CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制

目的 探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（CREPT）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44,并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞;免疫印迹法检测蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 U251细胞CREPT蛋白表达水平最高,SHG44细胞最低。沉默CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降（P<0.05）。过表达CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响（P<0.05）。结论 CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。     

白藜芦醇通过下调CD44表达抑制胶质瘤U251细胞增殖和侵袭

目的 探讨白藜芦醇对脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子调控机制。方法 体外培养胶质瘤U251细胞,分别用浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白藜芦醇继续培养48 h,参考Lipofectamine2000TM说明书将pcDNA3.1/CD44(CD44过表达)、pcDNA3.1（过表达对照）等质粒转染胶质瘤U251细胞并培养24 h进行后续实验。利用CCK-8法检测细胞增殖,利用Transwell实验检测细胞侵袭;RT-PCR和免疫印迹法检测细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达。结果 白藜芦醇明显抑制U251细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）;所以,用150μmol/L白藜芦醇进行CD44干预实验。白藜芦醇明显抑制U251细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）。CD44过表达明显抑制白藜芦醇对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0....     

上调LRIG1对胶质瘤U251细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨上调LRIG1表达对胶质瘤U251细胞侵袭及迁移的影响。方法 体外培养U251细胞，应用LipofectamineTM 2000试剂盒将质粒pLRIG1-GFP（pLRIG1-GFP组）及其空载pEGFP-N1质粒（pEGFP-N1组）转染U251细胞，G418挑选具有抗性的细胞并扩增，以供进一步实验。另选择不转染任何质粒U251细胞作为空白对照组。qRT-PCR、免疫印迹法检测LRIG1及细胞上皮-间充质转化（EMT）标志蛋白SNAI2、E-cadherin、N-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白表达；应用Transwell小室实验检测U251细胞侵袭和迁移能力。结果 成功构建高表达LRIG1的胶质瘤U251细胞，荧光显微镜下可见细胞散发绿色荧光。pLRIG1-GFP组LRIG1 mRNA及蛋白表达水平明显高于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。pLRIG1-GFP组侵袭和迁移细胞数明显低于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。pLRIG1-GFP组SNAI2、N-cadherin、vimentin mRNA及蛋白表达水平明显低于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显高于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05）；后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。结论 上调LRIG1，抑制U251细胞侵袭和迁移，其机制可能与调控细胞EMT过程有关。     

过表达TBX2对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨TBX2表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 采用RT-qPCR和免疫印迹法检测53例胶质瘤组织和瘤旁组织TBX2mRNA和蛋白表达水平。体外培养胶质瘤细胞（U251、U87和SHG-44）和正常星型胶质细胞（HA1800）,采用RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平。构建TBX2过表达或低表达U251细胞株,分别采用WST-1法检测胶质瘤细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 胶质瘤组织TBX2 mRNA和蛋白表达水平明显高于瘤旁组织（P<0.05）,而且,高级别胶质瘤TBX2表达水平显著高于低级别胶质瘤（P<0.05）。相比于人正常星型胶质细胞系HA1800,胶质瘤细胞系U251、U87、SHG-44细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）;而且,U251细胞TBX2表达水平显著高于U87和SHG-44细胞（P<0.05）,因此使用U251细胞进行后续实验。过表达TBX2显著增加U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）,低表达TBX2显著抑制U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论 胶质瘤TBX2呈高表达,与胶质瘤增殖、侵袭能力有关。     

lncRNA SNHG16对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA核内小RNA宿主基因16（SNHG16）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR检测正常胶质细胞HEB、NHA和胶质瘤细胞A172、U251、U87、SHG-4中SNHG16的表达。用siRNA沉默U251细胞SNHG16的表达,分为NC-siRNA组和SNHG16-siRNA组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。结果 与正常胶质细胞HEB和NHA比较,胶质瘤细胞A172、U251、U87和SHG-4的SNHG16表达水平明显升高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较,SNHG16-siRNA组细胞增殖能力、细胞侵袭能力和细胞迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 SNHG16在胶质瘤细胞中高表达,特异性沉默SNHG16基因可以抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

