高血糖对肝纤维化大鼠血清中TGF-β1、CTGF含量的影响

目的观察高血糖对肝纤维化大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)含量的影响,探讨高血糖与肝纤维化之间的相关性。方法将40只SD大鼠按照体重随机分为4组,每组10只,分别为对照组(C组)、高血糖组(H组)、肝纤维化组(M组)、高血糖+肝纤维化组(H+M组),其中用四氯化碳造肝纤维化模型,用链脲佐菌素诱导出现高血糖,8周后将动物处死,取血,采用酶联免疫分析法(ELISA法)检测4组动物血清中TGF-β1、CTGF的含量,采用实时定量RT-PCR检测4组动物血清中TGF-β1、CTGF mRNA的表达。结果 TGF-β1、CTGF含量及mRNA表达在H组与C组相比无显著差异(P0.05),M组及H+M组血清中上述指标明显高于C组(P0.05),而H+M组血清中上述指标升高更明显(P0.05);且TGF-β1与CTGF之间具有明显的正相关(r=0.812,P0.05)。结论高血糖能够增加肝纤维化大鼠血清中TGF-β1及CTGF的表达及含量,且TGF-β1与CTGF含量与肝纤维化程度呈正相关,可以作为评价肝纤维化的重要指标。     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响

背景：Delta—like4（DLL4）是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制DLL4可导致过度无效的血管生成。目的：研究RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点：随机分组,对比观察,于2007—07／2008—09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料：人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法：设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine^TM2000介导DLL4 siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录一聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测DLL4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测DLL4 siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组：①85nmol／LDLL4 siRNA—duplex组。②85nmol／LDLL4 siRNA-scrambled阴性对照组。⑧lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标：RNA干扰后,人微血管内皮细胞DLL4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果：反转录聚合酶链反应和Western blot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录DLL4和表达DLL4蛋白;85nmoIILDLL4 siRNA完全抑制人微血管内皮细胞DLL4转录和DLL4蛋白的表达。DLL4sIRNA抑制人微血管内皮细胞DLL4表达的有效浓度为85nmol／L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol／LDLL4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190．00％,未经处理组的细胞增殖率为110．00％。结论：人微血管内皮细胞表达DLL4,DLL4 siRNA抑制人微血管内皮细胞表达DLL4并促进人微血管内皮细胞增殖,DLL4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。     

TGF-β1和CTGF与慢性心力衰竭心肌纤维化的研究进展

随着生活方式的不断转变,加之我国已逐步步入老龄化社会,慢性心力衰竭已成为临床高发疾病,并且近年来该疾病的发病率仍然呈不断上升趋势。因此为降低患者的病痛,改善患者生存质量,则需要对其予以及时有效的治疗。为提升患者的治疗效果,则需要明确导致慢性心力衰竭心肌纤维化的相关因素,才能够对患者予以针对性的治疗。依据相关研究表明,转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)与慢性心力衰竭心肌纤维化具有密切关联,本文将探讨TGF-β1和CTGF与慢性心力衰竭心肌纤维化的关系。     

脐带间充质干细胞对角膜内皮细胞增殖能力的影响

目的:探讨并优化人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)体外获取及培养增殖的方法并鉴定;观察兔角膜内皮细胞(cornea endothelial cells,CEC)与hUCMSCs共培养后增殖能力及细胞周期的变化.方法:用酶消化法体外分离培养hUCMSCs,流式细胞仪检测hUCMSCs免疫表型:将CEC分别与hUCMSCs、兔角膜基质细胞在Transwell体系中共培养,通过流式细胞术观察内皮细胞增殖能力及细胞周期的变化.结果:采用酶消化法能有效分离纯化hUCMSCs.接种24 h,贴壁细胞形态多为长梭形、多边形或成纤维细胞样形态,大小均一.流式细胞仪分析第3代细胞均表达CD29、CD44、CD105,不表达造血干细胞标记CD34、CD45和HLA-DR.与空白对照组CEC周期比较脐带间充质干细胞组与基质细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例增加.G1期细胞比例下降,干细胞组增加幅度高于基质细胞组.干细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例比空白对照组的平均增加近17%,增殖能力显著提高.结论:经鉴定用酶消化法体外能成功分离培养出hUCMSCs,将其与CEC共培养能促进CEC增殖.     

RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究

本研究运用RNA干扰（RNAi）技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默，揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用。采用脂质体法将MMP-2小干扰RNA（siRNA）转化内皮细胞EAhy926，通过RT—PCR及流式细胞术分别在基因和蛋白水平验证转化的效率。应用MTT比色法测定经MMP-2siRNA干扰不同时间EAhy926细胞的增殖能力；虎红染色测定光密度法观察干扰48小时后内皮细胞在两种趋化因子作用下的迁移及侵袭能力的变化；Matrigel胶三维培养法观察干扰48小时后内皮细胞血管形成能力的改变；流式细胞术及半定量RT—PCR法测定内皮细胞周期和相关基因的变化。结果表明：干扰因素施加后48小时MMP-2基因表达水平降低至谷底，较正常对照下降约82％；流式细胞术分析表明，干扰因素施加后60小时MMP-2蛋白表达水平降低至谷底，较对照下降约60％。旧法检测显示干扰前后内皮细胞增殖无明显变化。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时后在两种趋化因子作用下的迁移能力均受到抑制，且对COLⅣ的抑制作用强于Fn（Fn未干扰组0．581±0．012，干扰组0．261±0．002；COLⅣ未干扰组对干扰组为0．467±0．009vs0．110±0．010，P〈0．01）。侵袭实验也有相似的结果（Fn未干扰组对干扰组为0．365±0．012vs0．101±0．002；COLⅣ未干扰组对干扰组为0．317±0．009vs0．102±0．010，P〈0.01）。内皮细胞体外的血管形成能力在经siRNA干扰48小时后下降至正常的58．9％。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时及72小时后，有丝分裂后期细胞比例（G1）分别由对照组[（65．9±2．53）％；（63．2±1.89）％]上升至[（83．9±2．53）％，（89．2±1．24）％]（P〈0．01）；DNA复制期（S）和有丝分裂前期（G2）期细胞比例分别由对照组[（32．7±1．91）％，（37．1±2．65）％]下降至[（18．1±1.49）％，（10．2±0．     

角膜塑形镜对角膜内皮细胞和角膜厚度的影响

  目的  探讨配戴夜戴型角膜塑形镜1年对角膜内皮细胞和角膜厚度的影响。  方法  观察2008年8月至2009年2月8~14岁在本院配戴角膜塑形镜随诊数据完整者40例(79眼), 配戴前与配戴后6个月及1年进行角膜内皮细胞和角膜厚度的测定与比较, 同时观察裸眼视力、屈光度和角膜地形图的变化。  结果  配戴后6个月及1年与配戴前比较角膜内皮细胞密度均无明显降低(P > 0.05)。细胞变异系数和六角形细胞比率在6个月时无明显变化, 而在1年时分别轻度增加和减少, 与配戴前比较差异均具有统计学意义(P < 0.05);角膜厚度在配戴后6个月及1年与配戴前比较无明显改变, 差异无显著统计学意义(P > 0.05)。配戴后1年裸眼视力、屈光度和角膜地形图(K值)与配戴前比较差异均有显著统计学意义(P < 0.01)。  结论  角膜塑形镜降低近视屈光度、控制近视发展效果明显, 但长期配戴对角膜内皮细胞形态有轻度影响, 必须严密观察和随诊, 以确保长期治疗的有效性和安全性。     

