p16~(INK4A)基因与宫颈癌早期防治

随着分子生物学的发展,人们发现在宫颈癌的发生、发展过程中,有多种癌基因、抑癌基因及相关因子参与,其中某些基因结构、功能等都会发生变化,这些基因可以作为这一进程中的分子标志,来用于高危病例的筛选。p16INK4A是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。它的过表达发生在宫颈癌和癌前病变阶段,可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌的临床筛查及诊断中。     

A549细胞中过表达p16INK4A引起细胞衰老样表型的研究

目的 研究p16^INK4A对A549肺小细胞腺癌细胞系表型的影响。方法 用pcDNA3-p16质粒转染p16基因缺失的A549肺小细胞腺癌细胞系并通过Northern blot和Western blot鉴定p16基因的异位表达，通过流式细胞仪分析转染后细胞周期变化，利用Western blot和SA—β-pgal染色检测Rb蛋白磷酸化状态的改变和细胞表型变化。结果 证实了在A549中p16^INK4A能稳定表达。p16^INK4A的表达能使细胞产生明显的G1期阻滞并伴随着Rb蛋白磷酸化状态的改变，Rb蛋白主要以低磷酸化形式存在。发生生长阻滞的转染细胞表现出一系列细胞衰老样表型，如细胞体积变大，细胞形态呈明显的扁平状态，并且存在衰老相关半乳糖苷酶阳性染色。结论 在A549细胞中表达p16^INK4A能使细胞发生衰老样表型并提示p16^INK4A在细胞衰老中起重要作用。     

p16~(INK4A)、p14~(ARF)和Ki-67在宫颈癌中的表达特点

目的:研究p16INK4A、p14ARF蛋白和Ki-67在宫颈癌患者中的表达水平,探讨它们之间的相互关系及临床意义。方法:采用免疫组化法对55例宫颈癌标本,40例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A、p14ARF和Ki-67检测。根据细胞核中出现棕褐色染色为阳性细胞的比例分为(-)、(+)、(++)、(+++)。对比各组的阳性表达。结果:随着CIN分期的增高和宫颈癌的发生,p16INK4A、Ki-67的表达有逐渐增高的趋势,宫颈癌患者(-)、(+)、(++)、(+++)的比例与正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01),CINⅢ期和宫颈癌患者(++)、(+++)的比例与CINⅠ期比较,差异有统计学意义(P<0.01);宫颈癌发生p14ARF的表达有逐渐增高的趋势,但在CIN期(+++)的表达增高不明显,宫颈癌患者p14ARF的表达于正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p16INK4A、p14ARF和Ki-67与宫颈癌的形成及进展密切相关。     

p16INK4A在ASCUS中的表达及其与HPV感染的关系

目的:探讨对筛p16INK4A查ASCUS中潜在宫颈病变的价值及其与HPV感染的关系.方法:对148例宫颈细胞学检查结果为ASCUS的病人进行p16INK4A免疫细胞化学检测,同时采用荧光定量PCR方法,检测剩余标本中HPV16,18型DNA的表达,其结果与p16INK4A表达结果比较,分析其相关性.结果:148例AS...     

hrHPV-DNA和p16~(INK4a)蛋白在宫颈病变中的表达

目的了解hrHPV-DNA载量及p16INK4a蛋白的表达,探讨hrHPV-DNA和p16INK4a蛋白与宫颈病变的关系,为宫颈癌早期诊断以及预测宫颈病变进展提供可靠的检测指标。方法利用第二代杂交捕获法检测hrHPV-DNA载量,采用免疫化学方法检测p16INK4a蛋白,运用检验与Spearman等级相关研究HPV-DNA和p16INK4a与宫颈病变的关系。结果随着活检分级升高,hr HPV阳性率和p16INK4a阳性表达率增高(P<0.05);正常或慢性宫颈炎中hr HPV阳性率、p16INK4a阳性表达率、HPV(+)/P16(+)表达率低于在CIN1、CIN2、CIN3、SCC中的表达(P<0.05);等级相关性分析在HPV(+)/P16(+)与活检分级呈正相关,在HPV(-)/P16(-)与活检分级呈负相关(P<0.05)。结论 hrHPV-DNA和p16INK4a蛋白均可以作为宫颈癌早期诊断的标志物。联合检测hrHPV-DNA和p16INK4a蛋白可以预测宫颈病变的进展。     

