脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ基因表达规律的研究

目的：观察脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白（CaM）、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）基因表达规律,揭示脾气虚证发生的内在机制。方法 ：将48只大鼠随机分为正常对照组和脾气虚7d、14d、21d组4组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用复合法（苦寒破气法、力竭法及饥饱失常法）建立脾气虚证大鼠模型,观测各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日体质量增加量、负重游泳耐力时间和基础肛温;同时,采用实时荧光定量PCR技术检测小肠组织钙调蛋白信号通路中CaM、CaMKⅡ基因表达水平的变化。结果：与正常对照组对比,脾气虚模型7d、14d、21d组大鼠平均每日体质量增加量、负重游泳耐力和基础肛温降低,脾虚证宏观证候积分升高,小肠组织CaM、CaMKⅡ基因相对表达量显著升高,且以脾气虚模型21 d组变化显著（P〈0.05）。结论：脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中CaM、CaMKⅡ基因表达水平异常增高。     

三七总皂甙对缺血性脑损伤保护作用的研究进展

三七总皂甙对缺血性脑损伤保护作用的研究进展韩金安，胡威夷三七总皂甙（ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ．ＰＮＳ）是从中药三七的干燥根茎中提取的主要有效成分之一。它作用广泛，对栓塞性疾病具有较好的治疗作用（１）。近年来发现它对缺血、缺氧性脑损伤具有一定的...     

丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白及心功能的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白(cardiac muscle, CaM)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependentproteinkinase-Ⅱ, CaMKⅡ)mRNA 表达和心功能的影响。方法100只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、丹参酮ⅡA组。模型组、丹参酮ⅡA组采用结扎左侧冠状动脉前降支45 min再灌注45 min,并反复3次阻断与再灌注的方法建立大鼠心肌梗死模型。丹参酮ⅡA组尾静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液10 mg/kg,假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。连续给药7 d后断头处死,取心脏用Langendorff离体心脏灌流器灌流离体心脏,测定各组大鼠给药前后离体心脏左室最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)、心肌收缩张力、心率等心功能指标;TTC染色观察心肌梗死面积;检测缺血区心肌组织CaM及CaMKII mRNA表达。结果与模型组比较,丹参酮ⅡA 组 CaM mRNA[(1.29±0.19)比(2.31±0.21)]及 CaMKⅡ mRNA[(1.10±0.07)比(2.13±0.18)]表达下调(P＜0.05),心肌梗死范围[(25.12±0.43)%比(35.15±0.64)%]缩小(P＜0.05),心肌收缩张力[(2.03±0.14)g比(1.06±0.12)g]及±LVdp/dtmax[(4701.2±135.3)mmHg/s比(3214.7±110.2)mmHg/s;(2518.7±65.4)mmHg/s比(1960.3±62.5)mmHg/s]增高(P＜0.05)。结论丹参酮ⅡA可下调急性心肌梗死模型大鼠心肌细胞CaM、CaMKⅡ mRNA表达,对心肌缺血有保护作用。     

大鼠肢体缺血-再灌注损伤早期骨骼肌钙调蛋白表达的研究

目的:探讨大鼠肢体缺血-再灌注损伤骨骼肌钙调蛋白表达的变化。方法:30只SD大鼠随机分为对照组(control组)、缺血-再灌注组(IR组)。对照组所有大鼠用橡皮筋松弛环绕右后肢不阻断血流;IR组按张连元所报道的方法复制SD大鼠右后肢缺血-再灌注模型。各组动物于相应时间点在右后肢相应区域,切取约1000mg腓肠肌,冰盐水快速洗去血液,滤纸吸干水份,剪碎制成组织匀浆,用于RyR1和SERCA1的RT-PCR检测。结果:①骨骼肌型RyR1mRNA的RT-PCR检测结果:在肢体缺血-再灌注损伤再灌注8h内,IR组骨骼肌型RyR1mRNA在再灌注0h、2h表达上调,与对照组相比,其差异有统计学意义(P0.01),4h时有所恢复,但8h时表达下调,与对照组相比,其差异有统计学意义(P0.01)。②SERCA1mRNA的RT-PCR检测结果:对于SERCA1mRNA的表达,再灌注8h内随时间的延长其表达逐渐下降,与对照组相比,其差异均有统计学意义(P0.01)。结论:在再灌注8h内,肢体缺血-再灌注损伤骨骼肌中RyR1mRNA早期表达上调,后期表达下降,SERCA1mRNA表达随时间的延长而逐渐下降。这可能是肢体缺血-再灌注骨骼肌损伤的重要原因之一。     

