细胞生长因子在肌腱修复中作用的研究进展

近年研究发现,在肌腱损伤修复过程中一些细胞生长因子起着极其重要的作用。通过对细胞生长因子合理调控有望成为一种促进肌腱愈合,减少肌腱粘连的新方法。随着细胞生物学、分子生物学、基因学、组织工程学等学科研究的不断深入,对这方面的研究有了更高更深的认识。现就有关细胞生长因子在肌腱损伤修复中作用的研究简要综述。     

生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究.方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较.结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGFBP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异.结论人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞.     

碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响

目的 对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响.方法 分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O (Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50 ng/mL bFGF-多孔钽软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达.结果 Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50 ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A～D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显(P＜0.05);组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24 h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P＜0.05),组间差异也有统计学意义(P＜0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P＜0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A～D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P＜0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P＜0.05).结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨细胞分泌功能.     

K562细胞的诱导分化与表型

Ｋ＿５６２细胞的诱导分化与表型临床生化教研室泰建平综述蒋纪恺，王霞文审校中图分类号Ｒ７３３．７目前对于白血病的治疗主要是用化疗、骨髓移植等，但疗效都不能令人满意。因此，探讨新的治疗途径显得十分必要而迫切。自从ＬｅｏＳａｃｈｓ于１９７８年报告恶性肿瘤细...     

生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

目的 对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法 体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞，观察细胞的形态特点；用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果 所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外，其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论 人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似，通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造，可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。     

GDF-5对大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察生长分化因子-5(GDF-5)对体外培养的大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖的影响,为进一步研究在体内局部添加GDF-5以促进损伤肌腱愈合及改善外源性愈合所致粘连打下基础.方法 MTT法测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞增殖率的影响;流式细胞仪测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞凋亡率的影响.结果 GDF-5可以明显促进肌腱细胞的增殖,而对腱鞘滑膜细胞的增殖率的作用较弱.对两种细胞的凋亡无明显影响.结论 添加一定浓度的GDF-5后肌腱细胞增殖率较腱鞘滑膜细胞提高更为明显,而凋亡并未发生改变.     

人转化生长因子β1对肿瘤细胞恶性表型的抑制作用

探讨人转化生长因子β１对肿瘤细胞的影响。方法通过构建人转化生长因子β１（ｈＴＧＦβ１）基因表达载体，利用基因转染技术，将基因导入ＨＬ－６０细胞中，经Ｇ４１８选择获得可稳定表达人转化生长因子β１的ＨＬ－６０细胞，对该细胞进行了一系列恶性表型变化的研究。结果表达人转化生长因子β１ｍＲＮＡ的ＨＬ－６０细胞其生长速度下降，在软琼脂中集落形成能力降低，在裸鼠体内的成瘤性下降，与对照组比较，转染组裸鼠没有发生肝转移。结论ｈＴＧＦβ１对肿瘤细胞ＨＬ－６０的恶性表型具有明显的抑制作用。     

血小板源性生长因子-BB对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响

目的了解血小板源性生长因子-BB（PDGFBBB）对大鼠阴茎海绵体平滑肌（CCSM）细胞增殖、迁移及表型转化的影响并
初步探讨其作用机制。方法采用改良的组织块培养法培养Wistar大鼠CCSM细胞,并用细胞免疫荧光法鉴定。利用CCK-8法
检测不同浓度的PDGFBB对培养的大鼠CCSM细胞增殖的影响,并筛选出最适PDGFBB作用浓度。分别用0 ng/mL PDGFBB
与最适浓度PDGFBB处理CCSM细胞,利用划痕实验检测PDGFBB对CCSM细胞迁移的影响,24 h和48 h时利用qRT-PCR检
测细胞中转录因子myocardin及收缩型表型标志物α-SMA、SMMHC mRNA表达水平;用最适浓度PDGFBB处理CCSM 细胞
0、24 和48 h 后,利用western blotting 检测细胞中myocardin 的蛋白表达水平。结果原代培养的CCSM 细胞中α-SMA 和
smoothelin 阳性率分别约为96.5%和96%;不同浓度的PDGFBB均能明显促进CCSM细胞增殖,其最适浓度为12.5 ng/mL。
PDGFBB（12.5 ng/mL）能促进CCSM细胞迁移,下调CCSM细胞中myocardin、α-SMA和SMMHC mRNA表达水平（P均<0.01）;
在48 h内myocardin蛋白质的表达水平随着PDGFBB作用时间增加而降低。结论改良的组织块培养法可获得高纯的CCSM
细胞;PDGFBB可促进CCSM细胞增殖、迁移,使细胞从收缩型向合成型转化,其机制可能是通过下调myocardin。
     

