ShRNA靶向沉默VEGFR1基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨慢病毒载体介导shRNA(short harpin RNA,siRNA前体)靶向沉默血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 构建针对VEGFR-1基因干扰序列和无关序列的shRNA慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染293T细胞,包装产生的病毒液感染U937细胞(U937-shVEGFR-1 KD组).采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测RNA干扰对U937细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达的影响;ELISA法检测细胞培养上清液VEGF表达水平的变化;CCK-8法检测常规培养条件下和不同浓度阿糖胞苷(Ara-C)作用下细胞增殖率和抑制率变化;流式细胞术检测经Ara-C作用后细胞凋亡率变化;Transwell小室检测不同条件下细胞迁移数量的变化.结果 成功构建VEGFR-1基因shRNA慢病毒载体,转染U937细胞后,U937-shVEGFR-1 KD组细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达均显著下降;细胞培养上清液VEGF表达水平明显下降,细胞增殖速度减慢;Ara-C作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞增殖抑制率及凋亡率较U937无关序列shRNA阴性对照(NC)组和U937空白对照(CON)组细胞明显增高.无药物及VEGF作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量均低于U937 NC组和U937 CON组细胞;Bevacizumab作用下,U937 NC组和U937 CON组细胞迁移数量降低,而U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量无明显变化.结论 慢病毒载体介导的shRNA干扰VEGFR-1基因可有效抑制U937细胞增殖、迁移,并能够增强U937细胞对Ara-C的敏感性.     

丙泊酚调控PI3K/AKT信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨丙泊酚调控PI3 K/AKT信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 传代培养人肺癌A549细胞株,根据细胞培养基中添加丙泊酚浓度的不同分为control组(未添加丙泊酚)、pL组(添加丙泊酚1.5μg/ml)和pH组(添加丙泊酚2.2μg/ml);克隆形成实验、细胞划痕实验及流式细胞术检测丙泊酚对肺癌...     

帕瑞昔布对非小细胞肺癌细胞株A549增殖和迁移的影响

目的 研究帕瑞昔布对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能机制.方法 采用随机数字表法将A549细胞随机分为四组：对照组（C组）,10 μmol/L帕瑞昔布（P1组）、40 μmol/L帕瑞昔布组（P2组）和160 μmol/L帕瑞昔布组（P3组）.C组细胞常规培养,P1、P2和P3组细胞分别用终浓度为10 μmol/L、40 μmol/L和160 μmol/L的帕瑞昔布处理A549细胞24 h.MTT法检测各组细胞的增殖情况,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Western blot法检测各组细胞p-AKT、survivin的表达情况.结果 与C组比较,P1、P2和P3组细胞的增殖抑制率依次增高（P＜0.05）,P1、P2和P3组细胞的迁移距离依次降低（P＜0.05）,P1、P2和P3组细胞p-AKT和survivin的表达水平依次降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性.结论 帕瑞昔布可以抑制A549细胞的增殖和迁移,其机制可能是抑制p-AKT和survivin的表达.     

miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响。方法人晶状体上皮细胞(HLE-B3)随机分为三组,实验组转染miR-21模拟剂(mimic),对照组转染miR-21阴性对照(NC),空白组加入等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,Western-blot检测细胞Bcl-2、Akt蛋白表达。对三组上述各指标进行比较。结果转染48 h后,实验组中miR-21相对表达水平显著上升,与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。转染24 h、48 h后,实验组的细胞增殖活性显著低于空白组与对照组(P 0. 05);转染48 h后,实验组的细胞凋亡率显著高于空白组与对照组(P 0. 05),迁移距离与过膜细胞数都显著少于空白组与对照组(P 0. 05)。转染48 h后,实验组的Bcl-2、Akt蛋白表达水平显著低于空白组与对照组(P 0. 05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 miR-21能通过调节晶状体上皮细胞中Bcl-2、Akt蛋白的表达,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

不同浓度薏苡仁提取物对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制

目的 探讨不同浓度薏苡仁提取物对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 体外培养人OSCC CAL27细胞,按照实验设计分为高剂量组、低剂量组、对照组,高、低剂量组分别予20、10μmol/L薏苡仁提取物干预,对照组不予任何干预.各组细胞培养24 h后采用MTT法、细胞划痕法、Transw...     

