苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW620细胞凋亡的实验研究

目的 观察苦参碱(MT)诱导结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制.方法 采用MTT法检测MT对SW620细胞的增殖抑制作用.应用流式细胞仪检测MT对SW620胞生长周期的影响,光学显微镜、荧光显微镜、电镜下观察细胞形态学变化.Annexin V-FITC法检测MT对SW620细胞凋亡的影响.结果 MT抑制SW620细胞增殖和诱导SW620细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,其48 h IC50=0.934 mg/ml.与对照组相比,苦参碱处理后的SW620细胞G0/G12期百分比明显增高,S期细胞比例下降.细胞爬片HE染色以及透射电镜可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,凋亡小体形成以及所谓的"印戒"细胞.结论 MT在体外能抑制SW620细胞的增殖.诱导细胞凋亡,其诱导作用具有明显的量效和时效关系.     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法和生长曲线测定不同浓度姜黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响，同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果姜黄素可在G0／G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖，使S期细胞比率降低；在一定范围内，姜黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高。结论姜黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长，并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。     

苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及Rho A基因表达的影响。方法 利用Cell Counting Kit-8检测不同浓度苦参碱对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测SW620细胞内Rho A mRNA表达的水平。结果 苦参碱能明显抑制SW620细胞的增殖,呈现剂量和时间依赖性关系,随着浓度增加能使SW620细胞的凋亡率增加,并且使SW620细胞内Rho A mRNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡、下调Rho A mRNA的表达有关。     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

硫利达嗪诱导SW480细胞凋亡的机制

目的研究硫利达嗪对结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响。方法应用5~30 μmol/L硫利达嗪处理SW480细胞,MTT
法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342 细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期;
RT-qPCR分析PDCD4、c-MYC、BCL2、CCND1、CASPASE3、PARP1、CDK4、EIF4A基因表达水平;Western blotting 检测AKT、
p-AKT、PDCD4蛋白表达水平。结果MTT结果表明硫利达嗪抑制SW480细胞的增殖,硫利达嗪处理细胞后出现核固缩、染色
质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;流式检测表明硫利达嗪诱导G0/G1期阻滞,细胞凋亡增加。RT-PCR结果表明硫利达
嗪处理细胞后PDCD4表达上调,CCND1、CDK4、c-MYC、BCL2、CASPASE3、PARP1和EIF4A表达下调。免疫印迹分析结果显
示PDCD4蛋白表达上调,p-AKT蛋白表达下调。结论硫利达嗪能够抑制人结肠癌SW480细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制
可能与抑制PI3K/AKT信号通路导致PDCD4表达水平升高有关。
     

三氧化二砷对人结肠癌SW620细胞OCT4和FOXO3a因子表达影响的研究

目的研究已证实三氧化二砷(As2O3)可杀伤干细胞,最新研究表明大肠癌是一种干细胞起源的疾病。实验研究As2O3对于大肠癌干细胞因子的作用及相关机制。通过观察FOXO3a基因沉默和激动后,As2O3对人结肠癌SW620细胞FOXO3a和OCT4表达的影响,探究As2O3对OCT4表达影响是否通过FOXO3a途径。方法采用脂质体转染siRNA方法降低人结肠癌SW620细胞FOXO3a的表达,采用PI3K抑制剂LY294002提高FOXO3a的表达。给予As2O3作用后,RT-PCR方法检测FOXO3a和OCT4 mRNA的表达,Western blot方法检测FOXO3a和OCT4蛋白的表达。结果①As2O3增加SW620细胞中FOXO3a mRNA及蛋白的表达,同时降低OCT4 mRNA及蛋白表达(P﹤0.05);②FOXO3a siRNA处理后,FOXO3a mRNA及蛋白的表达明显降低,OCT4 mRNA及蛋白的表达增加。LY294002处理后,FOXO3a mRNA及蛋白的表达增加,OCT4 mRNA及蛋白的表达减少(P﹤0.05);③FOXO3a siRNA处理后,As2O3对FOXO3a和OCT4蛋白及mRNA表达无影响(P>0.05),LY294002处理后,As2O3对FOXO3a和OCT4蛋白及mRNA表达无影响(P>0.05)。结论 As2O3能下调人结肠癌SW620细胞OCT4因子表达,其机制可能与上调FOXO3a因子表达有关。     

