慢性丙型肝炎血清抗HCV—IgM及HCV RNA水平的研究

目的：探讨影响干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）治疗慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）疗效的因素，并预测ＩＦＮ的疗效。方法；采用美国ＡＧ－９６００型ＰＣＲ定量仪及间接酶联免疫吸附试验检测血清ＨＣＶＲＮＡ水平和抗ＨＣＶ－ＩｇＭ水平。结果；５例患者对ＩＦＮ产生完全应答，９例部分应答，６例无应答，治疗前血清抗ＨＣＶ－ＩｇＭ水平完全应答组明显高于部分应答组（Ｐ〈０．０１）及无应答组（Ｐ〈０．０５）；血清ＨＣＶＲＮＡ水平完全应答     

丙型肝炎病人PBMC对HCV合成肽增殖反应与干扰素疗效的关系

目的：探讨丙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性抗原增殖反应与干扰素（ＩＦＮ）疗效关系。方法：用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究１１例经ＩＦＮ治疗与１３例未经ＩＦＮ治疗病人ＰＢＭＣ的增殖反应以及ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转和丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）复常指标。结果：１１例经ＩＦＮ治疗与１３例未经ＩＦＮ治疗病人ＰＢＭＣ对ＨＣＶ合成肽ＣＰ９、ＮＳ４增殖反应相比，前者明显增强，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５），且血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转和ＡＬＴ复常分别达到３６．３６％（４／１１）和５５．５５％（５／９），明显高于未经ＩＦＮ治疗组。结论：ＩＦＮ治疗丙型肝炎可提高ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应     

干扰素对HCVⅡ型和Ⅲ型的治疗反应

目的 探讨重组干扰素α（ｒＩＦＮ－α）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ⅱ型和Ⅲ型的治疗反应。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ，并按Ｏｋａｍｏｔｏ等基因分型方法进行ＨＣＶ基因分型。应用ｒＩＦＮ－α治疗２４例ＨＣＶⅡ型和６例Ⅲ型感染者。结果 ３０例ＨＣＶⅡ、Ⅲ型感染者的总治疗反应为：完全反应（ＣＲ）２１例（７０％），部分反应（ＰＲ）６例（２０％）和无反应（ＮＲ）３例（１０％）。Ⅱ型和Ⅲ型ＣＲ率分别     

丙型肝炎患者尿液特异标志物的检测及其临床意义

对５４例丙型肝炎患者尿液特异指标检测，结果：抗－ＨＣＶ阳性５／５４例（９．２％）。ＨＣＶＲＮＡ阳性９／５４例（１６．７％）。急性ＨＣＶ感染者，尿中抗－ＨＣＶ检出率为２／６例（３３％），较慢性者３／３８例（７．９％）为高（Ｐ＜０．０５）。尿液ＨＣＶＲＮＡ全部出现在未经α－干扰素治疗的慢性患者中，故可用作判断干扰素疗效的指标之一。本文在尿中检出ＨＣＶＲＮＡ，提示ＨＣＶ可经尿液污染环境。     

慢性丙型肝炎患者（2＇，5＇）寡腺苷酸合成酶的活性测定

目的：了解慢性丙型肝炎患者（２＇，５＇）寡腺苷酸合成酶（２－５ＡＳ）活性在干扰素治疗过程中的动态变化及意义。方法：ＰＥＩ－ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ薄板层析法。结果：（１）慢性丙型肝炎患者２－５ＡＳ基础水平比正常人显著升高（Ｐ＜０．０１）；（２）ＩＦＮα治疗结束后ＨＣＶＲＮＡ持续阳性的病人２－５ＡＳ基础水平比ＨＣＶＲＮＡ转阴的病人要高（Ｐ＜０．０５）；（３）ＩＦＮα治疗效果较好，ＨＣＶＲＮＡ转阴的病人２－５ＡＳ水平在用药后２４ｈ比ＨＣＶＲＮＡ未转阴的病人上升得更高（Ｐ＜０．０１）；（４）用药后１个月２～５ＡＳ水平与ＩＦＮα治疗效果无显著相关性（Ｐ＞０．０５）。结论：２－５ＡＳ可以作为评价干扰素治疗效果的１个机体反应指标。     

