姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的:探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。方法:采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。将24只大鼠随机均分为假手术组、模型组和姜黄素组。从制模后2 d起,姜黄素组给予100 mg.kg-1.d-1姜黄素腹腔注射。术后4周心脏穿刺抽血,测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)值。处死大鼠,用苏木素-伊红(HE)、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度;用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达部位及表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BUN水平显著增加(P<0.01),肾间质纤维组织相对面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-β1、α-SMA和Vimentin的蛋白表达均显著上调(P均<0.01)。姜黄素干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:姜黄素可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。     

D-半乳糖致大鼠衰老模型的研究

目的 探讨D-半乳糖腹腔注射法致大鼠衰老的合适剂量,以复制可靠的大鼠衰老模型.方法 32只SD大鼠随机均分为D-半乳糖低(15mg/kg)、中(30mg/kg)、高(60mg/kg)剂量组和假手术组四组,Y型迷宫测定各组大鼠认知能力;焦油紫染色,TUNEL法检测其海马区细胞形态学变化、神经元凋亡;免疫组织化学染色检测p-AKt表达水平.结果 和假手术组相比较,其他三组大鼠错误次数增加、时间延长,海马区锥体细胞层损伤严重,可见较多TUNEL阳性神经元,p-AKt活性明显降低,尤以D-半乳糖高剂量组最明显.结论 D-半乳糖高剂量组大鼠认知障碍、海马区细胞凋亡及p-AKt表达障碍最明显,可以复制出与衰老大鼠程度近似的模型.     

草苁蓉对D-半乳糖致衰老大鼠琥珀酸脱氢酶的影响

目的 探讨草苁蓉对D-半乳糖致衰老大鼠玻珀酸脱氢酶(succlnate dehydrogenase，SDH)的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分正常组、模型组(ScD-半乳糖48mg／kg／d)、人参皂甙组(100mg／kg．jg，D-半乳糖48mg／kg／d)、草苁蓉组(100mg／kg．k，ScD-半乳糖48mg／kg／d)，连续40天。用组织化学方法观察SDH的组织学变化，用比色分析法对大脑皮质SDH进行定量分析。结果 草苁蓉可升高因D-半乳糖所致SDH的降低，对线粒体等细胞器的变性具有改善作用。结论 草苁蓉提取物对D-半乳糖致衰老大鼠具有保护作用。     

白细胞介素1β诱导肾小管上皮细胞的转分化

目的:观察白细胞介素1β对肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞分泌功能的影响。方法:实验于2005-06/2006-01在泸州医学院附属医院传染免疫研究室完成。以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,给予白细胞介素1β(10μg/L)刺激,12,24,48,72h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测α-平滑肌肌动蛋白和E-钙粘连素的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白含量。结果:白细胞介素1β刺激48h后肾小管上皮细胞转变为明显类似成纤维细胞形态;刺激12h即可见α-平滑肌肌动蛋白的表达由64.80±2.19增加到83.23±2.71(P<0.05),E-钙粘连素的表达由81.77±1.27减少到64.50±1.31(P<0.05),随刺激时间延长上述变化越明显,72hα-平滑肌肌动蛋白表达增加到170.53±3.94;E-钙粘连素表达减少到26.20±2.32。细胞培养上清液中纤维连接蛋白含量随时间延长增加(P<0.05),白细胞介素1β刺激72h时纤维连接蛋白增加1倍。结论:白细胞介素1β可诱导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,增加纤维连接蛋白的分泌。     

红豆杉多糖对D-半乳糖致衰老小鼠模型肝功能的影响

目的 观察红豆杉多糖对D-半乳糖衰老小鼠模型肝功能的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 90只雄性ICR小鼠,随机挑选15只作为空白组,其余75只建立衰老模型,随机分为模型组（D-半乳糖）、阳性药物组（易善复）以及红豆杉多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各15只。造模第4周起,阳性药物组给予多烯磷脂酰胆碱（易善复）干预,红豆杉多糖低、中、高剂量组分别使用不同浓度红豆杉多糖溶液灌胃干预;空白组和模型组使用等剂量生理盐水灌胃。苏木精-伊红染色观察肝脏组织病理学改变,比色法比较肝组织匀浆中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量,全自动生化仪检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）含量。结果 模型组的SOD活性、T-AOC较空白组明显下降,MDA含量、ALT及AST含量较空白组明显上升,差异有统计学意义（P<0.01）。红豆杉多糖低/中/高剂量组和阳性药物组的SOD活性、T-AOC较模型组明显升高,MDA含量、ALT及AST含量较模型组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 红豆杉多糖可能通过提高抗氧化应激能力而...     