三七总皂甙治疗急性重型颅脑损伤的疗效观察及护理

基础研究表明，三七总皂甙(panax notogimcng，PNS)对创伤性颅脑损伤有较好的脑保护作用，但其临床应用方面的研究报道极少。2002年5月～2004年5月，我科将PNS注射液应用于急性重型颅脑损伤的治疗，现将治疗结果和护理体会总结如下。     

刺五加钙调蛋白基因的克隆及内生真菌对其表达的影响

目的:克隆刺五加的钙调蛋白(calmodulin,CaM)基因,并分析内生真菌对其表达的影响。方法:采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加CaM基因的全长cDNA序列。通过RT-PCR法检测可显著提高刺五加皂苷含量的内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对CaM表达的影响。结果:刺五加CaM基因的cDNA全长为856 bp,开放阅读框长450 bp,编码149个氨基酸的蛋白,与人参Panax ginseng和胡萝卜Daucus carota等物种的CaM同源性均高达100%。RT-PCR的结果显示,内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量(P<0.05),最大表达量出现在菌株P109-4回接90 d时,达对照的2.96倍。结论:首次克隆并报道了刺五加CaM的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷含量的机制奠定了基础。     

小檗胺类化合物对黑色瘤细胞内钙调蛋白水平的影响

目的：研究5种小檗胺类化合物对恶性黑色瘤细胞内钙调蛋白Calmodulin(CaM)水平的影响。方法：收集不同浓度不同药物作用后的细胞，通过反复冻融法破碎细胞，并用磷酸二酯酶（PDE）法测CaM含量。结果：5种化合物均能不同程度地降低细胞内CaM的水平，IC50（μmol/L）值分别为：B0＝10．83，B2＝9．1，B4＝7．4，BB＝6．15，EBB＝1．55。结论：小檗胺衍生物降低细胞内CaM的能力大于小檗胺，其中EBB的效果最为突出。     

钙调蛋白磷酸酶通路在白藜芦醇抑制异丙肾上腺素诱导心肌肥大作用机制研究

目的:探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用,及其钙调蛋白磷酸酶(Ca N)通路的作用。方法:利用体外培养模型,以10μmol/L ISO诱导心肌细胞肥大,观察白藜芦醇的作用,并用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;鬼笔环肽染色测细胞骨架;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化,用电泳法测定Ca N的表达。:结果与正常组相比,ISO使心肌细胞蛋白含量增加43.5%,细胞体积增大73.4%,[Ca2+]i瞬变增加,Ca N表达增高。与ISO组相比,白藜芦醇(25,50μmol/L)组蛋白含量降低25.8%和26.9%,细胞体积减少15.0%和27.8%,[Ca2+]i瞬变降低,Ca N蛋白表达降低。结论:白藜芦醇可通过降低胞内[Ca2+]i瞬变和Ca N表达抑制ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大。     

钙调蛋白信号转导与脑缺血再灌注脑损伤关系的研究

脑缺血再灌注引起的脑损伤发生机制十分复杂,包括神经元细胞内钙超载、神经递质变化（主要为兴奋性氨基酸等神经递质释放增加）、自由基生成、一氧化氮（NO）大量释放、细胞酸中毒、凋亡基因激活等。这些环节互为因果,相互影响,形成恶性循环,最终导致神经元细胞不可逆性坏死。其中神经元细胞内钙超载被认为是导致脑损伤的中心环节和关键因素。     

三七总皂甙对急性有机磷农药中毒患者脏器损伤的保护作用研究

目的：三七总皂甙对急性有机磷农药中毒脏器损伤的保护作用。方法：将52例口服有机磷农药中毒患者随机分为2组,一组为常规治疗组（n=26）给予洗胃、腹能剂、阿托品及对症处理,另一组为中西药治疗组（n=26)在常规治疗组的基础上加中用药三七总皂甙（200mg/d,同时以30例健康体检者为正常对照组,观察2组治疗前和治疗后72h以及健康体检组体检时血清胆碱酯酶（CHE）、丙氨酸氨基转酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CK）、白细胞介素－6（IL－6）白细胞介素－8（IL－8）变化。结果中西药治疗组治疗后72hALT、AST、CK、LDH、TNF、IL－6、IL－8值较常规治疗组减少（P＜0．05,P＜0．01）。结论三七总皂甙对急性有机磷中毒致脏器损伤具有保护作用。     

