铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠脂代谢异常的改善作用及机制

【目的】 观察铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠脂代谢异常的改善作用及机制。【方法】 将90只大鼠随机选取75只建立糖尿病模型,其余15只设为正常组。将造模成功的68只大鼠随机分为模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组,每组17只。铁皮石斛多糖低、高剂量组分别灌胃铁皮石斛多糖100、200 mg/kg,二甲双胍组灌胃盐酸二甲双胍150 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,干预30 d。干预结束后,测定空腹血糖（FBG）、胰岛素（FINS）水平,血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平以及超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,采用苏木素-伊红（HE）染色法观察肝脏组织病理学表现,采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测肝脏组织胰岛素受体底物2（IRS2）、磷酸化IRS2（p-IRS2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白相对表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组干预0、15、30 d FBG水平和FINS水平均升高（P < 0.05）;与模型组比较,各治疗组干预15、30 d FBG水平和FINS水平均降低,且铁皮石斛多糖高剂量组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）;随着干预时间增加,模型组FBG水平持续上升,各治疗组FBG水平持续下降（P < 0.05）。与正常组比较,模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组血清 TG、TC、LDL-C、MDA 水平升高,HDL-C、SOD 水平降低（P < 0.05）;与模型组比较,各治疗组血清TG、TC、LDL-C、MDA水平降低,HDL-C、SOD水平升高（P < 0.05）,且铁皮石斛多糖高剂量组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。模型组出现大量肝细胞水肿坏死现象,组织结构紊乱,排列不均,而铁皮石斛多糖高剂量组和二甲双胍组肝组织病理变化得到明显改善。与正常组比较,模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组肝脏组织 p-IRS2、p-PI3K、p-AKT、mTOR 蛋白相对表达水平降低（P < 0.05）;与模型组比较,各治疗组肝脏组织p-IRS2、p-PI3K、p-AKT、mTOR蛋白相对表达水平升高（P < 0.05）,且铁皮石斛多糖高剂量组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。【结论】 铁皮石斛多糖可改善糖尿病大鼠脂代谢异常,可能是通过激活PI3K/AKT信号通路发挥作用。     

铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠视网膜炎症因子表达干预的研究

目的观察铁皮石斛多糖(PDC)对糖尿病大鼠视网膜及血清中炎症因子表达水平的影响,探讨PDC在早期糖尿病视网膜病变中的抗炎作用及机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法诱导SD大鼠糖尿病模型。模型建立成功6周后,分别用低剂量PDC[100 mg/(kg·d)]、中剂量PDC[200 mg/(kg·d)]及高剂量PDC[300 mg/(kg·d)]灌胃治疗。8周后,2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉大鼠,取所需标本。采用蛋白印迹法(Westen Blot)检测大鼠视网膜内白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-6、TNF-α的含量,免疫组化观察大鼠视网膜内核转录因子κB(NF-κB)的表达水平。结果与正常组比较,糖尿病组大鼠视网膜内IL-6、TNF-α、VEGF的蛋白表达增加;血清IL-6、TNF-α表达增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。与糖尿病组比较,PDC低、中、高各剂量组大鼠视网膜内IL-6、TNF-α的蛋白表达明显降低,血清IL-6、TNF-α的表达降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。PDC各剂量组之间各指标两两比较差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化切片观察,正常大鼠视网膜未见明显NF-κB阳性染色,糖尿病组大鼠视网膜内NF-κB表达高于正常组,与糖尿病组比较,PDC各剂量组NF-κB表达降低。结论 PDC可以降低糖尿病视网膜病变大鼠体内炎症因子(IL-6、TNF-α)的表达,进而抑制VEGF表达上调。其作用机制可能与NF-κB通路有关。     

霍山石斛多糖对糖尿病性白内障大鼠眼球晶状体组织抗氧化作用的研究

目的 研究霍山石斛多糖对糖尿病性白内障大鼠眼球晶状体组织的抗氧化作用.方法 采用链脲佐菌素对SD大鼠腹腔注射制造糖尿病性大鼠白内障模型,酶法测定各组大鼠眼球晶状体组织的谷胱甘肽( GSH)、丙二醛(MDA)、蛋白质羰基化产物的含有量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物岐化酶(SOD)的酶活力.结果 霍山石斛多糖能够显著增加糖尿病性白内障大鼠晶状体组织中GSH水平、降低MDA及羰基的含有量,提高其GSH-PX、GR、GST、SOD、CAT酶活力.结论 霍山石斛多糖可能通过干预氧化应激途径延缓糖尿病性白内障的发展.     