石杉碱甲对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆行为的影响

背景：石杉碱甲是中国首创的一种可逆的胆碱酯酶抑制剂，其对良性记忆障碍有较好的疗效，能明显促进啮齿类动物的学习过程和记忆再现。目的：了解石杉碱甲对D-半乳糖拟衰老模型小鼠在跳台及迷宫实验中增强学习记忆行为的作用。设计：随机对照实验研究。单位：新乡医学院药物研究室。材料：实验在新乡医学院生理实验室及药物研究室完成。选择健康昆明种小鼠100只用跳台法实验和电迷宫法实验，每个实验组各50只。石杉碱甲片，由河南竹林众生制药股份有限公司提供，批号：031001；D-半乳糖，上海试剂二厂出品。干预：D-半乳糖对照组和石杉碱甲治疗组建立亚急性衰老模型：每日颈背部皮下注射120mg／(kg&;#183;d)D-半乳糖，连续6周，空白对照注射等量生理盐水。同时在以上处理的第37天开始，3个石杉碱甲治疗组分别用0．2mg／kg，0．4mg／kg，0．8mg／kg的3种不同剂量灌胃，空白对照组和D-半乳糖对照组以等量生理盐水灌胃，连续7d。主要观察指标：跳台法主要观察小鼠在跳台上安全区的潜伏时间和5min内小鼠触电次数；电迷宫实验主要观察小鼠逃至右侧电击区的错误次数。结果：跳台法检测结果显示，D-半乳糖致衰老模型小鼠的潜伏期时间较短，错误次数较多。空白对照组[(9．2&;#177;38．7)s，(4．12&;#177;1．02)次]与D-半乳糖对照组[(49．7&;#177;27．1)s，(5．17&;#177;0．64)次]比较，差异有显著性(P&;lt;0．05)。石杉碱甲治疗组小鼠的潜伏期时间明显延长、错误次数明显减少，差异更明显(P&;lt;0．01)。②电迷宫实验结果显示．D-半乳糖致衰老小鼠逃至右侧电击区的次数明显增加。与D-半乳糖对照组[(7．02&;#177;1．06)次]比较，空白对照组错误次数[(6．05&;#177;0．70)次]减少(P&;lt;0．05)，而石杉碱甲治疗组更明显(P&;lt;0．01)，且中等剂量(0．4mg／kg)治疗组错误次数更少[(3．86&;#177;1．80)次]。结论：石杉碱甲能有效提高D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力；在一定范围内显示出量效关系。     

1,25-二羟维生素D3对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及其可能机制。方法:培养人肾小管上皮细胞并分为正常对照组(含5.5mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(含25mmol/LD-葡萄糖)和高糖+1,25-二羟维生素D3组,细胞免疫组化方法测定各组HK-2细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素(E-cad)的蛋白表达,RT-PCR半定量方法测定各组HK-2细胞的α-SMA和E-cad的mRNA表达。结果:与正常对照组相比,高糖组和高糖+1,25-二羟维生素D3组,α-SMA蛋白表达水平和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),E-cad蛋白表达水平和mRNA表达水平明显下降(P<0.05);与高糖组相比,高糖+1,25-二羟维生素D3组α-SMA蛋白表达水平和mRNA表达水平明显下降(6.576±1.044vs.4.715±0.776;0.752±0.086vs.0.491±0.023,P<0.05),而E-cad蛋白表达水平和mRNA表达水平明显上升(2.085±0.553vs.4.970±0.845;0.163±0.036vs.0.478±0.062,P<0.05)。结论:1,25-二羟维生素D3可以抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,其可能通过下调α-SMA的表达,上调E-cad的表达,从而抑制肾小管上皮细胞转分化,对糖尿病肾病有一定防治作用。     

