三羟基异黄酮对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三羟基异黄酮（Genistein）对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其机制.方法以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM3为研究对象,用细胞基质粘附实验检测Genistein对肝癌细胞基质粘附能力的影响,Transwell小室侵袭运动实验检测Genistein对肝癌细胞侵袭、运动能力的影响.免疫细胞化学法检测肝癌细胞MMP-2蛋白表达.结果 Genistein能抑制肝癌细胞对FN和Marigel胶的粘附;Genistein能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭运动;Genistein处理组肝癌细胞MMP-2蛋白表达较对照组降低.结论 Genistein能抑制肝癌细胞的侵袭转移,其机制之一可能在于Genistein能抑制肝癌细胞MMP-2蛋白表达.     

槲皮素对人肝癌高转移细胞基质粘附能力的影响

目的 研究槲皮素对肝癌高转移细胞基质粘附能力的影响及其机制.方法 研究对象为人高转移肝细胞癌细胞HCCLM6,用细胞基质粘附实验检测槲皮素对细胞外基质粘附能力的影响,免疫荧光和Western blot 检测细胞内E-Cadherin蛋白表达.结果 槲皮素能抑制肝癌细胞对Marigel胶的粘附,免疫荧光和Western blot检测均发现槲皮素处理组肝癌细胞E-Cadherin蛋白表达较对照组增加(P＜0.05).结论 槲皮素能抑制肝癌高转移细胞的基质粘附能力,其机制之一可能在于槲皮素能上调肝癌细胞E-Cadherin蛋白表达.     

CXCR7-shRNA慢病毒载体对人肝癌细胞生长及侵袭能力的抑制作用

目的探讨CXCR7-shRNA慢病毒表达载体靶向抑制CXCR7的表达对人肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用
RNA干扰技术,构建CXCR7的shRNA慢病毒表达载体,转染人肺转移肝癌细胞株HCCLM3,分别通过RT-PCR和Western blot
检测HCCLM3细胞中CXCR7 mRNA和蛋白质表达水平的变化;然后通过MTT法考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞增殖侵袭
能力的影响,通过体外粘附实验和Transwell小室法分别考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞粘附及侵袭能力的影响。结果与空
白对照组比较,转染CXCR7-shRNA慢病毒载体的HCCLM3细胞中CXCR7 的mRNA及蛋白水平表达均明显降低（P<0.01）,
SDF-1诱导的HCCLM3细胞的增殖能力显著下降（P<0.05）,同时HCCLM3细胞的粘附及侵袭能力也明显受到CXCR7-shRNA
的抑制（P<0.01）。结论靶向沉默CXCR7能显著抑制结肝癌细胞的增殖和侵袭能力,为肝癌的治疗提供一个潜在的作用靶点。
     

转染NK_4基因对HCCLM_3细胞生物学特性的影响

目的:根据肝细胞生长因子(HGF)在肝癌进展过程中的促进作用和NK4拮抗HGF效应,探讨NK4基因在高转移肝癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖,侵袭转移能力的影响。方法:构建pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP慢病毒质粒载体,将载体转染至人高侵袭转移肝癌细胞HCCLM3(HCCLM3)中,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测NK4的表达产物。MTT法测定细胞增殖情况。通过小室侵袭试验检测HCCLM3细胞的侵袭转移能力。结果:转染后的HCCLM3细胞可表达活性NK4蛋白;NK4可以抑制由HGF引起HCCLM3细胞的增殖作用(P<0.05),且可以抑制其侵袭转移能力(P<0.05)。结论:通过HGF途径NK4可抑制HCCLM3细胞的增殖和侵袭转移能力,提示其在肝癌抗转移治疗中可能有重要作用。     

Genistein与顺铂协同抗肝癌的体外研究

目的研究Genistein与顺铂合用对肝癌细胞株HCCLM3的协同抑制作用.方法倒置显微镜观察Genistein与顺铂联用对肝癌细胞HCCLM3细胞形态的影响,MTT法检测两药联用对细胞增殖的影响,利用中效原理及公式计算联用是否具有协同作用;流式细胞术检测两药联用对细胞凋亡率和细胞周期的影响.结果倒置显微镜下Genistein与顺铂联用较单用组细胞密度降低,细胞相互分离,胞浆透亮度下降;Genistein与顺铂联用较单用组对HCCLM3细胞抑制率增加,Genistein与顺铂联用随着浓度增加对HCCLM3细胞增殖具有协同抑制作用;Genistein与顺铂联用较单用诱导细胞凋亡作用更明显,主要引起细胞G0/G1期阻滞.结论在体外Genistein与顺铂合用随着浓度增加对肝癌细胞能起到协同抑制作用;机制之一可能在于Genistein与顺铂联用较单用具有更强诱导肝癌细胞凋亡的能力.     

