB蛋白的表达情况。结果 空白组海马的CREB表达量较皮质（P<0.05）、小脑（P<0.001）显著升高；非经非穴组及长强组皮质的CREB表达量较海马（P<0.05，P<0.01）、小脑（P<0.05）显著升高。空白组小脑的p-CREB表达量及p-CREB率较皮质（P<0.01，P<0.001）、海马（P<0.05，P<0.001）显著升高；非经非穴组的小脑p-CREB表达量较海马（P<0.01）显著升高；非经非穴组小脑p-CREB率较皮质（P<0.01）、海马（P<0.05）显著升高；二者在长强组的三个脑区均无显著性差异（P＞0.05）。轮廓分析结果示：CREB平行轮廓分析示差异有统计学意义（P＜0.05），提示三个脑区的总体轮廓不平行，即脑区的联动变化不一致。p-CREB及p-CREB率水平轮廓分析差异有统计学意义（P＜0.01），提示三个脑区联动变化一致，且各组间变化程度一致，但各组中蛋白表达不相等，其中小脑最高。结论 通过轮廓分析能初步观察针刺的多脑区联动效应，且针刺刺激可能通过影响CREB磷酸化使得FMR1基因敲除小鼠多脑区效应方式发生改变。     

基于Akt/mTOR通路研究地榆皂苷II诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用机制

目的 探讨地榆皂苷II抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法 采用不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）地榆皂苷II处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响;运用流式细胞术检测地榆皂苷II对细胞凋亡的影响;通过Western blotting检测地榆皂苷II对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-II（microtubule-associated protein light chain3-II,LC3II）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅰ,LC3Ⅰ）、自噬相关蛋白p62、Beclin1及蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路关键蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷II显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力,且呈现一定的剂量相关性;流式细胞检测发现地榆皂苷II给药后细胞凋亡率显著增加（P＜0.01、0.001）;Western blotting结果显示,与对照组比较,地榆皂苷II给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01）,LC3Ⅱ/LC3I值显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,Beclin1蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01）,p62蛋白表达量显著下降（P＜0.05、0.01）,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 地榆皂苷II通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制,为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据。     

灵芝多糖调控抗氧化因子表达抑制乳腺癌恶性表型研究

目的 研究灵芝多糖对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及作用机制。方法 MCF-7和MDA-MB-231细胞分别给予灵芝多糖（25、50、75mg/mL）干预后,MTS法检测灵芝多糖对乳腺癌细胞增殖的影响;TUNEL染色及流式细胞术探测灵芝多糖对乳腺癌细胞凋亡的影响;采用流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用qRT-PCR技术检测抗氧化相关基因谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基（glutamate-cysteine ligase regulatory subunit,GCLM）、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）、人硫氧还蛋白还原酶1（human thioredoxin reductase 1,TXNRD1）、苹果酸酶1（malic enzyme 1,ME1）、硫氧还蛋白（thioredoxin,TXN）mRNA表达;采用Western blotting检测GCLM、TXNRD1蛋白表达。结果 给予灵芝多糖干预后,MCF-7、MDA-MB-231细胞活性明显降低（P＜0.01）,凋亡率显著升高（P＜0.05、0.01）,细胞内ROS水平显著升高（P＜0.05、0.01）,GSH水平明显下降（P＜0.01）;抗氧化因子mRNA及蛋白表达水平显著下调（P＜0.05、0.01）。结论灵芝多糖能够通过抑制GCLM等抗氧化基因表达诱导ROS生成,促进乳腺癌细胞凋亡,进而抑制乳腺癌恶性进展。     

基于GSK-3β/CREB信号通路探讨加味肾气丸减轻糖尿病小鼠肾间质纤维化的作用机制

目的 观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠肾功能及纤维化的影响,并基于糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/环磷腺苷效应原件（CREB）信号通路探讨其可能的作用机制。方法 雄性db/db小鼠50只,db/m小鼠10只。50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、加味肾气丸低、中、高剂量组。db/m小鼠10只为正常组。加味肾气丸低、中、高剂量组中药颗粒剂混悬液灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦混悬液灌胃,正常组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续干预12周。分别记录治疗前后小鼠的血糖和尿白蛋白肌酐比（UACR）及小鼠肾脏中GSK-3β、CREB、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维粘连蛋白（FN）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）蛋白的表达水平,并观测小鼠肾脏的病理损伤程度。结果 与正常组比较,模型组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）,CREB蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤严重;与模型组比较,肾气丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平均有不同程度下降（P<0.05）,CREB蛋白表达水平升高（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤有不同程度的减轻。结论 肾气丸可有效降低血糖、改善肾功能和纤维化,其作用机制与其抑制GSK-3β/CREB信号通路有关。     

