迷迭香酸通过Traf6/TAK1信号通路调控胃癌细胞的增殖及凋亡

[目的]观察迷迭香酸对胃癌细胞（HGC27）增殖、凋亡的作用效应及对Traf6/TAK1信号通路的影响。[方法]体外培养HGC27细胞,采用低（25 μmol/L）、中（50 μmol/L）、高（100 μmol/L）剂量迷迭香酸干预,然后运用CCK8法检测HGC27细胞增殖情况,流式细胞术分析HGC27细胞周期及凋亡情况,Western Blot技术检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达及肿瘤坏死相关受体因子6/转化生长因子活化蛋白激酶1（Traf6/TAK1）信号通路活化情况。[结果]与对照组相比,不同剂量迷迭香酸能明显抑制HGC27细胞增殖、诱导其凋亡,将HGC27细胞停留在G0/G1期,差异相比有统计学意义（P<0.05）;与对照组相比,不同浓度迷迭香酸可以明显诱导Bax表达,显著抑制Bcl-2、Traf6及p-TAK1蛋白表达,差异相比有统计学意义（P<0.05）。[结论]迷迭香酸可将HGC27细胞停留在G0/G1期,抑制其增殖、诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化相关。     

基于转录组学和网络药理学探讨肉豆蔻挥发油干预低氧性肺动脉高压的作用机制

目的 基于转录组学和网络药理学探讨肉豆蔻挥发油（volatile oil from Myristica fragrans,VOMF）干预低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary artery hypertension,HPAH）的作用机制。方法 通过SwissTargetPrediction数据库获取VOMF活性成分和药物潜在靶点,应用GEO数据库获取HPAH疾病相关靶点,Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”网络;运用Pymol和MOE软件对VOMF关键活性成分与作用靶点进行分子对接。采用雄性SD大鼠制备肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）,低氧处理并给予VOMF干预后,进行转录组学分析获取差异表达基因,采用Western blotting验证VOMF对细胞周期信号通路相关蛋白表达的影响。结果 网络药理学分析共得到VOMF潜在作用靶点512个,HPAH疾病相关差异靶点2 912个,交集基因80个;转录组学分析共得到40个共同差异表达基因。以P＜0.05为筛选条件将转录组学和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析结果进行交集,得到交集通路8条,其中与HPAH密切相关的包括细胞周期信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、缺氧诱导因子-1信号通路。结合文献报道和课题组前期研究,选取细胞周期信号通路进行验证。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2,CDK2）、CDK4、细胞周期蛋白D1（cell cycle protein D1,Cyclin D1）、Cyclin A2蛋白表达水平升高（P＜0.01、0.001）,p27Kip1蛋白表达水平降低（P＜0.01）;与模型组比较,VOMF组CDK2、CDK4、Cyclin D1、Cyclin A2蛋白表达水平降低（P＜0.05、0.01、0.001）,p27Kip1蛋白表达水平升高（P＜0.05、0.01）。结论 从网络药理学和转录组学角度初步阐明了VOMF能够通过干预细胞周期信号通路,进而干预HPAH的发生,可为后续的药理学研究和临床应用提供依据与参考。     