干扰素治疗前后肝组织内HCV—RNA变化分析

目的：探讨干扰素治疗前后,肝组织内丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ－ ＲＮＡ） 的变化与血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 及ＡＬＴ 的关系。方法：对丙型慢性肝炎（ＣＡＨ） 患者２０ 例,经过干扰素（ＩＦＮ） 治疗,使用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ ＰＣＲ） 和原位杂交方法（ＩＳＨ） ,对肝组织内和血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 及ＡＬＴ 值分析。结果：ＩＦＮ 治疗丙型ＣＡＨ 的有效率为７０ ％ ,停药后６ 个月有效率为３０ ％ 。血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 转阴率为５５ ％ ,停药后６ 个月转阴率为１５ ％ 。肝组织中ＨＣＶ－ ＲＮＡ,经治疗消失的有３ 例,占１５ ％ 。结论：肝组织中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 的有无,对ＩＦＮ 疗效的判定非常重要,即使血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 阴性、ＡＬＴ 正常的病例,如果肝组织中有ＨＣＶ－ＲＮＡ 残留,以后血中ＡＬＴ 值上升的可能性很大,应该进行抗病毒的再治疗。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV—RNA检测

目的：了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ存在情况及其意义。方法：采用套式ＰＣＲ检测３８例急性丙肝炎和３６例慢性丙型肝炎患者血清和外周血ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ《结果：７４例丙型肝炎血清ＨＣＶＲＮＡ阳性６８例,ＰＢＭＣ阳性４４例;急性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（３９．５％）,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中阳性２９例（８０．６％）。慢性丙型肝炎患者ＰＢＭ     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

重组α－2b干扰素治疗20例丙型病毒性肝炎的观察

对２０例丙型病毒性肝炎患者用重组α－２ｂ干扰素治疗，观察其近、远期疗效，发现干扰素对丙型病毒性肝炎有效。治疗３个月（一疗程）后，６０％的患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ转阴，８８．９％的患者肝功能恢复正常，但停药后其中部分患者ＨＣＶＲＮＡ又出现阳性，肝功能出现反复。随访１～２ａ，发现肝功能稳定正常者占５２．６％，ＨＣＶＲＮＡ持续阴转者占３１．６％。用干扰素治疗的丙型肝炎患者，凡早出现临床症状者，预后佳；ＨＣＶＲＮＡ持续阴转者，不易复发，病情稳定。     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。     

广州地区丙型肝炎患者HCV基因分型研究

目的研究广州地区丙型肝炎患者HCV基因型分布的变化情况。方法收集207例HCV RAN阳性丙型肝炎患者血清,对其HCV Core区(C区)和NS5B区基因序列进行RT-nPCR扩增,两区扩增成功的PCR产物进行基因测序,测序结果分别与相应的参照株序列比对,构建系统进化树,两区基因分型结果一致者确定HCV基因亚型。结果 185例HCV C区和NS5B区都扩增成功,其中179例两区基因分型结果一致。共检出1、2、3、6型4种基因型和8种基因亚型,其中1b型占40.78%(73/179),6a型占27.37%(49/179),3b型占11.73%(21/179),3a型占8.94%(16/179),2a型占6.15%(11/179),1a型占3.91%(7/179),2b型占0.56%(1/179),6n型占0.56%(1/179)。1b株可分为A、B、C三大簇,A簇与中国广泛流行1b株接近、B簇与中国中部及南部地区流行1b株接近,6a株分为Ⅰ、Ⅱ两大簇,与献血人群及静脉吸毒人群中6a型株接近。结论广州地区丙型肝炎患者HCV基因型以1b、6a、3型为主,存在多种亚型;1b型株包含中国大部分地区的1b型株,6a、3型已取代2a型分别成为第二、三主要流行基因型;未发现6型变异株。     

丙型肝炎患者血清补体C3、C4水平检测与临床关系的探讨

对３０例丙型肝炎患者血清补体Ｃ３、Ｃ４水平进行了检测。其中急性丙型肝炎患者１５例,慢性丙型肝炎１５例,结果显示：急性期患者血清Ｃ３、Ｃ４同对照组比较差异无显著意义（Ｐ＞０１）,慢性期患者血清Ｃ３、Ｃ４水平明显低于对照组,（Ｐ＜０００１,Ｐ＜０００２）,且亦低于急性期患者,（Ｐ＜００１,Ｐ＜００２）。结果表明：由于丙型肝炎的发病机制与机体免疫状态密切相关,肝功能受损后可加重免疫病损,使机体免疫调节功能紊乱,出现丙型肝炎一系列临床表现,选取患者血清Ｃ３、Ｃ４水平进行检测,根据其水平变化,有助于了解肝脏损害程度、病情估计及预后判断     

碘量法测定维C银翘颗粒中维生素C的含量

目的：为提高维C银翘颗粒的质量标准，建立样品中维生素C的含量测定方法。方法：用经典方法一碘量法。结果：与经典方法相比较，由于减半取样，缩短了滤过时间，使本法更加合理、迅速、结果准确。平均回收率为97．8263％，相对标准差RSD=1．2％。结论：应用于维C银翘颗粒测定维生素C含量，能有效控制产品质量。     