血管内皮细胞生长因子受体2基因短发夹RNA介导基因沉默对白血病的抑制

背景：血管内皮细胞生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR2）在血管内皮细胞生长因子的信号转导中有主导效应，并在某些疾病包括白血病的病理性血管生成中起关键作用。另外，白血病细胞分泌的血管内皮细胞生长因子还诱导自身表达VEGFR2．从而维持自身存活、增殖。目的：观察表达VEGFR2短发夹RNA（shorthairpin RNA，shRNA）的慢病毒载体Lenti6，shVEGFR2在全身性NOD／SCID白血病模型鼠中的作用，设计：随机、平行对照、开放性实验。单位：中山大学附属第二医院儿科，中山大学生物工程研究中心。材料：实验于2004-05／2006-01在中山大学附属第二医院医学研究中心、中山大学生物工程研究中心完成。分别以HL60，EA·hy926细胞株作为实验用白血病细胞、人血管内皮细胞的来源。Block-iT Lentiviral RNAi ExpressionSystem（Invitrogen）；humanVEGFR2Mcb（PE标记，R＆D）。CD31组化试剂盒（武汉博士德公司），CD33-PE流式细胞荧光标记抗体（BD公司）。方法：（D制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA，并据此设计shRNA寡核苷酸链。②构建pU6／shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞，构建表达克隆Lenti6／shVEGFR2，与VimPowed”PackagingMix共转染到293FT“细胞中，产生携带表达克隆的慢病毒载体。③pU6／shVEGFR2入门克隆转染和Lenti6／shVEGFR2转导HL60细胞，MTT法测定HL60细胞抑制率。④建立HL60白血病模型后观察注入人血管内皮细胞后小鼠骨髓微血管的分布。⑤将NODISCID小鼠20只随机分为4组，每组5只：白血病模型鼠组，白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组，白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组及白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。检测各组小鼠的骨髓细胞CD33表达变化、骨髓微血管密度变化及外周血细胞涂片、肝、脾的肿瘤浸润情况，以了解Lenti6／shVEGFR2重组慢病毒对小鼠白血病的作用。主要观察指标：①VEGFR2siRNA鉴定结果。②pU6，shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响。③pU6，shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6／shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较。④慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGFNEGFR2旁分泌和自分泌的影响。结果：①pU6，shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响：VEGFR2siRNAc抑制HL60细胞效率最高，利用其构建的pU6／shVEGFR2入门克隆并转染HL60，抑制细胞效率达84．9％；显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达。②pU6／shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6／shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较：pU6／shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6／shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48h细胞抑制率相近，48h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降（P〈0．01）；而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢，在96h达高峰，120h稍降，变化无显著差异。③慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGFNEGFR2旁分泌和自分泌的影响：白血病模型组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组小鼠骨髓流式细胞仪HL60检测结果分别为（25．8％±4．9）％，（14．3％±5．1）％．（8．4＋2．6）％，三组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组微血管密度明显小于白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组与其他组相比HL60细胞数最低。结论：①pLenti6／shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后持续高水平抑制细胞。重组慢病毒Lenti6／shVEGFR2具有抑制白血病小鼠骨髓血管生成的作用。②VEGFR2siRNA可阻断白血病HL60细胞VEGF／VEGFR2自分泌的内环路，在体外、动物体内均得到验证。③VEGFNEGFR2自分泌链和旁分泌链的联合阻断加强了抗白血病效果：     

参麦注射液对内皮细胞增殖和迁移的影响

背景：有报道参麦注射液具有治疗冠心病与抗肿瘤作用，但其作用机制如何?目的：从对血管生成影响角度探讨参麦抗肿瘤的作用机制。设计：设立对照的实验研究。地点和材料：浙江中医学院分子医学研究所。人癌细胞株购自中国科学院细胞生物学研究所。参麦注射液(10mL／2g)：正大青春宝公司。干预：采用MTT法检测参麦注射液对牛血清和肿瘤细胞(SMMC-7721)条件培养液促进的牛主动脉内皮细胞增殖的影响；采用琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清和肿瘤细胞(SMMC-7721)条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。培养细胞分为对照组、条件培养液组、不同浓度参麦注射液组。主要观察指标：参麦注射液对牛内皮细胞增殖和迁移的影响，参麦对条件培养液促牛内皮细胞迁移的影响。结果：无论是在含100mL／L新生小牛血清培养液中还是在肿瘤细胞条件培养液中，参麦均能明显抑制牛主动脉内皮细胞增殖，且随着剂量增加，抑制作用增强。当参麦的浓度为40mL／L时即可显著抑制牛血清促进的内皮细胞增殖，与对照组相比，差异有显著性意义(t=4．83，P&;lt;0．01)，20mL／L的参麦即可明显地抑制由条件培养液促进的内皮细胞增殖，与对照组相比，差异有显著性意义(t=5．32，P&;lt;0．01)。经20mL／L参麦处理48h后，对内皮细胞迁移的抑制率为58％，与对照组相比差异有显著性意义(t=8．36，P&;lt;0．01)；20mL／L的参麦对条件培养液中内皮细胞迁移的抑制率为50％，与对照组相比差异有显著性意义(t=5．45，P&;lt;0．05)。结论：参麦能抑制牛内皮细胞增殖和迁移，具有抗血管生成的作用。     