石杉碱甲对 D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆行为的影响

背景石杉碱甲是中国首创的一种可逆的胆碱酯酶抑制剂,其对良性记忆障碍有较好的疗效 ,能明显促进啮齿类动物的学习过程和记忆再现. 目的了解石杉碱甲对 D-半乳糖拟衰老模型小鼠在跳台及迷宫实验中增强学习记忆行为的作用. 设计随机对照实验研究. 单位新乡医学院药物研究室. 材料实验在新乡医学院生理实验室及药物研究室完成.选择健康昆明种小鼠 100只用跳台法实验和电迷宫法实验,每个实验组各 50只.石杉碱甲片 ,由河南竹林众生制药股份有限公司提供 ,批号 031001;D 半乳糖 ,上海试剂二厂出品. 干预 D 半乳糖对照组和石杉碱甲治疗组建立亚急性衰老模型 每日颈背部皮下注射 120 mg/(kg· d)D-半乳糖 ,连续 6周 ,空白对照注射等量生理盐水.同时在以上处理的第 37天开始 ,3个石杉碱甲治疗组分别用 0.2 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg的 3种不同剂量灌胃 ,空白对照组和 D-半乳糖对照组以等量生理盐水灌胃 ,连续 7 d. 主要观察指标跳台法主要观察小鼠在跳台上安全区的潜伏时间和 5 min内小鼠触电次数;电迷宫实验主要观察小鼠逃至右侧电击区的错误次数. 结果跳台法检测结果显示, D 半乳糖致衰老模型小鼠的潜伏期时间较短,错误次数较多.空白对照组 [(9.2± 38.7) s,(4.12± 1.02)次 ]与 D-半乳糖对照组 [(49.7± 27.1) s,(5.17± 0.64)次 ]比较,差异有显著性( P< 0.05).石杉碱甲治疗组小鼠的潜伏期时间明显延长、错误次数明显减少,差异更明显( P< 0.01).②电迷宫实验结果显示, D-半乳糖致衰老小鼠逃至右侧电击区的次数明显增加.与 D 半乳糖对照组 [(7.02± 1.06)次 ]比较,空白对照组错误次数 [(6.05± 0.70)次 ]减少( P< 0.05),而石杉碱甲治疗组更明显( P< 0.01),且中等剂量( 0.4 mg/kg)治疗组错误次数更少 [(3.86± 1.80)次 ]. 结论石杉碱甲能有效提高 D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力;在一定范围内显示出量效关系.     

电针对D-半乳糖所致衰老模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨电针对D-半乳糖处理后衰老大鼠神经细胞凋亡的抑制作用。方法：实验于2000-10／2003-01在上海中医药大学生理学教研室完成。选取雄性Wistar大鼠42只，随机分为正常组、模型组、电针组，14只／组。正常组每天皮下注射生理盐水1mL，连续6周；模型组每天皮下注射D-半乳糖800mg／kg，连续6周；电针组每天皮下注射同剂量D-半乳糖，第18天开始电针，电针穴位根据动物“针灸穴位图谱”选择百会、大椎，采用电流强度5mA、频率10Hz的断续波，15min／d，至第6周末结束。凋亡细胞以原位末端标记法检测，凋亡相关因子蛋白行免疫组织化学法检测，线粒体形态的改变用体视学方法分析。结果：42只大鼠全部进入结果分析。①各组脑海马锥体细胞的超微结构比较：正常组核周边内质网、线粒体、高尔基体等细胞器丰富，核大而圆，染色质密度均一，核仁明显。模型组粗面内质网大量增生，线粒体嵴变短、不规则或消失，溶酶体数量增加，细胞内出现自嗜体，核不规则固缩，染色质向核膜凝集成块，有核仁裂解现象，核膜、细胞器膜、细胞膜完整，提示模型组神经细胞有凋亡样形态学改变。电针组与正常组接近，主要表现为线粒体的肿胀不明显，溶酶体数量有所下降，核结构接近正常。②各组大鼠脑海马CA1区线粒体比表面情况：与正常组比较，模型组变小，电针组基本无变化（25．02&;#177;14．66，21．03&;#177;10．75，23．87&;#177;14．00，P〈0．05，P〉0．05）。③各组大鼠脑海马CA1区线粒体平均轴比情况：与正常组比较，模型组变大，电针组基本无变化（1.57&;#177;0.72，2.04&;#177;0.83，1.63&;#177;0.69，P〈0.05，P〉0.05）；电针组明显高于模型组（P〈0.05）。④凋亡阳性细胞率：与正常组比较，模型组显著增加，电针组略高（0．25&;#177;0．11，1．07&;#177;0.31，0．50&;#177;0．34，P〈0．05），与模型组比较，电针组明显降低（P〈0．05）。⑤Bax与Bcl-2阳性细胞数检测结果：与正常组Bax比较，模型组呈过表达，电针组略高（66．4&;#177;12．8，140．4&;#177;41．0，77．1&;#177;18．1，P〈0．05），电针组明显低于模型组（P〈0．05）；与正常组Bcl-2比较，模型组表达明显降低，电针组略低（157．0&;#177;59．7，56．9&;#177;15．3，108．5&;#177;25．8，P〈0．05），电针组明显高于模型组（P〈0．05）。⑥Bax与Bcl-2积分吸光度检测结果：与正常组Bax比较，模型组呈过表达，电针组略高（4．2&;#177;2．1，10．6&;#177;5．9，7．5&;#177;5．7，P〈0．05），电针组明显低于模型组（P〈0．05）；与正常组Bcl-2比较，模型组表达明显降低，电针组升高（8.0&;#177;1．7，1．2&;#177;0．8，13．9&;#177;4．1，P〈0．05），电针组明显高于模型组（P〈0．05）。结论：D-半乳糖致衰老时，大鼠脑海马组织中存在凋亡阳性神经细胞增加的现象。电针干预后，凋亡抑制基因Bel-2蛋白的表达量显著增强，线粒体形态得到改善，凋亡阳性细胞率也有所下降，但对促凋亡基因Bax蛋白的调节不很明显。因而推断电针是通过调节Bel-2蛋白的表达来抑制D-半乳糖所引起的神经细胞凋亡的。     