Myostatin干扰质粒的构建及在C2C12细胞中的效果验证

目的:研究Myostatin干扰质粒在小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞中的沉默作用。方法:根据Myo-statin mRNA序列,选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链以及1个无干扰作用DNA链,退火后插入pSilencer2.1-U6表达载体,构建3个RNAi阳性质粒:M1/pSilencer、M2/pSilencer、M3/pSilencer及一个阴性质粒Mc/pSilencer并转染C2C12细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot观察RNAi对C2C12细胞中MyostatinmRNA和蛋白表达的下调作用。结果:构建的3个阳性干扰质粒中M1/pSilencer能显著降低C2C12细胞中Myostatin表达量,随着M1/pSilencer干扰质粒剂量的增加,Myostatin表达量逐渐降低。结论:成功构建Myostatin RNAi质粒,该质粒能下调目的基因Myostatin在C2C12细胞中的表达量。     

抵抗素对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响

【目的】 抵抗素(resistin)是一种与胰岛素抵抗(IR)密切相关的脂肪细胞因子｡本研究通过观察resistin对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响,以探讨resistin在骨骼肌IR发生中的作用｡【方法】构建含resistin基因的重组表达质粒pcDNA3.1-resistin,用于转染C2C12肌细胞株,使其表达resistin,用3H-2-脱氧葡萄糖进行葡萄糖摄取试验,用D-[14C(U)]葡萄糖进行葡萄糖氧化和糖原合成试验,RT-PCR检测肌细胞的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRMA｡ 【结果】 pcDNA3.1-resistin转染的C2C12肌细胞株可表达resistin;resistin使肌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率减少约30%,并使GLUT4mRNA 表达降低28%,而对葡萄糖氧化和糖原合成无显著影响｡ 【结论】 resistin可能通过抑制骨骼肌GLUT4mRNA的表达而降低葡萄糖摄取,但对葡萄糖氧化和糖原合成影响较小,提示resistin在骨骼肌IR发生中的作用有限｡     

C2C12细胞体外微型灌注生物反应器培养初探

目的 研究组织工程种子细胞C2C12在微型灌注生物反应器中培养的特点,以期探索一种有效的种子细胞体外培养方法.方法 在自行研制的微型灌注生物反应器中以20%换液量/天、30%换液量/天两种条件进行C2C12细胞培养,通过细胞形态、生长曲线、细胞群体倍增时间及生化代谢离线检测等对培养情况进行研究.结果 微型灌注生物反应器培养较传统的细胞培养瓶培养,培养基使用效率提高;在细胞形态无显著性变化的情况下,细胞群体倍增时间显著缩短.而且,C2C12细胞的生化代谢在20%换液量/天灌注条件下较30%换液量/天的为佳.结论 C2C12细胞的灌注生物反应器培养方式较传统的细胞培养瓶培养方式优越,同时,20%换液量/天的灌注条件较30%换液量/天为佳.该灌注培养体系值得进一步深入研究.     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒交叉中和抗体的检测

[摘要]目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。 方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T 细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。 结果32份HCV抗体阳性血清中,26份血清可检测出E2抗体,阳性率81.3%。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性,E2抗体水平与HCV RNA水平负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相平行。结论HCV感染可诱导保护性体液免疫应答,丙肝患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。     

丙型肝炎病毒C区的DNA改组

目的：利用DNA改组技术进行不同基因型别丙型肝炎病毒（HCV）基因组C区的人工进化。方法：首先利用PCR扩增了三段具有较高序列同源性的460bp基因片段，然后将其等量混合，在Mg^2＋存在的条件下，用脱氧核糖核酸酶（DNase Ⅰ）切割成50bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下，利用PCR反应进行重聚，再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增。结果：获得了与原片段大小相当的基因片段。结论：这一技术为进一步筛选高活性的HCVC区基因打下基础，有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因，并为改组其他基因家族提供了借鉴。     

丝裂霉素C在泪囊鼻腔吻合术中的应用

目的：探讨丝裂霉素C(Mitomycinc，MMC)在泪囊鼻腔吻合术(Dacryocystorhinostomy，DCR)中应用的安全性和可行性。方法：64例(64眼)慢性泪囊炎患随机分为治疗组和对照组，治疗组在常规DCR术中采用含0．02％MMC棉片置于骨切开孔区鼻黏膜和泪囊黏膜上5分钟，对照组采用常规DCR手术。结果：术后1月内全部病例泪道冲洗通畅，随访过程中(6—54月)治疗组32眼有30眼(93．75％)泪道冲洗通畅，对照组32眼有26眼(81．25％)泪道冲洗通畅，无1例发生MMC并发症。结论：MMC在DCR手术中的应用是安全、有效、可行的，能提高手术的远期疗效。