乙型肝炎病毒X蛋白相关lncRNA NEAT1促肝癌增殖和转移的研究北大核心CSCD

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)相关lncRNA NEAT1表达与肝癌患者临床特征及预后的关系,及其对肝细胞癌(HCC)增殖和转移的影响。方法从本院行肝切除术的肝癌患者的标本中收集肝癌组织和相应的邻近非肿瘤肝组织各125份。构建稳定转染HBx基因的HepG2细胞和相应阴性对照,采用微阵列分析鉴定HBx差异调控的lncRNAs。采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织和HCC细胞中NEAT1的表达,MTT法测定细胞增殖,Transwell分析细胞迁移和侵袭能力。通过功能获得和功能丧失试验确定NEAT1/miR-128-3p在HCC细胞迁移和侵袭中的作用。结果微阵列分析显示,NEAT1在稳定转染HBx基因的HepG2细胞上调。NEAT1与HBx/HBV相关,并在体外和体内HCC中上调。临床病理分析表明,NEAT1与肝血管浸润、不良肿瘤分化和HBV感染显著相关(P<0.05),并且NEAT1在HCC组织中过表达与患者预后不良相关(P<0.05)。亚组生存分析表明,HBV阴性HCC患者的预后较好(P<0.05),而HBV+/NEAT1+亚组患者的预后较差(P<0.05)。体外试验证实,NEAT1过表达显著促进HepG2增殖(P<0.05),并增强细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);NEAT1敲除显著抑制Hep3B增殖(P<0.05),并降低细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因试验证实NEAT1靶向miR-128-3p,且miR-128-3p在很大程度上逆转NEAT1对HCC细胞迁移和侵袭能力的作用。结论 NEAT1通过竞争结合miR-128-3p作为ceRNA,促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微RNA 18与B细胞易位基因2在肝癌细胞中差异表达相关性的研究

目的 研究微RNA 18(miR-18)对肝癌细胞HepG2基因表达谱的影响,预测其靶基因,初步探讨miR-18与抗增殖基因B细胞易位基因2(BTG2)两者在肝癌发生过程中差异表达的相关性.方法 利用基因表达谱芯片技术筛选HepG2的微RNA差异表达谱,应用生物信息学方法预测表达明显上调的miR-18的靶基因,初步筛选出直接调控的靶基因为抗增殖基因BTG2;应用RT-PCR和Northern blot法分析BTG2正常与肝癌组织中的表达情况.结果 生物信息学分析结果显示miR-18分子调控的下游靶基因有609个,涉及细胞增殖、分化和凋亡,转录调节等众多生理和病理过程;抗增殖基因BTG2在肝癌组织和细胞中呈明显低表达.结论 miR-18在肝癌细胞中表达明显上调,并可能负性调控抗增殖基因BTG2在肝癌细胞中的表达,两者共同在肝癌细胞增殖方面发挥着重要作用.     

miR-378靶向胰岛素样生长因子1类受体抑制肝癌细胞生长

目的 探讨miR-378对肝癌细胞生长增殖的影响及其机制. 方法 用miR-378过表达慢病毒感染肝癌细胞株HepG2和稳定表达HBV的肝癌细胞株HepG2.2.15,采用四甲基偶氮唑盐和克隆形成实验研究其在肝癌发生和发展中的作用.生物信息学方法预测miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验验证靶基因,并用实时定量PCR方法和Western blot方法研究上调miR-378表达对其靶基因表达的影响,分析miR-378在肝癌中作用的机制.采用SPSS13.0软件进行统计分析,两组间比较采用t检验. 结果 与空载体感染组比较,miR-378过表达慢病毒感染组肝癌细胞的增殖活性降低和克隆形成减少,差异有统计学意义(P＜ 0.01或P＜ 0.05).用生物信息学方法预测胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)为miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验结果显示,与对照组比,miR-378与IGF1R 3 '-UTR共转染组荧光酶活性下降了41.8％,差异有统计学意义(P＜0.01).上调肝癌细胞中miR-378表达后,IGF1R mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),而IGF1R蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 miR-378可抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成,起抑癌基因的作用,其作用是通过抑制其下游靶基因IGF1R发挥的.HBV导致的miR-378下调表达可能是HBV相关性肝癌发生和发展的分子机制之一.     