苦参素诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法：用苦参素处理结肠癌Lovo细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制结肠癌细胞增殖，能诱导结肠癌细胞凋亡。     

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 k U·L-1青霉素、100 mg·L-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L-1)、OPB中剂量组(10μmol·L-1)和OPB高剂量组(20μmol·L-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例下降,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P <0. 05); OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。     

黄芩苷对人结肠癌SW480细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的:探讨黄芩苷对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。 方法:SW480细胞分为空白对照组,25、50和100 μmol·L^-1黄芩苷组,采用CCK-8法检测SW480细胞增殖活性,Annexin Ⅴ-FITC和DAPI染色观察SW480细胞凋亡的形态学表现,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、caspase 3和caspase 9表达水平。 结果:与空白对照组比较,50和100 μmol·L^-1黄芩苷组SW480细胞增殖活性在24、48和72 h均明显降低( P<0.01),25 μmol·L^-1黄芩苷组SW480细胞增殖活性在48和72 h明显降低( P<0.01)。50 μmol·L^-1黄芩苷作用48 h时SW480细胞处于早期或晚期凋亡状态,细胞核呈浓缩和破碎状态。与空白对照组比较,25、50和100 μmol·L^-1黄芩苷组caspase 3和caspase 9蛋白表达水平明显升高 (P<0.05或P<0.01),Bcl 2蛋白表达水平明显降低 (P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可以诱导SW480细胞凋亡,其机制可能与线粒体途经有关。     

人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析

目的 分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质。结果 MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI4~7、相对分子质量20000~70000范围内最多。两种细胞株25个差异蛋白点(SW62014个、SW48011个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个。在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为。结论 人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。     

自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡的基因调控研究

目的应用流式细胞仪和免疫组织化学技术检测自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡及bax、bcl-2基因调控．探讨自然流产发病机制和基因调控机制,为进一步自然流产基因治疗研究提供理论依据。方法对20例自然流产病例和正常早孕吸宫流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化;DNA倍体分析检测细胞凋亡及其周期变化;免疫组化S-P法检测bcl-2／bax基因蛋白表达率比值。结果自然流产绒毛、蜕膜组织形态学结构均出现不同程度的退形性改变,自然流产中绒毛及蜕膜细胞凋亡率均较正常妊娠明显增高（P〈0．05）。蜕膜凋亡率尤其明显。自然流产的绒毛和蜕膜中抑凋亡基因bcl-2表达也较正常早孕时下降（P〈0．001）,而促凋亡基因bax表达自然流产中显著增高（P〈0．001）,结果与细胞凋亡的发生一致。结论细胞凋亡在胚胎的发育过程中起着重要作用,自然流产绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的重要原因,并进而阻碍了胚胎的发育。     

稳定沉默黏着斑激酶结肠癌细胞株SW620的构建

目的：构建稳定沉默黏着斑激酶（FAK）结肠癌细胞株SW620。方法：用构建好的FAKRNA干扰（RNAi）慢病毒载体pLL3．7FAK及插入无沉默功能序列的阴性对照慢病毒载体pLL3．7,在293FT细胞中包装成慢病毒,感染体外培养结肠癌SW620细胞,作为实验组和阴性对照组,未感染病毒的SW620细胞作为未处理组,通过荧光倒置显微镜检测SW620细胞的感染效率,运用RT—PCR、Westernblot方法测定FAK的表达情况,建立稳定转染细胞株。结果：成功包装了靶向FAK的RNAi慢病毒,感染效率〉90％,稳定转染细胞株构建成功。RT—PCR及Westernblot方法检测发现实验组与阴性对照组及未处理组相比,FAK的表达明显降低。结论：稳定沉默FAK的RNAiSW620细胞构建成功。     