p16~(INK4a)/p14~(ARF)基因在细胞衰老和肿瘤抑制中的作用研究进展

细胞衰老发生后细胞在形态和生化成分都发生改变,进而发生生理性功能障碍,最终进入凋亡和死亡程序。细胞衰老是生命体在细胞水平防止永生化和恶变、预防肿瘤发生的一种机制。细胞衰老由多种原因引起,近年来的研究发现,p16INK4a-pRb(视网膜母细胞瘤抗癌蛋白)和p14ARF-p53这2条途径的活化与细胞衰老的启动和调节过程密切相关,对细胞衰老的信号传导通路及其调节因子等方面的深入研究,可以进一步认识细胞增生、衰老进程,以及防治肿瘤的规律,并为衰老相关疾病的治疗提示研究方向。     

p16INK4A、NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理学意义

目的：探讨宫颈鳞癌组织中p16INK4A,NF-κB p65的表达及临床病理学意义。方法：采用免疫组化PV-9000法检测p16INK4A,NF-κB p65在30例宫颈鳞状细胞癌（SCC）、30例宫颈上皮内瘤病变（CIN）和30例慢性宫颈炎（对照组）中的表达。结果：在慢性宫颈炎组织、CIN和宫颈鳞癌中p16INK4A的阳性率分别为26．66％、50．00％及93．33％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。NF-κB p65的阳性率分别为23．33％、56．66％及86．66％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。p16INK4A、NF-κB p65在不同临床分期,病理分级及淋巴结是否转移中的阳性表达率差异均无统计学意义（P〉0．05）。p16INK4A表达与是否绝经有关,在绝经组中表达高于未绝经组（P〈0．01）。结论：p16INK4A、NF-κB p65的表达在宫颈癌的发生、发展中起重要作用,p16INK4A和NF-κB p65有可能成为预测宫颈鳞癌发生的生物学检测指标。     

ELISA检测宫颈液基细胞p16~(INK4a)、p21及p27表达的研究

目的探讨不同级别宫颈病变液基细胞学标本中p16INK4a、p21和p27的表达区别及变化趋势。方法 212例高危HPV感染患者,因宫颈细胞学检测结果异常行阴道镜活检病理学明确病变级别。阴道镜活检前取宫颈液基细胞标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该液基细胞标本中p16INK4a、p21和p27蛋白表达数量,对比研究不同病变级别上述3种蛋白值的不同。结果 p16INK4a在正常宫颈上皮中呈现低表达,随宫颈病变级别升高,p16INK4a逐渐升高,差异显著(P<0.01);而p21及p27下调不具有显著性差异(P>0.05),只有宫颈癌中,p21及p27下调显著(P<0.05)。p16INK4a达到12 ng/L以上,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ以上及CINⅢ以上病变诊断敏感度分别为89%和88%;当p16INK4a达到24 ng/L以上,CINⅡ以上及CINⅢ以上病变诊断灵敏度分别为82%和91%。结论 ELISA方法检测宫颈液基细胞p16INK4a对CINⅡ及以上宫颈病变诊断具有意义。p16INK4a上调与宫颈癌发生及演进密切相关。p21、p27下调对判断CIN进展不具有意义。     

p27kip1和 p16INK4A 基因在鼻咽癌组织中的甲基化表达及意义

目的探讨 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化在鼻咽癌早期诊断和治疗中的作用.方法采用甲基化特异性PCR 方法对54例鼻咽癌组织(观察组)和20例正常鼻咽上皮组织(对照组)的 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化状态进行检测及对比分析.结果观察组患者 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化检出率分别为62.96%(34/54)和46.30%(25/54),两者同时甲基化19例,总检出率为74.1%(40/54);对照组均未检测到 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化;两组间差异有统计学意义(P<0.01).p27kip1和 p16INK4A 基因启动子甲基化与鼻咽癌患者年龄、性别、T 分期、N 分期、TNM 分期、病理类型等临床特征均无相关性(P >0.05).鼻咽癌患者 p27kip1基因甲基化与 p16INK4A 基因甲基化无明显相关关系(r=0.2507,P >0.05).结论鼻咽癌中 p27kip1基因甲基化可能是其基因表达调节的一种重要方式,p27kip1和 p16INK4A 基因甲基化具有肿瘤特异性,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.     