参麦注射液对内皮细胞增殖和迁移的影响

背景:有报道参麦注射液具有治疗冠心病与抗肿瘤作用,但其作用机制如何?目的:从对血管生成影响角度探讨参麦抗肿瘤的作用机制。设计:设立对照的实验研究。地点和材料:浙江中医学院分子医学研究所。人癌细胞株购自中国科学院细胞生物学研究所。参麦注射液(10mL/2g):正大青春宝公司。干预:采用MTT法检测参麦注射液对牛血清和肿瘤细胞(SMMC-7721)条件培养液促进的牛主动脉内皮细胞增殖的影响;采用琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清和肿瘤细胞(SMMC-7721)条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。培养细胞分为对照组、条件培养液组、不同浓度参麦注射液组。主要观察指标:参麦注射液对牛内皮细胞增殖和迁移的影响,参麦对条件培养液促牛内皮细胞迁移的影响。结果:无论是在含100mL/L新生小牛血清培养液中还是在肿瘤细胞条件培养液中,参麦均能明显抑制牛主动脉内皮细胞增殖,且随着剂量增加,抑制作用增强。当参麦的浓度为40mL/L时即可显著抑制牛血清促进的内皮细胞增殖,与对照组相比,差异有显著性意义(t=4.83,P<0.01),20mL/L的参麦即可明显地抑制由条件培养液促进的内皮细胞增殖,与对照组相比,差异有显著性意义(t=5.32,P<0.01)。经20mL/L参麦处理48h后,对内皮细胞迁移的抑制率为58%,与对照组相比差异有显著性意义(t=8.3     

聚焦超声近场对体外内皮细胞增殖的影响

目的 研究聚焦超声治疗外阴白色病变常用辐照参数(频率、声强、辐照时间)下的声通道近场对内皮细胞增殖的影响,优化最适辐照参数.方法 采用不同辐照频率(10.1、11.2 MHz)、功率(4.3、5 W)下的聚焦超声近场分别对体外人脐静脉内皮细胞辐照5、10、15、20、25和30 s,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测24 h后其生长增殖情况.结果 数据分析显示,10.1 MHz、4.3 W,11.2 MHz、4.3 W辐照10 s,10.1 MHz、5.0 W,11.2 MHz、5.0 W辐照15 s时,内皮细胞相对成活比分别较对照组大(均有P<0.05).其中,11.2 MHz、4.3 W辐照10 s时,内皮细胞相对成活值最大,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 频率11.2 MHz、功率4.3 W、辐照时间10 s为聚焦超声近场促进内皮细胞增殖活性最适辐照参数.     

靶向IGF-ⅠR的RNA干扰技术抑制胃癌细胞增殖的研究

目的 观察特异的小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)对胃癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(Insulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-Ⅰ R)基因表达的抑制作用,研究其对肿瘤增殖的影响.方法 设计并体外合成2条靶向IGF-Ⅰ R的siRNAs,脂质体法瞬时转染MGC803细胞,转染前后均使用Western Blot法检测IGF-Ⅰ R的表达水平,MTT法检测细胞增殖,细胞计数并描记生长曲线.结果 MGC803细胞中有IGF-ⅠR的强烈表达.转染后48h,干扰组(siRNA2-L组、siRNA2-H组、siRNA1组)IGF-Ⅰ R表达抑制率分别为64.41%±4.11%、74.14%±6.15%、89.8%±4.10%;siRNA1组转染后第2-5天细胞增殖逐渐减少(分别达49.9%±1.2%、45.9%±4.4%、39.1%±5.1%、29%±4.0%);同期细胞计数分别为对照组的65.58%±4.89%、55.59%±0.82%、44.18%±3.17%、21.15%±1.1%.结论 特异的siRNAs可显著抑制胃癌细胞中的IGF-Ⅰ R基因的表达从而显著抑制细胞的增殖.     

