17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCR1翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCR1表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCR1在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二噁英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX-CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二噁英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。     

17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞体外分泌趋化因子IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的影响

目的：探讨17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞分泌IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的调控，以解析雌激素在子宫内膜异位症发生发展中的作用机制。方法：用不同浓度17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞48小时；此后选用10^-9mol／L 17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞12、24、36和48小时，ELISA法分析刺激前后培养上清中IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309分泌水平。结果：子宫内膜间质细胞体外高水平自然分泌IL-8，17β-雌二醇能抑制IL-8的分泌，呈剂量依赖性。RNATES和MIP-1α分泌水平较IL-8低，经雌激素刺激子宫内膜间质细胞后MIP-1α表现出与IL-8相同的分泌方式，但对RANTES分泌无明显影响。子宫内膜间质细胞经雌激素刺激前后均未检测到I-309。结论：雌二醇可能参与子宫内膜白细胞和单核巨噬细胞的募集，但不是异位灶中上述趋化因子高表达的原因。     

雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的调控作用*

 目的： 探讨雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的调控作用及其意义。方法: 用免疫组化鉴定子宫内膜间质细胞,RT-PCR及蛋白免疫印迹法测定MIF mRNA及蛋白的表达。结果: 子宫内膜间质细胞经雌激素作用后分泌MIF mRNA及蛋白水平明显增高。子宫内膜异位症组MIF 上调水平明显高于正常组。结论: 子宫内膜异位症内膜间质细胞中MIF的表达对雌激素的刺激呈现超敏状态,子宫内膜间质细胞内MIF表达升高,可能促进子宫内膜异位症的发生发展。     

白介素-17和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的作用

目的:探讨白介素-17(IL-17)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症血管生成中的作用。方法:采用免疫组织化学及免疫印迹方法检测50例异位症患者在位内膜、异位内膜及47例正常子宫内膜组织中IL-17及VEGF蛋白表达。结果:各组内膜组织腺上皮细胞及基质细胞中均有IL-17和VEGF蛋白表达,内膜异位症在位内膜及异位内膜均高于同期对照组内膜,差异均有统计学意义;对照组分泌期内膜IL-17和VEGF蛋白表达均高于增生期,呈周期性变化,而内膜异位症组分泌期与增生期IL-17和VEGF蛋白均呈高表达,失去周期性变化。结论:内膜异位症患者在位及异位内膜组织中IL-17及VEGF蛋白高表达可能与内膜异位症的发生发展有关。     

雌激素受体不同亚型在卵巢子宫内膜异位症在位内膜与异位内膜中的表达及其意义

目的 研究雌激素受体(ER)不同亚型在子宫内膜异位症的在位和异位内膜中的表达,以寻找其在不同病灶中的分布规律,探讨子宫内膜异位症的发病机制.方法 收集解放军总医院2004年1月-2006年12月行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症石蜡标本,包括卵巢子宫内膜异位囊肿60例及其在位内膜60例(增生期各30例、分泌期各30例)以及正常子宫内膜30例(增生期和分泌期各15例).采用免疫组织化学(EnVision)方法检测上述组织中ERα和ERβ的表达.染色结果半定量化,并分析比较各种组织间的表达差异.结果 各组中,ERα和ERβ在腺上皮的表达与它们在间质细胞中的表达呈正相关.ERα蛋白在不同部位的表达:在位内膜ERα的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为73.3%和76.7%)高于卵巢子宫内膜异位囊肿(腺上皮和问质细胞阳性率分别为43.4%和46.7%)和正常内膜的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为56.7%和50.0%),均P<0.05.ERβ蛋白在不同部位的表达:卵巢子宫内膜异位囊肿(腺上皮和间质细胞阳性率分别为90.0%和76.7%)高于在位子宫内膜的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为68.0%和63.3%),后者又高于正常子宫内膜(腺上皮和间质细胞阳性率分别为36.7%和26.7%),P均<0.05.在位内膜的ERα和ERβ蛋白表达在增殖期均高于分泌期,P均<0.05;异位内膜增殖期和分泌期的表达差异无统计学意义.ERα和ERβ蛋白在不同部位表达的比较:在正常内膜中ERα的表达略高于ERβ,但差异无统计学意义,P>0.05;卵巢子宫内膜异位囊肿中ERβ的表达高于ERα,P<0.05;而在位内膜中两种亚型表达差异无统计学意义.结论 子宫内膜异位症患者在位子宫内膜及异位内膜均有ERα和ERβ的表达,但与正常子宫内膜相比,在卵巢子宫内膜异位囊肿中ERβ表达占优势,而ERα表达受限.ERα和ERβ在不同组织中的分布及表达水平与子宫内膜异位症的发生和发展有着密切关系.     