HPV16E7基因和P16~(INK4A)蛋白在宫颈病变中的表达及其临床意义

目的:检测宫颈病变组织中HPV16E7基因和P16INK4A蛋白的表达,分析基因表达变化的临床意义。方法:入选慢性宫颈炎和CINⅠ^Ⅱ患者81例、CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌患者57例,采用PCR扩增技术检测宫颈病变组织HPV16E7基因表达,采用免疫组化方法检测宫颈病变组织P16INK4A蛋白表达,用SPSS软件行等级相关分析和χ2检验。结果:⑴HPV16E7特异性片段阳性率在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ患者81例、CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌患者57例,采用PCR扩增技术检测宫颈病变组织HPV16E7基因表达,采用免疫组化方法检测宫颈病变组织P16INK4A蛋白表达,用SPSS软件行等级相关分析和χ2检验。结果:⑴HPV16E7特异性片段阳性率在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ中分别为17.0%、26.5%,在CINⅢ及宫颈浸润性鳞癌中分别为61.5%和74.2%;HPV16E7分布在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ中分别为17.0%、26.5%,在CINⅢ及宫颈浸润性鳞癌中分别为61.5%和74.2%;HPV16E7分布在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑵P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑵P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ分别为10.6%和30.0%,在CINⅢ和宫颈浸润性鳞癌中分别为96.0%和100%;P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ分别为10.6%和30.0%,在CINⅢ和宫颈浸润性鳞癌中分别为96.0%和100%;P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑶在HPV16E7特异性片段表达阳性的宫颈病变组织中,P16INK4A蛋白的表达均是阳性。宫颈病变组织中P16INK4A蛋白与HPV16E7的表达有相关性(r=0.482,P<0.001)。结论:HPV16E7和P16INK4A蛋白与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生具有相关性,HPV16E7和P16INK4A蛋白可能是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的早期预测指标。     

宫颈癌中p16^INK4A蛋白表达的意义

目的探讨p16INK4A蛋白与宫颈癌发生发展以及临床病理指标的关系。方法采用免疫组化法检测宫颈鳞癌组织40例,宫颈上皮内瘤变（CIN）30例,宫颈癌旁正常宫颈组织25例中的p16INK4A表达。结果 p16INK4A在宫颈上皮内瘤变中阳性率为86.6%,宫颈鳞癌组织中阳性率均呈100%表达,正常宫颈组织中为阴性。结论 p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,导致p16INK4A在子宫颈癌上皮组织全层表达。所以,p16INK4A作为一种免疫组织化学标志物应用于宫颈癌及其上皮内瘤变（CIN）的诊断有广阔的应用前景。     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

P16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达及意义

目的探讨p16INK4A蛋白在宫颈脱落细胞即液基细胞学薄片(liquid-based cytology test,LCT)的表达及其用于宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)筛查的意义。方法225例宫颈病变患者,其中宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)56例,高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)41例,低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)76例,不典型鳞状细胞(atypical squa-mous cell lesions,ASC)32例,正常范围(within normal limits,WNL)20例。采用免疫组化方法,检测p16INK4A的表达。比较P16INK4a联合LCT及单纯LCT的病理诊断符和率。结果单纯LCT的病理诊断符合率为LSIL52.08%,HSIL77.14%,SCC 98.21%;P16INK4a联合LCT的病理诊断符合率为LSIL 68.75%(33/48),HSIL 91.43%(32/35),SCC100%(56/56);差异有显著性(P<0.05)。32例ASC的P16INK4a联合LCT阳性病理诊断符合率为71.43%,与单纯LCT相比,差异有显著性(P<0.05)。结论P16INK4a联合LCT可用于宫颈癌的筛查,尤其对于ASC的确诊,较单纯LCT有更高的病理诊断符合率,可以提高宫颈癌的诊断准确性。     