参龙健脑汤对D-半乳糖诱导衰老大鼠脑神经递质的影响

目的 探讨参龙健脑汤对D-半乳糖拟衰老大鼠学习记忆能力的影响.以及对拟衰老大鼠大脑皮质内去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺浓度变化的影响.方法 采用D-半乳糖诱导的脑老化大鼠为动物模型,将实验动物分为5组:正常对照组、参龙健脑汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、D-半乳糖诱导模型组,采用不同剂量的参龙健脑汤灌胃,分别用游泳水迷宫测定各组大鼠学习记忆能力的变化;采用荧光法测定各组大鼠大脑皮质内去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺浓度的变化.结果 与正常对照组相比,D-半乳糖模型组大鼠游泳时间延长,游泳正确次数降低(P<0.05).与模型组比较,应用大剂量参龙健脑汤处理6周后.大鼠游泳时间降低,正确次数增加(P<0.05);大鼠脑内去甲肾上腺素、5-羟色胺的浓度升高(P<0.05).结论 参龙健脑汤能改善D-半乳糖诱导的脑老化大鼠学习记忆能力,并能提高脑组织中去甲肾上腺素、5-羟色胺浓度.上述作用呈剂量相关.     

The influence of fasudil on the epithelial-mesenchymal transdifferentiation of renal tubular epithelial cells from diabetic rats

To investigate the influence of fasudil on the epithelial-mesenchymal transdifferentiation of renal tubular epithelial cells from diabetic rats and explore the mechanisms of this effect. Wistar rats were randomly divided into the following three groups: control, diabetes and fasudil-treatment. All rats were sacrificed after three months of feeding with or without fasudil treatment. Pathological changes to the glomeruli and renal interstitium were studied using Periodic acid-Schiff's staining and Masson staining, respectively. Expression of ROCK1, α-SMA, E-cadherin and the distribution of β-catenin in rat renal cortex were revealed by immunohistochemistry. Changes in the MYPT1 phosphorylation profile and α-SMA, E-cadherin and membrane β-catenin expression were revealed by western blot. Changes in the levels of ROCK1, E-cadherin and total β-catenin mRNA expression were analyzed by real-time PCR. Fasudil treatment notably attenuates renal interstitial fibrosis in diabetic rats. Compared to the control rats, diabetic rats showed elevated phosphorylation of MYPT1, increased expression of ROCK1 and α-SMA, decreased expression of E-cadherin and membrane β-catenin, and increased expression of ROCK1 and total β-catenin mRNA, decreased expression of E-cadherin mRNA. Fasudil treatment of diabetic rats resulted in attenuated MYPT1 phosphorylation, decreased ROCK1 and α-SMA expression, increased E-cadherin and membrane β-catenin expression, and reduced ROCK1 and total β-catenin mRNA expression, increased expression of E-cadherin mRNA. In conclusion, fasudil may reduce the epithelial-mesenchymal transdifferentiation and renal interstitial fibrosis in diabetic rats through a mechanism by which ROCK activity is inhibited, which further facilitates the recovery of the cell-cell adhesions among renal tubular epithelial cells and adhesion complex formation.     

