NKG2D及其配体在恶性血液肿瘤中的研究进展

近20年来血液肿瘤化疗方案的不断改进、靶向治疗药物的使用以及造血干细胞移植技术的广泛应用,使得其完全缓解率及长期生存率已有很大提高。但是肿瘤细胞耐药、复发、治疗的严重不良反应等问题,严重影响了血液肿瘤患者的长期无病生存及治愈。肿瘤的发生发展与机体的免疫功能密切相关,肿瘤的免疫逃逸是其发生的主要原因之一。打破肿瘤的免疫耐受、激活机体免疫来杀伤肿瘤成为当前肿瘤免疫治疗研究的主要方向。自然杀伤细胞（natural killer cells,NK cells）是天然免疫系统的主要效应细胞。NKG2D是NK细胞主要的激活性受体,与配体结合后可激活NK细胞和T细胞,杀伤有NKG2D配体表达的肿瘤细胞。因此,NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用,已成为近年肿瘤免疫治疗研究的热点。本文围绕NKG2D受体及其配体的生物学特性、功能及其在血液肿瘤免疫中的应用的研究进展进行综述。     

NKG2D-NKG2D配体系统抗肿瘤作用研究进展

肿瘤的免疫治疗已经成为抗肿瘤治疗中的一个重要策略,越来越多的证据表明,NKG2D-NKG2D配体系统在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。本文对NKG2D及其配体的表达、调节、信号传导、免疫治疗作一综述。     

NKG2D及NF-κB在胃腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨NKG2D和核因子-κB(NF-κB)在胃腺癌及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系.方法 通过免疫组织化学的方法,检测南昌大学第一附属医院20例胃腺癌组织及癌旁正常组织中NKG2D和NF-κB的蛋白表达情况,分析组织中表达率及表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 ①NKG2D在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为55%和100%(P<0.01);而NF-κB在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为95%和20%(P<0.01).②NKG2D在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌组织中显著降低,而NF-κB在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌中显著升高(P<0.05).③NKG2D和NF-κB的表达之间呈负相关(P<0.05).结论 胃腺癌组织中NKG2D表达下调而NF-κB表达上调,且二者的表达成负相关,NKG2D和NF-κB在胃癌发生发展中可能有重要作用.     

高原胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D的表达

目的研究高原胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达,并分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法对41例高原胃癌患者及30例健康人,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况并行相关分析。结果高原胃癌患者及健康者外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为（13.26±7.51）%、（32.18±5.14）%,胃癌组明显低于正常组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高原胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调有关。高原胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。     

灵芝多糖抗肿瘤免疫机制的研究进展

灵芝多糖因其免疫调节功能、抑制肿瘤生长且无不良反应等特点,被认为是通过调节机体免疫功能达到抗肿瘤目的的一味良好的药物。其抗肿瘤作用可能通过抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡、抑制肿瘤血管新生、调节机体免疫等途径实现,其中调节细胞因子、机体固有免疫系统、T/B淋巴细胞及黏膜免疫系统等的免疫机制可能是其发挥抗肿瘤作用的主要机制。     

DNA损伤反应会激活身体免疫系统

目的人们虽然对于DNA损伤启动细胞周期停止、DNA修复和凋亡等方面的机理已经比较了解,但是其对免疫系统的潜在作用却了解的比较少。最近研究发现,在自然杀伤细胞、某些T细胞,以及各种可以攻击肿瘤细胞的细胞,基因毒性应激和延迟DNA复制又能够诱导NKG2D受体的链接酶的表达。肿瘤细胞内的慢性激活反应有利于免疫辨认,同时也会影响到免疫逃逸和恶性化过程。这种DNA损伤特殊反应有利于理解治疗反应(其中很多可以诱导出DNA损伤反应),也有利于设计更为有效的癌症治疗方案。     

