C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0．4-20ng／mL;分析敏感性为0．23ng／mL;分析批内、批间精密度分别为7．99％、11．97％;C-肽回收率为99．57％;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0．358-3．590ng／mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0．9432,线性方程为Y=0．9854X＋0．5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用．     

人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

TRFIA全血降钙素原检测试剂盒的性能评价

目的评价时间分辨免疫荧光法(TRFIA)全血降钙素原(PCT)检测试剂盒的分析性能。方法采用AQT90FLEX免疫分析仪,以TRFIA检测全血PCT,评价该方法精密度、检测下限、功能敏感度、线性范围、干扰试验、携带污染率、方法比对和参考区间等性能指标;将其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒进行比较。结果 TRFIA批内变异系数(CV)小于5.5%,批间CV小于6.0%,检测下限为0.03ng/mL,功能敏感度为0.11ng/mL,线性范围0.072~100.000ng/mL,干扰物对PCT检测无明显影响(干扰小于或等于±10%),携带污染小于0.25ng/mL,参考区间为0.081~0.120ng/mL。其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性(R2=0.995 3)。结论采用TRFIA的AQT90FLEX免疫分析仪PCT检测试剂盒敏感度高,精密度好,线性范围宽,与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性,快速便捷,能更好地适用临床即时检验。     

游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制一种游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fuoroimmunoassay,TRFIA）试剂盒。方法采用直接竞争法建立游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）检测TRFIA试剂盒（固相包被T3-复合物,与样本中的FT3竞争结合DTTA-Eu3＋标记的T3单克隆抗体）,并对试剂盒各项指标进行评价。结果该试剂盒的有效检测浓度范围为1.5~70 pmol/L,分析灵敏度为不高于0.7 pmol/L,批内、批间的不精密度分别不高于8.2%与10.5%。与T4、FT4、反T3、反T4交叉反应率分别为：〈0.01%、0.11%、〈0.01%、〈0.01%。稳定性试验表明试剂可以在2~8℃稳定一年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份正常人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是3.2~6.5 pmol/L。156份血清标本用本试剂盒与国外某知名品牌化学发光法试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可考虑作为国外化学发光法同类产品试剂盒的替代产品。     

游离甲状腺素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

目的研制一种人游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒。方法采用直接竞争法建立FT4检测方法(固相包被T4-复合物,与样本中的FT4竞争结合Eu标记的T4单克隆抗体),并对该试剂盒各项性能指标进行评价。结果该试剂盒的分析灵敏度为不高于2.0pmol/L,工作范围为2.0～120.0pmol/L。分析内变异系数为4.4%～5.7%、分析间变异系数为6.5%～8.2%,其总变异系数小于9.0%。与T3、FT3、rT3和rT4的交叉反应率分别为:1.12%、0.34%、0.56%和1.51%。稳定性试验表明该试剂盒可以在2～8℃稳定1年,37℃稳定7d。用该试剂盒对500份健康人血清标本进行测试,统计该试剂盒的正常参考值范围是11.5～22.7pmol/L。200份血清标本用本试剂盒与国外的化学发光试剂盒同时检测FT4,其相关系数为0.993。结论该试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外化学发光法的同类产品试剂盒。     

时间分辨免疫荧光法和放射免疫法测定血清C-肽的偏差评估

目的比较时间分辨免疫荧光法和放射免疫法检测血清C-肽结果的一致性,并对其进行偏差评估。方法依据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A文件要求,每天选取临床样本8份,分别用2种方法测定血清C-肽,连续测定5 d。以放射免疫法（X）为对比方法,时间分辨免疫荧光法（Y）为评价方法,对测定结果计算回归方程、t检验、配对秩和检验和偏差评估。结果 2种方法测定结果的回归方程为Y^=0.993 0X＋0.027 2,相关系数（r）=0.987 5（P〈0.001）。C-肽含量在0.4、0.5、1.0、5.0、10.0 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法相对于放射免疫法的偏差分别为6.10%、4.75%、2.02%、-0.16%、-0.43%。结论 C-肽水平≥0.4 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法与放射免疫法检测血清C-肽具有很好的相关性;C-肽水平〈0.4 ng/mL时,两法的相对偏差较大。     

国产细胞角蛋白19片段CYFRA21-1化学发光定量检测试剂盒的性能评估

目的对厦门万泰凯瑞生物技术有限公司的细胞角蛋白19片段非小细胞肺原相关抗原21-1(CYFRA21-1)化学发光定量检测试剂盒进行分析性能评估。方法依据《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则》等文件对试剂盒的敏感性、线性范围、可报告范围、准确度、精密度、交叉反应等性能进行评估,同时与电化学发光法平行比对,检测配对血清/血浆结果的一致性。结果该试剂盒检测最低限为0.1ng/mL;线性范围为0.1~1 000.0ng/mL;可报告范围达0.1~2 000.0ng/mL;批内精密度为6.15%~9.46%,批间精密度为7.57%~11.00%;回收率达99.60%;与多种常见肿瘤抗原无交叉反应;轻度溶血、胆红素小于或等于340μmol/L、三酰甘油小于或等于18.1μmol/L及类风湿因子小于或等于400U/mL时,对试剂无显著干扰;与电化学发光法检测总符合率为98.56%,一致性良好(P0.05,Kappa=0.965);血清、血浆标本检测一致性良好(P0.05,Kappa=0.936)。结论厦门万泰凯瑞生物技术有限公司生产的细胞角蛋白19片段CYFRA21-1化学发光定量检测试剂盒各项性能评估良好,可满足临床检测要求。     

