胎肝造血与凋亡

细胞凋亡是多细胞器官控制自身细胞增殖率和死亡率以保持自身组织稳定的一种重要方式，是有别于坏死的一种生理过程。胚胎时期胎肝造血以红系为主，受ＥＰＯ水平的调节。ＥＰＯ作用于ＣＦＵ－Ｅ和部分ＢＦＵ－Ｄ，通过调节ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ的凋亡控制经系造血。     

小鼠巨噬细胞对红系血祖细胞增殖的影响

应用造血祖细胞体外培养技术,观察了小鼠腹腔巨噬细胞对BFU-E和CFU-E增殖的影响。结果标明,小鼠巨噬细胞对CFU-E表现为刺激作用;对BFU-E增殖表现为刺激和抑制双重作用,提示巨噬细胞具有促红纤细胞生成素(EPO)和爆式集落促进活性(BPA)样活性。     

NK细胞与血液病

国内外学者研究发现,NK细胞具有细胞毒和免疫调节作用。最近发现NK细胞还具有造血调节作用,且其在血液病发生、发展及治疗上起一定的作用,本文将就这些方面做一综述。一、NK细胞的造血调节作用 (一)对红系的调节近年来,很多学者对NK细胞在造血系统中的作用做了一系列的研究,发现NK细胞具有调节骨髓造血的作用。Kenneth等报道NK细胞抑制骨髓5-6天CFU-E的生长,对血14天BFU-E和骨髓10-12天BFU-E无明显的抑制作用。Hansson等也报道了NK细胞     

单核巨噬细胞与血发生

巨噬细胞在血发生过程中扮演着一个十分令人注目的角色。有实验证明,巨噬细胞通过细胞分泌,作用于造血干细胞和所有四系造血祖细胞。最近Richard提供了电镜下巨噬细胞和拟造血干细胞之间存在相嵌连接这一重要形态学依据。单核巨噬细胞在红系造血调控中起着刺激和抑制两方面的作用。实验证明,适量的单核巨噬细胞或其培养上清液可以促进红系祖细胞(BFU-E,CFU-E)生长,但单核巨噬细胞或其上清液过多,则BFU-E和CFU-E生长明显受抑。以巨噬细胞为中心的红细胞岛,无论在骨髓或在脾脏、在体内或是在体外培养中,均较常见。提示红细胞的发生依赖于巨噬细胞的存在。对于巨噬细胞在红细胞     

人脐血前红系祖细胞(BFU-E)体外培养的动态观察

<正> 脐血含各系造血干/祖细胞和多种造血集落刺激因子,是继骨髓、外周血、胎肝之后第4个新开发的、可移植的造血干细胞来源;还可静脉输注,用于一切放化疗后血细胞减少的病人、刺激造血功能,从而扩大了血源供应。笔者通过对37份人脐血和11份正常骨髓的BFU-E体外培养观察,再次证明脐血含有丰富的造血干细胞,并对脐血红系定向祖细胞的2个亚群(CFU-E、BFU-E)进行了动态观察,结果报告如下。     

再障病人血清爆式集落刺激活性研究进展

爆式集落刺激活性(Burst-Promoting Activity,BPA)系指一组具有造血调控作用的物质的活性。对于体外培养的早期红系造血祖细胞(BFU-E),BPA具有维持其生存、促进其增殖、分化的作用。自从Dukes和Nissen分别自再生障碍性贫血(再障)病人尿液及血清中发现较正常人为高的BPA以来,国外一些学者对BPA与再障的关系做了许多工作。下面仅就此作一文献复习。一、BPA的来源、生物学作用及其理化特性人及小鼠红系造血祖细胞是一个异质性的群体。在进行体外半固体培养时,可以产生3种不同的集落形式:早期BFU-E、晚期BFU-E及CFU-E。这3种集落分别起源于3种分     

造血干细胞的抗原特性

本文综述了近年来有关人和小鼠造血祖细胞各种抗原系统的特点及其鉴别方法,以及在生物学和治疗学方面的有关问题。造血祖细胞在有刺激因子存在的半固体培养中,粒-巨噬祖细胞(CFU-G,M)可形成粒细胞或巨噬细胞,或二者混合组成的细胞集落。在红细胞生成素(Ep)刺激下,红系祖细胞(BFU-E和 CFU-E)可生成红系细胞集落。小鼠多能干细胞是通过受致死剂量照射小鼠的脾脏形成     