长链非编码RNA ASB16-AS1调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景多种长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNAs)在胃癌(gastriccancer,GC)进展中被证实发挥抑癌或促癌作用.但lncRNAs数量众多,仍有多种lncRNAs在GC进展中的作用并不明确.因此,筛选具有影响GC细胞增殖、迁移和侵袭的lnc RNAs对GC防治十分必要.目的探讨Lnc RNA ASB16-AS1调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, RTq PCR)和westernblot检测人胃黏膜细胞GES-1、GC细胞HGC-27、AGS、NUGC-4中ASB16-AS1、mi R-670-3p和ATXN7L3的表达水平.将HGC-27细胞分为si-NC、si-ASB16-AS1、mi R-NC、mi R-670-3p、siATXN7L3、si-ASB16-AS1+anti-mi R-NC、si-ASB16-AS1+anti-mi R-670-3p、si-ASB16-AS1+pc DNA-NC、si-ASB16-AS1+pc DNA-ATXN7L3组.采用细胞计数试剂盒、transwell实验分别测定细胞活力、迁移侵袭能力;双荧光素酶报告实验、RT-q PCR、western blot确定ASB16-AS1与mi R-670-3p、mi R-670-3p与ATXN7L3之间的相互作用.结果 GC细胞中ASB16-AS1、ATXN7L3呈高表达,mi R-670-3p呈低表达(P 0.05).抑制ASB16-AS1表达,或过表达mi R-670-3p,或抑制ATXN7L3表达后, HGC-27细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著降低(P0.05).ASB16-AS1靶向负调控mi R-670-3p表达.mi R-670-3p靶向负调控ATXN7L3表达.抑制mi R-670-3p表达部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P0.05).过表达ATXN7L3部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P 0.05).结论抑制ASB16-AS1通过调控mi R-670-3p/ATXN7L3轴抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.     

Notch1基因在调控人肝癌细胞HepG2侵袭转移中的作用

目的：探讨Notch1基因在调控人肝癌细胞HepG2侵袭转移中的作用。方法将Notch1细胞内段（ pc-NICD）、干扰RNA和pEGF-C1空载体转入到HepG2细胞中,筛选稳定表达的细胞,采用荧光显微镜、RT-PCR及Western blot检测Notch1 mRNA及蛋白;采用Transwell迁移及Matrigel侵袭实验鉴定HepG2细胞侵袭、迁移能力。结果上调Notch1受体表达,可使肝癌细胞HepG2迁移侵袭能力增强;反之,下调Notch1受体表达时,细胞迁移侵袭能力减弱（P均＜0．05）。结论 Notch1基因对肝癌细胞HepG2的侵袭、转移具有重要作用。     

MiR-122通过靶向SIRT1抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的?探讨微小RNA-122（microRNA-122, miR-122）通过靶向沉默信息调节因子1（silent information regulator 1, SIRT1）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法?用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法检测肝癌组织和细胞中miR-122和SIRT1 mRNA表达水平；用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析并验证miR-122和SIRT1靶向关系。培养肝癌细胞HepG2，将其分为空白对照组（control组）、miR-122过表达阴性对照组（miR-NC mimic组）、miR-122过表达组（miR-122 mimic组）、miR-122过表达和SIRT1过表达阴性对照组（miR-122 mimic+pcDNA组）、miR-122过表达和SIRT1过表达组（miR-122 mimic+pcDNA-SIRT1组）。用细胞计数试剂（cell counting kit-8, CCK-8）和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷分析各组细胞增殖情况；划痕愈合实验和Transwell实验分析各组细胞迁移和侵袭能力；用Western blot法分析各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白p53、细胞周期蛋白D1、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白及SIRT1蛋白表达水平。结果?MiR-122表达水平在肝癌组织和细胞中下调，SIRT1 mRNA表达水平在肝癌组织和细胞中上调（P＜0.05）。MiR-122负靶向调控SIRT1表达（P＜0.05）。过表达miR-122抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭，降低SIRT1、细胞周期蛋白D1、N-钙粘蛋白和波形蛋白蛋白水平，升高p53和E-钙粘蛋白蛋白水平（P＜0.05）。然而，SIRT1过表达可部分逆转过表达miR-122对HepG2细胞的作用（P＜0.05）。结论?MiR-122通过负靶向调控SIRT1抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