shRNA沉默EZH2表达对人肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默EZH2表达对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法利用RT-PCR方法检测EZH2在人肺癌细胞株中的表达,特异性shRNA沉默EZH2表达后分析NCI-A549细胞增殖和侵袭能力的变化。结果检测14株非小细胞肺癌细胞中EZH2的mRNA表达,80%的细胞株EZH2较正常肺组织高表达;shRNA阻断EZH2表达可显著降低人肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在非小细胞肺癌中作用提供了研究基础。     

沉默SETD8基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的探究siRNA下调含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶) 8(SETD8)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的机制。方法采用脂质体法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,得到关于SETD8基因沉默表达的MG-63稳定的细胞系即实验组,将杂序siRNA用脂质体法同时转染骨肉瘤MG-63细胞,得到关于Control siRNA的MG-63细胞系即对照组,未经转染的骨肉瘤MG-63的稳定的细胞系即空白组。以上三组细胞系通过应用细胞毒性活性检测法(CCK-8法)、平板克隆法同时检测被SETD8基因沉默后骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,侵袭迁移小室即(Transwell小室)法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力,实时荧光定量法即(PCR法)以及蛋白质印迹法即(Western Blot法)检测SETD8基因沉默表达效果及细胞内SETD8,β-catenin,cyclin D1,vimentin、MMP3的mRNA和相应蛋白的表达水平。结果 SETD8 siRNA转染后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力显著低于对照组(control siRNA转染MG-63细胞)和空白组(未经转染的MG-63细胞)(P 0. 05); Transwell小室结果显示,沉默SETD8基因组的侵袭和迁移能力明显下降;实验组(SETD8 siRNA转染MG-63细胞)中SETD8、β-catenin、cyclin D1、vimentin、MMP3的mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA下调SETD8基因表达可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力,Wnt/β-catenin信号通路可能参与并调控这一过程。     

蜂毒肽对口腔鳞癌细胞的增殖及迁移能力的影响

目的 探讨蜂毒肽对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系Scc-15、Tca8113、Cal-27增殖性、迁移性的影响及其作用机制.方法 以用四种不同浓度梯度(2、4、8、16 μg/ml)的蜂毒肽分别处理的OSCC细胞系为蜂毒肽组,以不含药的培养液处理的细胞系为对照组.采用MTT实验检测蜂毒肽对OSCC细胞系Scc-15...     

奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制

目的研究奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制。方法用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平处理A549细胞,MTT测定细胞增殖情况,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的奥氮平处理A549细胞,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平作用后的A549细胞增殖能力和克隆形成能力均明显低于0μM作用组(P0.05)。A549细胞经半数抑制浓度的奥氮平作用后,细胞G0/G1期比率升高,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、p27蛋白水平升高,CDK4、Cyclin D1蛋白水平降低,与未经奥氮平处理的细胞比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论奥氮平可以在体外抑制肺癌A549细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与下调CDK4、Cyclin D1蛋白,促进Cleaved Caspase-3、p27蛋白表达有关。     

CD151对心肌梗死血流动力学的影响及其信号机制

目的 探讨CD151对大鼠心肌梗死模型血流动力学的影响及其分子学机制.方法 制作大鼠心肌梗死模型,将携带人CD151基因的重组腺病毒相关病毒(rAAV)载体注入缺血心肌.4周后,心导管测定心脏功能,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外源性CD151 mRNA的表达,Western blot检测CD151、PI3K、Akt的表达.结果 心肌梗死后左室功能明显下降,CD151高表达能够明显改善左室功能,并可上调磷脂酰肌醇3-激酶和磷酸化的蛋白激酶B的表达.结论 CD151基因的导入能够改善心室功能,其分子机制与PI3K/Akt信号通路的激活有关.     

慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响

目的观察慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响。方法将pRNAT-shSTAT3重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度,感染大肠癌HT-29细胞,筛选获得阳性细胞株,实时定量PCR和Westernblot检测shRNA对STAT3基因的沉默效率,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功包装慢病毒,其病毒悬液的滴度为2×107TU/mL。病毒液感染大肠癌HT-29细胞,经G418筛选获得稳定细胞株,实时定量PCR和Western blot结果分别显示HT-29细胞STAT3mRNA表达和蛋白明显减弱,表达量分别为(16.9±2.1)%、(18.8±2.4)%(P0.01)。MTT结果显示STAT3基因沉默后的大肠癌HT-29细胞生长明显减慢,G0/G1期细胞占(68.73±2.88)%,S期细胞占22.93±1.10%,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长有明显的影响,细胞生长速度明显减慢,细胞阻滞于G0/G1期。     

低氧对人肺腺癌A549细胞生长的影响

目的：研究低氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549生长、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞技术观察低氧不同时间对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。采用免疫细胞化学方法检测bcl—2和caspase-3表达。采用半定量RT—PCR法分析低氧对细胞内缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的影响。结果：MTr结果显示低氧12、24、48h后，A549细胞生长受到抑制。流式细胞技术检测显示低氧12、24、48h后，G1／G0期的A549细胞增多，相应的S期细胞减少，同时A549细胞凋亡明显增多。免疫细胞化学结果显示随着低氧时间的延长，bcl-2表达减少，而easpase-3表达增加。RT—PCR检测HIF-1α mRNA的结果显示12、24、48h低氧组HIF-1α mRNA水平均较相应的常氧组增加（P〈0．05）。结论：低氧环境可抑制A549细胞增殖，使细胞周期阻滞于G。／G0期，并促进细胞凋亡，其作用可能是由于低氧环境影响HIF—1α mRNA水平及通过调节bcl—2和caspase-3的表达诱导细胞凋亡而实现。     

Gli1表达抑制对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的 抑制Glioma-associated oncogene homoglog（GLI）基因在卵巢癌SKOV3细胞中的表达,探讨GLI1表达抑制对SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建并筛选GLI1基因的RNAi表达质粒,转染SKOV3细胞,CCK-8法比较转染前后卵巢癌细胞增殖变化,流式细胞仪检测紫杉醇诱导转染前后细胞凋亡比例,流式细胞仪检测转染前后SKOV3的细胞周期情况.Westem blot检测cyclinD、Bcl-2及Capase3蛋白表达的影响.结果 转染48 h后,在SKOV3细胞中Control组、N-Control组、GLI1 shRNA-1组、GLI1 shRNA-2组、GLI1shRNA-3组、GLI1 shRNA-4组的GLI1 mRNA水平分别为1.00±0.00、1.03 ±0.02、0.73±0.07、0.98 ±0.08、0.53±0.08、0.68±0.04,与Control组相比,GLI1 shRNA-1、GLI1 shRNA-3、GLI1 shRNA-4组GLI1 mRNA表达量均下降（P＜0.05）,转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞中GLI1蛋白表达水平低于GLI1 shRNA-1、GLI1shRNA-2、GLI1 shRNA-4组（P＜0.05）,具有显著的干扰效果.转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）,在紫杉醇的诱导下细胞凋亡比例明显增加,细胞周期主要阻滞在G1/S期.Western blot检测发现Bcl-2蛋白表达下降（P＜0.05）,Capase3蛋白表达升高（P＜0.05）,细胞周期蛋白CyclinD1蛋白表达下降（P＜0.05）.结论 GLI1 shRNh对SKOV3细胞增殖抑制作用明显,促进细胞凋亡,GLI1信号可通过抑制cyclinD1活化抑制细胞恶性增殖.     

慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响

目的 观察慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响.方法 将pRNAT-shSTAT3重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度,感染大肠癌HT-29细胞,筛选获得阳性细胞株,实时定量PCR和Western blot 检测shRNA对STAT3基因的沉默效率, MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 成功包装慢病毒,其病毒悬液的滴度为2×107 TU/mL.病毒液感染大肠癌HT-29细胞,经G418筛选获得稳定细胞株,实时定量PCR和Western blot结果分别显示HT-29细胞STAT3mRNA表达和蛋白明显减弱,表达量分别为（16.9±2.1）%、（18.8±2.4）%（P＜0.01）.MTT结果显示STAT3基因沉默后的大肠癌HT-29细胞生长明显减慢, G0/G1期细胞占（68.73±2.88）%, S期细胞占22.93±1.10%, 与对照组相比差异显著（P＜0.01）.结论 慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长有明显的影响,细胞生长速度明显减慢,细胞阻滞于G0/G1期.     