放射治疗对肺癌患者NKG2D、HMGB1及DC细胞活性的影响*

目的 分析接受放射治疗（以下简称放疗）肺癌患者在放疗不同阶段外周血细胞因子NKG2D、高迁移率蛋白1（HMGB1）的变化及与树突状细胞（DC细胞）活性的相关性。方法 选取承德医学院附属医院30例肺癌放疗患者,分别在放疗前及放疗后不同时段通过ELISA检测NKG2D、HMGB1,通过免疫磁珠法检测DC细胞。结果 HMGB1、NKG2D的浓度于放疗2?000、4?000及6?000?cGy时逐渐下降（P?<0.05）。DC细胞活性差异无统计学意义（P?<0.05）。DC细胞与HMGB1、NKG2D无相关性（r?=-0.204和0.105,P?= 0.281和0.580）。结论 放射治疗可降低肺癌患者HMGB1、NKG2D的水平,激活免疫功能,但对肺癌患者外周血中DC细胞的活性无影响,外周血中DC细胞活性与HMGB1、NKG2D无相关。     

固有免疫在急性HIV-1感染中的作用

病毒感染首先引起固有免疫系统的强烈激活,随后适应性免疫应答发生。病毒感染不同模型和疫苗的研究均进一步显示早期固有免疫应答的质量与随后适应性免疫应答功能有紧密联系。人类免疫缺陷病毒（HIV）感染与其他病毒感染相比在激活免疫系统方面没有差异,现有研究已经证明,在急性HIV-1感染中固有免疫系统成分的激活先于适应性B细胞和T细胞反应的发生。     

灸法对肿瘤相关免疫机制影响的研究述评

目的：探讨灸法对肿瘤相关免疫机制影响的研究。方法：对近12a来文献中关于灸法对免疫器官的作用、灸法对免疫细胞的作用、灸法对细胞因子的作用方面的研究进行分析、总结。结果：艾灸是中医学中公认的扶正之法,通过对机体的良性刺激来激活免疫细胞、分泌细胞因子从而促进免疫系统的自我调节。正常情况下人体免疫系统所具有的监视及清除非己成分的功能在肿瘤的发病中被无能状态所代替,一方面表现为免疫系统自身的异常导致的对肿瘤无法识别清除;另一方面肿瘤发生后又会产生抑制机体免疫系统的物质。结论：艾灸调节肿瘤状态下的免疫机制,有助于肿瘤的临床治疗,艾灸能提高肿瘤患者的生活质量。     

NKG2D在颅内肿瘤中的表达

 目的  通过研究垂体腺瘤、胶质瘤、脑膜瘤、颅咽管瘤患者外周血NK细胞表面受体NKG2D的表达情况,分析探讨NKG2D表达与颅内肿瘤的关系,并结合临床资料,对垂体腺瘤患者NKG2D表达与临床因素关系进行了分析。  方法  通过红细胞裂解法,分离受检者外周血单核细胞,染色后利用流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D的表达,并结合临床因素作比较分析。  结果 与正常人相比,胶质瘤、脑膜瘤、颅咽管瘤患者外周血NK细胞表面受体NKG2D表达无明显变化,垂体腺瘤患者外周血NKG2D的表达水平降低,并发现NKG2D的表达水平变化与垂体腺瘤患者视野缺损程度、出血等因素相关。 结论  在颅内常见肿瘤中,胶质瘤、脑膜瘤、颅咽管瘤患者外周血NK细胞受体NKG2D表达无明显变化,而垂体腺瘤患者外周血NK细胞受体NKG2D表达发生了变化,并且NKG2D表达水平与垂体腺瘤病情进展有一定的关系。     

MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的活化性受体表达

目的探讨暴发性肝炎初期疾病急速恶化的机制,探讨在3型鼠肝炎病毒（MHV-3）诱导的小鼠爆发性肝炎模型中,小鼠感染病毒前后γδT细胞其活化受体NKG2D表达情况。方法建立MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型,在不同感染时间点0、24、48h时对小鼠肝组织行苏木精-伊红染色（HE染色）,观察肝脏病理学改变,并检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。采用流式细胞学方法标记γδT细胞,并标记其NKG2D的表达。结果MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中,γδT表面所表达活化性受体NKG2D表达增高。结论小鼠暴发性肝炎初期,肝脏重要的天然免疫效应细胞γδT细胞表面活化性受体NKG2D表达增高。     