IDO通过整合素αvβ3调控子宫内膜间质细胞黏附能力

探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)通过细胞外黏附分子整合素对子宫内膜间质细胞(ESC)与细胞外基质黏附能力的调控。收集非内异症患者健康内膜、内异症患者在位内膜及异位内膜样组织,体外分离、培养获得子宫内膜间质细胞,并鉴定细胞纯度;In-cell Western比较分析健康、在位和异位ESC中IDO的表达水平,以及脂多糖(LPS)和1-甲基色氨酸(1-MT)单独或联合作用对IDO表达的影响;黏附试验分析LPS和(或)1-MT对ESC与细胞外基质laminin、collagen、fibrino-gen、fibronectin等黏附能力的影响;进一步应用流式细胞术分析LPS或/和1-MT对相应细胞外基质配体-整合素表达的调节。结果显示,IDO在子宫内膜异位症患者来源在位及异位ESC中高表达。炎症因子LPS可以促进ESC中IDO的表达,并通过上调整合素αvβ3增强ESC对细胞外基质collagen I、collagen IV、fibrinogen、fibronectin的黏附。IDO特异性抑制剂1-MT可以抑制ESC表达IDO,并且可以逆转LPS诱导的整合素αvβ3表达及ESC黏附能力。     

异位灶微环境子宫内膜间质细胞对调节性T细胞的功能影响

本研究探讨了子宫内膜异位症异位病灶中调节性T细胞(Treg细胞)的功能调节及其分子机制。采用原代分离培养子宫内膜间质细胞(ESC),密度梯度离心法及磁珠分选法分离获得健康人外周血Treg细胞,分别建立ESC,Treg细胞单独培养,及ESC-Treg细胞共培养体系;并观察外源性促炎细胞因子白介素1-β(IL-1β)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对调节性T细胞功能的影响。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清中转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌水平;流式细胞术分析Treg细胞表面分子CTLA-4的表达以及胞内转录因子Stat3、Stat6和Foxp3的表达。结果显示:(1)ESC能够促进Treg细胞转录因子Foxp3及表面分子CTLA-4的表达。(2)ESC能够明显促进Treg细胞分泌TGF-β1;但IL-1β与TNF-α对TGF-β1的分泌没有明显的促进作用。(3)ESC明显上调Treg细胞转录因子Stat3和Stat6的表达;IL-1β和TNF-α均能够进一步增强对Stat3的表达;IL-1β还能进一步增强Stat6的表达。我们的研究提示,子宫内膜异位症异位病灶微环境中的ESC能够增强Treg细胞的免疫抑制能力,从而有利于异位内膜的种植生长。     

子宫内膜及异位灶趋化因子受体转录在子宫内膜异位症发病中的作用

目的：探讨子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶18种趋化因子受体的转录特征，以揭示趋化因子受体及其配体在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法：以正常子宫内膜为对照，半定量RT-PCR检测子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶18种趋化因子受体mRNA的表达水平，并比较其差异。结果：与正常子宫内膜相比，子宫内膜异位症患者在位子宫内膜CCR6、CCR8、CCR9、CX3CR1表达明显升高（P＜0．05）。与在位内膜相比，异位灶CCR4、CCR8、CCR9、CXCR1表达显著升高（P＜0．05）。结论：在位子宫内膜CCR6、CCR8、CCR9、CX3CR1高表达，可能参与子宫内膜异位症的发生；异位灶CCR4、CCR8、CCR9、CXCR1高表达，可能参与子宫内膜异位症的进一步发展。     

GnRHⅡ蛋白在子宫内膜异位症患者中的表达及意义

目的：检测GnRHⅡ蛋白在子宫内膜异位症患者异位子宫内膜、在位子宫内膜和正常子宫内膜中的表达情况,同时分析其表达是否与子宫内膜月经周期有关。方法：采用免疫组织化学SP法检测GnRHⅡ蛋白在异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组织中的表达情况,并分析和比较其表达是否有差异。结果：GnRHⅡ蛋白在子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜及正常子宫内膜中均有表达,阳性表达定位于子宫内膜腺体及间质细胞的细胞质;GnRHⅡ蛋白在异位内膜、在位内膜及对照组正常内膜的表达依次增强,两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）;GnRHⅡ蛋白在正常子宫内膜分泌期表达强于增生期（P＜0.05）,且以分泌早中期最强,显著强于增生期和分泌晚期（P＜0.01）,而异位组或在位组的分泌期与增生期比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：GnRHⅡ蛋白在子宫内膜异位症的发病中以及在人类月经生理方面可能起重要作用。     

MiR-17-5p在子宫内膜异位症间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨miR-17-5p在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的影响.方法:MiRNA芯片筛选EMs异位子宫内膜组织中差异表达的miRNA,qRT-PCR验证EMs异位、在位子宫内膜组织和子宫...     