大剂量γ射线对树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨大剂量电离辐射对树突状细胞(DC)表型及免疫功能的影响和辐射致免疫抑制的机制。方法以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)诱导造血干细胞产生DC,给予0、10、20、30 Gyγ射线照射,并于照后24 h进行脂多糖(LPS)处理(1μg/ml)使之成熟。用Transwell法研究DC的迁移能力,流式细胞术检测DC表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ和CCR7)的表达,ELISA检测细胞因子(IL-6、IL-10和PGE2)的分泌。结果大剂量γ射线对DC的表型无影响,却能抑制DC向CCL19的迁移,同时下调CCR7的表达,减少IL-6、IL-10和PGE2等细胞因子的分泌。结论大剂量γ射线可以通过下调CCR7和诱导凋亡抑制DC的迁移,减少细胞因子的分泌,导致免疫抑制。     

辛伐他汀抑制PDGF-BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖及对细胞表型转换的影响

目的 探讨辛伐他汀对血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)抑制细胞表型转换及其可能的信号调节机制.方法 以体外培养SD大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB进行诱导,辛伐他汀及RhoA/Rho激酶抑制剂Y-27632进行干预,流式细胞术检测PASMC的增殖,荧光定量RT-PCR 检测各组PASMC α-SM-actin mRNA的表达及Western blot 检测各组PASMC α-SM-actin、SM22α和RhoA蛋白的表达.结果 辛伐他汀及Y-2763在抑制PDGF-BB诱导的PASMC增殖的同时,促进了主要收缩表型蛋白α-SM-actin mRNA 的表达,促进α-SM-actin 、SM22α这两种收缩表型蛋白表达,同步地相应抑制了RhoA蛋白表达.结论 辛伐他汀在抑制PDGF-BB介导的PASMC增殖的同时,也抑制了PASMC细胞表型的转换,而且该作用可能通过抑制RhoA/Rho激酶信号通路实现.     

TGF-β2对树突状细胞表型和功能的影响

目的: 研究转化生长因子-β2 (TGF-β2)对树突状细胞(dendritic cells, DC)表型和功能的影响. 方法: 体外培养骨髓来源的DC(BMDC)及TGF-β2诱导的DC(TGFβ2-DC). 采用双色免疫荧光化学染色或流式细胞仪(FCM)分析DC的细胞表型. 分离纯化脾脏来源的同种异体T细胞和CD4+ T细胞. 用BMDC及TGFβ2-DC刺激T细胞增殖,并用混合淋巴细胞反应(MLR)测定其能力. 在CD4+ T细胞与BMDC或TGFβ2-DC共培养5 d后,用FCM检测CD4+ T细胞表型的变化. 结果: BMDC表现为CD11c, CD86, MHC class II+和CD8а-的髓系DC. TGF-β2的诱导抑制了DC表面协同刺激分子、MHC classII的表达(P<0.01),并抑制其刺激同种异体T细胞增殖的能力. 与BMDC诱导的CD4+ T细胞相比,TGFβ2-DC诱导的CD4+ T细胞CD152(细胞毒T淋巴细胞相关分子4, CTLA-4)表达上升(P<0.01). 结论: TGF-β2的诱导促使DC表面协同刺激因子表达下降,T细胞合成CTLA-4增加,T细胞的活化和增殖受到明显抑制.     