应用RNA干扰技术抑制白血病细胞血管内皮生长因子基因表达及功能的研究

目的探讨用RNA干扰技术下调血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对白血病细胞生长的影响。方法设计3段分别针对VEGF第3~5外显子的短发夹状RNA(shRNA)并构建其表达载体,分别转染人白血病细胞株NB4,用实时定量PCR及Western blot方法观察3段shRNA对细胞内VEGF基因表达的影响。抗性筛选稳定抑制VEGF表达的永久细胞克隆,应用MTT法、甲基纤维素半固体培养法及细胞周期动力学检测了解VEGF基因缄默对白血病细胞生长的影响。结果成功构建分别携带3段shRNA及对照随机片段的重组质粒pGenesil-VR1,2,3和pGenesil-con,3种shRNA重组质粒中pGenesil-VR3可明显降低细胞内VEGF mRNA的丰度及VEGF蛋白表达,筛选出的NB4-VR3细胞株增殖能力明显下降,细胞集落形成率为(13.3±3.8)%,与NB4-con的(21.3±6.4)%和NB4组的(24.5±5.2)%相比,差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期阻滞于G1期,3组细胞G1期比例分别为(53.2±4.6)%、(42.7±5.9)%和(40.5±5.3)%。结论应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断VEGF基因表达及功能的shRNA,VEGF基因表达下调能明显抑制白血病细胞生长。     

RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放

背景:利用RNA干扰和沉默基因达到临床治疗效果,已经越来越受到重视。目的:探讨利用小干扰RNA方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体释放的效果和意义。方法:设计腺病毒介导的针对调节韦伯潘力氏小体释放的关键蛋白N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子N端功能区shRNA,筛选鉴定收获病毒,转染人主动脉内皮细胞,携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染设为实验组、单纯病毒表达载体转染设为阴性对照组,空白对照组未加任何东西。结果与结论:用携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,3组N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA表达比较,差异有显著性意义(P<0.05);实验组的表达随时间变化持续下降,24,48,72h组间比较差异有显著性意义(P=0.048)。N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子蛋白表达实验组低于两对照组,差异有显著性意义(P<0.05);而两对照组之间比较差异无显著性意义(P=0.249)。免疫荧光染色显示,N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体的释放。说明携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体释放。     

RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放

背景：利用RNA干扰和沉默基因达到临床治疗效果,已经越来越受到重视。目的：探讨利用小干扰RNA方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体释放的效果和意义。方法：设计腺病毒介导的针对调节韦伯潘力氏小体释放的关键蛋白N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子N端功能区shRNA,筛选鉴定收获病毒,转染人主动脉内皮细胞,携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染设为实验组、单纯病毒表达载体转染设为阴性对照组,空白对照组未加任何东西。结果与结论：用携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,3组N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA表达比较,差异有显著性意义（P〈0.05）;实验组的表达随时间变化持续下降,24,48,72h组间比较差异有显著性意义（P=0.048）。N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子蛋白表达实验组低于两对照组,差异有显著性意义（P〈0.05）;而两对照组之间比较差异无显著性意义（P=0.249）。免疫荧光染色显示,N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体的释放。说明携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体释放。     

RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

Objective To investigate the impact on renal fibrosis by inhibition of connective tissue growth factor( CTGF) by RNA interference in spontaneous hypertension rat( SHR) . Method Twenty SHR were randomly (random number) divided into SHR group ( n = 10) and RNAi group ( n = 10), eight Wistar-Kyoto rats were set as control. At the end of RNA interference procedure, all the rats were sacrificed and the kidneys were harvested. The mRNA and plasmosin of CTGF and fibronectin(FN) of renal tissue were extracted and measured by RT-PCR and Western Blotting. And the localization of CTGF and FN were analyzed with immunohistochernistry technique. The collagen deposition(shown as collagen volume traction, CVF) were evaluated with 0.1% sirius-picric staining, and the hydroxyproline of myocardium were detected by colorimetry. Results The mRNA and protein expression of CTGF decreased 66% and 62% in RNAi group (P < 0.01). The mRNA and protein expression of FN decreased 56% and 51% in RNAi group.The same inhibition effect was observed by hislological analysis. Immuno-histochemistry showed that CTGF localized both in renal parenchyma and renal interstitium, whereas FN majorly expressed in renal interstitium. Observation with light microscope showed that collagen deposition(CVF)decreased sharply in RNAi group versus SHR group. And the same effect was viewed in hydroxypnoline assay[SHR group: (0.596 ± 0.067) μg/mg, RNAi group: (0.368±0.084) μg/mg, P < 0.01 ] .Further study by polarized microscope displayed that RNA interference mainly suppressed type I collagen synthesis. Conclusions Targeted inhibition of CTGF by RNA interference leads significant decrease of extracellular matrix deposition in kidney. And the anti-fibrotic effect independent of lower the blood pressure. This study indicated CTGF take a key role in the development and progress of renal fibrosis.     

