ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测了 ORP8对DLD-1细胞细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)的总蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)水平和上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果 干扰DLD-1细胞ORP8表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高(P＜0.01),EMT相关分子标志物中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平下降,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平升高,ERK1/2蛋白的磷酸化水平也升高;相反,过表达ORP8,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,p-ERK1/2水平也降低.结论 ORP8蛋白能够抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与阻断EMT和抑制ERK1/2磷酸化有关.     

四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(Rho A)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞Rho A、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与Rho A/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。     

CIP2A在卵巢癌癌组织中的表达及其基因沉默后对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响

【摘要】目的 探讨蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子（CIP2A）在卵巢癌癌组织中的表达及其基因沉默后对肿瘤细胞侵袭、迁移能力的影响。方法 收集2015年7月～2016年7月在我院实施卵巢癌手术的患者47例卵巢癌组织为卵巢癌组,选择同期行卵巢良性病变部分切除时的5例正常卵巢组织为正常组,测定组织中CIP2A的表达水平。应用siRNA干扰卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的CIP2A表达,将细胞分为对照组和干扰组,采用MTT法检测两组细胞增殖,Transwell检测两组细胞侵袭和迁移能力,Western Blot检测E 钙黏蛋白（E cad）、基质金属蛋白MMP 2、MMP 9、转移性肿瘤抗原1（MTA1）蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,卵巢癌组CIP2A蛋白和CIP2A mRNA表达量显著升高（P＜0.05）;与对照组相比,干扰组A2780和SKOV3细胞增殖率、侵袭和迁移力显著下降（P＜0.05）,E cad的蛋白表达量显著升高（P＜0.05）,MMP 2、MMP 9和MTA1的蛋白表达量显著下降（P＜0.05）。结论 CIP2A在卵巢癌组织中具有高表达,可有效调节细胞侵袭和迁移相关蛋白的表达,调控细胞的侵袭和迁移力。     

c-cbl 基因沉默对卵巢癌 SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨 c-cbl 在卵巢癌的表达及其对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响。方法通过免疫组织化学法（S-P 法）检测c-cbl 蛋白在卵巢癌组织的表达;EdU 检测卵巢癌 SKOV3细胞沉默 c-cbl 基因后细胞增殖能力变化;Transwell 检测卵巢癌 SK-OV3细胞侵袭能力;Western blot 检测 P21蛋白和 P53蛋白的表达。结果 c-cbl 蛋白在卵巢癌中表达位于细胞质,在卵巢癌中, c-cbl 蛋白呈强阳性表达,在正常卵巢组织 c-cbl 蛋白呈弱阳性或者阴性表达。与正常卵巢组织比较,c-cbl 蛋白在卵巢癌表达明显增高（P＜0．05）;c-cbl 蛋白在卵巢癌的表达与 FIGO 分期相关（P＜0．05）;沉默卵巢癌 SKOV3细胞 c-cbl 基因后,卵巢癌细胞增殖能力和侵袭能力降低（P＜0．05）;沉默 c-cbl 基因后,P21和 P53蛋白表达上调（P＜0．05）。结论 c-cbl 蛋白在卵巢癌表达上调,沉默 c-cbl 基因可能与上调 P21和 P53蛋白有关。     

L-NAME调控EMT抑制卵巢癌细胞迁移

目的探讨一氧化氮合酶泛抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖、迁移以及对上皮间充质转化(EMT)标志物的影响。方法利用L-NAME抑制卵巢癌SKOV3中一氧化氮合酶(NOS)功能,以L-NAME处理组为实验组,二甲基亚砜(DMSO)组为对照组,采用CCK8增殖实验、平板克隆形成试验、划痕试验和Transwell小室迁移实验检测L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移功能的影响;并利用荧光定量PCR和Western blot检测卵巢癌细胞上皮细胞标志物E-cadherin和间充质细胞标志物N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达,观察L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞EMT标志物的调控作用。结果 CCK8增殖实验和平板克隆形成实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞增殖功能(P0.05);划痕实验和Transwell小室实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞迁移功能(P0.05);荧光定量PCR和Western blot结果显示L-NAME上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达(P0.05)。结论 L-NAME抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移功能,调节EMT标志物变化。     