白杨素抑制血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移和表型转换

目的 研究白杨素对血小板源性生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和表型转换的影响及可能的分子机制。方法 采用Transwell小室法评价白杨素对PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的影响,Western blot法测定收缩型VSMCs标志蛋白:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)和结蛋白的表达水平,以及AKT和糖原合酶激酶(GSK)3β的总蛋白和磷酸化蛋白水平。结果 20ng/ml PDGF-BB明显促进VSMCs迁移,而12.5μmol/L白杨素预处理能显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs迁移;20ng/ml PDGF-BB显著降低VSMCs中α-SMA、SM22α和结蛋白的蛋白表达水平,而12.5μmol/L白杨素预处理能逆转这些标志蛋白的下调;20ng/ml PDGF-BB显著升高VSMCs中AKT和GSK3β磷酸化表达水平, 12.5μmol/L白杨素预处理几乎完全阻断PDGF-BB诱导的这些信号分子的磷酸化。结论 白杨素显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs迁移,并能阻止PDGF-BB诱导的VSMCs收缩表型向合成表型转换,其机制可能部分与抑制AKT信号通路活化有关。     

肌腱细胞的生物学特性

肌腱细胞是肌腱的基本功能单位，它合成和分泌胶原等细胞外基质，维持肌腱组织的新陈代谢。目前，肌腱组织工程研究的焦点集中在种子细胞来源问题上。肌腱细胞是一种分化程度很高的细胞，在体外培养条件下，增殖相对缓慢，尤其是经过多次传代后，肌腱细胞甚至丧失进入增殖期的能力。这是组织工程化肌腱研究的瓶颈问题。因此，寻     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响.方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR 检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平.结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01), VSMC α- SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深.而matrix Gla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05).并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α- SM actin表达量明显低于收缩表型.提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用.胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.     

神经母细胞瘤细胞的细胞化学及免疫表型研究

神经母细胞瘤(NeuroblastomaNB)为儿科常见的一种恶性肿瘤,仅次于白血病,居第三位[1]。为探讨该细胞的细胞化学和免疫学特征,我们对其进行了细胞化学方面和免疫表型方面的检测,现报告如下。1　材料和方法1.1　标本来源　选我院血液病研究室确诊的2例神经母细胞瘤骨髓标本...     

神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响

目的：探讨不同的神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响。方法将原代培养的神经元进行缺氧处理,不同的时长（0.5、1、2、4 h）后,复氧处理24 h ,收集神经元条件培养液（neuron‐conditioned media ,NCM ）,然后将NCM刺激原代培养的小胶质细胞24 h（NCM∶小胶质细胞培养液＝1∶1,V/V ）。采用Western blot法检测小胶质细胞内的M2表型标记物精氨酸酶‐1（arginase‐1）和激活标记物离子钙结合衔接分子‐1（Iba‐1）的表达变化规律,采用免疫荧光法检测ar‐ginase‐1的表达变化规律。同时,采用 ELISA 法检测小胶质细胞培养液上清中的营养因子,如脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和炎性因子,如肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）、白细胞介素‐6（IL‐6）的分泌变化规律。最后,将不同损伤度的NCM 诱导小胶质细胞形成不同表型,将小胶质细胞和缺氧处理2 h后的神经元共培养24 h ,MTT法检测神经元的活力。结果轻微损伤（缺氧0.5、1 h）的NCM 明显下调M2型标记物arginase‐1的表达水平,中度（缺氧2 h）和重度（缺氧4 h）损伤的 NCM 能够上调arginase‐1的表达,各种损伤度的NCM都能上调Iba‐1的表达水平,提示其在一定程度上激活小胶质细胞。同时,轻微损伤的NCM明显上调小胶质细胞TNF‐α、IL‐1β和IL‐6的分泌,而中度和重度损伤的NCM 对这些促炎因子的释放没有影响,各种损伤度的NCM 都能明显上调营养因子的分泌。M T T法检测表明,轻微和重度损伤处理的NCM刺激的小胶质细胞进一步加重缺氧处理的神经元损伤,而中度损伤的NCM对缺氧处理后的神经元具有保护作用。结论神经元损伤度是决定小胶质细胞表型的重要因素,进而使小胶质细胞进一步发挥神经毒性或保护作用。     