特异性hTERT-siRNA介导RNAi在Hela细胞中的实验研究

目的:探讨RNA干扰对宫颈癌Hela细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制效应。方法:化学合成靶向于hTERT基因的4个siRNA片段和1个阴性对照小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)片段,分siRNA 1-4、control siRNA和空白对照组共6个组,分别用阳离子脂质体转染法将其导入Hela细胞内,通过RT-PCR和WesternBlot方法分别检测宫颈癌细胞转染后细胞hTERT mRNA和蛋白水平,MTS法检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:siRNA-3组端粒酶活性明显下降,hTERT mRNA表达水平明显下降,hTERT蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向于hTERT的siRNA能特异性抑制宫颈癌Hela细胞hTERT基因,下调hTERT mRNA及蛋白表达水平,抑制癌细胞生长增殖,促进宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗研究提供实验依据。     

特异性hTERT-siRNA介导RNAi在Hela细胞中的实验研究

目的:探讨RNA干扰对宫颈癌Hela细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制效应.方法:化学合成靶向于hTERT基因的4个siRNA片段和1个阴性对照小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)片段,分siRNA1-4、control siRNA和空白对照组共6个组,分别用阳离子脂质体转染法将其导入Hela细胞内,通过RT-PCR和Western Blot方法分别检测宫颈癌细胞转染后细胞hTERT mRNA和蛋白水平,MTS法检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:siRNA-3组端粒酶活性明显下降,hTERT mRNA表达水平明显下降,hTERT蛋白表达明显下降.细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论:靶向于hTERT的siRNA能特异性抑制宫颈癌Hela细胞hTERT基因,下调hTERT mRNA及蛋白表达水平,抑制癌细胞生长增殖,促进宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗研究提供实验依据.     

RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展

Objective To investigate the impact on renal fibrosis by inhibition of connective tissue growth factor( CTGF) by RNA interference in spontaneous hypertension rat( SHR) . Method Twenty SHR were randomly (random number) divided into SHR group ( n = 10) and RNAi group ( n = 10), eight Wistar-Kyoto rats were set as control. At the end of RNA interference procedure, all the rats were sacrificed and the kidneys were harvested. The mRNA and plasmosin of CTGF and fibronectin(FN) of renal tissue were extracted and measured by RT-PCR and Western Blotting. And the localization of CTGF and FN were analyzed with immunohistochernistry technique. The collagen deposition(shown as collagen volume traction, CVF) were evaluated with 0.1% sirius-picric staining, and the hydroxyproline of myocardium were detected by colorimetry. Results The mRNA and protein expression of CTGF decreased 66% and 62% in RNAi group (P < 0.01). The mRNA and protein expression of FN decreased 56% and 51% in RNAi group.The same inhibition effect was observed by hislological analysis. Immuno-histochemistry showed that CTGF localized both in renal parenchyma and renal interstitium, whereas FN majorly expressed in renal interstitium. Observation with light microscope showed that collagen deposition(CVF)decreased sharply in RNAi group versus SHR group. And the same effect was viewed in hydroxypnoline assay[SHR group: (0.596 ± 0.067) μg/mg, RNAi group: (0.368±0.084) μg/mg, P < 0.01 ] .Further study by polarized microscope displayed that RNA interference mainly suppressed type I collagen synthesis. Conclusions Targeted inhibition of CTGF by RNA interference leads significant decrease of extracellular matrix deposition in kidney. And the anti-fibrotic effect independent of lower the blood pressure. This study indicated CTGF take a key role in the development and progress of renal fibrosis.