肝脏中自然杀伤细胞的表型及功能

自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,也是机体抗感染和防止细胞恶性转化的重要免疫调节细胞。与T淋巴细胞不同,NK细胞无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞,是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞。在肝脏中,NK细胞占很大比例,最近研究表明,NK细胞通过直接作用或生物信号间的协同作用活化树突状细胞或直接影响T细胞来调节T细胞的反应。肝脏NK细胞功能主要是通过激活抑制性受体的表达和炎性细胞因子的分泌调节,特别是与脾脏NK细胞相比,肝内NK细胞对白细胞介素(IL)-12、IL-18反应较低。同时,肝脏中含有较多的抑制性受体NK细胞受体2A抗体,缺乏组织相容性复合体Ⅰ类/Ly49受体。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

类风湿性关节炎患者外周血NKG2D、NKG2A及颗粒酶B表达的研究

目的 本研究旨在探讨类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中NK细胞表达NKG2D、NKG2A及胞内颗粒酶B的水平,并且分析它们与疾病活动度（DAS28）的相关性。方法 流式细胞术检测41例RA患者和35例健康对照者外周血中NK细胞、NKG2D⁺NK细胞、NKG2A⁺NK细胞以及颗粒酶B⁺NK的表达水平;采用Spearman秩相关分析法分析它们与DAS28的相关性。结果 RA患者外周血中,NK细胞表达水平显著低于健康对照组（P=0.016）;NKG2D的表达水平显著低于健康对照组（P=0.002）,且NKG2D的表达水平与DAS28评分呈负相关（P<0.05）;NKG2A的表达水平与健康对照组之间比较差异无统计学意义（P=0.547）,且与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）;颗粒酶B的表达水平有所降低（P=0.034）,但与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）。结论 活化性受体NKG2D以及胞内颗粒酶B表达的异常降低可能导致NK细胞杀伤活性的损伤,不能有效杀伤免疫效应细胞,从而促进了RA的发生、发展。     

肺癌患者外周血Th1、Th2细胞及NKG2D检测的临床意义

目的检测肺癌患者外周血中Th1、Th2型细胞因子及NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达水平,探讨其临床意义。方法选择64例初发未治疗的肺癌患者为病例组,体检中心健康人60例为对照组,分别用CBA法检测两组外周血Th1细胞因子ATh2细胞因子,流式细胞仪检测两组外周血NK细胞表面NKG2D含量。分析上述指标的不同表达水平在肺癌患者中的意义。结果（1）与正常对照组相比,病例组外周血中IL-2、IFN—γ、IL-10、表达水平低于对照组（p〈0.05）,IL-4、IL—6及TNF—α水平高于对照组（P〈0．05）,NKG2D水平低于对照组（P〈0.05）;（2）III-IV期肺癌患者IL-2、IFN—YANKG2D的表达明显低于I-II期患者,IL-4的表达则相反;（3）在不同病理分型中,鳞癌、腺癌及小细胞癌患者外周血中IFN—γ表达差异有统计学意义（F=3.995,P〈0.024）,其余指标表达差异无统计学意义,（4）TNF—α在男性患者中表达高于女性患者（t=2,087,P=0．041）,其余指标差异无统计学意义;（5）所检测指标在吸烟与否的患者间差异无统计学意义;（6）在对照组中,IL-2与IL-4、IL-10、TNF-α呈正相关;在病例组中,IL-2与IL-4、IFN—γ、TNF-α呈正相关,IL-4与IL-6、IL—10、IFN—γ、TNF-α呈正相关,IL-6与IL—10正相关,IFN—γ与IFN-α呈正相关,上述结果差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）肺癌患者Th1型细胞因子ANKG2D在外周血中低表达,Th2型细胞因子高表达,且与肺癌的分期有关;（2）Th1／Th2细胞因子的失衡ANKGaD的下调导致患者免疫功能失调,是肺癌发生发展的重要原因;（3）检测上述指标有助于了解患者的免疫功能状态,可为临床肿瘤的生物免疫治疗提供依据。     