潜阳育阴颗粒调控NR3C2/ROS/ERK信号通路抑制醛固酮诱导足细胞损伤的机制

目的 探讨潜阳育阴颗粒对醛固酮干预的小鼠足细胞的保护机制。方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组：正常组、模型组、潜阳育阴颗粒低、高剂量组、螺内酯组,每组6只;除正常组外其余小鼠均植入微型渗透泵持续注入醛固酮（300 μg·kg^-1·d^-1）,诱导小鼠肾损伤,造模后给药组分别给予潜阳育阴颗粒低剂量、高剂量（2.6、5.2 g·kg^-1·d^-1）,螺内酯（18 mg·kg^-1·d^-1）连续干预28 d。苏木素-伊红（HE）染色及马松（Masson）染色观察小鼠肾脏病理改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肾脏组织足细胞裂孔膜结构蛋白Nephrin、足细胞丝结蛋白Desmin、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、核受体亚家族3C组成员2（NR3C2）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）的表达水平;原位末端标记法（TUNEL）染色观察小鼠肾脏组织的凋亡水平;检测小鼠肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）水平;体外研究分为5组：正常组、模型组（醛固酮浓度200 nmol·L^-1）、潜阳育阴颗粒低、中、高质量浓度组（25、50、100 mg·L^-1）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度潜阳育阴颗粒对醛固酮诱导的足细胞相对活力的影响;Western blot检测足细胞中Nephrin、Desmin、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、NR3C2、p-ERK/ERK表达水平;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）检测足细胞的凋亡水平;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法（DCFH-DA）观察足细胞的活性氧（ROS）水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠肾脏结构病变、出现纤维化情况,凋亡程度升高（P<0.01）,SOD水平显著下降（P<0.01）;醛固酮浓度在200 nmol·L^-1时足细胞活性明显下降（P<0.05）,模型组足细胞形态病变、细胞间微丝结构排列错乱,凋亡水平升高（P<0.01）,细胞内ROS水平显著升高（P<0.01）,小鼠肾脏组织及足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Desmin、Bax、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达明显上升（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,潜阳育阴颗粒各剂量改善小鼠肾脏结构损伤和纤维化情况,减轻小鼠肾脏凋亡水平（P<0.05,P<0.01）,提高肾脏SOD含量（P<0.05,P<0.001）,改善足细胞活性（P<0.05,P<0.01）,恢复足细胞足突结构,改善足细胞凋亡（P<0.01）,下调足细胞ROS水平（P<0.01）,上调小鼠肾脏组织和足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,下调Desmin、Bax、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 潜阳育阴颗粒通过调节NR3C2/ROS/ERK信号通路改善醛固酮诱导的小鼠足细胞损伤。     

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的 研究茱萸丸对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的影响及其相关机制。方法 采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除（low density lipoprotein receptor knockout,LDLR^-/-）小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR^-/-小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量（130.54、261.08、552.16 mg/kg）组和阿托伐他汀（10.40 mg/kg）组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）、IL-1β、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;超高液相色谱串联质谱法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS）检测小鼠血浆中三甲胺（trimethylamine,TMA）、氧化三甲胺（trimethylamine oxide,TMAO）含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein,ASC）、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）mRNA表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著下降（P＜0.01）,主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高（P＜0.01）,SOD活性显著降低（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数降低（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降（P＜0.01）,主动脉中ROS含量增加（P＜0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高（P＜0.01）。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低（P＜0.05、0.01）,HDL-C水平显著升高（P＜0.01）,主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低（P＜0.05、0.01）,SOD活性显著升高（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高（P＜0.05、0.01）,厚壁菌门菌群丰度降低（P＜0.05）,主动脉中ROS含量减少（P＜0.05、0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）。结论 茱萸丸能够显著抑制LDLR^-/- AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。     

金银花与山银花体外印迹等效性的研究

目的运用超分子印迹模板作用规律对金银花和山银花体外印迹等效性进行研究,旨在为金银花和山银花两花纷争提供新的解决方法。方法以金银花药渣、山银花药渣、菊花药渣为主体分子,以金银花、山银花、双黄连(金银花)、双黄连(山银花)、银翘散(金银花)、银翘散(山银花)水提液为客体分子,3种主体分子和6种客体分子进行选择性吸附。采用HPLC法对吸附前后的客体分子水溶液指纹图谱进行测定。运用总量统计矩法计算总量一阶矩及其差值,并对差值进行t检验。结果 6种客体分子分别被金银花与山银花主体分子组、金银花与菊花主体分子组、山银花与菊花主体分子组吸附后,其总量一阶矩差值经t检验,P1=0.940.05、P2=0.020.05、P3=0.040.05。所有客体分子分别被金、山银花主体分子吸附后,其总量一阶矩差值无显著性差异。而被菊花主体分子吸附后,与被金银花和山银花主体分子吸附后相比均存在显著性差异。结论金银花和山银花之间印迹模板具有相似性,而金银花和山银花与菊花之间印迹模板存在差异。说明金银花和山银花二者存在印迹等效性,这也与临床用药相符合。     