肾间质纤维化中结缔组织生长因子（CTGF）与肾小管上皮细胞表型转化的关系

目的研究肾间质纤维化过程中CleF与肾小管上皮细胞表型转化的关系方法采用免疫组化方法,检测各组肾活检标本CTGF和α-SMA的表达。结果CTGF主要表达于肾小管上皮细胞和一些肾间质细胞胞浆,并且随间质病变的加重,表达量增加,范围增大;α-SMA在病变肾间质区域表达增强,一些管腔破坏和萎缩的肾小管上皮细胞也可见表达,阳性分布区域与CTGF相似。肾小管间质中CTGF、α-SMA表达量之间呈正相关,CTGF和α-SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关关系。结论CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化的形成,CTGF的表达上调对肾脏疾病有预后价值。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质成分的调节与阿魏酸钠的干预效果

背景：细胞外基质在肾间质的积聚是肾小管间质纤维化的主要特征。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用。目的：从细胞水平观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的影响。设计：以细胞为观察对象，随机对照实验：单位：四川大学华西医院肾脏科、材料：大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E来源于American Type Culture Collection（ATCC），由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供，本实验所用细胞株为第36代。阿魏酸钠为白色晶体，可溶于水，纯度〉98．0％，由成都亨达药业有限公司提供，实验时终浓度分别125，250，500μmol／L。兔抗大鼠α平滑肌肌动蛋白多克隆抗体为武汉博士德产品；ELISA试剂盒为上海森雄公司产品；人重组转化生长因子β1为R＆D公司产品：DNA Engine Opdcon^TM实时荧光定量聚合酶链反应仪为MJ Research产品。方法：将体外培养的细胞株NRK52E分为5组；空白对照组：仅加入含血清的DMEM培养基；转化生长因子β1刺激组；培养液中加入终质量浓度为5ng/L的转化生长因子β1；阿魏酸钠低、中、高浓度组：培养液中加入终质量浓度为5ng／L转化生长因子β1和125，250，500μmol／L的阿魏酸钠。主要观察指标：应用相差显微镜、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对细胞外基质主要成分胶原Ⅰ胶原Ⅲ和纤维粘连蛋白的影响。结果：①NRK52E细胞形态：与空白对照组相比，转化生长因子β1刺激组细胞在培养3d后，细胞株NRK52E从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态。阿魏酸钠3个浓度组细胞受转化生长因子β1的刺激而出现的形态学改变得到不同程度的改善，并呈剂量依赖性。②α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达：转化生长因子β1 5ng／L诱导6h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA较空白对照组上升，在72h达高峰；经过不同剂量阿魏酸钠干预72h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA显著下调并呈剂量依赖性（P〈0．05）。③细胞外基质变化；经转化生长因子β1 5ng／L诱导72h后，细胞培养上清中Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白含量明显增加（P〈0．05）。经过不同剂量的阿魏酸钠干预后，不同程度地抑制了转化生长因子β1促Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白增多的作用，并呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：转化生长因β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，刺激细胞外基质成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的升高。阿魏酸钠可剂量依赖性地抑制转化生长因子β1所导致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化作用。     

尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义

目的 探讨尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义。方法 无菌收集40份尿毒症患者血清和20例正常人血清,培养及鉴定人肾小管上皮细胞株（HK-2）,采用消化法检测羟脯氨酸含量,ELISA方法检测纤连蛋白（FN）、金属蛋白酶-1（MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的蛋白分泌量,RT-PCR方法检测MMP-1、TIMP-1 mRNA的表达。结果 5％-20％浓度尿毒血清组胶原蛋白、FN分泌量均较正常对照组增高（P〈0．01）,且随着尿毒血清浓度的升高而增高,以分子量〉10000ku的组分增高最为显著（P〈0．01）。各浓度尿毒血清组MMP-1／TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值均较正常对照组降低（P〈0．01）,且随着尿毒血清浓度的增高而降低,以分子量〉10000ku尿毒血清组降低最为显著,而分子量〈5000ku尿毒血清组较正常对照组增高（P〈0．01）。结论 慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症毒素可能通过促进人肾小管上皮细胞外基质的分泌,减少其降解,加速肾小管．间质纤维化的进展,其中以分子量〉10000ku的尿毒症毒素作用最为显著。     