红细胞生成素

红细胞生成素(Erythropoicun,Ep)已被确认为主要造血调节因子。1977年人Ep被纯化,不久人Ep基因被克降和表达。重组人Ep的结构和生物特性与天然Ep无显著不同。人Ep为酸性糖蛋白,分子量约34.000,其蛋白质部份包含166个氨基酸残基,其糖组成部份,特别是唾液酸部份,与Ep生物活性的发挥有重要关系,失去唾液酸部份的Ep迅速被肝从血内清除。Ep不能通过啮齿类和羊的胎盘,但初生鼠可经哺乳而获得Ep。 Ep促原始红细胞增殖,分化和成熟。较原始的红系细胞(如BFU-E)不仅受Ep控制,也接受IL-3,GM-CSF等其他造血因子的影响,而稍成熟一些的原始红细胞(如CFU-E)主要受Ep控     

血清EPO检测评价全身热疗对恶性实体肿瘤贫血的疗效

红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾脏近曲小管附近细胞合成和分泌的一种糖蛋白类激素。EPO的作用受体为膜受体,只存在于红系前体细胞,EPO的作用是促进红系干细胞及原红细胞的有丝分裂,刺激骨髓红系造血,促进原始红细胞增殖、分化和成熟,以维持外周血中红细胞和血红蛋白的恒定,是调节红细胞生成的主要因子。正常情况下,血清EPO水平受肾组织氧分压的影响,低氧和贫血是EPO增高的主要刺激因素。近年来,41.8℃全身热疗(41.8℃whole body hyperthermia,41.8℃WBH)治疗恶性实体肿瘤成为肿瘤治疗领域研究的热点,建立了坚实的理论基础,…     

抗-CD36单克隆抗体对人CD34~+造血干(祖)细胞增殖和分化的影响

目的探讨抗-CD36单克隆抗体对人CD34~+造血干(祖)细胞体外增殖和分化的影响。方法选择无各种产科并发症的健康足月产妇3名,取脐带血20 mL/(人)份,以Ficoll细胞分离液(1.077 g/mL)密度梯度800 g离心30 min后,流式细胞仪分选CD34~+造血干(祖)细胞,培养2—3代,四唑盐(MTT)比色法检测抗-CD36单克隆抗体对CD34~+细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,Annexin V/PI双染法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期。观察抗-CD36单克隆抗体对CD34~+造血干(祖)细胞凋亡和细胞周期的影响、对造血干(祖)细胞红系分化能力以及对红系集落形成单位(CFU-E)和红系爆式集落形成单位(BFU-E)生成的影响。结果流式细胞仪分选出经Ficoll分离脐带血获得的单个核细胞中约0.44%CD34~+造血干(祖)细胞。2、8、32、64、128μg/mL抗-CD36单克隆抗体分别与CD34~+造血干(祖)细胞体外共培养:单纯CD34~+造血干(祖)细胞培养(正常)组、抗-CD36单克隆抗体2及32μg/mL组,IgG(对照)组的OD值分别为1.05±0.12 vs 0.9±0.15 vs 0.81±0.11 vs 1.06±0.18(P0.01)。Annexin V流式检测凋亡率(%):正常组、对照组与2μg/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为10.13SymbolqB@1.42 vs 10.51SymbolqB@1.75 vs 24.57SymbolqB@2.75(P0.05)。G_1/S值:正常组、对照组与2μL/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为3.95±0.25 vs 4.36±0.55 vs 7.35±0.65(P0.05)。CD34~+造血干(祖)细胞定向分化红系(CFU-E/BFU-E克隆形成数):正常组、对照组与抗-CD36单克隆抗体组分别为169±12、172±12和85±6(P0.05)。结论抗-CD36单克隆抗体诱导人CD34~+造血干(祖)细胞凋亡,细胞增殖减少和红系CFU-E/BFU-E克隆能力降低。     

重组人红细胞生成素对骨髓增生异常综合征患者CFU-E的作用

应用CFU-E培养技术观察28例骨髓增生异常综合征(MDS)患者对EPO的反应,表明MDS患者CFU-E的形成能力明显低于正常人,其中反应好者,加入EPO后CFU-E可达正常水平,占观察组17.3％;反应差者,即使加入足量EPO后,CFU-E增殖仅为对照组的20％以下;CFU-E对EPO还有剂量依赖性。通过EPO对MDS患者CFU-E不同反应,可能与MDS病因、发病机理有关,或部分患者病变发生在BFU-E或其以上水平,故对EPO无反应。     