安寐丹调控OXA/CREB/PER1信号通路改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱＊

目的 观察中医经典名方安寐丹对睡眠剥夺（Sleep disruption，SD）模型大鼠食欲素（Orexin）及其介导的食欲素A（Orexin A，OXA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）/Period1（period circadian regulator 1， PER1）基因信号通路的作用。方法 40只雄性6月龄SD大鼠随机等分为空白组、模型组、艾司唑仑组、安寐丹组，空白组常规进食进水，其他三组采用对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射叠加多平台水环境剥夺法构建SD模型，自主活动仪监测昼夜活动节律。空白组、模型组给予等容的0.9%氯化钠灌胃，艾司唑仑组给予艾司唑仑0.09 mg·kg^-1、安寐丹组给予安寐丹水煎剂9.09 mg·kg^-1灌胃治疗，连续4周。4周后运用Morris水迷宫检测其学习记忆，免疫荧光检测下丘脑Orexin神经元表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠下丘脑组织OXA、食欲素B（Orexin B，OXB）含量，蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）和实时荧光定量（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）检测各组大鼠下丘脑组织OXA/CREB/PER1信号通路蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠24 h自主活动时间和活动距离均高于空白组；活动时间、活动距离显著增加（P<0.01），上平台潜伏期与游泳总路程显著延长（P<0.01），穿越站台次数和站台活动时间均减少（P<0.01）；下丘脑组织OXA、OXB含量高于空白组（P<0.01）；且OXA、CREB 蛋白和mRNA表达均显著升高（P<0.01），PER1 蛋白和mRNA表达均显著下调（P<0.01）。与模型组比较，安寐丹组大鼠上平台潜伏期缩短（P<0.01）、游泳总路程减少（P<0.05）、穿越平台数量增加（P<0.05）；下丘脑组织OXA、OXB含量降低（P<0.05），OXA蛋白表达下调（P<0.05）、CREB蛋白表达下调（P<0.01）、PER1蛋白表达上调（P<0.01），OXA和CREB mRNA表达降低（P<0.05），PER1 mRNA表达升高（P<0.05）。结论 安寐丹改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱可能与调节Orexin及其介导的OXA/CREB/PER1信号通路相关。     

荭草提取物抗炎镇痛作用实验研究

目的探讨荭草提取物的抗炎镇痛作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀2种急性炎症模型以及大鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型,研究荭草水提物和醇提物ig给药的抗炎作用。采用热板法和醋酸扭体法致痛,研究荭草水提物和醇提物ig给药的镇痛作用。结果与模型组相比,荭草水提物和醇提物高、低剂量(生药7.5、3.75 g/kg)组显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P<0.01),明显抑制蛋清所致大鼠足跖肿胀(P<0.05、0.01),明显抑制大鼠棉球肉芽肿(P<0.01)。荭草水提物和醇提物高、低剂量组给药后明显延长热板所致小鼠的痛阈值,与模型组比较差异显著(P<0.01);荭草水提物和醇提物高、低剂量组明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数,与模型组比较差异显著(P<0.01)。荭草水提物高、低剂量组给药后与相同剂量醇提物相比,各项指标差异显著(P<0.05、0.01)。结论荭草提取物ig给药具有抗炎、镇痛作用,且水提物作用强于醇提物。     

怀菊花种质资源品质评价

目的:对怀菊花种质资源品质评价,分析不同地域菊花的遗传关系及其药材的质量差异。方法:实地观察、走访药农等方法调查分析怀菊花种质资源;以2015年版《中国药典》中方法对绿原酸,木犀草苷,3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量测定;紫外-可见分光光度法总黄酮测定,2015年版《中国药典》中方法对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、挥发油测定为主要评价指标,对不同产地的菊花药材的质量进行评价;采用随机扩增多态性DNA分子标记(RAPD)法分析不同产地菊花的遗传关系。结果:通过对菊花6项指标的分析,其有效成分含量均符合2015年版《中国药典》标准,表明温县、武陟县适合怀菊花的生长,是道地产区;7条引物共扩增出50条带,其中46条呈多态性,多态性比率为92.00%,怀菊和杭菊、贡菊、野菊都未能聚类,表明它们之间的亲缘关系较远,也证明在菊花种质资源中存在较丰富的遗传多样性,怀菊花聚为一大类,表明怀菊花栽培品种的遗传纯度较高。结论:对怀菊花种质资源分析研究,为怀菊花的规范化种植提供科学的参考依据;保护怀菊花资源、合理开发利用药材提供了科学依据。     