三七总甙对NB4细胞促凝活性及诱导分化的影响

目的：研究三七总甙对NB4细胞促凝活性和组织因子表达及诱导分化作用的影响：方法：用三七总甙处理NB4细胞,测定复钙时间观察NB4细胞的促凝活性(procoagulant activity,PCA),RT—PCR检测TF—mRNA的表达;采用四唑蓝(MTT)法检测三七总甙对NB4细胞增殖抑制作用;以NBT还原实验、细胞形态学观察及流式细胞术分析研究三七总甙对NB4细胞诱导分化的影响。结果：(1)不同浓度三七总甙均可显著延长NB4细胞的复钙时间,降低NB4细胞的PCA水平,呈时间浓度依赖性,同时下调组织因子TF—mRNA的表达;(2)三七总甙可部分抑制NB4细胞的增殖;(3)三七总甙可提高NB4细胞NBT还原能力(P<0.05),细胞形态方面显示单核／巨噬细胞分化趋势。结论：三七总甙可降低NB4细胞的促凝活性及TF—mRNA的表达,诱导NB4细胞部分分化,有望作为新的抗凝药物。     

高效液相色谱-电喷雾质谱法鉴别人参、西洋参和三七的皂苷提取物

 目的采用高效液相色谱-电喷雾质谱法(HPLC/ESI-MSn)研究人参、三七和西洋参中不同皂苷提取物的组成,以期建立快速高效的鉴别方法。方法通过与人参皂苷对照品比较和对碰撞诱导解离(CID)质谱图的解析鉴定各皂苷提取物的主要成分。结果共计鉴定32种皂苷成分。通过对比,发现了各皂苷提取物中的标识性成分。结论采用高效液相色谱-电喷雾质谱法能够快速高效地鉴别人参、三七和西洋参的不同皂苷提取物,具有很高的实用价值。     

蒸制法炮制熟三七粉对皂苷含量的影响

目的 :研究蒸制法炮制熟三七粉对皂苷含量的影响。方法 :采集 10个不同产地的三七样品 ,分别制成生三七粉和熟三七粉 ,比色法测定总皂苷含量、高效液相色谱法测定 R1 ,Rg1 ,Rb1 3种单体含量 ,比较蒸制法炮制成熟三七粉对皂苷含量的影响。结果 :生三七粉经过蒸制法炮制成熟三七粉后总皂苷及 3种含量均有不同程度的降低 ,3种单体含量降低程度依次为 Rg1 >R1 >Rb1 ,Rg1 / Rb1 均有不同程度的降低。结论 :蒸制法炮制熟三七粉的过程中对皂苷成分有一定的破坏作用     

利用高效液相色谱法对蒸制三七粉中多个皂苷类成分的测定

目的：探讨利用高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定。方法：采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,建立同时分析16个三七皂苷对照品Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb3、Rd、Rg3、Rh1、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、Rg5等的方法,并对蒸制三七粉样品进行成分测定。结果：通过对蒸制三七粉样品HPLC图与混合样品的HPLC图各峰保留时间进行对比,发现样品中含有未炮制三七不含的Rg3、Rh1、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、Rg5皂苷类成分。结论：利用高效液相色谱法对蒸制三七粉成分进行分析确证其中含有提升免疫的成分,符合三七“生消熟补”的理论,对下一步该饮片指纹图谱研究奠定了基础。     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护机制研究

目的:探讨三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:SD大鼠分成假手术组,模型组,三七总皂苷组。模型组和三七总皂苷组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,三七总皂苷组在缺血前15 min和缺血后6 h分别ip三七总皂苷100 mg.g-1,模型组ip等量生理盐水。术后24 h评价神经行为学变化,测定脑梗死体积,脑组织中伊文思蓝含量及白介素-β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α),白介素-6(IL-6),白介素-8(IL-8)水平。结果:三七总皂苷可有效降低脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死体积,明显减轻脑缺血区血脑屏障破坏的程度。三七总皂苷组脑组织中细胞因子及伊文思蓝的含量较缺血再灌注组显著降低(P<0.05)。结论:三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤有显著的脑保护作用,其作用机制与降低脑缺血再灌注损伤中脑部细胞因子的表达和降低血脑屏障通透性有关。     