MicroRNA-21在胰腺癌细胞增殖和迁移中作用的研究

背景:大量研究表明microRNAs与肿瘤的发生、发展密切相关。MiR-21为最为常见的致癌性microRNAs分子之一,其对胰腺癌细胞增殖、迁移的具体作用及其机制尚未完全阐明。目的:探讨miR-21对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其具体分子机制。方法:以PANC-1和MIA PaCa-2细胞为研究对象,通过转染慢病毒表达载体分别构建miR-21过表达和敲低的稳转株,以qRT-PCR法验证转染效率。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测Spry2 mRNA和蛋白表达,萤光素酶报告实验检测miR-21对Spry2的调控作用。结果:Mi R-21过表达可明显促进PANC-1细胞增殖和迁移(P 0. 05),miR-21表达下调可明显降低MIA PaCa-2细胞增殖和迁移(P 0. 05)。与对照组相比,miR-21表达上调可明显降低Spry2 m RNA和蛋白表达(P 0. 05),而敲低mi R-21表达可明显升高Spry2 mRNA和蛋白表达(P 0. 05)。上调miR-21表达可抑制含野生型Spry2 3’-UTR序列质粒的萤光素酶活性(P 0. 05),下调miR-21表达则增强萤光素酶活性(P 0. 05)。Spry2可逆转mi R-21介导的细胞增殖和迁移(P 0. 05)。结论:MiR-21能通过靶向调节Spry2的表达而影响胰腺癌细胞的生物学功能。     

miR-1266靶向DAB2IP调控肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-1266对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法选取西安市第八医院2018年1月至2018年10月收治的40例肝癌患者,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌组织中miR-1266和DAB2IP的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-1266潜在靶基因DAB2IP,双荧光素酶实验进行验证;利用脂质体转染技术向在肝癌HepG2细胞中转染miR-1266 mimics、miR-1266 mimics+pcDNA-DAB2IP,qRT-PCR验证转染效率;利用Western blotting检测转染后细胞中DAB2IP蛋白表达水平;CCK-8实验和流式细胞仪分别检测转染后细胞的增殖和凋亡情况。结果 qRT-PCR结果显示,肝癌组织中miR-1266表达上调,而DAB2IP表达下调,两者表达水平呈负相关。生物信息学预测miR-1266的靶基因可能是DAB2IP,双荧光素酶报告实验显示,DAB2IP是miR-1266的靶基因。Western blotting实验结果显示,转染miR-1266 mimics显著降低了DAB2IP蛋白表达,miR-1266 mimics+pcDNA-DAB2IP共转染恢复了DAB2IP蛋白表达。CCK-8增殖实验和流式细胞仪结果显示,转染miR-1266 mimics显著促进了HepG2细胞增殖,抑制了细胞凋亡,miR-1266 mimics+pcDNA-DAB2IP共转染逆转了上述现象。结论肝癌组织中miR-1266表达上调,DAB2IP表达下调;miR-1266通过靶向下调DAB2IP表达促进肝癌细胞增殖、抑制细胞凋亡。     