下调TTK表达改善胶质母细胞瘤裸鼠的生存预后

目的 探讨苏氨酸/酪氨酸激酶（TTK）在胶质母细胞瘤（GBM）中的表达变化及其作用。方法 计算机检索TCGA数据库,利用生物信息学技术分析GBM组织TTK的表达水平及其与病人生存预后的关系。免疫组化染色分析我院生物样本库中60例脑胶质瘤组织的TTK表达水平。体外培养U251细胞,慢病毒转染构建TTK低表达细胞系,利用Alarma blue试剂盒测定细胞增殖能力,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期。将不同TTK表达水平的U251细胞接种裸鼠构建移植瘤模型,分析TTK表达水平与移植瘤模型生存期的关系。结果 生信分析结果显示,GBM组织TTK表达水平明显高于低级别胶质瘤及正常脑组织（P<0.05）,TTK低表达GBM病人的总生存期更长（P<0.05）。我院60例胶质瘤中,高级别胶质瘤TTK高表达率（69.0%,29/42）明显高于低级别胶质瘤（16.7%,3/18;P<0.05）。下调TTK表达明显抑制U251细胞增殖、促进细胞凋亡（P<0.05）。TTK低表达裸鼠移植瘤模型的生存期明显延长（P<0.05）。结论 GBM组织...     

下调RNA甲基化酶NSUN2表达对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2(NSUN2)表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法体外培养正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系（A172、U251、U87）,免疫印迹法检测NSUN2蛋白表达水平;用shNSUN2慢病毒（sh-NSUN2组）及shRNA scramble慢病毒（sh-CON组）感染U87细胞下调NSUN2表达,用CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB相比,胶质瘤细胞系A172、U251、U87的NSUN2蛋白表达量均明显增高（P<0.05）。与sh-CON组比较,sh-NSUN2组NSUN2蛋白表达水平、细胞增殖活力、侵袭能力和迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 胶质瘤NSUN2呈高表达,下调其表达明显抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA SNHG7对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)与胶质瘤生存预后的关系,及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 选取2015年6月至2016年3月手术切除的胶质瘤组织80例（术后随访截止2020年4月）和50例颅脑损伤颅内减压术中切取的非肿瘤脑组织为对照,用RT-PCR法检测lncRNA SNHG7的表达水平。体外培养胶质瘤U87细胞,转染不同质粒敲低lncRNA SNHG7表达,用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SNHG7对miR-4516的调控作用。结果 胶质瘤组织lncRNA SNHG7表达量明显高于对照组（P<0.05）;多因素Cox回归分析显示,lncRNA SNHG7高表达是胶质瘤病人不良生存预后的独立影响因素（P<0.05）;生存曲线分析显示,高表达组胶质瘤病人中位总生存期较低表达组明显缩短（P<0.05）。敲低lncRNA SNHG7表达,明显抑制U87细胞侵袭和迁移力（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA SNHG7靶向上调miR-4516表达...     

肉桂醛对神经胶质瘤U251细胞生物学行为的影响

目的 探讨肉桂醛对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法 体外培养胶质瘤细胞系U251细胞,分为对照组、低剂量肉桂醛组（40μmol/L）和高剂量肉桂醛组（80μmol/L）。采用平板克隆和CCK-8试验检测细胞增殖水平;流式细胞术分析细胞凋亡率;Transwell小室实验和细胞划痕试验评估细胞迁移和侵袭水平;免疫印迹法分析凋亡相关蛋白、PI3K/Akt和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。结果 肉桂醛明显抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移能力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）;抑制Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、cycling D、C-Myc、β-catenin表达（P<0.05）,促进Cleaved-Caspase-3、Bax表达（P<0.05）;而且,随剂量增大,肉桂醛的作用明显增强（P<0.05）。结论 肉桂醛抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

