新型二维高效液相色谱测定人血清伏立康唑浓度方法的建立与应用

目的建立全自动二维高效色谱法(2D-HPLC)测定血清中伏立康唑的浓度并应用于临床。方法第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6mm×25mm,5μm),流动相为20mmol/L磷酸铵∶乙腈∶甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶10∶50(V∶V∶V∶V),流速1.0mL/min;中间柱为ASTON SH柱(3mm×10mm,5μm),辅助流动相为纯水。样品由一维色谱柱萃取,经中间柱捕获并转移至第二维色谱柱分析,检测波长256nm,柱温40℃,进样量200μL。结果伏立康唑在0.28～22.56μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限为0.28μg/mL,方法回收率为99.01%～104.62%,提取回收率为85.81%～89.82%,日内、日间精密度RSD均小于9%。结论该方法操作简单、准确、灵敏,符合血清样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定。     

RP-HPLC法测定人血浆中替考拉宁的浓度

目的 建立测定人血浆替考拉宁的HPLC法,供血药浓度监测用,指导临床安全合理用药.方法 色谱柱为Wondasil C18柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05 mol/L KH2 PO4溶液(体积比28∶72,pH=3.2),检测波长为240 nm,流速为1.0 mL/min;柱温为25℃....     

高效液相色谱法测定替考拉宁血药浓度

目的:建立高效液相色谱（HPLC）法检测人血浆中替考拉宁浓度的方法。方法:采用Waters System-C18色谱柱,以乙腈:0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液（25:75,V/V,H3PO4调pH值为2.53）为流动相,柱温40 ℃,流速1.2 mL/min;进样量20 L;检测波长215nm。结果:本方法得到标准曲线方程为y = 0.053x - 0.021（R2= 0.998）,人血浆中替考拉宁浓度在3.125～100 mg/L范围内具有良好的线性关系。回收率大于92%,精密度和稳定性的RSD均小于8%。结论:本研究建立的替考拉宁血药浓度HPLC测定法专属性好、操作简单、准确度高、重现性好、回收率和灵敏度高,适用于生物样本分析研究,可满足替考拉宁药动学研究的需要。     

克伦特罗和马布特罗在替考拉宁手性柱上的对映体分离

目的研究自制的替考拉宁手性色谱柱上对克伦特罗和马布特罗进行对映体分离,探讨其手性识别机理.方法在流动相组成的甲醇/乙醇/冰醋酸/三乙胺=50/50/0.05/0.05(V/V/V/V),流速1.0 mL/min,柱温25℃.应用了极性流动相中不同浓度的酸碱添加剂,不同浓度的乙醇,柱温和流速对克伦特罗和马布特罗对映体进行分离.结果在上述条件下,克伦特罗对映体和马布特罗对映体的选择因子分别达到1.37和1.51.结论自制的替考拉宁手性柱对克伦特罗和马布特罗的对映体具有一定的分离效果.     

高效液相色谱/质谱/质谱联用法测定人血浆中贝那普利及贝那普利拉浓度

目的建立二级质谱与高效液相色谱联用的方法测定人血浆中贝那普利及其活性代谢产物贝那普利拉浓度的新方法。方法色谱柱为ZorbaxC18(5μm,4.6mm×150mm)。流动相为乙腈-10mmol/L乙酸胺(含0.08%NH3)(70∶30,v/v),流速1mL/min,柱后分流4∶1。样品经乙腈沉淀蛋白后直接进样。用选择离子分别对贝那普利、贝那普利拉和内标依拉普利进行检测。结果测定贝那普利及贝那普利拉的线性范围均为0.5～600μg/L,最低检测浓度为0.1μg/L。日内精密度<2.6%,日间精密度<3.5%。方法回收率范围为100.9%～110.2%。结论本方法精密、准确,适用于贝那普利及贝那普利拉的药物动力学及生物等效性研究。     

HPLC-UV检测法及其在比格犬血浆非布司他浓度检测中的应用

目的建立测定比格犬血浆非布司他浓度的高效液相色谱紫外(HPLC-UV)检测法。方法采用冰醋酸和乙腈对500μL比格犬血浆进行蛋白沉淀,离心后取上清液20μL进样分析。采用反相C18液相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)进行检测;流动相为甲醇-水(90∶10,V/V),流速1.0 mL/min,紫外检测波长为314nm。结果非布司他色谱峰的保留时间为4.50min,标准曲线在0.27～16.32μg/mL浓度范围内线性关系良好,平均相关系数(r)=0.999 5±0.002 0。日内和日间的精密度均不超过7.0%;准确度分别为96.7%～104.2%、97.7%～105.4%。结论 HPLC-UV检测法简单、准确、可靠,可用于非布司他药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中乌苯美司浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中乌苯美司浓度。方法采用API3000型HPLC-MS/MS液质联用系统,Ultimate C18分析柱(50mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-甲酸(70∶30∶0.05,V/V/V),流速为0.2mL/min,格拉司琼作为内标。样品经过固相萃取后浓缩进样,多反应离子检测模式,正离子扫描,离子源为ESI源。结果检测乌苯美司的线性范围为0.4～4000ng/mL,最低定量限为0.4ng/mL。批内精密度和批间精密度均小于6%。结论本法具有快速简便、灵敏准确的特点,可满足乌苯美司临床药物浓度测定的需要。     