苦参碱对肺腺癌A549细胞CC10 mRNA表达的影响

目的:观察苦参碱对肺腺癌A549细胞生长、凋亡及其对CC10mRNA表达的影响。方法:肺腺癌A549细胞进行培养传代,按苦参碱药物作用浓度由低向高分为A、B、C、D、E组及对照组,培养72h后,MTT实验检测苦参碱对肺癌细胞生长抑制作用;Hoechst33258染色法观察苦参碱对A549细胞凋亡形态的影响,AnnexinV-PI双标法检测苦参碱对A549细胞凋亡率的影响,RT-PCR检测CC10mRNA的表达。结果:不同浓度的苦参碱均具有抑制肺癌A549细胞生长及诱导凋亡作用,A、B、C、D、E组及对照组A549细胞的生长抑制率及凋亡率分别为24.7%、5.12%,33.1%、8.36%,44.3%、10.81%,61.7%、17.10%,74.2%、25.67%及6.2%、3.06%,各组差异具有显著性(P<0.05)。各实验组CC10mRNA阳性表达率分别为1.03±0.07、0.87±0.03、0.74±0.04、0.62±0.06、0.49±0.04。结论:苦参碱抑制肺腺癌A549细胞生长及诱导细胞凋亡的作用可能与其促进CC10mRNA表达上调有关。     

肿瘤坏死因子α对人肺腺癌细胞耐顺铂的影响

目的研究肿瘤坏死因子OL（TNF-α）对人肺腺癌细胞系A549／顺铂（DDP）耐DDP的逆转作用,探讨其与肺耐药相关蛋白（LRP）表达之间的关系。方法以MTT法检0n,0TNF-α与顺铂联用对A549／DDP细胞的细胞毒性作用,以免疫细胞化学方法检测A549／DDP细胞LRP的表达情况。结果250、1000U／mlTNF-α可使顺铂对A549／DDP细胞的IC50从7．12ng／L分别降至5．02、4．41ng／L,能够逆转A549／DDP对顺铂的耐药,逆转倍数分别为1．42、1．62。A549／DDP细胞LRP呈强阳性表达,250、1000U／mlTN-α与顺铂联用可以下调LRP表达,LRP阳性表达率分别为（60．14-4-6．54）％、（57．234-5．98）％,同无药组和顺铂组LRP表达率（79．63±4．78）％、（75．97±5．32）％比较,差异具有统计学意义（P均〈0．01）。结论TNF-α能够逆转A549／DDP对顺铂的耐药,其机制可能与下调LRP表达有关。     

海水对肺腺癌细胞株A549细胞蛋白酶激活受体2表达的作用研究

目的 观察海水对肺腺癌细胞株A549细胞的炎性损伤及对蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达的影响,探讨海水导致急性肺损伤的作用机制.方法 将培养的A549细胞接种于6孔板中,按随机数字表法把细胞分为对照组及海水处理2、4、8 h组,相应时间点用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测PAR-2的mRNA和蛋白表达;收集细胞培养上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)含量.结果 用海水处理后,A549细胞PAR-2 mRNA和蛋白表达均于2 h显著增加(P均<0.05),4 h达高峰,分别为对照组的1.8倍和2.2倍,随后下降,但仍显著高于对照组(P均<0.01);TNF-α和IL-8含量则于2 h即显著升高并达最高峰[分别为(214.35±20.85)ng/L,(55.86±5.65)ng/L],随后下降,但仍显著高于对照组[分别为(25.86±3.85)ng/L,(6.97±1.77)ng/L,P均<0.01].结论 海水可致A549细胞炎症反应明显,并可诱导A549细胞PAR-2表达增高.