slfn5基因在卵巢癌上皮-间质转化中的作用及机制

目的 探讨slfn5基因在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 收集杭州市第一人民医院确诊的卵巢癌患者手术切除标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测卵巢癌组织中slfn5 mRNA的相对表达量。采用Western blot法检测并比较卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、OVCAR3、HO8910中SLFN5蛋白的相对表达量;选取表达高的SKOV3、OVCAR3细胞株转染沉默slfn5基因,分为si-NC组,si-slfn5^#1组、si-slfn5^#2组。Transwell和细胞划痕实验比较各组细胞侵袭、迁移能力。Western blot法考察各组细胞SLFN5及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail等EMT相关蛋白和Wnt/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白β-catenin的相对表达量。结果 相比正常组织,卵巢癌组织slfn5 mRNA相对表达量明显增高,差异有统计学意义(P<...     

ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）;shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

NS-398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制

目的探讨环氧合酶2( COX2)抑制剂NS-398对卵巢癌细胞恶性生物学特性的影响。方法以卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,根据 NS-398的处理分为对照组、实验组。利用MTS法和免疫组化法检测Ki-67蛋白表达,从而监测NS-398对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和侵袭实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化,采用RT-PCR法检测基质金属蛋白酶( MMP ) mRNA的表达情况;采用实时荧光定量PCR及Western blot检测上皮间质转化( EMT)相关分子表达情况。结果① MTS增殖实验表明NS-398对SKOV3细胞增殖作用无影响,免疫组化结果与之一致;②划痕实验和侵袭实验分别显示,NS-398显著下调SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。 RT-PCR检测结果表明NS-398抑制MMP的mRNA表达;③ Western blot结果表明NS-398上调 SKOV3细胞 E-cadherin的表达,下调Vimentin、Slug、Snail的表达。结论 COX2抑制剂通过阻止MMP 的表达和EMT的发生,从而下调SKOV3细胞的迁移、侵袭能力。     

靶向沉默CCDC132表达对卵巢癌细胞SKOV3生长、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的研究shRNA靶向沉默CCDC132基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计CCDC132-siRNA及空转序列,转染卵巢癌SKOV3细胞,分别为shCCDC132组及对照组,利用qRT-PCR检测各组细胞CCDC132相对表达量,CCK8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western Blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果转染后,sh-CCDC132组细胞中CCDC132表达水平较对照组显著降低(P0.01);sh-CCDC132组细胞增殖率较对照组显著降低(P0.01),迁移率下降(P0.01)、侵袭细胞数显著降低(P0.01),caspase-3、Bax蛋白表达显著上调(P0.01),而β-catenin(P0.01)、Cyclin D1(P0.01)和c-myc(P0.05)蛋白表达水平显著降低。结论沉默CCDC132可抑制SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力,其具体机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

糖尿病并发症的临床进展(六)

糖尿病肾病是糖尿病重要的微血管病变之一，也是糖尿病的主要死亡原因，糖尿病病人中20%～40%会发生糖尿病肾病，水平在30～299mg/24h的持续蛋白尿（微量蛋白尿）是糖尿病肾病的最早期阶段，也是CVD（心血管病）的显著标志之一，合并微量蛋白尿的病人常常会发展为临床蛋白尿（≥300mg/24h），并在数年内陆不出现肾小球滤过率（GFR）持续下降，一旦出现临床蛋白尿，发生终末期肾病（ESRD）的风险就很高。     

冠心病介入治疗的过去、现在和未来

冠心病是致死率与致残率极高的心血管疾病，严重威胁人类健康。目前，药物治疗、冠状动脉搭桥术和介入治疗是冠心病治疗的三架“马车”，其中又以介入治疗发展最为迅速，成为缓解心绞痛和降低急性心肌梗死死亡率的重要治疗手段。冠状动脉造影和介入治疗技术源于外周动脉疾病介入治疗，经过无数冠状动脉介入治疗先行者的不懈努力，使介入器械得到巨大进步和发展，先后经历单纯球囊扩张、金属裸支架和药物洗脱支架时代，同时介入治疗适应症亦不断扩大，几乎囊括所有的冠心病患者。展望未来，伴随着光学相干断层扫描、血管内超声和血流储备分数测定等新技术广泛应用，生物可降解支架成为下一代支架治疗的新希望和发展方向。