人脐血红系祖细胞体外培养观察

<正>脐血代替骨髓移植重建造血的成功,已引起人们对脐血造血功能研究的兴趣。笔者等曾在国内首先报告了脐血粒—单核系祖细胞(CFU-GM)体外培养观察,证实人脐血富含粒单核细胞系造血干/祖细胞。通过进一步以体外甲基纤维素法培养人脐血的红系祖细胞,包括红系集落形成单位(CFU-E)和爆式红系形成单位(BFU-E),笔者观察了人脐血红系祖细胞造血情况,现将结果报告如下。     

细胞因子在淋巴瘤贫血中作用机制的研究

本研究探讨细胞因子在恶性淋巴瘤贫血的发生中的作用。应用ELISA法检测45例初治淋巴瘤患者和12名正常对照者血清IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-1β和EPO水平;以流式细胞术检测骨髓红系EPOR水平;分离骨髓单个核细胞进行红系集落培养,并在倒置显微镜下检计数CFU-E。结果表明,45例初治淋巴瘤患者中发病时即贫血者25例(55.6%),治疗过程中发生贫血者13例(28.9%),从未发生贫血者7例(15.5%);血清IFN-γ及TNF-α水平在中、重度贫血组均显著高于轻度贫血组、无贫血组及对照组。血清EPO、IL-6、IFN-γ水平与Hb水平呈显著负相关;淋巴瘤无贫血组EPOR水平明显高于各种程度贫血组及正常对照组。CFU-E与Hb及EPOR水平均呈显著正相关。结论:IFN-γ、TNF-α、IL-6是导致淋巴瘤贫血的造血负调控因子;EPO和EPOR上调是机体对抗红系造血负调控及维持正常造血的重要机制。     

IL-6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复的促进作用

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)基因转染的骨位基质细胞系QXMSC, IL6对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法:将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠,建立骨髓移植(BMT)模型。小鼠的造血功能用脾结节(CFU-S)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)测定及外周血各项血液学指标来确定。结果:QXMSC_1 IL-6转基因骨髓基质细胞可明显增强BMT小鼠形成的CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E数,促进外周血象的恢复。结论:QXMSC_1 IL-6细胞可明显促进小鼠骨髓移植后早期造血功能重建。     

骨髓基质细胞系QXMSC_1体外促进造血及其作用机理的研究

本实验研究了骨髓基质细胞系QXMSC_1体外对CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落形成的影响,并通过建立QXMSC_1基质细胞与骨髓造血细胞的长期共培养体系,研究了QXMSC-1在体外促进造血的机理。结果表明,QXMSC_1基质细胞条件培养上清液可促进小鼠CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落的生长。在无GM-CSF和Epo存在的情况下,QXMSC_1细胞能维持CFU-GM,BFU-E和CFU-E集落生长。表明QXMSC_1细胞本身可分泌GM-CSF和Epo。QXMSC_1细胞与骨髓造血细胞共培养时,可明显提高CFU-GM集落数。共培养体系中,用微孔滤膜隔断QXMSC_1与造血细胞的直接接触,也能促进CFU-GM集落生成,但比混合培养时低,说明QXMSC_1通过直接接触和分泌细胞因子促进造血的过程。     

纤维连结蛋白、粘附抗原和造血祖细胞

纤维连结蛋白(FN)是广泛存在于多种细胞表面、基质及血浆中的一种糖蛋白,在细胞粘附、迁移、分化及成熟中的作用已有较多研究。但FN与髓系祖细胞分化成熟的关系研究尚少。除BFU-E、CFU-E和CFU-GM皆能和FN分子中RGD短肽相结合外,最近发现,原始造血祖细胞(LTBMC-IC)多向造血祖细胞(CFU-MIX)、BFU-E、CFU-E及CFU-GM还能和FN分子肝素结合片段中的“CS_1”多肽结合,并证实,祖细胞表面的粘附抗原(VLA_5)是RGD短肽的受体,而VLA4则是CS_1多肽的受体.     