附子-干姜对慢性溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜微循环障碍的改善作用

目的研究附子-干姜对慢性溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)小鼠肠黏膜微循环障碍的改善作用。方法建立慢性UC小鼠模型,给予附子-干姜水煎液进行干预,记录各组小鼠体质量、大便性状及便血情况,进行疾病活动指数(disease activityindex,DAI)评分;采用激光多普勒血流仪检测各组小鼠肠黏膜血流灌注量、血细胞移动速度和移动血细胞浓度;采用ELISA法检测各组小鼠血清中血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)和组织因子(tissue factor,TF)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组小鼠结肠组织病理改变情况;采用免疫组化法检测各组小鼠肠黏膜毛细血管内皮细胞CD31表达并计算微血管密度(microvessel density,MVD)。结果与对照组比较,模型组小鼠DAI评分显著增加(P<0.01),肠黏膜血流灌注量、血细胞移动速度显著下降(P<0.01),肠黏膜移动血细胞浓度显著升高(P<0.01),血清PAF、TF水平显著升高(P<0.01),结肠组织CD31表达减少,肠黏膜微血管密...     

基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制。方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400 mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2 siRNA进行干预。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检...     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。     

当归多糖对糖尿病肾病KK-Ay小鼠肾脏AMPK信号通路及线粒体自噬的影响

目的 研究当归多糖对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）KK-Ay小鼠肾脏磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPactivated protein kinase,AMPK）信号通路及线粒体自噬的影响。方法 SPF级雄性KK-Ay小鼠用高糖高脂饲料喂养,随机分为模型组、厄贝沙坦（25 mg/kg）组和当归多糖高、中、低剂量（400、200、100 mg/kg）组,每组10只;将10只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组。给予药物干预4周,观察小鼠一般情况,每周称定体质量并检测血糖;末次给药后,心脏取血并处死小鼠,分离血清检测尿微量白蛋白（urine microalbuminuria,U-ALB）、肌酐（creatinine,SCr）、尿素氮（urea nitrogen,BUN）;采用苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理变化;采用Western blotting检测肾组织线粒体自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62、Nix]和线粒体裂变蛋白[线粒体动力相关蛋白1(dy...     

铁筷子挥发油对慢性脑缺血致血管性认知功能障碍大鼠的作用及机制研究

目的 探究苗药铁筷子[腊梅Chimonanthus praecox及山腊梅C. nitens的干燥根]挥发油对慢性脑缺血（chronic cerebral hypoperfusion,CCH）致血管性认知功能障碍（vascular cognitive impairment,VCI）大鼠的作用及机制。方法 采用改良的双侧颈总动脉结扎（bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO）法建立CCH模型,将造模成功大鼠随机分为模型组及铁筷子挥发油高、中、低剂量（80、40、20 mg/kg）组和丁苯酞（63 mg/kg）组,另设假手术组,给予相应药物干预28 d,采用水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;采用旷场实验、Y迷宫实验检测各组大鼠自主活动性和新奇事物探索能力;采用苏木素-伊红（HE）染色、Nissl染色、TUNEL染色观察各组大鼠大脑皮层及海马CA1区神经细胞结构变化、尼氏小体以及凋亡细胞数量变化;采用ELISA法检测各组大鼠血清中脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）水平;采用比色法检测各组大鼠海马组织中乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和乙酰胆碱转移酶（cholineacetyltransferase,ChAT）的活性;采用Western blotting法检测各组大鼠海马组织中BDNF、酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor B,TrkB）、磷酸化TrkB（phosphorylated TrkB,p-TrkB）、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylin-ositol-3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）蛋白表达。结果 与模型组比较,铁筷子挥发油组大鼠逃避潜伏期缩短（P＜0.05、0.01）,穿越平台次数和跨格次数提高（P＜0.05、0.01）,在新异臂所待时间延长（P＜0.05）;神经细胞结构的变性得到改善,脑组织中尼氏小体的数量提高（P＜0.05）,细胞凋亡减少（P＜0.05）;血清中BDNF水平及海马组织中ChAT活性升高（P＜0.05、0.01）,海马组织中AChE活性降低（P＜0.05）;海马组织中BDNF、TrkB、p-TrkB、PI3K和p-Akt蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05、0.01）,Caspase-3蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论 苗药铁筷子挥发油可以改善CCH致VCI大鼠认知功能障碍,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路有关。     

枸杞子-菊花配伍源流考证及特征分析

枸杞子Lycii Fructus与菊花Chrysanthemi Flos均为药食两用中药,两者配伍组成的枸杞子-菊花在疾病治疗与养生保健中应用广泛.从应用历史与药性理论角度系统梳理考证了枸杞子-菊花的配伍历史渊源,并通过搜集《中医方剂大辞典》中枸杞子与菊花同方配伍方剂以及含有该药对中成药,总结了该药对应用主治、配伍比例...