精脒对SW620细胞增殖及糖酵解的影响

目的 探讨精脒对人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的影响.方法 以SW620细胞为研究对象,用0.625～2.5 μmoL/L精脒(SPD)作用于细胞,细胞密度以104个/mL接种于96孔培养板,分别培养24 h后,MTT法检测细胞增殖情况;同时,取6孔板培养24 h的细胞上清液,用试剂盒检测SW620细胞葡萄糖消耗及乳酸水平;细胞密度以1.2× 105个/mL接种于6孔培养板中,培养24 h后加入不同浓度SPD,继续培养24 h后,Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1)、乳酸脱氢酶(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化.结果 与对照组比较,精脒各浓度组均能促进SW620细胞的增殖(P＜0.01),且促进作用呈剂量依赖性;精脒各浓度组作用后SW620细胞内葡萄糖的消耗及乳酸含量明显增多(P＜0.01),呈剂量依赖性;与对照组比较,LDHA、HIF-1及GLUT1蛋白表达水平随着精脒浓度的升高而增加(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 精脒具有促进人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的作用.     

结肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的代谢组学研究

目的：分析不同转移潜能结肠癌细胞株的代谢模式,筛选并探讨差异代谢物与结肠癌转移的关系。方法：利用1H NMR技术,采用PLS-DA模型分析高转移潜能SW620和低转移潜能SW480细胞株的代谢模式,并定量差异表达代谢物。利用Seahorse能量代谢仪分析,进一步探讨代谢能力。结果：不同转移潜能的2株结肠癌细胞的代谢模式能够在第一主成分上明显分开。与原发灶结肠癌细胞SW480相比,具有高转移潜能的SW620细胞中乳酸、琥珀酸、异亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸水平较高（P＜0.05）,乙酸、氧化磷酸胆碱、ATP、肌苷和牛磺酸水平较低（P＜0.05）。转移潜能高的SW620细胞具有更高的糖酵解水平、TCA循环活性、细胞外酸化率和线粒体耗氧率水平。结论：不同转移潜能结肠癌细胞株SW480/SW620的代谢模式具有显著差异,与SW480细胞相比,SW620具有较高的代谢基础潜能,提示其高转移能力的能量需要,也能更快适应其所在微环境,证明转移过程的发生与代谢密切相关。     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及基因调控的研究

目的 探讨紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的基因调控机制。方法 用紫杉醇诱导卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡，采用荧光染色，透射电镜，流式细胞仪，蛋白免疫印迹等方法进行检测和观察。结果 卵巢癌细胞在紫杉醇作用下，首先表现为G2／M期阻滞，一定时间后出现细胞凋亡。凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中低表达而促凋亡基因bax呈高表达。结论 紫杉醇可诱导卵巢癌细胞凋亡，bcl-2和bax基因在紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620埃兹蛋白表达及活性影响

目的 观察半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620的埃兹(Ezrin)蛋白表达及活性影响.方法 采用四氮甲唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT]检测5F对SW620细胞的增殖抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(revers...     

6个中药单体对结肠腺癌细胞SW620体外增殖活性的影响

目的考察并比较苦参中苦参碱、氧化苦参碱,大黄中大黄素、芦荟大黄素,三七中的人参皂苷Rh2、Rgl等6个成分对结肠腺癌细胞株SW620体外增殖活性的影响。方法采用MTT法检测不同浓度各成分分别作用24h、48h对体外培养的结肠腺癌细胞SW620增殖抑制率,并每天于显微镜下观察细胞生长情况。结果与对照组比较,各成分在一定剂量范围内均能不同程度地抑制细胞增殖,其作用呈剂量和时间依赖性。结论各成分均能抑制体外培养的细胞增殖,尤以芦荟大黄素的活性最强。