c-Fos基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型及迁移的影响

 目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞（VSMC） c-Fos基因,探讨c-Fos基因表达抑制后c-Fos siRNA 对平滑肌细胞表
型转换及迁移的作用。方法设置正常对照组、阴性siRNA 组及阳性siRNA 转染组。应用RT-PCR半定量法检测VSMC
中c-Fos和α平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）mRNA 的水平,采用Western blot 检测琢-SM-actin、碱性成纤维细胞生长因子
（bFGF）、内皮素1（ET-1）蛋白活性的变化,应用免疫荧光染色检测平滑肌分化标志蛋白琢-SM-actin,同时应用Transwell 检测平
滑肌细胞迁移能力。结果c-Fos siRNA 转染后阳性siRNA转染组c-Fos基因表达水平降低,而正常对照组与阴性siRNA组比
较c-Fos基因表达水平无统计学差异。siRNA 转染使c-Fos表达减弱后,VSMC 中α-SM-actin mRNA 和蛋白表达较正常对照组及
阴性siRNA组显著上调,bFGF、ET-1 表达减弱,VSMC 迁移速度减慢。结论RNA 干扰介导的c-Fos基因沉寂可在诱导VSMC
分化的同时抑制VSMC 迁移。     

PHA对CIK细胞形态、免疫表型的影响

目的 :探讨植物血凝素 (PHA)对细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK)形态和免疫表型的影响。方法 :分离健康人外周血单个核细胞 ,培养CIK细胞和PHA预先刺激 2 4h的PHA -CIK细胞。培养至第 15d ,用瑞氏染色和糖原染色观察细胞形态变化 ,流式细胞术检测 2者的免疫表型。结果 :2组细胞在形态上无明显差异 ,均表现为胞体和胞核增大 ,胞浆增多 ,浆中出现颗粒、空泡 ,糖原染色发现较多粗大阳性颗粒。 2组细胞相比各细胞亚群所占百分数不同 ,加入PHA后 ,可引起CD3+ 、CD8+ 细胞比例明显增多 ,CD3-CD5 6 + 细胞比例明显减少 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 5 )。结论 :PHA可以提高CIK细胞培养物中CD3+ 、CD8+ 、CD3+ CD8+ 细胞数量 ,为临床免疫治疗提供足量的效应细胞     

核心蛋白聚糖对兔肌腱细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察核心蛋白聚糖(decorin,DCN)对兔肌腱细胞体外增殖和细胞周期的影响,以探讨decorin在肌腱愈合中对肌腱细胞的作用.方法 原代培养兔肌腱细胞,分别加入不同浓度(0.25、1.25、2.5、5μg/ml)的decorin;培养12、24、48 h用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法测定细胞增殖速度;镜下观察低浓度DCN作用24 h后对兔肌腱细胞增殖的影响;低浓度DCN培养24 h后用流式细胞仪检测细胞周期.结果 0.25、1.25、2.5μg/ml浓度decorin作用12 h后对兔肌腱细胞增殖有着减少的趋势,但是24 h后却明显地促进其增殖(P＜0.05),但是48 h后差异不显著.而5μg/ml浓度组作品12 h对兔肌腱细胞增殖有着增加的趋势,24 h后促进增殖作用显著(P＜0.05),48 h后却抑制兔肌腱细胞的增殖.0.25μg/ml低浓度decorin作用兔肌腱细胞24h后镜下观察和流式细胞分析,细胞增殖明显增强,S期增加,PI明显大于对照组(P＜0.05).结论 低、中浓度decorin对兔肌腱细胞的增殖起着先延迟后促进的作用,提示在肌腱愈合中如果在肌腱和腱鞘之间运用DCN,可能起到早期隔离TGF-β对腱鞘成纤维细胞的作用,而后期增强TGF-β对腱内膜细胞的作用,从而促进内源性愈合,减少外源性愈合,达到减少粘连的效果.     

血小板衍生生长因子-BB对平滑肌细胞和成纤维细胞的作用及机制研究进展

血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)具有促有丝分裂、分化、趋化和参与血管生成的特性,是多种不同细胞类型重要的有丝分裂原,包括成纤维细胞和平滑肌细胞(SMCs),可调控细胞增殖、迁移能力以及细胞外基质(ECM)的合成,参与多种疾病发生、发展,如动脉粥样硬化(AS)、肺部相关疾病、肝纤维化等.近年来许多研究揭示了PD...