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨加味黄芪甘草汤对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的 探究加味黄芪甘草汤冻干粉对人非小细胞肺癌细胞A549、PC9增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响及可能的机制。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉对非小细胞肺癌细胞增殖的影响;将A549、PC9细胞分为空白组和加味黄芪甘草汤低、中、高组（2.0,4.0,8.0 g·L^-1）;平板克隆检测加味黄芪甘草汤对细胞克隆能力的影响;Hoechst 33342染色检测加味黄芪甘草汤对细胞凋亡的影响;划痕实验和Transwell小室实验分别检测其迁移与侵袭能力;微球体形成实验观察加味黄芪甘草汤对肿瘤细胞成球能力的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测多能干细胞维持基因八聚体转录因子（Oct-4）、人性别决定区y框蛋白2（Sox2）、同源盒转录因子（Nanog）的mRNA表达水平,评估肿瘤干细胞活性;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白（Bad）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,活化与非活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3、Caspase-3）,E-钙黏连蛋白（E-cadherin）,N型钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,β-连环蛋白（β-catenin）,c-核蛋白类基因（c-Myc）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）,锌指转录因子（Slug）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,A549、PC9细胞经1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉处理24 、48 h,细胞增殖能力均被明显抑制,并呈浓度与时间依赖性（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞的克隆能力（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤高组均能诱导A549、PC9细胞凋亡（P<0.01）;加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞侵袭、迁移能力（P<0.05,P<0.01）;经加味黄芪甘草汤低、中、高组处理后,A549细胞的微球体体积明显缩小,A549、PC9细胞Oct-4、Sox2和Nanog mRNA表达量均降低（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05,P<0.01）,上调促凋亡蛋白Bad、Bax及cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin的表达（P<0.05,P< 0.01）,上调E-cadherin的表达（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞β-catenin、c-Myc、Cyclin D₁及Slug表达（P<0.01）。结论 加味黄芪甘草汤可抑制人非小细胞肺癌A549、PC9细胞的增殖、侵袭、迁移、肿瘤干细胞活性及上皮间质转化,并能诱导凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

JAK1/STAT1/p21通路在姜黄素诱导结肠癌细胞HCT116周期阻滞中的作用

目的 探讨姜黄素对人结肠癌HCT116细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测姜黄素（0、12.5、25、50、75、100 μmol·L^-1）和5-氟尿嘧啶（5-FU）（600 μmol·L^-1）处理不同时间（24、48、72 h）对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术检测姜黄素（0、25、50、75 μmol·L^-1）和5-FU对HCT116细胞周期的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HCT116细胞中Janus酪氨酸蛋白激酶1（JAK1）/信号传导及转录激活因子1（STAT1）/细胞周期依赖性激酶抑制因子1A（p21）通路相关蛋白表达的影响;染色质免疫沉淀法（ChIP）检测STAT1与p21启动子区的结合情况;采用小干扰核糖核酸（siRNA）,分别通过Western blot和细胞免疫荧光检测STAT1在调控p21表达中的作用及JAK1蛋白在调控STAT1活化中的作用。结果 与空白组比较,姜黄素各组和5-FU组HCT-116细胞活性明显降低（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素组和5-FU组DNA合成前期（G₀/G₁）细胞比例明显升高（P<0.05）,DNA复制期（S）和DNA合成后期（G₂/M）细胞比例及磷酸化p21（p-p21）蛋白水平明显降低（P<0.05）,p21蛋白表达明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,p21 siRNA+姜黄素组G₀/G₁期细胞明显降低（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化STAT1（p-STAT1）水平明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中p21蛋白表达水平升高（P<0.05）。机制研究表明,与空白组比较,姜黄素处理明显增强了STAT1蛋白在p21启动子区的富集（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化JAK1（p-JAK1）水平明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中的p-STAT1和p21蛋白水平明显升高（P<0.05）。结论 姜黄素诱导的人结肠癌HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与激活JAK1/STAT1/p21信号通路有关。     

莪术二酮对MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨莪术二酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和细胞周期的作用。方法 体外培养MDA-MB-231细胞,以卡培他滨作为阳性对照,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度的莪术二酮（125,250,500,1 000,2 000 μmol·L^-1）作用细胞24,48 h后对细胞活力的影响;选取3个有效抑制增殖的莪术二酮浓度（250,500,1 000 μmol·L^-1）进行后续实验。流式细胞术结合碘化丙啶（PI）染色法检测莪术二酮对细胞周期的影响;增设高浓度组（2 000 μmol·L^-1）,用JC-1法检测莪术二酮对细胞线粒体膜电位的影响,并采用流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡的情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测莪术二酮作用后细胞中周期调控和凋亡相关蛋白表达的变化。结果 与空白组比较,250,500,1 000,2 000 μmol·L^-1莪术二酮对细胞增殖有显著抑制作用（P<0.01）,效果呈浓度和时间依赖性,24 h和48 h的半抑制浓度（IC₅₀）分别为1 607,1 401 μmol·L^-1;250,500,1 000 μmol·L^-1莪术二酮可将细胞阻滞在G₁期;250 μmol·L^-1莪术二酮对细胞线粒体膜电位无影响,500,1 000,2 000 μmol·L^-1莪术二酮可使细胞线粒体膜电位明显下降（P<0.05,P<0.01）;250,500,1 000 μmol·L^-1莪术二酮可使凋亡细胞比例明显增加（P<0.05,P<0.01）;各浓度莪术二酮可使B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）/ B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）明显增加（P<0.05,P<0.01）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达量无明显变化,而Caspase-9,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3,p53和p21蛋白表达量均有所增加（P<0.05）。结论 一定浓度的莪术二酮能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,可能与其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