LC-MS法测定比格犬血浆中长春氟宁浓度及其药代动力学

目的:建立测定比格犬血浆中长春氟宁浓度的LC-MS方法,用于研究其在犬体内的药代动力学。方法:血浆样品中加入内标非那雄胺,0.25 mol/L NaOH碱化后用乙酸乙酯提取,取上清真空挥干,流动相150μL溶解,取40μL进行LC-MS测定。色谱柱为Shimadzu VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm ID,5μm);流动相为0.01 mol/L乙酸铵水溶液-甲醇(20∶80),流速为1 mL/min。ESI选择正离子检测:长春氟宁,m/z:817.3;非那雄胺,m/z:373.2。结果:线性范围为0.025~12.5μg/mL,日内和日间的精密度均小于7.8%,方法回收率在97.0%~100.2%之间,提取回收率大于80%。结论:该方法选择性好,灵敏度高,操作简便,符合生物样品的测定要求,可应用于长春氟宁在犬体内的药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定胃痛宁片中甘草酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定胃痛宁片中甘草酸的含量。方法胃痛宁片中甘草酸通过流动相超声提取,并在Kromasil ODS 5μm,4.6 mm×150 mm色谱柱上,以流动相:乙腈-0.01 mol/L磷酸溶液(38∶62)进行分离,流速1 mL/min,250 nm波长检测。结果本法简便、准确、精密度高、重现性好,浓度线性范围0.112 9~0.263 5 mg/mL(r=0.999 7);平均回收率在99.0%,RSD为1.3%。结论该法可作为胃痛宁片中甘草酸质量控制方法。      

高效液相色谱法测定安徽产木通药材中3种有效成分含量

目的 测定安徽产木通药材中木通苯乙醇苷B、齐墩果酸和常春藤皂苷元的含量,考察安徽产木通药用价值.方法 采用高效液相色谱法,木通苯乙醇苷B的色谱测定条件为:Alltima C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相是甲醇-水-磷酸(35∶65∶0.05),流速1.0 mL/min,检测波长330 nm,柱温35℃;齐墩果酸和常春藤皂苷元的色谱测定条件为:Alltima C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相是乙腈-水(65∶35),流速1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温25℃.结果 安徽宁国、明光产木通药材中木通苯乙醇苷B、齐墩果酸和常春藤皂苷元含量高于市售木通.结论 安徽宁国、明光产木通药材质量较好,可进一步开发利用.     

高效液相色谱法测定复方萘甲唑啉滴眼液中盐酸萘甲唑啉和盐酸苯海拉明的含量

目的建立HPLC测定复方萘甲唑啉滴眼液中盐酸萘甲唑啉和盐酸苯海拉明含量的检测方法。方法采用反相液相色谱和紫外检测(检测波长λ=230nm),色谱柱为HypersilODS柱(250mm×4. 6mm, 5μm);流动相是0. 05mol/L硫酸铵(硫酸液调pH至5. 0)∶甲醇(V∶V=30∶70)。结果当流动相的流速为0. 5mL/min时,盐酸萘甲唑啉和盐酸苯海拉明的流出时间分别为5. 5min和8. 0min,线性范围分别是3. 240 ~8. 790μg/mL、12. 89 ~27. 62μg/mL;平均回收率分别为99. 40%、99 82%;RSD分别为1. 03%、1. 33% (n=9)。结论本法简便,准确和选择性好,可用于复方萘甲唑啉滴眼液的质量控制。     

土鳖虫超微粉体中尿嘧啶、次黄嘌呤的含量测定

目的建立HPLC同时测定土鳖虫超微粉体中核苷类成分尿嘧啶、次黄嘌呤含量的方法。方法色谱柱为Hypersil C18 BDS柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.05 mol/L磷酸氢二铵水溶液,检测波长为254 nm,流速为0.4 mL/min,柱温为25℃。结果尿嘧啶、次黄嘌呤分别在0.044～0.22μg、0.042～0.21μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为95.93%、97.32%,RSD分别为2.9%、3.0%。结论建立的方法简单、重复性好、准确可靠,可用于土鳖虫中尿嘧啶、次黄嘌呤的含量测定。     

HPLC法测定伤痛宁胶囊中延胡索乙素

目的 建立用高效液相色谱法测定伤痛宁胶囊中延胡索乙素的方法。方法 采用高效液相色谱法。Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-水-三乙胺(65∶35∶05)为流动相;检测波长为280 nm;体积流量为0.80 mL/min;柱温为室温;进样量为20μL。结果 延胡索乙素在0.250~8.00 μg/mL线性良好,平均回收率为100.24%,RSD为 2.43%。结论 本方法操作简便,准确,灵敏,为伤痛宁胶囊的质量控制建立了方法。     

反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统分析维生素D3软胶囊(油性基质)