微小RNA34a下调沉默信息调节因子1抑制内皮祖细胞功能的机制研究

目的分析氧化应激过程中微小RNA34a(mi R-34a)下调沉默信息调节因子1(SIRT1在内皮祖细胞功能障碍中的机制。方法本实验采用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理内皮祖细胞,通过CCK-8检测细胞的存活率;运用化学合成的方法合成mi R-34a模拟物、mi R-34a抑制物及其各自对照组转染至内皮祖细胞后,并用500μM H_2O_2刺激,用RT-PCR验证mi R-34a表达水平,利用流式细胞仪检测H_2O_2刺激mi R-34a诱导细胞凋亡情况,通过q RT-PCR方法和Western blot技术检测SIRT1中m RNA和蛋白的表达水平。结果 CCK-8检测发现,细胞存活率随着H_2O_2浓度的增加而逐渐降低,呈现浓度依赖性;与不加H_2O_2相比,加入100、200、500和800μM的H_2O_2细胞存活率分别为94%±2%、85%±2%、78%±2%和32%±1%,差异具有统计学意义(F=16. 3,P<0. 001)。H_2O_2刺激内皮祖细胞后,转染mi R-34a模拟物的表达水平高于其对照组(t=16. 0,P=0. 003),转染mi R-34a抑制物的表达水平低于其对照组(t=53. 0,P=0. 000)。通过细胞凋亡检测mi R-34a模拟物组细胞凋亡率明显升高(t=30. 4,P<0. 001),mi R-34a抑制物组细胞凋亡率明显降低(t=8. 7,P<0. 001)。q RT-PCR结果显示,mi R-34a模拟物组中的靶基因SIRT1相对表达量低于其对照组(t=87. 7,P<0. 001),mi R-34a抑制物组中的靶基因SIRT1相对表达量高于其对照组(t=125. 0,P<0. 001)。Western blot结果显示mi R-34a的模拟物与其对照组相比,SIRT1蛋白表达量明显下降(t=4. 1,P=0. 014),而mi R-34a的抑制物与其对照组相比,SIRT1蛋白表达明显增高(t=7. 1,P=0. 002)。结论在氧化应激状态下,使用mi R-34a的模拟物及抑制物可以调节mi R-34a的表达,改变SIRT1中蛋白的表达。内皮祖细胞功能障碍可能与mi R-34a水平升高及其靶蛋白SIRT1的表达下降相关。     

RhoA短发夹状双链RNA对肝癌细胞HepG2生物学行为的调控研究

[目的]探讨肝癌细胞HepG2中RhoA的表达水平,以及载体表达的短发夹状双链RNA(shRNA)特异性抑制RhoA在HepG2中的表达后,对肝癌细胞侵袭迁移和增殖能力的影响。[方法]RT-PCR和Western-blot方法检测RhoA在HepG2及L02中的表达;构建RhoA shRNA真核表达载体;脂质体法转染至高表达RhoA的HepG2细胞中;筛选得到稳定低表达RhoA的HepG2细胞株,用侵袭小室法(transwell)检测该细胞株侵袭和迁移能力的改变;并用染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记该细胞株,流式细胞仪检测细胞增殖能力的变化。[结果]HepG2中RhoA mRNA和蛋白的表达水平均显著高于正常人肝胚胎细胞系L02(两者均P0.05)。转染pshRNARhoA真核载体特异性抑制RhoA的表达后,HepG2细胞分别在侵袭实验和迁移实验中穿过微孔膜的细胞个数均远少于对照组细胞(两者均P0.05),增殖能力也明显减弱(P0.05)。[结论]抑制肝癌细胞HepG2中RhoA基因的表达能降低细胞的侵袭迁移和增殖能力,部分逆转肝癌细胞的恶性表型,为进一步研究肝癌侵袭转移和增殖机制提供了实验基础。     

miR-567靶向TRPM8调控结直肠癌细胞增殖凋亡的分子机制

背景mi RNA在癌症中的作用日益成为研究的热点, miR-567在癌症中的研究相对较少,其在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)中的功能作用尚缺乏参考.目的研究mi R-567对CRC细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法运用qRT-PCR法检测CRC细胞SW480、SW1116、HT29和正常结直黏膜上皮细胞NCM460中miR-567、瞬时受体电位8(transient receptor potential melastatin8,TRPM8)的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、m i R-567组(转染m i R-567m i m i c s)、s i-N C组(转染si-NC)、si-TRPM8组(转染si-TRPM8)、mi R-567+pcDNA组(共转染miR-567和pcDNA)、miR-567+pcDNA-TRPM8组(共转染miR-567和pcDNATRPM8),用脂质体法转染至SW480细胞.MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡; Western blot检测细胞中TRPM8、CyclinD1、p21、p23、Bcl-2、Bax、Cleaved-capase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果与正常结直黏膜上皮细胞NCM460相比, CRC细胞中miR-567的表达明显降低,TRPM8的表达明显升高;过表达miR-567或抑制TRPM8均可抑制SW480细胞的增殖,促进其凋亡; miR-567可抑制野生型TRPM8细胞的荧光活性,并负向调控TRPM8的表达;过表达TRPM8逆转了过表达miR-567对SW480细胞的增殖抑制和凋亡促进作用.结论mi R-567可抑制CRC细胞的增殖,促进凋亡,其机制与靶向TRPM8有关,将可为CRC的预防和治疗提供新方向.     

miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的调控作用

背景miR-145-3p在头颈癌、肺癌和胃癌等肿瘤可发挥抑癌的作用,而其在肝癌中的表达和作用并不清楚.目的探讨miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法用RT-q PCR法检测肝癌组织、癌旁组织、肝细胞株(Hep3B、Huh-7、Hep G2和SMMC-7721)与正常肝细胞株L-02中miR-145-3p的表达水平;将miR-145-3pmimic或miR-145-3pinhibitor转入Hep3B细胞,用CCK-8法、流式细胞术、TUNEL法和Westernblot法分别检测细胞活力、细胞周期、细胞凋亡和4型黏蛋白(mucin4, MUC4)表达.用荧光素酶报告基因实验鉴定miR-145-3p的靶基因.将pc DNA-MUC4转入已转染miR-145-3p mimic的细胞,用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力与细胞凋亡.结果miR-145-3p在肝癌组织和细胞中呈低表达.过表达miR-145-3p能抑制细胞增值和G0/G1期到S期转换,促进凋亡和降低MUC4表达;而敲减miR-145-3p则作用相反. MUC4是miR-145-3p的靶基因.过表达MUC4能逆转miR-145-3p mimic对细胞存活的抑制作用.结论miR-145-3p在肝癌低表达,且其表达与T分期呈负相关.过表达miR-145-3p可抑制肝癌细胞存活与生长,而敲减miR-145-3p能促进肝癌细胞存活与生长.     

miR-509-3p及XIAP表达与肝癌细胞增殖侵袭能力影响

目的了解微小RNA(micro RNA,miR)miR-509-3p和XIAP表达对肝癌细胞增殖侵袭能力的影响及其作用机制。方法应用实时定量PCR(RT-PCR)检测107例肝癌患者肝癌组织和癌旁组织中miR-509-3p和XIAP表达,利用细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察转染miR-509-3p类似物和抑制剂的HepG2细胞、RNA干扰XIAP表达的HepG2细胞的增殖和侵袭能力。结果肝癌组织miR-509-3p与XIAP的相对表达量分别为0.415±0.098、1.657±0.147,癌旁组织miR-509-3p与XIAP的相对表达量分别为1.127±0.126、0.425±0.113,癌组织中miR-509-3p相对表达量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(t=3.257,P=0.002),而XIAP的相对表达量显著偏高(t=4.201,P=0.000)。肝癌组织miR-509-3p与XIAP mRNA表达水平呈负相关(r=0.218,P=0.046)。与对照组相比,转染miR-509-3p类似物48、72、96及120 h时,HepG2细胞增殖率明显偏低,差异有统计学意义(均P0.05);与对照组相比,转染miR-509-3p抑制剂48 h后HepG2细胞增殖明显偏高(P均0.05),与对照组相比,转染miR-509-3p类似物后24 h HepG2细胞侵袭数目明显较低,分别为96.32±0.52、51.47±0.45,差异有统计学意义(t=2.263,P=0.021);与对照组相比,转染miR-509-3p抑制剂后24 h HepG2细胞侵袭数目明显较高,分别为94.65±0.42、120.14±0.45,差异有统计学意义(t=2.463,P=0.013)。结论 miR-509-3p与XIAP的表达与肝癌细胞的增殖与侵袭能力有关,miR-509-3p表达可能通过影响XIAP表达而发挥调节肝癌细胞增殖和侵袭能力的作用。     