川芎嗪对白血病U937细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。 方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达。 结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC₅₀为160 mg·L^-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G₀/G₁期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调。 结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,最终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡。     

复方丹参方对大鼠心脏细胞色素P450酶的影响

目的 研究复方丹参方及其单味药对大鼠心脏细胞色素P450酶（CYPs）主要亚型的影响。方法 雄性SD大鼠随机分为5组,分别用复方丹参方 [0.32 g/(kg?d)]、丹参 [0.27 g/(kg?d)]、三七 [0.05 g/(kg?d)]、冰片 [0.003 g/(kg?d)] 或生理盐水连续ig诱导处理28 d,取各组大鼠心脏组织,利用Real Time荧光定量PCR技术检测各组大鼠心脏CYPs各亚型mRNA表达水平的变化。结果 与对照组比较,复方丹参方对大鼠心脏CYP1B1、CYP2B1、CYP2E1、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调趋势（P＜0.05）。丹参对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4F4和CYP4F5的mRNA表达有下调趋势（P＜0.05、0.01）,而对CYP4A3、CYP4F1和CYP4F6的mRNA表达有上调趋势（P＜0.05）。三七对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4、CYP4F5和CYP4F6的mRNA表达均有不同程度的抑制趋势（P＜0.05、0.01）。冰片对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调作用（P＜0.01）。结论 复方丹参方全方对心脏CYPs 亚型mRNA表达影响弱于方中各单味药对CYPs的影响,显示复方对CYPs影响可能是各单味药作用的综合和叠加,同时全方及单味药对CYP2家族和CYP4家族的影响显示其对心脏均有双向调节作用。     

通莲汤对胃癌MGC803细胞周期及NF-κBs信号通路的影响

目的: 研究通莲汤对胃癌MGC803细胞形态、生长周期的调节作用及细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响,以探讨该方抑制胃癌细胞增殖的机制。 方法: 将MGC803细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板,以含5%胎牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~800 mg·L^-1倍比梯度的通莲汤提取液,以10~160 mg·L^-1倍比浓度的氟脲嘧啶为阳性对照组,孵育48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测细胞增殖变化,曲线拟合法计算通莲汤和氟脲嘧啶50%抑制浓度(IC₅₀);以两者48 h IC₅₀浓度处理细胞48 h,流式细胞技术(FCM)测定细胞周期,Western blot法测定细胞IκB激酶β(IKKβ),NF-κB,phosph-NF-κB蛋白水平。 结果: 通莲汤和氟脲嘧啶48 h IC₅₀值分别为192.74 mg·L^-1,23.61 mg·L^-1;与空白对照组相比,通莲汤显著影响MGC803细胞周期中G₂期,氟脲嘧啶显著影响MGC803细胞周期中G₁期(P<0.05);通莲汤和氟脲嘧啶均能显著抑制IKKβ与NF-κB的蛋白表达。 结论: 通莲汤抑制MGC803细胞生长与抑制细胞于G₂期,下调NF-κB通路中IKKβ,NF-κB蛋白的表达有关。     

白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测，观察白藜芦醇(0．1、0．2、0．5 mmol／L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长，0．1mmol／L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团；流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0．5mmol／L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGc823、sGc7901和HGc27细胞于G0／G1、S、G2／M期，并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡，其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19．3％，远高于其他两株胃癌细胞。结论自藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。     