高糖诱导肾小管上皮细胞转化的作用

目的观察高糖诱导肾小管上皮的转化,以及转化生长因子13,（TGF-β1）和信号转导蛋白（Smad）受体激活锚定蛋白（SARA）的变化。方法建立高糖诱导肾小管上皮细胞（HKC）转化模型,高糖处理HKC0、12、24、48h后提取总蛋白,Westernblot法检测波形蛋白、钙黏附蛋白、TGF—β1、SARA和Smad2蛋白的表达。结果Westernblot法检测高糖处理HKC0、12、24、48h后,钙黏附蛋白的相对表达量分别为1．13±0．31、0．74±0．1g、0．63±0．18、0．32±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;波形蛋白相对表达量分别为0．23±0．09、0．34±0．04、0．83±0．15、1．02±0．22,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;TGF—B1蛋白的相对表达量分别为0．25±O．08、0．44±O．12、0．72±0．21、0．92±0．28,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;SARA蛋白的相对表达量分别为0．83±0．21、0．54±0．13、0．42±0．09、0．35±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;Smad2蛋白的相对表达量分别为1．14±0．22、0．82±0．15、0.61±0．17、0．30±0．13,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论高糖可诱导HKC转化,TGF—β1通路的激活可能是其主要的作用机制,SARA蛋白的下调和继发的Smad2蛋白降解协同了TGF—β1通路的致纤维化作用。     

上皮细胞膜抗原和增殖细胞抗原在肾细胞癌中的表达与预后的关系

目的探讨上皮细胞膜抗原(EMA)及增殖细胞抗原(PCNA)在肾细胞癌中的表达与鉴别方法。方法使用免疫组化法检测82例肾细胞癌EMA和PCNA表达,以及比较EMA与PCNA的阳性表达与肾癌临床病理之间的关系。结果 EMA在肾癌中的表达率为75.60%(62/82),主要位于细胞浆与细胞膜。EMA阳性表达组的5年生存率为71.42%,高于EMA阴性表达组的5年生存率(28.57%),差异有统计学意义(χ2=4.32,P<0.05)。PCNA在肾癌中的总阳性表达率78.05%(64/82),主要位于细胞核,均为增殖活跃表达;其5年生存率为57.14%,低于PCNA阴性表达组的5年生存率72.85%,差异有统计学意义(χ2=3.76,P<0.05)。在不同病理分级的肿瘤组织中,Ⅰ级的EMA阳性表达高于Ⅱ级和Ⅲ级,Ⅱ级的EMA阳性表达高于Ⅲ级,差异均有统计学意义(χ2分别=4.77、9.12、9.98,P均<0.05);Ⅰ级的PCNA增殖活跃程度低于Ⅱ级和Ⅲ级,Ⅱ级的PCNA增殖活跃程度低于Ⅲ级,差异均有统计学意义(χ2分别=3.86、8.42、7.95,P均<0.05)。在不同肿瘤大小、组织学分型、临床分期的肿瘤组织中EMA、PCNA的表达比较,除移动细胞癌与透明细胞癌的EMA阳性表达比较,差异有统计学意义(χ2=16.94,P<0.05)外,余指标之间比较,差异均无统计学意义(χ2分别=0.58、2.39、16.94、0.71、8.04、3.01,P均>0.05)。结论 EMA和PCNA在肾细胞癌中表达可在一定程度上反映肿瘤的恶性程度及预后,可作为鉴别高分期肾癌的依据之一。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的改善作用并探讨其机制。方法将雄性Wistar大鼠36只随机分为假手术组,UUO组,处理组(AcSDKP+UUO),每组各12只。于造模第3、14d各处死大鼠6只,取其梗阻侧肾脏组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理改变,计算肾间质纤维化指数。免疫组织化学方法检测其各组肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1及a-SMA mRNA含量。结果与假手术组相比,各时间点UUO组大鼠肾脏病理损害进行性加重,AcSDKP处理后可明显减轻UUO组大鼠肾间质纤维化程度(P0.05);免疫组化染色及RT-PCR显示:TGF-β1、a-SMA的蛋白及mRNA表达UUO组和处理组明显多于假手术组,但处理组较UUO组明显减轻(P0.05)。结论 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)可通过抑制TGF-β1及a-SMA表达,进而抑制大鼠肾间质纤维化,减缓肾纤维化的病程进展。     