IL-6在子宫内膜异位患者血清中的表达及其潜在作用机制研究

目的：探讨IL-6在子宫内膜异位患者血清中的表达及其高表达对子宫内膜异位症腺上皮细胞的作用及潜在机制。方法：ELISA实验检测子宫内膜异位患者血清中IL-6表达;MTT实验检测IL-6对子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖影响,Western blot、Transwell实验检测IL-6对子宫内膜异位症腺上皮细胞上皮间质转化的影响;Western blot检测IL-6对细胞中STAT3/BCL6通路蛋白表达的影响;免疫组化检测患者组织中BCL6表达。结果：IL-6在子宫内膜异位患者血清中高表达;IL-6可促进子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖和上皮间质转化;IL-6可促进细胞中p-STAT3、BCL6蛋白表达增加;子宫内膜异位患者组织中BCL6高表达。结论：IL-6、BCL6在子宫内膜异位患者血清和组织中普遍高表达,IL-6可能通过激活STAT3/BCL6促进子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖及上皮间质转化过程,提示IL-6和BCL6可作为临床诊断治疗子宫内膜异位的新靶标。     

白细胞介素-6 mRNA在内异症子宫内膜的表达变化

目的：探讨IL-6 mRNA与子宫内膜异位症发病的关系。方法：利用大鼠子宫内膜异位症（内异症）动物模型，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测子宫内膜白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达情况。结果：正常对照组，各时点间（2、4、6和8周）IL-6 mRNA表达无显著差异（P>0.05）。内异症模型组,在成模后（2、4、6和8周）其在位、异位子宫内膜IL-6 mRNA的表达呈增高趋势（P<0.01）。在各时点，内异症异位子宫内膜>内异症在位子宫内膜>正常子宫内膜IL-6 mRNA的表达（P<0.01）。结论：IL-6 mRNA可能与内异症的进展有关。IL-6 mRNA可能促进异位内膜的种植和生长。     

Treg与促炎因子协同作用活化子宫内膜间质细胞Smad2信号通路

本研究探讨了异位病灶调节性T细胞(Treg)与促炎细胞因子IL-1β、TNF-α协同作用对子宫内膜间质细胞Smad2信号通路的活化作用及其分子机制。采用原代分离培养子宫内膜异位症(简称内异症)患者在位及异位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC);流式细胞术和ELISA法分别检测腹腔液中Treg的比例和TGF-β1的水平;免疫组织化学法分析正常、在位及异位内膜间质细胞中P-Smad2和Smad2的表达水平;细胞内Western法分析ESC Smad2信号通路的活化状况。结果显示:(1)与非内异症者相比,内异症患者盆腹腔内具有更多数量的Treg和更高水平的TGF-β1,且与疾病的进展呈正相关。(2)内异症患者在位及异位内膜具有更高的P-Smad2和Smad2水平。(3)异位病灶微环境中的Treg能够通过分泌TGF-β1与IL-1β或TNF-α发挥协同作用,可能通过激活ERK和p38信号通路活化ESC Smad2信号通路。ESC Smad2信号通路的活化可能通过多种分子机制影响ESC的生物学活性,从而导致疾病的发生和发展。     

雌激素调控子宫内膜异位症基质细胞侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨雌激素调节长链非编码RNA-339(lncRNA-339)对子宫内膜异位症(EMs)基质细胞侵袭和迁移的作用机制。方法 观察EMs子宫内膜中lncRNA-339的表达。用雌激素受体拮抗剂ICI、白细胞介素-1β(IL-1β)抑制剂ACZ885分别处理经雌二醇(E₂)刺激的人子宫内膜基质细胞系ThESCs。另外,E₂处理条件下对ThESCs细胞进行过表达或沉默lncRNA-339,并且过表达lncRNA-339后用ACZ885处理ThESCs细胞。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA-339的水平。Western blot检测ThESCs中IL-1β的水平,Transwell法检测ThESCs细胞的迁移率和侵袭率。结果 lncRNA-339在EMs子宫内膜中表达增加(P<0.05)。E₂或者过表达lncRNA-339都能促进ThESCs细胞中lncRNA-339和IL-1β的表达(P<0.05),促进细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。而当抑制E₂、沉默l...     