p16INK4a在子宫颈细胞学分级的临床意义

目的:研究在意义不明的不典型鳞状细胞(Atypical squamous cells of undetermined significance,ASC-US),不能排除高度上皮内瘤变的不典型鳞状细胞(Atypical squamous cells,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H),低度鳞状上皮内病变(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL),高度鳞状上皮内病变(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)中p16INK4a蛋白和HPV16/18的表达水平及意义.方法:应用免疫组织化学技术和原位分子杂交技术,对89例子宫颈细胞涂片样本中p16INK4a蛋白及HPV16/18型DNA进行检测.结果:p16INK4a蛋白阳性率随着子宫颈病变程度的加重而升高,LSIL、HSIL及ASC-H的p16INK4a蛋白阳性率均高于ASC-US(P<0.05);ASC-US和LSIL的p16INK4a阳性表达与HPV16/18阳性表达无差异性;LSIL和ASC-US的HPV16/18阳性表达无差异性.结论:子宫颈细胞涂片样本中p16INK4a蛋白检测能协助子宫颈细胞学诊断分级,尤其对于ASC-US的病例.需同时做p16INK4a免疫组织化学检查,以帮助临床医生选择恰当的处理方式.     

p16^INK4a和Survivin在宫颈癌及其癌前病变中的表达及临床意义

探讨p16^INK4a、Survivin在宫颈鳞癌（SCC）及其癌前病变中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化S-P方法检测p16^INK4a和Survivin在36例SCC、66例宫颈上皮内瘤变（CINI20例、CINⅡ20例、CINⅢ26例）及10例正常宫颈组织标本中的表达。结果：①p16^INK4a在CINI、CINⅡ、CINⅢ和SCC中的表达阳性率分别为70．00％（14／20）、75．00％（15／20）、69．23％（18／26）、66．67％（24／36）,CINI、CINⅡ、CINⅢ、SCC分别与正常宫颈组织相比差异有统计学意义（P〈0．05）。②Survivin在CINI、CINⅡ、CINⅢ和SCC中的表达阳性率分别为86．67％（13／15）、100．00％（16／16）、76．92％（10／13）、55．56％（10／18）,CINI、CINⅡ、CINⅢ和SCC分别与正常宫颈组织相比差异有统计学意义（P〈0．05）。③p16^INK4a和Survivin在CINI、CINⅡ、CINⅢ中的表达均呈正相关性,相关有统计学意义;在SCC中的表达亦呈正相关,相关系数很低,相关无统计学意义。结论：CINⅡ的p16^INK4a、Survivin阳性表达是其发生质变的信号;Survivin为反映宫颈细胞异常增殖的灵敏标志物;联合检测宫颈病变中p16^INK4a、Survivin的表达有助于早期检出具有进一步恶变倾向的宫颈癌前病变。     

不同剂量睾酮干预心肌细胞衰老中p16~(INK4a)的表达

目的探讨不同剂量睾酮干预小鼠心肌细胞衰老中p16^INK4a的表达。方法用1μmol／L,100nmol／L,10nmol／L3种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,检测各组衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率,细胞周期分布,p16^INK4a mRNA及蛋白表达。结果与衰老心肌细胞相比,1μmol．／L,100nmol／L,10nmol／L睾酮可剂量依赖性的降低衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率及细胞G0／G1期比例（P〈0．05）。睾酮干预亦可剂量依赖性地下调p16^INK4a mRNA及蛋白表达。结论1μmol／L,100nmol／L,10nmoL／L睾酮可通过剂量依赖性地减少p16^INK4a的表达,抑制小鼠心肌细胞衰老。     

p14~(ARF)和p16~(INK4a)蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p14ARFF和p16INF4a蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组化SP法检测57例PTC、21例甲状腺乳头状微小癌(PTMC)和40例甲状腺腺瘤中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达情况.结果 p14ARF和p16INK4a蛋白在PTC组的表达阳性率显著低于腺瘤组及PTMC组,差异有统计学意义(分别为P<0.01和<0.05).p16INK4a慨蛋白在PTMC组的阳性率明显低于腺瘤组,差异有统计学意义(P<0.05).PTC组中,p14ARF蛋白表达与淋巴结转移成负相关;p16INK4a蛋白表达与肿瘤复发成负相关,与临床分期成正相关.结论 p14ARF和p16INK4a可能参与了PTC的发生和发展,可作为临床判定其生物学行为的辅助指标.