 目的   开发维生素D3软胶囊(油性基质)在反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)系统中的含量测定和杂质分析方法。方法   RP-HPLC系统的色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长265 nm,柱温25 ℃,流速1 mL/min。以乙腈混合不同比例的甲醇、水、乙醇为流动相,探究这4种流动相组分对维生素D3及其3种同分异构体在C18柱上保留行为的影响。根据保留行为研究选择合适的流动相进行含量测定和杂质分析。结果   以纯乙腈为流动相时,含量测定方法回收率仅为80.55%~84.37%;而以V(乙腈)∶V(水)=90∶10为流动相时回收率显著改善(98.07%~103.23%,RSD<1.69%),同时可改善峰形,适用于含量分析。该方法呈现良好的线性［(0.52~5.2)×10-4 μmol/L,R2>0.999］和精密度(RSD<2.32%)。以V(乙腈)∶V(水)=95∶5为流动相能够排除空白油性基质峰对杂质峰的干扰,可用于杂质分析。结论   本方法能在RP-HPLC系统中简单而准确地进行维生素D3软胶囊(油性基质)的含量测定和杂质分析。     

高效液相色谱法测定镇咳宁糖浆中盐酸麻黄碱的含量

目的:用高效液相色谱法(HPLC)测定镇咳宁糖浆中盐酸麻黄碱含量.方法:色谱条件:C18(5μm,4.6mm×150mm),流动相为乙腈∶0.02mol/L磷酸二氢钾(含0.1%三乙胺)=4∶100,流速1mL/min,检测波长210nm,室温测定,结果:盐酸麻黄碱在10～90μg /mL范围内线性良好,r =0.9989,RSD=2.58%.结论:本实验方法简便,结果准确.     

固相萃取-反相HPLC荧光法快速测定血浆中氟罗沙星

目的建立固相萃取-反相HPLC荧光法快速测定人血浆中氟罗沙星的方法。方法采用C18固相萃取小柱萃取血浆中的氟罗沙星。色谱柱为ODS-BP柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为含1.31 g/L L-异亮氨酸和0.80 g/LCuSO4的水溶液-甲醇(80∶20,V∶V),激发波长为280 nm,发射波长为504 nm,流速为0.8 ml/min。结果该方法在0.4-20μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 3),最小检测限50 ng/ml,萃取回收率和方法回收率分别为89.52%和100.45%,高、中、低3个浓度的日内RSD为3.2%,日间RSD为1.5%。结论该法血样处理简单,干扰小,灵敏度高,精密度好,可用于该药物体内监测的快速测定。     

高效液相色谱法测定女贞子中齐墩果酸的含量

目的:建立高效液相色谱外标法(HPLC)测定女贞子中齐墩果酸含量的方法。方法:采用安捷伦1100色谱系统,色谱柱为Phenomenix Luna C18柱(4.6×250mm,5μm),流动相为甲醇∶水∶冰乙酸(265∶35∶0.1,V/V),流速为0.8ml/min,检测波长为210nm,进样量20μl。结果:齐墩果酸在5～60μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率100.64%,RSD1.46%。结论:该方法简便、快速、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为齐墩果酸的定量分析方法。     

高效液相色谱法测定血清叶黄素和玉米黄素

目的:建立C30-高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)内标法测定血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素。方法:应用Develosil C30-UG色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈∶甲醇(体积比60∶40),流动相B为甲基叔丁基醚,梯度洗脱。流速1 mL/min,检测波长450 nm,进样量20μL,柱温25℃。内标物为全反式-β-阿扑-8'-胡萝卜醛。结果:血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的分离效果良好,保留时间分别为9.9min、10.3 min和21.2 min,日内相对标准差分别为3.22%、3.81%和1.60%。血清叶黄素、β-胡萝卜素在0.012 5～12.5 mg/L(r=0.999 5、r=0.999 7),玉米黄素在0.005～5.0 mg/L(r=1)范围内呈良好线性关系。58名正常老年人(年龄50岁)血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的平均浓度分别为0.410μmol/L、0.054μmol/L和0.128μmol/L。结论:该C30-HPLC内标法是定量分析血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的可靠方法之一。     

HPLC法测定不同产地大黄中番泻苷A和番泻苷B的含量

目的采用HPLC法测定大黄中番泻苷A和番泻苷B的含量。方法色谱柱E1718897 Hypersil C18(4.6mm×250mm,25μm),流动相为四氢呋喃-水-醋酸(15∶85∶1.5),流速为0.8mL/min。结果番泻苷A的含量在0.176～1.76g/L范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),番泻苷B的含量在0.12～1.2g/L范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均加样回收率番泻苷A为100.44%(RSD=2.44%),番泻苷B为101.37%(RSD=2.28%)。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于大黄药材中番泻苷A、B含量的测定。     

高效液相色谱法测定星翳明片中丹皮酚含量

目的 用高效液相色谱法测定星翳明片中丹皮酚含量.方法 采用Kromasil C18(200mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇-水(V∶V=58∶42)为流动相,检测波长274nm,流速1.0mL/min. 结果线性范围0.4896～2.448μg(r=0.9999,n=5),平均回收率99.1 %,RSD为1.2%(n=6).结论 本法适合测定星翳明片中丹皮酚的含量.