STIP1对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）表达对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,及其对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。方法 免疫印迹法检测体外培养的正常胶质细胞（SVG）和人胶质瘤细胞（U251、U87和U37）STIP1蛋白表达水平。NC-siRNA或STIP1-siRNA质粒转染U251细胞,CCK-8法检测U251细胞增殖;Transwell实验检测U251细胞侵袭能力;流式细胞术检测U251细胞凋亡率;免疫印迹法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。结果 与正常胶质细胞SVG比较,胶质瘤细胞U251、U87和U373的STIP1蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较,STIP1-siRNA组STIP1蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞侵袭力明显明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显增高（P<0.05）,而且,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 STIP1在胶质瘤细胞中呈高表达,抑制STIP1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭、促进凋亡,机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

lncRNA LINC00689靶向调控miRNA-634促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链基因间非蛋白编码RNA689（LINC00689）对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 RT-PCR实验检测正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系A172、U251、U87、SHG-4中LINC00689和miRNA-634的表达。将si-NC、si- LINC00689、miRNA-634 mimics、miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-634质粒转染至U251细胞中;CCK-8实验检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB比较,胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-4的LINC00689表达水平较高,而miRNA-634表达水平较低（P<0.05）。与si-NC组比较,si-LINC00689组LINC00689表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显较低（P<0.05）。与miRNA-NC组比较,miRNA-634 mimics组miRNA-634表达水平明显增高（P<0.05）,细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显降低（P<0.05）。与si- LINC00689+anti-miRNA-NC组比较,si- LINC00689+anti-miRNA-634组细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显增高（P<0.05）。结论 LINC00689可以促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与靶向调控miRNA-634有关。     

JAZF1对胶质母细胞瘤侵袭和迁徙的影响及分子机制研究

目的探讨JAZF1对脑胶质母细胞瘤（GBM）细胞侵袭、迁徙的作用及相关作用机制。 方法通过挖掘TCGA数据库中不同级别胶质瘤患者JAZF1的转录水平差异以及患者生存曲线差异,然后通过科内收集的胶质瘤样本提取总蛋白进行Western blot实验研究JAZF1蛋白水平在胶质瘤不同级别中的差异,通过Trans-well实验、细胞划痕实验研究JAZF1对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响,通过Western blot实验研究JAZF1对胶质瘤细胞侵袭和迁徙能力的关键分子的影响。 结果（1）Ⅳ级胶质瘤中JAZF1的mRNA、蛋白水平的表达上相较于Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤明显更高,差异具有统计学意义（P<0.05）;（2）JAZF1高表达组患者的中位生存期为13.0个月,而低表达组中位生存期为30.2个月,差异具有统计学意义（P<0.05）;（3）JAZF1表达下降后,U87M细胞的侵袭和迁徙能力均显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;（4）干扰JAZF1的表达后,p-Akt、MMP9、MMP2的表达水平显著下调,差异均具有统计学意义（P<0.05）,而Akt的表达变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。 结论JAZF1在GBM中高表达且显著缩短了患者的中位生存期,通过调控Akt的磷酸化水平进一步调控相应信号通路下游的MMP9、MMP2的表达影响GBM的侵袭和迁徙能力。     

白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨白藜芦醇（RES）不同途径给药对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制效果。方法 取80只雄性无胸腺裸鼠（BALB/c-nu;21~27日龄,体重10~12 g）,采用U87细胞建立人裸鼠脑胶质瘤原位移植模型,采用随机数字表法分为RES干预组（造模后10 d,开始给药,1次/d,40 mg/kg）和溶剂对照组（造模后10 d,开始给药,1次/d,10 mg/kg;溶剂为0.5%羧甲基纤维素钠）,根据给药途径,RES干预组又分为RES灌胃组和RES经鼻组,溶剂对照组又分为溶剂灌胃组和溶剂经鼻组,每组20只。经鼻给药采用经鼻滴入法。采用Kaplan-Meier法分析生存曲线;造模后14、21、28、35 d测定肿瘤体积;采用CD31标记胶质瘤血管内皮细胞并计算微血管密度（MVD）,采用免疫组化方法检测胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）以及Ki-67表达,采用TUNEL法检测胶质瘤细胞凋亡。结果 与溶剂对照组相比,RES干预组裸鼠生存时间明显延长（P<0.05）,造模后28、35 d肿瘤体积明显缩小（P<0.05）,肿瘤组织MVD明显减小（P<0.05）,肿瘤组织VEGF和Ki-67表达水平明显降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,而且,RES经鼻给药较灌胃给药作用更明显（P<0.05）。结论 RES可有效抑制裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长,机制可能与抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡有关。与灌胃给药相比,经鼻给药肿瘤抑制效果更好。