Cyclin E / CDK2 及 p27 在胃癌细胞周期 G1/ S 调控中的研究

目的探讨胃癌组织中CyclinE／CDK2和p27蛋白表达及细胞增殖与胃癌发生及发展的关系。方法采用流式细胞术检测CyclinE／CDK2及p27蛋白在胃癌组织及正常胃壁组织细胞中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤细胞分化程度、癌组织浸润深度及有无淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。结果胃癌组织及正常胃组织细胞增殖指数分别为（40．62±5．07）％和（24．99±3．11）％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;FCM检测胃癌组织及正常胃组织细胞中CyclinE蛋白表达荧光强度分别为（482．67±19．45）A．U．和（442．46±20．49）A．U．,CDK2蛋白表达荧光强度分别为（469．04±21．62）A．u．和（436．64±11．24）A．U．,p27蛋白表达A．u分别为（449．10±19．98）A．u．和（502．17±18．78）A．U．,二者比较均有显著性差异（P〈0．叭）。结论胃癌具有旺盛的增殖能力。CyclinE、CDK2及p27蛋白的异常表达引起了细胞异常增殖,从而引起早期胃癌的发生。联合检测CyclinE、CDK2及p27蛋白的表达可为临床上胃癌早期诊断提供实验依据,对于提高临床上胃癌早期诊断的准确率具有重要的意义。     

中药胃康宁对胃癌细胞周期因子Cyclin E、CDK2和p27表达的影响

目的:观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞Cyc lin E、CDK2(Cyc lin dependant k inase 2,CDK2)和p27mRNA及其蛋白表达的作用。方法:分别以高、中、低不同剂量的胃康宁制剂对W istar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组含药血清培养胃癌细胞,采用免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中Cyc linE、CDK2和p27蛋白的表达,RT-PCR法检测各组胃癌细胞中Cyc lin E、CDK2和p27 mRNA的表达。结果:免疫组化法结果显示,胃康宁高、中、低剂量组Cyc lin E和CDK2灰度值均有明显升高,与空白对照组比较,P<0.05~0.01,而p27灰度值则显著降低(P<0.05~0.01);RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,胃康宁低、中、高剂量组均能明显降低Cyc lin E和CDK2 OPTD I值(P<0.05~0.01)。同时,还能升高p27 OPTD I值(P<0.05~0.01)。结论:中药胃康宁可抑制胃癌细胞周期因子Cyc lin E、CDK2及其mRNA的表达,促进细胞周期抑制因子p27及其mRNA的表达,这可能是胃康宁抑制胃癌细胞生长的机制之一。     

长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的通过体内外水平研究长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法采用MTS法检测人胃癌BGC细胞的增殖情况;采用Hoechst荧光染色法、流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期的情况;通过Western blotting法检测BGC细胞内增殖、周期和凋亡相关蛋白表达情况;荷瘤裸鼠实验检测长春新碱抑制胃癌生长情况。结果长春新碱明显抑制BGC细胞的生长,其抑制率与药物浓度呈剂量和时间相关性,将细胞周期阻滞于G1期,并促进其凋亡,下调了细胞增殖和周期相关蛋白p-FAK、FAK、E2F1、Cylin E2、Cyclin D2、CDK2、CDK6的表达,并激活了凋亡相关蛋白Caspase-3。荷瘤裸鼠实验显示长春新碱能明显抑制胃癌生长。结论长春新碱通过下调细胞增殖与周期相关蛋白的表达,使细胞周期在G1期阻滞,同时激活Caspase-3诱导细胞的凋亡。     