高糖诱导下肾小管上皮细胞中细胞因子信号转导抑制因子-1/3的表达及意义

目的 观察高糖诱导下肾小管上皮细胞形态学改变及细胞因子信号转导抑制因子(SOCS-1/3)在肾上管上皮细胞中的表达及意义. 方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),并分为空白对照组、高糖组、Janus激酶2抑制剂AG490组.空白对照组以无血清培养基(5.5 mmol/L葡萄糖)培养细胞8 h;高糖组在含1%胎牛血清培养基中加高糖(300.0 mmol/L葡萄糖)培养;AG490组在高糖组基础上加10 μmol/L AG490培养.后两组再按培养时间分为2、4、6、12、24、48 h 6个亚组,每组6孔.倒置显微镜和电镜下观察细胞形态学及超微结构改变,采用免疫细胞化学和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SOCS-1/3蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SOCS-1/3 mRNA表达. 结果 与空白对照组比较,高糖组12 h后细胞呈梭形改变,有不规则突起,随时间延长细胞界限不清,胞质内颗粒增多;电镜下细胞表面微绒毛及细胞内线粒体明显减少,粗面内质网明显增加.AG490组细胞变化不明显.免疫细胞化学显示,SOCS-1/3蛋白表达以胞质为主,散在胞核表达.SOCS-1/3在正常HKC中有基础表达(0.218±0.023,0.337±0.009);高糖组4～24 h SOCS-1/3蛋白表达均高于空白对照组,其中SOCS-1以4 h表达最高(1.022±0.072),SOCS-3以6 h表达最高(1.256±0.105,均P<0.01);AG490组SOCS-1/3蛋白表达较高糖组明显下降(4 h SOCS-1:0.589±0.167,6 h SOCS-3:0.656±0.075,均P<0.05).高糖组2～12 h SOCS-1/3 mRNA表达高于空白对照组,其中SOCS-1以4 h表达最高(1.716±0.098比0.475±0.045,P<0.05),SOCS-3以6 h表达最高(2.848±0.116比0.749±0.086,P<0.01);AG490组则低于高糖组(4 h SOCS-1:0.865±0.075,6 h SOCS-3:0.923±0.116,均P<0.05). 结论 高糖可诱导肾小管上皮细胞发生形态学及超微结构改变,在早期即有SOCS-1/3表达上调,可能与Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)/SOCS信号转导通路的负反馈调节途径有关.     

骨髓间充质干细胞体内分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)能否在体内分化为肾小管上皮细胞。方法取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)进行标记。32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量的生理盐水。分别于术后1d、2d、3d、4d处死大鼠,留取肾组织,荧光显微镜观察移植的MSCs在肾组织中的分布,采用能与肾小管内腔壁特异结合的蓖麻血凝素(Ricinus communis agglurinin,RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定。结果移植组术后第三天肾组织内可见DAPI标记细胞,第四天DAPI标记细胞明显增多(P<0.05),且多数DAPI标记细胞能结合RCA。对照组没有发现DAPI标记细胞。结论移植的外源性MSCs能够迁移、定居于肾组织中并分化为肾小管上皮细胞。     

高脂血症对OLETF大鼠肾小管上皮细胞尿酸盐阴离子交换器表达的影响

目的:探讨自发代谢综合征及2型糖尿病动物模型(OLETF大鼠)在高脂血症阶段肾小管上皮细胞尿酸盐阴离子交换器(URAT1)的表达.方法:选择雄性4周龄OLETF大鼠10只为OLETF组,同系4周龄LETO大鼠(非糖尿病)10只为LETO组,基础饮食至11周龄,记录7周龄和11周龄大鼠体重、体长,检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿酸(UA)、肌酐、尿素氮、高密度脂蛋白,采用荧光定量RT-PCR方法检测URAT1在肾皮质中的表达量.结果:大鼠11周龄时,OLETF组TG、TC较LETO组显著增高,均P＜0.05;UA较LETO组升高,但P＞0.05;URAT1 mRNA的表达水平为2.17,较LETO组(1.00)明显升高,P＜0.05.结论:OLETF大鼠在高脂血症阶段,随着尿酸的升高,URAT1 mRNA的表迭明显升高.可能通过上调URAT1的表达,来调节体内尿酸的排泄.脂代谢紊乱和高尿酸血症可能通过该纽带密切相关联.