人参、三七提取物与牛磺酸对兔心肌缺血再灌注损伤中ET、CGRP影响的实验研究

目的：探讨人参、三七提取物与牛磺酸配伍防治心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的作用机理。方法：雄性比利时兔18只,随机分为对照组（生理盐水组）与治疗组（益气活血解毒组）各9只,均于同等条件下口服给药7d。结扎冠脉造成MIRI模型,术中动态监测心电;分别在服药前（T1）、冠状动脉结扎10min（T2）、再灌注10min（T3）取血,抗凝,测定血清内皮素（TE）、降钙素基因相关肽（CGRP）含量。结果：治疗组与对照组比较,可显著降低ET、ET／CGRP水平,CGRP水平有升高趋势。结论：人参提取物、三七提取物、牛磺酸对MIRI有良好的保护作用,其机制之一是通过降低血清中ET含量和升高血清中CGRP水平。     

Saponin Accumulation in Flower Buds of Panax notoginseng

Objective Panax notoginseng is an important Chinese medicinal plant. Saponin accumulation is higher in the flower buds than in the other parts of P. notoginseng. However, the flower bud compositions have not yet been quantified. The aim of this study is to investigate the formation and accumulation of saponins in the flower buds of P. notoginseng from different populations and at different growth years. Methods Fourteen types of P. notoginseng with different growing durations and from different areas of Wenshan County, Yunnan Province were collected. We separated P. notoginseng individually into the flower buds, stems, leaves, and roots at the places where it has the highest saponin content. An efficient high-performance liquid chromatography(HPLC) method was developed for simultaneously quantifying two active saponins, ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3, in the flower buds of P. notoginseng. The total saponin content was determined by using a quantitative vanillin-sulfuric acid colorimetric method. HPLC method was used to establish the fingerprints of 13 saponins and then quantify the composition in the whole plant of P. notoginseng. Results The saponin contents of different parts differ significantly, and the total saponin content and those of Rb1 and Rb3 do not entirely correlated. The flower buds of P. notoginseng contain 27.79% of total saponins, which is the highest saponin content in the whole plant. Fingerprint result showed that different saponins were appeared in different parts of the plant, i.e. flower buds, stems, leaves, and roots.Conclusion The saponin contents from the flower buds of P. notoginseng vary depending on the growth area and duration. The fingerprints show that the saponin contents and compositions vary depending on the part of P. notoginseng. These results are useful for the pharmacological evaluation and quality control of P. notoginseng.     

三七原人参二醇型总皂苷的琼斯氧化

三七原人参二醇型总皂苷直接用琼斯试剂氧化,得到四个人参二醇衍生物.     

三七总皂苷对脊髓损伤大鼠神经元凋亡及Nrf2、caspase-3表达的影响

目的:探究三七总皂苷(TSPN)对脊髓损伤(SCI)大鼠神经元凋亡及Nrf2、Caspase-3表达的影响。方法:采用"自制击打器"建立SCI大鼠模型,将成功构建的100只SCI大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组及实验组,每组25只。阳性对照组与实验组分别腹腔注射甲基强的松龙[30 mg/(kg·d)]与TSPN[100 mg/(kg·d)],对照组与模型组则腹腔注射等量生理盐水,连续干预14 d。采用HE染色与TUNEL法检测大鼠脊髓组织病理学变化与神经元凋亡;采用免疫组化法及Wb法检测脊髓组织Nrf2、Caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠脊髓组织Nrf2蛋白表达显著降低,且阳性对照组与实验组高于模型组,阳性对照组高于实验组;神经元凋亡率及Caspase-3蛋白表达升高,且阳性对照组与实验组低于模型组,阳性对照组低于实验组(均P0.05)。结论:TSPN可减轻SCI大鼠脊髓组织病变程度,保护神经元,其作用机制可能与下调脊髓组织Caspase-3蛋白表达,上调Nrf2蛋白表达有关。