化学发光酶免疫分析法定量检测人血清层粘连蛋白

摘要：目的：建立检测人血清层粘连蛋白（LN）的化学发光酶免疫分析法(CEIA)。 方法：用3 μg/mL抗人LN单抗包被微孔板制成固相抗体,辣根过氧化物酶标记抗人LN单抗浓度为1∶2 000,建立检测人血清LN浓度的CEIA法。评价该法的线性范围、灵敏度、稳定性等性能指标;并与ELISA法检测LN进行比对;初步检测100例健康献血员血清LN水平。 结果：该法线性范围为22~1 635 ng/mL,灵敏度为12.2 ng/mL,批内、批间变异系数均＜10%,检测高、中、低值LN血清的回收率分别为00.9%、95.2%和105.0%;试剂在4 ℃和37 ℃条件下至少稳定7 d;健全性良好;与ELISA法检测LN结果差异无统计学意义（t=0.299,P>0.05）;100例健康献血员LN水平为（44.9±16.3） ng/mL。 结论：成功建立定量检测LN的CEIA法,该法性能较好,可用于临床检测。     

酶联免疫吸附试验癌胚抗原定量测定试剂盒临床应用评价

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)癌胚抗原(CEA)定量试剂盒检测人血清或血浆中的CEA浓度是否满足临床应用。方法参照相关评价方案对ELISA法CEA测定试剂进行精密度、回收率、线性试验、最低检出限、参考值范围,进行相关性分析。结果该法最低检出限为2ng/mL,线性范围可达1.25～320ng/mL(r=0.998 7),批内CV<5%,批间CV<7%。结论该试剂盒灵敏度高,精密癌胚抗原、线性范围宽,结果准确,且操作简便快速,满足临床要求。     

人血清层粘连蛋白直接化学发光免疫分析法的建立及评价

目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的直接化学发光免疫分析法(CLIA),并对检测性能进行方法学评价。方法采用包被有抗人LN单抗的微米级磁珠和吖啶酯标记抗人LN单抗分别作为固相试剂和发光试剂,建立并优化定量检测人血清LN水平的CLIA法,评价该方法的线性范围、灵敏度、精密度和特异性等性能指标,并与市场上同方法学的LN检测试剂盒进行相关性比对分析。结果该方法线性范围为5.00~1 000.00ng/mL,检测灵敏度小于5.00ng/mL,血清平均回收率为97.60%,批内变异系数(CV)小于5.00%,批间CV小于8.00%,特异性、稳定性良好,与市场上同方法学的LN检测试剂盒具有较好相关性。结论建立的人血清LN直接化学发光免疫分析法能够满足临床检测需求。     

两种免疫分析法检测甲胎蛋白在原发性肝癌诊断中的价值

目的分别用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）和化学发光免疫分析（CLIA）法检测血清甲胎蛋白（AFP）浓度,比较两种检测方法对原发性肝癌（PHC）诊断的临床应用价值。方法选择门诊和住院期闻确诊的PHC患者114例和肝良性病变患者126例,分别用TRFIA和CLIA法检测受试者血清AFP浓度,并进行工作特征（receiver operating characteristic curves,ROC）曲线分析。结果以健康对照组95％可信区间为医学正常值范围,TRFIA法和CLIA法诊断肝癌的临床界限值分别为7．31ng／mL和24,17ng／mL。TRFIA诊断肝癌的灵敏度为46．9％,特异性为93．4％,诊断准确率为79．2％。CLIA法的灵敏度为41．2％,特异性为91．6％,诊断准确率为65．8％。两种检测方法ROC曲线下面积分别为0．761（TRFIA）和0．682（CLIA）。结论TRFIA和CLIA法都可以满足临床AFP检测需要,但TRFIA法优于CLIA法。     

时间分辨荧光分析法检测低值乙型肝炎病毒表面抗原的质量评价

目的评价时间分辨荧光分析法检测低值乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的性能。方法使用不同浓度试剂盒标准品、二级标准品进行重复测定,建立相应的数学模型,进行检测低限（lower limit of detection,LLD）、生物检测限（biologic limit of detection,BLD）、功能灵敏度（functional sensitivity,FS）、空白限（limit of blank,LoB）、检出限（limit of detection,LoD）、定量检出限（limit of quantifications,LoQ）的统计计算。结果 LLD为0.044ng/mL、BLD为0.18ng/mL、FS为0.18ng/mL、LoB为0.03ng/mL、LoD为0.108ng/mL,尝试计算低值HBsAg检测结果的不确定度,确定定量检出限（LoQ）约为0.5ng/mL。结论使用灵敏度性能和不确定度2种方法进行评价,该检测系统对低值HBsAg分析能够达到试剂盒规定的性能要求。     

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA,BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE,线性范围为0．12～20ng／mL,回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0．5ng／mL时,敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。     

乙型肝炎两对半和HBVDNA定量检测的临床应用

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）免疫标志物（HBV-M）与HBVDNA之间的相互关系，为临床诊断、治疗乙型肝炎提供有价值的判断标准。方法用时间分辨荧光免疫法（TRFIA）定量检测HBV-M，并与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相比较。结果105例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗—HBc）均为阳性；85例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性；34例乙型肝炎病毒抗体（抗-HBs）、抗-HBe、抗HBc阳性组中HBVDNA的检出率分别为65．7％、95．5％和11．7％。以HBsAg含量为100ng／mL作为HBV复制的诊断限，其特异性和敏感性分别是70．0％和84．0％。结论TRFIA定量检测HBV-M灵敏度高、特异性强、操作简便，无放射性污染，是一种较好的HBV-M测定方法，在实验室不具备HBVDNA定量测定的条件下，选择TRFIA进行乙型肝炎两对半定量检测也是一种较好的方法。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)建立高灵敏的抗弓形虫(TOX)IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数(CV)分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4~200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量(ED20、ED50和ED80)分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为(5.3±2.3)U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

Sm~(3+)标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26%和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73%和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483MPL U/L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。