加味寿胎丸联合黄体酮调节NKG2D、NKG2A表达治疗肾虚型URSA作用机制研究

目的?探讨NK细胞活性变化在不明原因复发性流产（URSA）发病中的机制;加味寿胎丸联合黄体酮通过调节NK细胞受体表达变化诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制。方法?选取加味寿胎丸联合黄体酮治疗肾虚型URSA成功患者20例,并选取同期URSA妊娠丢失组及健康早孕（HEP）组各15例,以流式细胞术检测各组外周血NKG2D、NKG2A的表达,并比较URSA妊娠组治疗后与健康早孕组血E₂、P、β-HCG水平。结果?URSA妊娠丢失组pNK细胞NKG2D呈高表达及NKG2A呈低表达,与HEP组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。URSA妊娠组治疗后pNK细胞NKG2D表达水平明显低于治疗前,与HEP组比较有统计学意义（P＜0.05）,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）;NKG2A表达水平明显高于治疗前（P＜0.01）,与HEP组比较无统计学意义,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。经加味寿胎丸联合黄体酮治疗后,URSA妊娠组血清E₂、P、β-HCG水平与HEP组分别比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论?NK细胞受体NKG2D、NKG2A的表达参与了URSA的发病;加味寿胎丸联合黄体酮能通过下调URSA患者NKG2D的表达水平,上调NKG2A的表达水平介导母胎免疫耐受治疗URSA;固肾安胎法是治疗肾虚型URSA的有效方法,加味寿胎丸是治疗肾虚型URSA的有效方剂。      

双特异性抗体mAb04-MICA对人白血病细胞K562的体内外抗肿瘤活性

探讨双特异性抗体mAb04-MICA对人白血病细胞K562的体内外抗肿瘤活性。前期研究显示,mAb04-MICA具有抗血管生成和重塑肿瘤微环境中的免疫监视作用,体外对K562细胞具有良好的抗肿瘤作用。通过ELISA鉴定mAb04-MICA 对抗原VEFGR2和受体NKG2D的亲和力;CCK8法分析mAb04-MICA对K562的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术分析mAb04-MICA对鼠源VEGFR2的交叉反应能力;建立K562皮下荷瘤BALB/c裸鼠模型,通过测定瘤体积、称量瘤重、观测荷瘤鼠生存期等方法检测目的抗体的体内抗肿瘤活性;免疫组化方法测定其对肿瘤组织本身及组织内新生血管生成的影响。结果显示:mAb04-MICA对VEGFR2和NKG2D都具有良好的亲和力,并且在体外能够特异性地抑制VEGF诱导的K562细胞的增殖;mAb04-MICA与鼠源VEGFR2具有较高的结合能力;相同给药剂量下,双特异性抗体抑瘤作用显著优于母体单抗,且能延长荷瘤裸鼠生存期,其中Ki-67、p-VEGFR2、VEGF及CD34的表达量显著降低,提示mAb04-MICA可通过特异性地阻碍瘤组织VEGFR2的磷酸化而控制瘤体新生血管的生成,在治疗白血病方面具有潜在的应用价值。     

人NKG2D真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的瞬时表达

目的：构建人NKG2D重组真核表达载体，并研究其在COS-7细胞中的表达。方法：应用RT-PCR，自健康人外周血单个核细胞(PBMC)中获取NKG2D cDNA，应用基因重组技术构建含目的基因的T载体克隆后，构建含目的基因的真核细胞表达质粒，并经酶切和测序证实。然后应用脂质体介导将重组真核表达质粒转染COS-7细胞．用RT-PCR和流式细胞术(FCM)检测转染细胞NKG2D表达。结果：重组真核表达载体中插入片段序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。NKG2D在COS-7细胞中获得表达。结论：成功地构建了重组表达栽体pcDNA3．1-NKG2D，并实现了在COS-7细胞中的瞬时表达，为研究NKG2D的生物学活性奠定了基础。