Guttiferone K诱导人前列腺癌LNCaP细胞G0/1期阻滞的作用研究

目的：本文主要观察从云南藤黄Garcinia yunnanensis中提取分离得到的多环多异戊烯基间苯三酚（Polycyclic Polyprenylated Acylphoroglucinols,PPAPs）类化合物Guttiferone K（GUTK）对人前列腺癌LNCaP细胞增殖情况的影响。方法：取处于对数生长期的人前列腺癌LNCaP细胞,给予GUTK。采用MTT法检测细胞增殖的情况;采用PI染色的流式分析法、BrdU法及免疫细胞化学法检测细胞的周期分布;采用Western Blotting法检测Cyclin A、p27和激酶相关蛋白-2（S-Phase Kinase-Associated Protein 2,SKP2）蛋白水平的变化。结果：GUTK呈时间和剂量依赖性地抑制人前列腺癌LNCaP细胞的增殖;GUTK能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞的G_0/1期细胞周期阻滞;GUTK能够下调人前列腺癌LNCaP细胞Cyclin A和SKP2蛋白的表达水平并上调p27蛋白的表达水平。结论：从云南藤黄中提取分离得到的化合物GUTK能够通过诱导人前列腺癌LNCaP细胞G_0/1期细胞阻滞来抑制细胞的增殖,具有潜在的抗肿瘤作用。     

橙皮苷诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究

目的探讨橙皮苷对胃癌AGS细胞的诱导凋亡作用及其相关分子机制。方法采用MTT比色法检测橙皮苷对AGS细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测橙皮苷对AGS细胞的诱导凋亡作用、活性氧水平及加入活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)后细胞凋亡变化情况;Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果 MTT比色法检测结果显示橙皮苷对AGS具有良好的增殖抑制作用。经橙皮苷处理后AGS细胞呈现细胞核固缩、细胞皱缩等凋亡现象。Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测结果表明橙皮苷可以诱导AGS细胞发生线粒体依赖性凋亡,增加细胞内活性氧的水平,预处理NAC后,橙皮苷的诱导凋亡作用被抑制。Western blotting检测结果显示p-JNK、p-p38、Bad、cleavedCaspase-3及活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavePARP)蛋白表达水平升高,抗凋亡蛋白磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及Bcl-2表达水平降低,说明橙皮苷激活了AGS细胞中的MAPK信号通路及线粒体依赖性凋亡。结论橙皮苷对AGS细胞具有良好的杀伤作用,并通过提高AGS细胞内活性氧水平,进而调控MAPK信号通路来诱导AGS细胞发生线粒体依赖性凋亡。     

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的 研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体...     

蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测蓝萼甲素对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blotting法检测细胞中cyclin B1、cyclin D1、细胞周期素依赖激酶2(CDK2)、CDK4、p53、p21、p27、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(H3K4me2)、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)蛋白表达水平。结果蓝萼甲素能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;提高G2/M期细胞比例;上调p53、p21、p27、H3K4me2、H3K9me2蛋白表达水平,下调cyclin B1、cyclin D1、CDK2、CDK4、LSD1蛋白表达水平。结论蓝萼甲素抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞MDA-MB-231细胞周期于G2/M期,其机制可能与激活p53的表达及调控组蛋白的甲基化作用有关。     

苎麻根石油醚部位体外抗肿瘤生物活性及其GC-MS分析

目的:明确苎麻根石油醚部位体外抗胃癌活性并揭示其发挥药效的物质基础,为苎麻根的开发利用奠定基础。方法:采用噻唑蓝(MTT)法考察不同给药剂量,不同给药时间下苎麻根石油醚部位对人胃癌HGC-27细胞的增殖抑制作用及其与时间、剂量的关系;采用流式细胞仪检测苎麻根石油醚部位作用于人胃癌HGC-27细胞后细胞凋亡率和细胞周期的变化;通过GC-MS对发挥药效的苎麻根石油醚部位进行成分解析。结果:不同质量浓度的苎麻根石油醚部位作用于人胃癌HGC-27细胞24,48,72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,并呈现一定的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P 0. 05);苎麻根石油醚部位作用人胃癌HGC-27细胞后可诱导细胞凋亡,影响细胞周期的正常变化,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多;通过GC-MS鉴定出苎麻根石油醚部位中26种化学成分,主要包括谷甾醇、豆甾醇等。结论:苎麻根石油醚部位为其抗胃癌活性部位,其发挥药效的主要成分为甾醇类化合物,为苎麻根在临床上的合理应用及其在抗肿瘤方面的进一步研究奠定基础。     

多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制

目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95%乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况。结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95%乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P0.05),并呈现浓度依赖关系。挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98±2.62)mg·L~(-1),三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901最为敏感,其IC50为(8.73±0.55)mg·L~(-1),而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P0.05)。结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901最为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期。研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据。