铁皮石斛附生树种对多糖含量的影响

为了揭示附生树种对铁皮石斛多糖含量的影响,通过采集野外与设施地不同树种上附生的铁皮石斛,并用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛多糖含量。结果表明,不同附生树种铁皮石斛多糖含量差异极显著,但多糖含量与附生树种树皮形态、树皮中的营养相关性不显著,而与附生树种上铁皮石斛接受的光强有关。树种通过对光照调控的生物特性对其附生的铁皮石斛多糖含量产生的影响。     

铁皮石斛多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛多糖DT2,DT3的化学结构。方法 运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法确定多糖的结构。结果 DT2,DT3的数均分子量分别为7.4×10⁵,5.4×10⁵,主要含有葡萄糖、半乳糖、木糖及少量阿拉伯糖和甘露糖,摩尔比分别为5.9:1.0:1.0:0.8:0.5和7.9:1.3:1.0:0.5:0.7。结论 这两个多糖为首次从铁皮石斛中分离得到。     

铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响

目的研究铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响。方法采用水提醇沉法对铁皮石斛进行初步提取,体外培养小鼠胚胎干细胞,通过克隆形成率试验、MTT试验及实时定量PCR的方法研究铁皮石斛提取多糖对小鼠胚胎干细胞的增殖及多能性维持的作用。结果铁皮石斛多糖处理组细胞(50~200μg/m L)的克隆形成率、MTT吸光度值均高于空白对照组,同时其干性相关基因的表达量与对照组相比无显著差异。结论铁皮石斛多糖可以显著促进小鼠胚胎干细胞的增殖、提高其克隆形成率,同时又不影响其多潜能性的维持。     

紫草素通过调节ERK信号通路对子宫肌瘤大鼠的影响

目的 探讨紫草素对子宫肌瘤大鼠的作用及其分子机制。方法 SPF级别SD大鼠60只,雌性,体质量200~250 g,随机分为空白组、模型组、紫草素低、中、高剂量组（5,10,20 mg·kg^-1）和米非司酮组;建立子宫肌瘤大鼠模型,连续给药4周后检测子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度的变化;采用苏木素-伊红（HE）染色观察子宫组织的病理染色变化;采用酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清和子宫中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测子宫组织中ER,PR,磷酸化细胞外调节激酶（p-ERK）和ERK的蛋白水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著升高（P<0.01）;子宫发生畸变,平滑肌细胞局灶性坏死和增生,且伴有中性粒细胞浸润等病理变化;血清ER和PR含量显著升高（P<0.01）;子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,紫草素中剂量组、高剂量组和米非司酮组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著降低（P<0.01）;子宫病理变化缓解,且血清ER和PR含量降低,子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。紫草素低剂量组较模型组大鼠子宫湿重、平滑肌层厚度、血清中ER水平,子宫组织PR和p-ERK蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 紫草素可能通过抑制ERK信号活化,从而产生抗子宫肌瘤活性。     

声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响

目的:测定特定的声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响程度。方法:以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量。结果:连续刺激24天后多糖含量明显高于对照组。结论:特定的声波刺激可以明显地促进铁皮石斛多糖的合成,对石斛多糖代谢途径有显著的影响。     