TGF-β1在子宫内膜异位症与子宫内膜癌中的表达及生物学行为相关性研究

目的研究转化生长因子β-（TGF-β1在子宫内膜异位症、子宫内膜癌中的表达，探讨其表达与子宫内膜异位症发生及子宫内膜异位症和子宫内膜癌生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测10例子宫内膜异位症在位内膜、异位内膜，10例子宫内膜癌，10例对照组正常子宫内膜TGF-β1表达。结果TGF-β1在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达显著高于子宫内膜异位症在位内膜组及对照组（P〈0．05、P〈0．05）；TGF—β1在子宫内膜癌组中的表达显著高于对照组（P〈0．05）；TGF-β1在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达与子宫内膜癌组中的表达差异无显著性（P〉0．05）。结论TGF-β1的异常表达可能与子宫内膜异位症的发生有关；且可能与子宫内膜异位症具有和子宫内膜癌相似的生物学行为有关。     

TGFβ1与EGFR在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的检测转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）以及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在子宫内膜异位症中的表达,探讨两者在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测子宫内膜异位症患者在位内膜（10例）、异位内膜（10例）、正常子宫内膜（10例）中TGF-β1和EGFR的表达情况。结果TGF-β1在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达显著高于子宫内膜异位症在位内膜组及对照组（P〈0.05）,TGF-β1在子宫内膜异位症在位内膜组及对照组中的表达无显著性差异（P〉0.05）;EGRF在子宫内膜异位症异位内膜组及在位内膜组中的表达显著低于对照组（P〈0.05）,EGFR在子宫内膜异位症异位内膜组及在位内膜组中的表达无显著性差异（P〉0.05）。结论TGF-β1及EGFR的异常表达可能与子宫内膜异位症的发生发展有关。     

骨桥蛋白及其受体异常表达在子宫内膜异位

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)及其受体整合素αvβ3在子宫内膜异位症发生、发展中的作用.方法 随机选取经手术治疗的89例子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜作为实验组,同期非内异症患者子宫内膜作为对照组,SP免疫组化法对上述病例的骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3的表达水平进行检测;并对两者进行相关性分析.结果 子宫内膜异位症患者的异位内膜中骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3的表达高于其在位内膜的表达,子宫内膜异位症患者的在位内膜中骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3的表达高于对照组子宫内膜中的表达;骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3两者在子宫内膜异位症中的表达呈正相关.结论 在子宫内膜异位症中存在着OPN、整合素αvβ3的高表达,两者可能协同在子宫内膜异位症的发生发展中起着重要作用.     

人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡**☆

背景：人脐带间充质干细胞可通过旁分泌机制调控细胞的生物学活性。 目的：观察人脐带间充质干细胞对子宫内膜异位症细胞增殖及凋亡的影响。 方法：体外原代培养人异位子宫内膜细胞与人脐带间充质干细胞,实验组将脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞按1×105/1×105比例接种于Transwell共培养板上下室,建立上下双层细胞非接触共培养体系,设1×105单独培养异位子宫内膜细胞为对照组。 结果与结论：①MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖：与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制(P < 0.05),且具有时间依赖性(P < 0.05)。②流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞增殖凋亡：实验组凋亡细胞明显多于对照组(P < 0.05),异位子宫内膜细胞由G1期进入S期细胞减少。③RT-PCR法检测异位子宫内膜细胞张力蛋白同源物基因mRNA的表达：实验组明显高于对照组。表明人脐带间充质干细胞可以通过旁分泌机制抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,且可能是通过提高张力蛋白同源物基因基因表达来达到的。 关键词：人脐带间充质干细胞;子宫内膜异位症细胞;细胞凋亡;共培养;张力蛋白同源物基因 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.013     

子宫内膜异位症中ER-α和ER-β研究进展

雌激素在子宫内膜异位症的发生发展中有重要的作用。过去认为这些雌激素的效果都是通过单一的雌激素受体ER-α(estrogen receptor-α)起作用的。然而，最近一种新形式的雌激素受体ER-β(estrogen receptor-β)的发现，促进关于雌激素对靶器官作用的再研究。本文综述了国际上关于此研究的最新报道，提示了在子宫内膜、腹膜和卵巢异位内膜中ER-α和ER-βmRNA的表达有明显差异，对于深入研究子宫内膜异位症的发生发展，临床生物特性、治疗及预后有重要意义。     

白芍总苷对子宫内膜异位症大鼠异位组织HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的 探究白芍总苷对子宫内膜异位症（EMs）大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子（VEGF通路的影响。方法 取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、白芍总苷组、HIF-1α激动剂（DMOG）组、HIF-1α/VEGF信号通路阻断剂（YC-1）组、白芍总苷+DMOG组，用自体子宫内膜移植法建立EMs模型。各组大鼠持续给药4周后，比较病灶体积，取异位内膜组织，H-E法检测各组子宫内膜组织形态；免疫组化法检测HIF-1α、VEGF、CD34表达；蛋白免疫印迹法（western blot）检测促血管生成素2(Ang-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核转录因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)、雌激素受体β(ERβ)、基质环氧酶2(COX-2)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)表达水平。结果 与假手术组相比，模型组大鼠异位内膜病灶体积增大，异位内膜组织腺体及间质细胞增多，血管增生严重，HIF-1α介导的血管生成、雌激素分泌相关通路、炎症反应等...