Effects of quercetin on proliferation, invasion and VEGF protein expression on human renal cell cancer of ACHN cell line

目的 研究槲皮素对人肾癌细胞株(ACHN)细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制.方法 体外培养ACHN细胞,加入不同浓度的槲皮素进行处理后,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Transwell小室模型对传代培养的ACHN细胞进行体外侵袭检测,以Western blot法检测ACHN细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 不同浓度的槲皮素均能抑制ACHN细胞的增殖,并有明显的浓度和时间依赖性(P<0.05);Transwell试验结果显示,与空白对照组比较,槲皮素处理组肾癌细胞侵袭能力明显下降;槲皮素处理组VEGF蛋白表达水平均明显低于空白对照组,且呈浓度依赖性.结论 槲皮素可明显抑制ACHN细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调VEGF表达有关.     

重组人血管内皮抑素体外对肝癌HCCLM6细胞转移侵袭的影响

目的 研究重组人血管内皮抑素在体外对人肝癌HCCLM6细胞粘附、迁移及侵袭的抑制作用.方法 分别以25、50、100、200、400μg/ml的重组人血管内皮抑素在体外处理HCCLM6细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,利用transwell小室及matrigel胶体外检测药物对细胞迁移、侵袭及粘附的影响.结果 重组人血管内皮抑素作用HCCLM6细胞72 h后对细胞增殖存在一定的抑制作用;重组人血管内皮抑素可明显抑制HCCLM6细胞与matrgel的黏附、对人工基底膜的侵袭力和迁移力,且抑制作用均呈剂量依赖性.结论 重组人血管内皮抑素具有直接抑制人肝癌细胞体外侵袭转移和增殖作用,其机制有待进一步探讨.     

RAB5A反义寡脱氧核苷酸抑制大肠癌细胞转移侵袭的实验研究

目的 应用RAB5A反义寡脱氧核苷酸(ASODN)体外转染高转移度的大肠癌细胞LS174T,观察其对肿瘤细胞的增殖、侵袭和运动的影响,初步探讨RAB5A在大肠癌转移中的作用与机制.方法 用脂质体将RAB5A转染人大肠癌高转移细胞LS174T,细胞增殖抑制实验(MTT法)检测RAB5A反义寡核苷酸对细胞的生长和增殖的影响;Transwell小室法检测对细胞的侵袭和运动能力的影响,明胶酶谱法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的分泌与活性的变化;RT-PCR法检测大肠癌细胞的RAB5A的mRNA表达.结果 RAB5A-ASODN能抑制大肠癌高转移细胞LS174T的增殖和高转移大肠癌细胞的浸润和运动能力,并能抑制基质金属蛋白酶的分泌和活性.RAB5A-ASODN组RAB5A表达量比对照组明显减少.结论 在体外抑制RAB5A的表达可抑制大肠癌的转移.     

活化的肝星状细胞对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探讨活化的肝星状细胞（HSC）对肝癌细胞（CBRH7919）增殖与侵袭的影响及其可能机制.方法 采用Optiprep法分离HSC并进行鉴定、传代.建立肝星状细胞与肝癌细胞共培养体系.MTT法检测肝星状细胞对肝癌细胞增殖的影响.Transwell小室侵袭实验检测肝星状细胞对肝癌细胞侵袭能力的影响.Western blot法检测肝癌细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和核因子-κB（NF-κB）蛋白的表达.结果 成功分离、培养并鉴定为肝星状细胞.肝星状细胞能明显促进肝癌细胞增殖与侵袭（增殖：0.571 ±0.024 vs 0.803 ±0.048,1.271 ±0.044,1.973±0.036;侵袭：25.2±1.9 vs35.8±3.3,44.4±2.7,53.9±3.6）,差异有统计学意义（P＜0.05）.肝星状细胞明显提高肝癌细胞MMP-2（1.32±0.22 vs 2.46±0.39）和NF-κB（0.85 ±0.09 vs 1.44 ±0.21）的表达.结论 肝星状细胞能显著促进肝癌细胞的增殖和侵袭,可能与肝星状细胞促进肝癌细胞MMP-2及NF-κB表达增强有关.     

CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义

  目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法 利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证, 应用RT-PCR和Western Blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western Blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率均具有明显差异。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥了重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。     

槲皮素对人鼻咽癌细胞生长和AKT/mTOR通路表达的影响

目的：探究槲皮素对人鼻咽癌5-8F细胞生长和AKT/mTOR通路表达的影响。方法：采用不同浓度槲皮素（20、40和60 μmol/L）处理人鼻咽癌5-8F细胞24 h、48 h和72 h后,MTT法检测细胞生长情况;荧光定量PCR和Western blot检测经不同浓度槲皮素处理后的5-8F细胞中AKT和mTOR的表达水平。裸鼠皮下接种5-8F细胞建立裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,随机分为对照组和槲皮素处理组,每7天测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线;Western blot检测肿瘤组织中AKT和mTOR蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织内AKT和mTOR的表达。结果：槲皮素处理组与对照组相比,5-8F细胞生长明显受抑制（P＜0.05）。槲皮素可降低5-8F细胞中AKT和mTOR的表达水平（P＜0.05）。体内实验中,槲皮素处理组的裸鼠肿瘤体积显著受抑制（P＜0.05）,且肿瘤组织中AKT和mTOR的表达水平降低（P＜0.05）。结论：槲皮素可抑制鼻咽癌细胞5-8F细胞生长,抑制AKT/mTOR通路表达。     

槲皮素对人肾癌细胞株细胞增殖、侵袭及其VEGF表达的影响

目的研究槲皮素对人肾癌细胞株(ACHN)细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养ACHN细胞,加入不同浓度的槲皮素进行处理后,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Tr-answell小室模型对传代培养的ACHN细胞进行体外侵袭检测,以Western blot法检测ACHN细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果不同浓度的槲皮素均能抑制ACHN细胞的增殖,并有明显的浓度和时间依赖性(P<0.05);Tr-answell试验结果显示,与空白对照组比较,槲皮素处理组肾癌细胞侵袭能力明显下降;槲皮素处理组VEGF蛋白表达水平均明显低于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论槲皮素可明显抑制ACHN细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调VEGF表达有关。     

槲皮素通过STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的 观察槲皮素通过抑制信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养A549细胞,以不同浓度(0、7.5、15、30、60、120μmol/L)槲皮素处理24、48和72 h,采用CCK-8检测槲皮素对A549细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).A549细胞随机分为4组:分别以0(空白对照组)、15和30μmol/L槲皮素和3μg/ml顺铂(阳性对照组)处理24 h.采用细胞黏附实验、划痕修复实验、Transwell小室体外侵袭实验观察A549细胞黏附、迁移、侵袭能力,Western印迹法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达的变化.结果 槲皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖.与空白对照组相比,槲皮素显著抑制A549细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数(P<0.05或P<0.01);与空白对照组相比,槲皮素显著降低A549细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 槲皮素具有明显的抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关.     

GSTθ高表达对肝癌7721细胞的生长及侵袭性的影响

目的探讨增加GSTθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细胞的生长;采用Boyden小室方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 GSTθ高水平表达对7721细胞的生长无明显影响,但使7721细胞的侵袭能力下降。结论本实验证实了在7721细胞中,GSTθ高水平表达可以降低细胞的侵袭能力。     