黑豆皮花青素对2型糖尿病大鼠氧化应激信号传导通路DAG-PKC的影响

目的:观察花青素(Proanthocyanidin,PC)对2型糖尿病大鼠氧化应激信号传导通路DAG-PKC的影响。方法:用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,以不同剂量(25、50、100mg/kg)PC灌胃12wk,检测血糖、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平和晚期糖基化终产物(AGEs)的含量;测定肾小球PKC活性和总二酰基甘油(DAG)的含量。结果:PC 25～100 mg/kg能明显降低糖尿病大鼠血糖含量,50～100 mg/kg的PC可抑制AGEs的形成(P<0.05),并呈明显的剂量依赖性;PC 50、100 mg/kg大鼠血清中SOD活性,以及100 mg/kg血清中GSH-Px活性均明显高于糖尿病模型组,各剂量组(25～100mg/kg)MDA水平均明显低于糖尿病模型组;肾小球PKC活性和肾小球总DAG的含量比糖尿病模型组明显下降。结论:PC可明显降低糖尿病大鼠血糖,对AGEs的形成具有明显的抑制作用,可改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力。     

三七多糖对2型糖尿病大鼠高同型半胱氨酸信号通路的影响

目的:探讨三七多糖对2型糖尿病大鼠肝脏高同型半胱氨酸代谢信号通路3个关键分子亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、胱硫醚β-合酶(CBS)、5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶(MTR)表达的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组以及三七多糖治疗组,每组20只,模型组以及三七多糖治疗组给予高脂高糖饮食6个月建立2型糖尿病模型,模型建立成功后三七多糖治疗组给予三七多糖57 mg/(kg·d)灌胃治疗,模型组给予同体积生理盐水灌胃,分别在治疗4周和8周后处死大鼠各半,收集血清和肝脏进行相关指标的检测。结果:治疗4周后大鼠血糖以及胰岛素抵抗指数三七多糖治疗组较模型组降低(P0.05),8周后进一步降低,胰岛素水平治疗4周后三七多糖治疗组较模型组降低(P0.05),8周后较4周无进一步改善;三七多糖治疗后,大鼠叶酸较模型组有一定升高,但差异无统计学意义(P0.05),维生素B12在治疗4周后较模型组明显升高(P0.05),治疗8周后进一步升高;同型半胱氨酸在治疗4周后明显降低(P0.05),但在8周后无进一步改善;治疗4周后,与模型对照组比较,三七多糖治疗组MTHFR、MTR以及CBSm RNA及蛋白表达升高(P0.05),治疗8周后进一步升高,但未达到空白组水平。结论:三七多糖可显著降低模型大鼠血清中同型半胱氨酸含量,其可能是通过调控高同型半胱氨酸信号通路相关蛋白MTHFR、CBS、MTR的表达来实现。     

铁皮石斛多糖对肠道微生态的影响研究

目的为探究铁皮石斛多糖对正常小鼠肠道微生态的影响,支撑铁皮石斛合理应用。方法将KM小鼠随机分成正常组和铁皮石斛多糖组,每组6只,雌雄各半,根据临床等效剂量灌胃7天后进行指标检测。结果铁皮石斛多糖可控制体重增长,显著提高脾脏系数(P0.05)和胸腺系数(P0.01),抑制肠道中大肠杆菌和乳酸菌(P0.01)的增殖,显著促进双歧杆菌(P0.05)及真菌(P0.01)的增殖,能显著提高纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶和蛋白酶等肠道消化酶的活性。结论铁皮石斛多糖通过控制体重、增强免疫、调节肠道菌群和提高肠道酶活性而发挥其保健功效。     

开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响

目的:揭示开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响,为优质铁皮石斛培育提供依据.方法:采集铁皮石斛开花前样品、开花结束时经人工摘除花蕾与未摘花蕾的样品,采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛中多糖质量分数,柱前衍生HPLC检测多糖中的单糖组分.结果:摘花蕾样品与未摘花蕾样品比较,总多糖及多糖中的甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖绝对量分别高30.35％,26.44％,20.78％,57.80％,木糖,阿拉伯糖分别低28.33％,24.37％,半乳糖差异不显著.结论:开花显著消耗铁皮石斛药材中的多糖及多糖中甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖的量,而开花过程可能有利于木糖、阿拉伯糖积累.     