小鼠胎肝造血基质细胞株的建立及生物学特性和功能研究

小鼠胎肝造血基质细胞经原代和传代培养并克隆成细胞株。该细胞株单层贴壁生长,核分裂相较多,有丝分裂指数较高,生长有赖于马血清的存在,有密度依赖抑制现象,染色体众数4n近80者常见。在半固体培养中无集落形成,ConA凝集试验阴性。该细胞株能双向调控红系和粒系造血,其刺激性影响主要由体液因子介导,其抑制性作用尚含细胞间短距离的调节因素。其培养上清液包括无血清培养上清液具有支持红系和粒系造血祖细胞增殖分化的活性,文中讨论了实验结果与胎肝临床疗效间的可能关系。     

HIF-1α在照射损伤铁过载疾病红系造血中的表达及意义

目的:研究铁过载状态下缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在照射损伤小鼠体内的表达及其对红系造血的影响和机制。方法:20只小鼠随机分成Ctrl(对照)、IR(单纯照射损伤)、IO(照射损伤+铁过载)和RAPA(雷帕霉素给药)共4组,验证铁过载模型;培养红系集落:CFU-E(红系集落形成单位)和BFU-E(爆式红系集落形成单位);流式细胞术检测骨髓原始红细胞:早期Ter119~+CD71~+和晚期Ter119~+CD71~-的比例;RT-PCR检测骨髓细胞HIF-1α及相关信号分子表达。结果:IR和IO组的HIF-1α的表达均较Ctrl组明显升高,且IO组明显高于IR组(P0.05)。IR和IO组的晚期红细胞比例、BFU-E和CFU-E数目均较Ctrl组明显降低,且在IO组明显低于IR组(P0.05)。IR和IO组HIF-1α相关信号分子表达明显高于Ctrl组(P0.05)。应用mTOR抑制剂RAPA时HIF-1α及相关信号分子的表达明显降低,BFU-E明显升高(P0.05)。结论:照射使HIF-1α表达升高,红系造血集落和晚期原始红细胞比例下降,铁过载更加重了损伤。雷帕霉素可缓解部分损伤,提示铁过载可通过HIF-1α介导损伤红系造血。     

尿毒症患者红细胞生成抑制因子的实验研究

目的本文采用甲基纤维素细胞培养的方法,分析尿毒症患者血清及超滤液对小鼠骨髓红系造血祖细胞集落形成的影响,初步探讨红细胞生成抑制因子的存在、其相对分子质量大小及高通量透析器与普通低通量透析器对其清除的不同影响。方法选择北京朝阳医院肾内科12例尿毒症肾性贫血未透析患者为实验组,另选正常健康体检者12例为正常对照组,将实验组、正常对照组血清及应用F80透析器对实验组患者采用单纯超滤的方法所得超滤液(A组)、并将上述超滤液再用F6透析器进行循环超滤所得的超滤剩余液(B组)及F6超滤液(C组)分别稀释成不同终浓度,采用甲基纤维素细胞培养的方法与小鼠骨髓细胞进行培养,对比不同浓度血清组红系集落形成单位(CFU-E)、红系爆式形成单位(BFU-E)的集落数,A、B、C3组超滤液在相同浓度时CFU-E、BFU-E集落的数量。结果在实验组中,与血清浓度为0的浓度组相比,与各浓度组血清共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数均明显减少,且随血清浓度的增加,小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数逐渐减少,各浓度组间差异有显著性(P<0.05);在A、B、C3组的各组内,与超滤液浓度为0的浓度组相比,与各浓度组超滤液共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数均明显减少,且随超滤液浓度的增加小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数逐渐减少,各浓度组间差异有显著性(P<0.05);相同浓度时,与A组滤过液共同培养的小鼠骨髓CFU-E和BFU-E的集落数较B组、C组均明显减少;B组、C组两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论尿毒症患者血中存在红细胞生成抑制因子,其对红系造血祖细胞的抑制作用具有剂量依赖性;红细胞生成抑制因子既可有大、中分子物质也有小分子物质;高通量透析器较普通低通量透析器能更有效清除红细胞生成抑制因子。     

大鼠重组EPO结合蛋白的表达纯化及活性鉴定

EPO是调控骨髓红系造血的关键因子，其与红系祖细胞表面的特异受体EPO—R结合引发胞内信号机制，防止细胞凋亡并促进其增殖和分化。EPO—R胞外域是与EPO发生结合的受体区段，又称为EPO结合蛋白（EBP）。迄今，采用基因工程方法制备的EBP主要被应用于受体一配体结合特性及物理结构研究，其在治疗EPO反应性增生失调如红白血病和红细胞增多症中的可能性探讨尚未见报道。我们依据EPO-R与EPO结合的化学计量特性设计了串联融合的双体结合蛋白，采用原核系统进行表达，对其体内外结合活性进行了鉴定。