MicroRNA-181b诱导血管内皮细胞衰老和功能异常的机制研究

目的研究micro RNA-181b（mi R-181b）和胰岛素样生长因子1受体（Insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R）参与血管内皮细胞衰老和血管新生的调节机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,传代培养计算细胞群体倍增水平（Population doublings,PDL）,将PDL≤8 HUVECs定义为年轻细胞,PDL≥44 HUVECs定义为衰老细胞,并检测mi R-181b和IGF1R在年轻（PDL8）和年老（PDL44）HUVECs中的表达。PDL8 HUVECs过表达或抑制mi R-181b后,分别用MTS比色法、划痕（Wound healing）和成管（Tube formation）实验检测内皮细胞的增殖、迁移、成管等血管新生能力。采用双荧光素酶报告系统法检测mi R-181b对IGF1R转录后水平的调控。此外,给予缺氧刺激,观察缺氧应激条件下mi R-181b对IGF1R表达的调控作用。结果过表达mi R-181b可抑制PDL8内皮细胞的增殖能力22%（P〈0.001）、迁移能力23%（P〈0.001）,对成管能力没有显著影响（P〉0.05）。与PDL8HUVECs比较,mi R-181b在PDL44衰老内皮细胞中上调64%（P=0.046）,IGF1R的m RNA和蛋白水平分别下调39%和45%（P=0.004,P=0.014）。荧光素酶活性实验显示mi R-181b可与IGF1R的3’UTR结合,但过表达mi R-181b对IGF1R的表达水平无显著影响（P〉0.05）。在缺氧应激条件下,mi R-181b可上调IGF1R的表达（P=0.005）。结论 Mi R-181b抑制血管内皮细胞增殖、迁移等血管新生能力,这一作用与mi R-181b在缺氧应激条件下上调血管发育相关基因IGF1R的表达相关,其机制仍需进一步研究。     

lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

新型促癌基因LSM11通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖*

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染促进肝癌细胞增殖的潜在机制。方法 取肝癌细胞HepG2和Huh7细胞,转染HBV或HCV。采用转录组水平高通量测序和小干扰核糖核酸遗传学筛选,鉴定HBV或HCV感染后影响细胞增殖水平的关键基因。过表达或敲低上述基因后,采用高通量测序和通路富集分析基因功能。结果 在转染HBV后,肝癌细胞HepG2和Huh7增殖水平分别为(1.01±0.09)和(0.97±0.09),显著高于转染前【分别为(0.61±0.12)和(0.60±0.12),P<0.05];转染HCV后,肝癌细胞HepG2和Huh7增殖活性分别为(1.10±0.09)和(1.03±0.08),显著高于转染前【分别为(0.65±0.13)和(0.52±0.11),P<0.05】;敲低LSM11后,肝癌细胞HepG2和Huh7增殖活性分别为(0.39±0.06)和(0.34±0.04),显著低于未敲低前【分别为(0.49±0.02)和(0.50±0.06),P<0.05】;过表达LSM11,肝癌细胞HepG2和Huh7增殖活性分别为(1.04±0.07)和(1.02±0.08),显著高于未过表达【分别为(0.54±0.11)和(0.50±0.12),P<0.05】;敲低LSM11或过表达LSM11后,进行高通量测序并将受调控的基因进行通路富集分析,发现LSM11可以显著影响Wnt/β-catenin通路的产物表达;在敲低LSM11后,HepG2和Huh7细胞β-catenin活性分别为(1235±69)和(884±95),显著低于未敲低前【分别为(23645±256)和(19482±119),P<0.05】;在过表达LSM11后,HepG2和Huh7细胞β-catenin活性分别为(43999±2345)和(39572±3912),显著高于未过表达【分别为(25281±281)和(2004±145),P<0.05】;经免疫共沉淀检测发现LSM11与β-catenin存在相互作用。结论 肝癌细胞感染HBV或HCV后,LSM11表达水平升高,而LSM11与Wnt/β-catenin信号通路中关键转录因子β-catenin结合并增强了β-catenin的功能活性。     

微小RNA miR-199a／a^＊模拟物转染肝癌细胞HepG2中Met原癌基因的表达

目的探讨在肝癌细胞系HepG2中,Met是否为miR-199a／a^＊的靶基因。方法将miR-199a／a^＊的模拟物及阴性对照物分别转染至HepG2细胞中,转染后48h及72h分别提取RNA及蛋白行RT—PCR及Western Blot检测Met的表达。结果与阴性对照相比,转染Up-miR-199a^＊组的MetmRNA（P〈0．05）和蛋白（P〈0．001）表达水平均显著下调;而Up—miR-199a组与阴性对照组相比无统计学差异。结论肝癌细胞HepG2中miR-199a^＊负调控Met的mRNA及蛋白表达。