体外RNAi对S100A4基因表达及其对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响

[目的]应用RNAi技术抑制人骨肉瘤MG-63细胞S100A4基因的表达,并观察对MG-63细胞增殖及体外侵袭能力的影响。[方法]合成针对S100A4的siRNA载体,并根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列及非特异性的siRNA。将培养细胞分为C组(空白对照组);C1组(转染脂质体组);C2组(转染非特异性的siRNA组);S1、S2、S3组(转染特异性的siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组)。荧光倒置显微镜下观察转染情况,Real-time PCR方法检测转染前后S100A4基因表达变化,应用Western-Blot方法检测转染前后S100A4蛋白表达变化。筛选出转染效率最高的特异性siRNA组作为后续实验的实验组。后续实验分为正常细胞组,阴性对照组和实验组,应用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭及转移能力变化。[结果]倒置显微镜下C2组与S1、S2、S3组培养细胞的细胞浆均可见绿色荧光。S1、S2与S3组的S100A4 mRNA表达水平均有不同程度的下调,以S3组最为显著。Western-Blot检测S100A4蛋白表达结果与其相符。MTT法和平板克隆形成实验均显示S3组细胞增殖受到抑制,与正常细胞组、阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。Tran-swell小室实验显示RNA干扰S100A4基因表达后肿瘤细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,与正常细胞组、阴性对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]体外合成的S100A4特异性siRNA能够抑制骨肉瘤细胞系MG-63的S100A4表达,进而抑制细胞的增殖和体外侵袭能力。     

肝素酶通过诱导血管内皮细胞凋亡促进肝癌细胞跨内皮迁移

目的 探索肝癌肝素酶（HPSE）对微血管内皮细胞（MVECs）凋亡及跨细胞迁移的影响。方法 用qRT-PCR和Western blot法从HepG2,BEL-7402和HCCLM3三种肝癌细胞中筛选高表达HPSE的肝癌细胞;构建含有HPSE之RNA干扰序列的慢病毒载体（LV-HPSE -RNAi-1249-2, RNAi组）,用含有阴性对照序列的慢病毒载体（LV-HPSE-Control, Control组）作为对照,分别感染肝癌细胞,并验证感染效率。用人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）代表肝癌MVECs,用Transwell小室行肝癌细胞跨内皮迁移试验;肝癌细胞和HUVECs细胞非接触共培养24 h,应用CCK-8法检测内皮细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,电镜观察细胞形态。肝癌细胞腹腔注射法制作裸鼠肝癌模型,观察肝癌MVECs凋亡及癌细胞跨内皮成瘤情况。结果 从3种肝癌细胞中筛选出高表达HPSE的HCCLM3肝癌细胞。慢病毒载体分别感染HCCLM3细胞72 h后,荧光显微镜显示细胞感染效率达到70%以上,qRT-PCR和Western blot 法检测RNAi组肝素酶 mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）。RNAi组肝癌细胞跨内皮迁移率为0.39,显著低于Control组的0.62（P<0.01）。HCCLM3细胞与HUVECs非接触共培养,RNAi 组内皮细胞成活率为1.14,显著高于Control组的0.77（P<0.05）;RNAi组凋亡指数3.94±1.51明显低于Control组（12.53±0.55） （P<0.05）。透射电镜示RNAi组细胞形态大致正常;Control组内皮细胞体积变小、变形,胞膜有发泡现象;染色质浓缩、边缘化,部分分割成块状,并见凋亡小体。实验裸鼠全部成活,Control组6只肝组织中均出现GFP标记的肿瘤细胞,镜下成瘤率100% （6/6）,显著高于RNAi组成瘤率（33.3%,2/6）（P<0.05）。光镜下Control组肝组织内可见肝癌细胞,部分血管内皮细胞坏死,胞浆可见空泡,核质浓缩;RNAi组肝组织内罕见肝癌细胞,内皮细胞基本正常。结论 肝癌肝素酶可能通过诱导血管内皮细胞凋亡而促进癌细胞转移。     

生长抑素类似物对肝癌细胞的抑制作用及对CDK5表达的影响

目的探讨生长抑素及其类似物对人肝癌细胞的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白激酶5（CDK5）的表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株（HepG2）,在倒置显微镜下观察不同浓度组肝癌细胞的形态变化。MTT比色实验观察不同浓度的奥曲肽（Octreotide）对细胞增殖的影响。细胞爬片,免疫细胞化学法检测CDK5的表达情况。结果不同浓度的奥曲肽对肝癌细胞增殖的抑制作用有差异,高剂量组的抑制作用最强。药物作用48h后,药物组CDK5的表达较对照组明显减少,着色程度随药物浓度增高而逐渐减弱。结论奥曲肽对肝癌细胞的增殖有抑制作用,可下调肝癌细胞中CDK5的表达,CDK5在奥曲肽抑制肝癌细胞增殖的过程中发挥作用。     

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

 目的  探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法  应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果  CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA 566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论  CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。