玄参多糖对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及肝胰岛素信号通路的影响

目的探究玄参多糖对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及肝胰岛素信号通路的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)注射法制备糖尿病大鼠模型,随机分成5组,分别为模型组、阳性药二甲双胍(200 mg/kg)组及玄参多糖低、中、高剂量(80、160、320 mg/kg)组,另设同周龄普通饲料喂养大鼠为对照组;ig给药6周后监测各组大鼠体质量及生存状态、空腹血糖(FBG)、血脂[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、肝功能[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)]、肾功能[肌酐(CREA)、血尿素氮(BUN)]、糖化血红蛋白(GHb)、空腹血清胰岛素(FINS)、C-肽、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标的变化;HE染色和油红O染色评估大鼠肝脏病理学变化及脂肪变性;Western blotting法检测肝胰岛素信号通路相关蛋白表达。结果玄参多糖能回升2型糖尿病大鼠体质量,改善代谢功能,降低大鼠FBG、GHb、ALT、AST、CREA、BUN、TC、TG、LDL-C、MDA水平,升高HDL-C、FINS、C-肽、SOD、CAT、GSH-Px水平;Western blotting结果表明玄参多糖能活化IRS-2/PI3K/Akt信号通路,升高过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)表达水平。结论玄参多糖能够改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢,其机制可能跟调控肝胰岛素信号通路有关。     

铁皮石斛原球茎多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法 经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖（CDO）和原球茎粗多糖（CDOP）;CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法（GC）分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1（78×103）、DOPW-2（37×103）、DOPS1-1（287×103）、DOPS1-2（351×103）、DOPS1-3（335×103）和DOPS1-4（171×103）;它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论 这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠血流动力学及氧化应激的影响

目的:探讨灵芝多糖(GLPs)对2型糖尿病大鼠血流动力学及心肌组织中NO,SOD,MDA,CAT,GSH-Px含量的影响.方法:SD大鼠高脂饮食喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg·kg~(-1)建立2型糖尿病(T2DM)模型.成模后将大鼠随机分为6组:正常对照组、模型对照组、灵芝多糖低、中、高剂量治疗组(200,400,800 mg·kg~(-1))、小檗碱阳性对照组,给予药物治疗,第16周末测定血流动力学参数(LVSP,LVEDP,dp/dt_(max),-dp/dt_(max)),检测心脏NO,SOD,MDA,CAT,GSH-Px水平;用电镜观察左室心肌组织超微结构.结果:与模型对照组比较,灵芝多糖中、高剂量能有效降低血糖水平;改善糖尿病大鼠血流动力学指标:降低LVEP,升高LVSP,dp/dt_(max),-dp/dt_(max);能够有效对抗氧化应激作用.同时可以显著改善心肌超微结构.其中高剂量组效果优于中剂量组和BerG.结论:灵芝多糖能够明显改善T2DM大鼠血流动力学参数,降低其氧化应激的水平.     

铁皮石斛快繁及多糖含量测定

目的测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。方法对铁皮石斛进行组织培养,用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。结果铁皮石斛组培苗的多糖含量为25.09%。结论铁皮石斛组培苗的多糖含量达到2010版《中华人民共和国药典》的规定标准,具有一定的药用价值。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L^-1（诱导子·培养基。）的剂量（高剂量）加入培养基时,铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5．63％）,与对照（3．16％）相比提高了78．2％。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5．92％）,与平均值（4．59％）相比提高了29．0％。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

恒温条件下采收时机对铁皮石斛多糖的影响

为揭示铁皮石斛多糖积累的规律,明确采收时机对铁皮石斛多糖的影响,该研究在组培室恒温条件下,于2015年12月至2016年11月预培养铁皮石斛D21无性系小苗至1 cm左右,然后转接培养2~5个月后采收,用苯酚硫酸法测定多糖含量、柱前衍生-UPLC分析单糖组分的差异,结果显示多糖及其关键组分甘露糖的含量与培养月龄呈正相关,但各种培养月龄多糖含量均在5—6月份具有峰值,并与大田种植条件下的趋势吻合,表明即使在组培室恒定条件下,采收季节仍然显著影响多糖及其组分的含量,这种植物内在调控的多糖积累动态变化趋势可能与铁皮石斛固有的感知四季变化的生命节律有关。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法 用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果 将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L-1（诱导子·培养基-1）的剂量（高剂量）加入培养基时, 铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5.63%）,与对照（3.16%）相比提高了78.2%。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5.92%）,与平均值（4.59%）相比提高了29.0%。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。